一种中国被毛孢改良培养基的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明属于食用真菌培养技术领域，具体设及一种中国被毛抱改良培养基。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)又名虫草、冬虫草等，其子实体、菌核及菌 丝体中含有多种的活性成分，比如虫草多糖、胆酱醇、麦角酱醇、腺嚷岭、多种氨基酸及粗蛋 白、脂肪酸、D-甘露醇、维生素、有机酸和微量元素等多种活性物质。但目前野生虫草需求量 大且资源短缺，而人工培育子实体技术条件相对不成熟、耗资成本较高；因此产生的虫草菌 深层液体发酵技术用于生产虫草替代品，既可有效保护虫草运一珍贵自然资源，又因其生 产条件不受地理气候环境的严格限制的优势，可适于工业化大规模推广生产。该技术应用 生产的替代品如菌丝体、发酵液等的有效成份含量及保健效果与天然虫草有着异曲同工的 效果。
[0003] 冬虫夏草无性型菌株是中国被毛抱(Hirsutella sinensis)，但因其生长条件要 求十分严格，生产周期长。已有不少专家学者从不同方面寻找其最适条件;例如：李春如等 (2004)在研究冬虫夏草过程中提出了不同的氮源、碳源等培养工艺条件对中国被毛抱生长 的重要性;葛飞等(2007)考察了不同培养条件对中国被毛抱胞内核巧类组分的影响；王灿 等(2011)则从溫度角度思考对发酵条件的影响，认为中国被毛抱不同的有效成份积累是需 要不同的溫度条件的。此外，本发明团队亦经过不懈的探索试验，最终研制出一种针对深层 液体发酵的高效培养基;其有助于中国被毛抱发酵过程中快速渡过潜伏期，进入菌丝快速 生长的对数期，故可有效缩短发酵周期，提高其有效成分(虫草多糖和腺巧)含量，促进生产 发酵效率。
[0004] 现如今国内外已有部分科研单位和相关研发团队正努力着手从事人工培育子实 体的工作，但其技术条件不成熟，到目前为止都未能实现大规模培养。因此，结合本发明并 利用深层液体发酵技术进行工业化生产虫草菌丝既可大大缓解人工栽培虫草子实体困难 的问题，又可提高生产效率，降低能耗。本发明最终得到开发应用后不仅可提升人的健康素 质，形成良好的社会效益，又可提升产值，创造可观经济效益。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种中国被毛抱改良培养基，其有利于中国被毛抱快速进 入生长对数期，有效缩短发酵周期，提高有效成分含量，促进生产发酵效率，为利用中国被 毛抱进行大规模液体发酵生产提供有利条件。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种中国被毛抱改良培养基，其中含有20wt%去皮马铃馨、2. Owt%葡萄糖、5.0~lOwt%牛 肉膏、0.50~1. Owt%酵母膏、0.050~0.15wt%维生素 Bi、5.0~15wt%麦芽糖。
[0007] 优选地，所述培养基中含有20wt%去皮马铃馨、2.0wt%葡萄糖、lOwt%牛肉膏、 1 .Owt〇/〇 酵母膏、0.10wt〇/〇 维生素 Bi、15wt〇/〇 麦芽糖。
[0008] 本发明提供的中国被毛抱改良培养基有利于中国被毛抱快速进入生长对数期，有 效缩短发酵周期，提高有效成分含量、低成本的条件下产生更高的经济效益，且W本发明为 基础的培养条件能有效缩短周期至7~8d，可为后期利用中国被毛抱进行大规模液体发酵生 产提供有利条件。
【具体实施方式】
[0009] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0010] W安发(福建)生物科技有限公司提供的中国被毛抱菌种为试验对象，进行液体发 酵培养。方法如下： (1) 将保存的冬虫夏草菌斜面培养基取出后，置于超净工作台上化，使其恢复活性； (2) 将斜面菌种活化3次，取长势良好的斜面菌种刮取菌苔，用无菌水稀释制成菌悬液， 备用； (3) 液体发酵培养WA培养基(去皮马铃馨20%、葡萄糖2%，余量为无菌水)为对照组，各 试验组分别在A培养基的基础上，添加牛肉膏:5.0%、10%、15%，酵母膏:0.50%、1.0%、1.5%，维 生素 Bi: 0.050%、0.10%、0.15%，麦芽糖:5.0%、10%、15%(各因子水平具体见表1);然后分装至 250 mL容量的=角瓶培养瓶中，每瓶装液量为100 mL。在分别编号后，将各培养基在12TC 下高压灭菌30min;待其冷却后按菌液和培养基Wl:25(v/v)的比例接种至各培养瓶中，振 荡（18°C，120 r/min)化后，又置于22°C，120 r/min的条件下振荡培养;每组重复3次，培养 7d后收集培养瓶中的全部菌丝体，经纱布过滤，在6(TC下充分烘干至恒重后分别称重(试验 所得结果如表2所示），然后对胞内多糖含量及腺巧含量的测定。
[00川表1因素水平表
表2经液体发酵后所得菌丝体干重
I.胞内多糖含量的测定方法 A、配制葡萄糖标准溶液 精密称取于105°C干燥至质量恒定的葡萄糖0.050g，置于250mL容量瓶中，加蒸馈水溶 解并定容，即得浓度为0.20mg/mL的葡萄糖标准溶液。
[0012] B、制作葡萄糖标准曲线 精密吸取葡萄糖标准溶液 0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.2mL、1.6mL、2. OmL 于15mL 带塞试管中，分别加水至2. OmL，并加入6%苯酪溶液0.50mL，摇匀，迅速加入浓硫酸4.5血，振 荡摇匀，室溫放置lOmin。另取2.OmL蒸馈水按照上述方法操作，作为空白对照。在波长为 490nm处测定吸光度值。W葡萄糖含量(X)为横坐标，吸光度值(Y)为纵坐标，绘制葡萄糖标 准曲线，得回归方程:Y=0.0 603X-0.0084，相关性R2=O. 9992。
[0013] C、测定胞内多糖量 精确称取0.50g干燥菌丝体于试管中，加入15mL蒸馈水，超声波破碎IOmin之后，置于90 °C恒溫水浴锅中浸提化，离屯、后取上清液即为样品溶液。吸取样品溶液0.1 OmL，置于15mL带 塞试管中，加水至2 .OmL,并加入6%苯酪溶液O . 50mL，摇匀，迅速加入浓硫酸4.5mL，振荡摇 匀，室溫放置IOmin。另取O. IOmL蒸馈水按照上述方法操作，作为空白对照。于波长490nm处 测定吸光度值，并根据回归方程计算出多糖含量。
[0014] 试验所得结果如表3所示。
[0015] 表3经液体发酵后所得菌丝体胞内多糖含量
2.腺巧含量的测定方法 A、配制测量溶液 提取液:无水甲醇与高纯水按体积比1:1配制成提取液，保存备用。
[0016] 腺巧标准溶液:精密称取腺巧标准品20.0 mg，置于IOOmL容量瓶中，加提取液溶解， 摇匀，定容至刻度，得浓度为0.20mg/mL的腺巧标准溶液。
[0017] B、色谱条件 色谱柱Shimadzu VP-ODS (4.6 X 150nm，5皿）；柱溫30 °C ;流动相:水-甲醇(85:15，v/v)， 流速1. OmL/min;进样量20化;检测器波长为260nm。
[0018] C、制作腺巧标准曲线 精密吸取腺巧标准溶液0.1 OmL、0.20mL、0.40mL、O. SOmL、1.2mL、1.6mL、2. OmL于 15mL 带 塞试管中，分别加提取液至10.OmL，摇匀制成不同浓度标准液。分别进样20.0化，记录峰面 积。W腺巧含量(X)为横坐标，峰面积（Y)为纵坐标，绘制腺巧标准曲线，得回归方程:Y= 22460.7X-47.9，相关性 R2=O. 9990。
[0019] D、现憶腺巧含量 精确称取0.250g干燥菌丝体于带塞试管中，加入IOmL提取液，超声波破碎IOmin之后， 置于90°C恒溫水浴锅中浸提化，离屯、后取上清液，经0.45WI1微孔滤膜过滤后即得样品溶液。 进样20.0 iiL样品溶液，记录峰面积，并根据回归方程计算出腺巧含量。
[0020] 试验所得结果如表4所示。
[0021] 表4经液体发酵后所得菌丝体腺巧含量
由试验结果可W看出，在A培养基的基础上添加10%牛肉膏、1.0%酵母膏、0.10 %维生素 Bi、15%麦芽糖，培养所得冬虫夏草菌丝体干重、多糖含量及腺巧含量最高。
[0022] W上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与 修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1. 一种中国被毛孢改良培养基，其特征在于：所述培养基中含有20wt%去皮马铃薯、 2 · Owt%葡萄糖、5 · 0~10wt%牛肉膏、0 · 50~1 · Owt%酵母膏、0 · 050~0 · 15wt%维生素 Βι、5 · 0~ 15wt%麦芽糖。2. 根据权利要求1所述中国被毛孢的改良培养基，其特征在于：所述培养基中含有 20wt%去皮马铃薯、2 · Owt%葡萄糖、10wt%牛肉膏、1 · Owt%酵母膏、0 · 10wt%维生素 Bi、15wt%麦 芽糖。
【专利摘要】本发明公开了一种中国被毛孢改良培养基，属于食用真菌培养技术领域。该培养基中含有20wt%去皮马铃薯、2.0wt%葡萄糖、10wt%牛肉膏、1.0wt%酵母膏、0.10wt%维生素B1、15wt%麦芽糖。本发明提供的培养基可有效改进中国被毛孢的发酵生产条件，缩短发酵周期，提高有效成份积累，为利用中国被毛孢进行大规模液体发酵生产提供有利条件。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/645
【公开号】CN105713848
【申请号】CN201610275394
【发明人】高益槐, 王 忠, 黄宝菊
【申请人】安发（福建）生物科技有限公司