一种高活性猴头菇多糖的提取方法
【专利摘要】一种高活性猴头菇多糖的提取方法，该提取方法的主要步骤为：步骤1、粉碎；步骤2、热水浸提、抽滤浓缩；步骤3、醇析、离心；步骤4、去淀粉、除蛋白、去小分子物质、醇析；步骤5、离心、干燥；步骤6、检测；本发明的高活性猴头菇多糖的提取方法，提取出来的产品色泽好、效率高、纯度高，工艺简单，适宜工业化生产。
【专利说明】一种高活性猴头菇多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多糖提取方法，特别是一种高活性猴头菇多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]猴头菇又名猴头、猴头蘑、猴头菌、刺猬菌等，是一种大型真菌，属担子菌纲、多孔菌目、齿菌科、猴头属，因其子实体形状像猴子头部而得名。从猴头菇中提取的多糖是主链由β_1，3糖苷键，支链为β_1，6糖苷键连接的葡聚糖混合物。猴头菇作为一种药用菌，对消化系统的癌变、溃疡、胃窦炎、慢性胃炎等病均有疗效，并且能够提高人体的免疫能力。药用真菌多糖作为一类重要的生物活性物质，在对一些人类疑难病症的治疗方面已显示出很好的疗效。
[0003]目前比较常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行，但在稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量也比较多，有一定的使用范围。专利“真菌多糖精化提纯工艺”(200610012682.3)指出了提纯真菌多糖的方法，但针对猴头菇多糖而言，其本身存在使颜色较深的酚型化合物与糖链连接，较难除去，且存在纤维素、果胶等生物大分子的干扰，超滤膜孔易阻塞等问题。因此，由此法获得的猴头菇多糖还存在产品色泽、效率、纯度等需要进一步提高的缺陷。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种高活性猴头菇多糖的提取方法。
[0005]本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种高活性猴头菇多糖的提取方法，该提取方法的主要步骤为:
步骤1、粉碎:取新鲜猴头菇，自然风干，得到干燥的猴头菇，用粉碎机粉碎，过60目筛，得干燥猴头菇粉末；
步骤2、热水浸提、抽滤浓缩:按照干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5-20的质量比，加入蒸馏水，然后在75°C的恒温水浴锅中进行浸提2-8小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物进行抽滤，将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩，得浓缩液；
步骤3、醇析、离心:将浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为70-100%的乙醇，醇析24小时，将提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，然后将混合物以3500r/min的转速离心分离，离心得猴头菇多糖粗品；
步骤4、去淀粉、除蛋白、去小分子物质、醇析:用糖化酶去除猴头菇多糖粗品中的淀粉除净；加入胰蛋白酶去除猴头菇多糖粗品中的蛋白质；使用透析袋去除猴头菇多糖粗品中的小分子物质，去除猴头菇多糖粗品中的其他物质后，再进行醇析24小时；
步骤5、离心、干燥:将醇析后的猴头菇多糖粗品在3500r/min的转速下离心，并于40°C下真空干燥，称重，即得高活性猴头菇多糖；
步骤6、检测:将得到的高活性猴头菇多糖提取物用硫酸蒽酮法检测多糖含量，得到高活性猴头菇多糖成品。
[0006]本发明的有益效果:本发明的高活性猴头菇多糖的提取方法，提取出来的产品色泽好、效率高、纯度高，工艺简单，适宜工业化生产，同时本发明研究了提取工艺过程中料液t匕、乙醇浓度、提取时间对多糖提取率的影响。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
1、粉碎:取干燥的猴头菇(由新鲜猴头菇经自然风干得到)，用粉碎机粉碎，过60目筛，得猴头菇干燥粉末；
2、热水浸提、抽滤浓缩:准确称取猴头菇干燥粉末6.25g，加入5倍质量比的蒸馏水，在75°C的恒温水浴锅中进行浸提2小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物用抽滤机进行抽滤，将得到滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至20mL左右；
3、醇析、离心:浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为70%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，将混合物以3500r/min的转速离心得猴头菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:多糖粗品转入小烧杯中并加蒸馏水20mL使其溶解，在90°C下水浴30min将多糖糊化，降温至60°C ,用糖化酶(酶活力:10万U/g)0.005g处理lOmin,用碘液检测至碘液不变色，称取0.00125g胰蛋白酶(酶活:2500U/g)在37°C下处理50min，在280nm下紫外检测无明显吸收峰则说明蛋白质已被除尽；
5、去小分子物质、醇析:把透析袋放入大烧杯中煮沸lOmin待其完全分离后捞出待用，将处理液装入已用线绑好一端的透析袋，然后在离液面疒3cm处绑好另一端并进行流动透析，透析24小时，直至透析袋中的溶液从淡黄色变为无色，在透析后的多糖溶液中加入40mL的无水乙醇放置24小时沉淀；
6、离心、干燥:将沉淀后的混合物离心，沉淀转入小烧杯中(记录烧杯的重量)，在40°C下真空干燥，完全干燥后再次称重，前后的质量差即为提取的高活性猴头菇多糖的质量。
[0008]实施例2
1、粉碎:同实施例1;
2、热水浸提、抽滤浓缩:准确称取猴头菇干燥粉末6.25g，加入10倍质量比的蒸馏水，在75°C的恒温水浴锅中进行浸提4小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物用抽滤机进行抽滤，将得到滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至20mL左右；
3、醇析、离心:浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为80%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，将混合物以3500r/min的转速离心得猴头菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同实施例1;
5、去小分子物质、醇析:同实施例1;
6、离心、干燥:同实施例1。
[0009]实施例3
1、粉碎:同实施例1;
2、热水浸提、抽滤浓缩:准确称取猴头菇干燥粉末6.25g，加入15倍质量比的蒸馏水，在75°C的恒温水浴锅中进行浸提6小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物用抽滤机进行抽滤，将得到滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至20mL左右；
3、醇析、离心:浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为90%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，将混合物以3500r/min的转速离心得猴头菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同实施例1;
5、去小分子物质、醇析:同实施例1;
6、离心、干燥:同实施例1。
[0010]实施例4
1、粉碎:同实施例1;
2、热水浸提、抽滤浓缩:准确称取猴头菇干燥粉末6.25g，加入20倍质量比的蒸馏水，在75°C的恒温水浴锅中进行浸提8小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物用抽滤机进行抽滤，将得到滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至20mL左右；
3、醇析、离心:浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为100%的乙醇进行醇析24小时，使提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，将混合物以3500r/min的转速离心得猴头菇多糖的粗品;
4、去淀粉、除蛋白:同实施例1;
5、去小分子物质、醇析:同实施例1;
6、离心、干燥:同实施例1。
【权利要求】
1.一种高活性猴头菇多糖的提取方法，其特征在于:该提取方法的主要步骤为: 步骤1、粉碎:取新鲜猴头菇，自然风干，得到干燥的猴头菇，用粉碎机粉碎，过60目筛，得干燥猴头菇粉末； 步骤2、热水浸提、抽滤浓缩:按照干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5-20的质量比，加入蒸馏水，然后在751的恒温水浴锅中进行浸提2-8小时，边提取边进行磁力搅拌，浸提后将混合物进行抽滤，将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩，得浓缩液； 步骤3、醇析、离心:将浓缩液转入小锥形瓶中，加入浓度为70-100%的乙醇，醇析24小时，将提取出的高活性猴头菇多糖完全沉淀，然后将混合物以350017^111的转速离心分离，离心得猴头菇多糖粗品； 步骤4、去淀粉、除蛋白、去小分子物质、醇析:用糖化酶去除猴头菇多糖粗品中的淀粉除净；加入胰蛋白酶去除猴头菇多糖粗品中的蛋白质；使用透析袋去除猴头菇多糖粗品中的小分子物质，去除猴头菇多糖粗品中的其他物质后，再进行醇析24小时； 步骤5、离心、干燥:将醇析后的猴头菇多糖粗品在350017^111的转速下离心，并于401下真空干燥，称重，即得高活性猴头菇多糖； 步骤6、检测:将得到的高活性猴头菇多糖提取物用硫酸蒽酮法检测多糖含量，得到高活性猴头菇多糖成品。
【文档编号】C08B37/00GK104403021SQ201410700230
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】戴路 申请人:哈尔滨墨医生物技术有限公司