一种从萝卜叶中提取山奈苷的方法与流程

本发明属于天然产物化学技术领域，具体涉及一种从萝卜叶中提取山奈苷的方法。

背景技术：

山奈苷(kaempferitrin)，别名：山奈酚-3,7-o-l-二鼠李糖苷(kaempferol-3,7-l-

dirhamnoside)，分子式：c27h30o14，分子量：578.57，据文献报道，山奈苷具有降血压、降血糖、抗疲劳、清热解毒、抗骨质疏松等药理活性。山柰苷的提取主要以伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根为原料，经醇提后浓缩，采用柱层析分离纯化，冻干后得到相应的产品。中国专利cn201210382477、201410183257.5、200810068891.9和105732743a分别公开了从紫叶李树叶、山蚂蝗、槐角、阴香叶中分离提取山奈苷的方法。

萝卜叶是十字花科植物萝卜（raphanussativusl.）的根生叶，又称莱菔叶。萝卜是我国一种重要的蔬菜，全国各地均有种植，可四季栽培，全年供应，产销量很大。萝卜叶作为萝卜的副产品，资源也十分丰富。萝卜叶的营养成分丰富，美国公众科学中心将萝卜叶列于超级营养蔬菜第三名。同时，萝卜叶还具有很高的营养价值和药用价值。现代营养学研究表明，萝卜叶具有促进胃肠蠕动、治疗胃溃疡、抗氧化及降血压等多种生物活性。前期研究发现，萝卜叶中含有山奈苷组分，但目前尚未有从萝卜叶中提取分离山柰苷的文献报道和专利申请。本发明可进一步扩大萝卜叶的开发和利用，同时也为山奈苷的提取提供新资源和新方法，可产生良好的社会效益和可观的经济效益。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种从萝卜叶中提取山奈苷的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种从萝卜叶中提取山奈苷的方法，其特征在于包含以下步骤：

步骤1、以萝卜叶为原料，干燥后粉碎过60~200目筛；

步骤2、将过筛的萝卜叶加入到含一定体积分数的乙醇水溶液中恒温浸提；经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得萝卜叶乙醇提取物浸膏；

步骤3、将上述浸膏在低温下静置，离心去除沉淀物质；

步骤4、将离心上清液上大孔吸附树脂层析柱进行初步分离，上样后，先用蒸馏水洗脱除去未吸附的水溶性杂质，再用一定体积分数的乙醇水溶液洗脱，收集有效馏分液；

步骤5、将上述有效馏分液置于低温条件下，使其析出结晶为山奈苷粗品；粗品再经重结晶、真空干燥后得山奈苷纯品。

步骤2中，所述萝卜叶与一定体积分数乙醇水溶液的料液比为1g:10~50ml（质量和体积比）；所述一定体积分数乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为0~95%；所述恒温浸提得温度为室温~45℃，提取时间为1~48h。

步骤3中，所述低温为1~5℃；所述静置时间为12~120h。

步骤4中，所述大孔吸附树脂为非极性极性或中等极性，具体型号为d101、ab-8和ads-17等；所述一定体积分数的乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为25~35%；所述有效馏分液为经检测含有山奈苷的馏分液。

步骤5中，所述低温条件为0~5℃；所述重结晶的具体步骤为：边滴加乙醇边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，得澄清的滤液，在0~5℃的条件下将澄清的滤液静置1~7d，使重结晶，以获得山奈苷纯品。

本发明的有益效果：本发明公开的从萝卜叶中提取分离山奈苷的方法，所用萝卜叶原料低廉易得，涉及到的工艺流程简单，操作简便，涉及到的化学药剂成本较低，可回收重复使用，无有毒有害试剂污染，可进行工业化生产，可用于医药用原料药。

附图说明

图1为从萝卜叶中分离得到山奈苷单体化合物的hplc图。

具体实施方式

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

取粉碎过60目筛的萝卜叶粉末100g，加入1000ml水置于水浴45℃下浸提，经抽滤，滤渣重复提取三次，合并滤液，真空浓缩得浓缩液；将所得浓缩液以3ml/min流速上大孔树脂色谱柱（ab-8大孔吸附树脂，非极性，玻璃柱型号为φ3.0*l100cm），以同样的流速，用2000ml蒸馏水冲洗柱子；采用体积分数为25%的乙醇水溶液洗脱，收集山奈苷有效馏分液，用高效液相色谱检测（方法见实施例3）；将收集的有效馏分液于0℃下静置1d，析出结晶后过滤，得山奈苷粗品；将粗品边滴加乙醇边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，得澄清的滤液，将该滤液于0℃的条件下静置1d，经重结晶，室温真空干燥后，得山奈苷纯品。经hplc检测，山奈苷含量大于95%，提取率为79.1%。

实施例2

取粉碎过200目筛的萝卜叶粉末100g，加入5000ml体积分数为95%的乙醇水溶液置于室温下浸提，经抽滤，滤渣重复提取三次，合并滤液，真空浓缩至无醇味，得浸膏；将所得浸膏以3ml/min流速上大孔树脂色谱柱（河北沧州宝恩吸附材料科技有限公司的ads-17大孔吸附树脂，为中等极性，玻璃柱型号为（φ3.0*l100cm），以同样的流速，用2000ml蒸馏水冲洗柱子；采用体积分数为35%的乙醇水溶液脱，收集山奈苷有效馏分液，用高效液相色谱检测（方法见实施例3）；将收集的有效馏分液于5℃下静置7d，析出结晶后过滤，得山奈苷粗品；将粗品边滴加乙醇边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，得澄清的滤液，将该滤液于5℃的条件下静置7d，经重结晶，室温真空干燥后，得山奈苷纯品。经hplc检测，山奈苷含量大于95%，提取率为85.8%。

实施例3

本实施例为山奈苷检测方法的实施例。

山奈苷通过高效液相色谱法检测，山奈苷产品在检测波长为344nm，经安捷伦zorbaxsb-c18柱（4.6×250mm，5μm）分离（流动相：a相为1%的乙酸水溶液，b相为甲醇；流速为1ml/min，柱温为25℃，梯度洗脱），色谱图如图1所示，山奈苷在30.93min处出现色谱峰，在同一色谱条件下，该峰的保留时间与山柰苷对照品的保留时间一致。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种从萝卜叶中提取山奈苷的方法，属于天然产物化学技术领域。该方法以萝卜叶为原料，经浸提、抽滤，减压浓缩、低温静置、离心、分离/富集、洗脱、馏分液低温静置、结晶和重结晶、干燥的步骤，得到山奈苷纯品。本发明方法可用于高纯度山奈苷的工业化生产，所用萝卜叶原料低廉易得，工艺流程简单，操作简便，成本低，无有毒有害试剂污染，可用于医药用原料药。

技术研发人员：段玉清;罗孝平;张海晖;张迪;蔡梅红
受保护的技术使用者：江苏大学
技术研发日：2017.05.02
技术公布日：2017.09.29