专利名称：一种低效价肝素钠的提取方法
技术领域：
本发明涉及生化药物领域，特别涉及一种低效价肝素钠的提取方法。背景技术：
肝素是1916年Mclean研究凝血机制时从肝脏组织中发现的一种酸性粘多糖。1939年，BrinkhousfIj等证明了肝素具有抗凝血活性，从此，肝素作为天然抗凝血物质而受到世界各国的重视。肝素用于临床虽有60余年的历史，但到目前为止，还没有一种能够完全代替它的产品，所以它仍然是最重要的生化药物之一，也是我国主要的出口药物之一。肝素具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素不但有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能，肝素钠在生产中，肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠解离不完全，去除蛋 白的过程中料渣会带走部分肝素钠的问题，造成浪费。
发明内容
本发明为了弥补现有生产技术的不足，解决了料渣会带走部分肝素钠，造成浪费的问题，提供了一种低效价肝素钠的提取方法。本发明是通过如下技术方案实现的
一种低效价肝素钠的提取方法，其特殊之处在于包括如下步骤
Cl)溶解将传统工艺生产肝素钠而产生的料渣中加水，水与料渣的重量比为2-5:1，然后在所得的溶液中加入溶液重1%_5%的肠衣专用盐，搅拌并升温至50-55°C，反应2-3h，得到反应液；
(2)酶解在反应液中加入NaOH调节pH至8.5-9. 0，然后向反应液内加入胰蛋白酶，胰蛋白酶与料渣的重量比I: 45-55，反应温度为50-55°C，时间为3_4h，得到酶解液；
(3)去除蛋白在酶解液中加入酶解液重量1%_2%的氯化钙反应，用 NaOH调酶解液的pH为9. 0-9. 5，升温至80_85°C，进行离心，得到离心液；
(4)去除钙离子将离心液放凉到30-50°C，按Ca2+:C032_浓度比1:1的比例，向离心液中添加碳酸钠或碳酸钠的结晶水合物，反应后，进行过滤，得到过滤液；
(5)沉淀将过滤液中，添加盐酸调pH为6.0-6. 5，然后用乙醇进行沉淀，静止，去除上层液，收集下层沉淀；
(6)脱水、烘干将所收集的沉淀，用体积分数为95-100%的乙醇进行脱水处理，脱水后的沉淀在75-80°C进行烘干处理，得到低效价肝素钠。本发明的低效价肝素钠的提取方法，步骤(I)肠衣专用盐添加量为溶液重的3%。本发明的低效价肝素钠的提取方法，步骤(2)中料渣胰蛋白酶的重量比50:1。本发明的低效价肝素钠的提取方法，步骤(3)氯化钙的添加量为酶解液重量的I. 5%。本发明的低效价肝素钠的提取方法，步骤(5)中上层液中乙醇的体积分数为40%-45%。传统生产工艺在肝素钠生产过程中，往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉，致使产品收率低。本发明通过酶解肝素钠料渣将残留肝素钠再次解离，然后加入氯化钙沉淀蛋白，通过离心、过滤、沉淀、脱水、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。本发明的有益效果为在传统肝素钠生产工艺基础上，对肝素钠料渣进一步酶解，去除蛋白，将肝素钠-蛋白复合体中未完全解离的肝素钠，提取出来，相应的提高肝素钠的收率，以料渣为原料提取的肝素钠，其收率为5%-7%，所得肝素钠的效价一般在50-60USP u/mg左右，可以作为肝素钠粗品使用，而该肝素钠粗品的价格较高，大约为I万元/kg，由于该肝素钠提取成本低，大约为5000元，对该部分肝素钠的进一步提取，既避免了资源浪费又能有效的提闻利润。
具体实施方式
实施例I:
本实施例的低效价肝素钠的提取方法，通过下述步骤实现
(1)溶解将200kg传统肝素钠生产产生的料渣加入反应罐中，向反应罐中加入600kg水，打开搅拌机进行搅拌，加入24kg肠衣专用盐，打开蒸汽阀门使温度达到53°C，搅拌3h，得到反应液；
(2)酶解用质量浓度20%的NaOH调节反应液pH至8.5，向反应液中加入4kg胰蛋白酶，使反应液温度保持在53 °C，反应3. 5h ；
(3)去除蛋白步骤(2)结束后，向酶解液中加入12kg氯化I丐,反应30min,用质量浓度20%的NaOH调节酶解液pH为9. 2，打开蒸汽阀门使温度达到80°C，进行离心，得到离心液；
(4)去钙离子打开降温阀使离心液温度降到30-50°C，向离心液中加入11.7kg的无水碳酸钠，反应30min，进行过滤，得到过滤液；
(5)沉淀将过滤液用6mol/L的盐酸调pH为6.5，用体积分数为85%_90%的乙醇进行沉淀，边加乙醇边进行搅拌，控制上层乙醇体积分数为42%，静置2h，上层待乙醇抽入复沉te中，收集下层沉淀。(6)脱水、烘干将收集到的沉淀，用体积分数为97%的乙醇进行脱水，脱水后的沉淀放入烘箱中，用80°C的蒸汽干燥7h，即得低效价肝素钠10kg，收率为5%，该肝素钠粗品的价格大约为I万元/kg，总价值为10万元，有效提高了利润。实施例2:
步骤(I)中料渣加入135kg，水加入260kg，肠衣专用盐加入3. 95kg，温度为50°C，反应3h。步骤(2)中，反应液pH为8. 7，胰蛋白酶加入3kg，反应液温度保持在50°C，反应3h。步骤(3)中，氯化钙加入4kg，反应30min，调节酶解液的pH至9. 0，温度为82V ； 步骤(4)中，添加十水碳酸钠，其添加量为10. 31kg。步骤(5)中，过滤液pH调至6. 2，上层乙醇体积分数为45%，静置3h。步骤(6)中，用体积分数为95%的乙醇进行脱水，烘干温度为75°C，时间为5h，低效价肝素钠产量为9kg,收率为6. 66%,该肝素钠粗品的价格大约为I万元/kg,总价值为9万元，有效提高了利润。其他步骤与实施例I相同。
其中，十水碳酸钠也可按Ca2+ =CO32-浓度比I: I的比例，换成其他碳酸钠的结晶水合物，如一水碳酸钠、七水碳酸钠等。实施例3
步骤(I)中料渣加入350kg，水加入1750kg，肠衣专用盐加入105kg，温度为55°C，反应2-3h。步骤(2)中，反应液pH为9. O，胰蛋白酶加入6. 36kg，反应液温度保持在55°C，反应 3. 5h。步骤(3)中，氯化钙加入44. 22kg，反应30-50min，调节酶解液的pH至9.5，温度为 85 0C ；
步骤(4)中，无水碳酸钠加入43. Ikg0 步骤(5)中，过滤液pH调至6. 0，上层乙醇体积分数为40%，静置I. 5h。步骤(6 )中，用体积分数为100%的乙醇进行脱水，烘干温度为75-80 V，时间为6h，低效价肝素钠产量为24. 5kg,收率为7%,该肝素钠粗品的价格大约为I万元/kg,总价值为24. 5万元，有效提高了利润。其他步骤与实施例I相同。
权利要求
1.一种低效价肝素钠的提取方法，其特征在于包括如下步骤 (1)溶解将传统工艺生产肝素钠而产生的料渣中加水，水与料渣的重量比为2-5:1，然后在所得的溶液中加入溶液重1%_5%的肠衣专用盐，搅拌并升温至50-55°C，反应2-3h，得到反应液； (2)酶解在反应液中加入NaOH调节pH至8.5-9. 0，然后向反应液内加入胰蛋白酶，胰蛋白酶与料渣的重量比I: 45-55，反应温度为50-55°C，时间为3_4h，得到酶解液； (3)去除蛋白在酶解液中加入酶解液重量1%_2%的氯化钙反应，用 NaOH调酶解液的pH为9. 0-9. 5，升温至80_85°C，进行离心，得到离心液； (4)去除钙离子将离心液放凉到30-50°C，按Ca2+:C032_浓度比1:1的比例，向离心液中添加碳酸钠或碳酸钠的结晶水合物，反应后，进行过滤，得到过滤液； (5)沉淀将过滤液中，添加盐酸调pH为6.0-6. 5，然后用乙醇进行沉淀，静止，去除上层液，收集下层沉淀； (6)脱水、烘干将所收集的沉淀，用体积分数为95-100%的乙醇进行脱水处理，脱水后的沉淀在75-80°C进行烘干处理，得到低效价肝素钠。
2.根据权利要求I所述的低效价肝素钠的提取方法，其特征在于步骤(I)肠衣专用盐添加量为溶液重的3%。
3.根据权利要求I所述的低效价肝素钠的提取方法，其特征在于步骤(2)中料渣胰蛋白酶的重量比50:1。
4.根据权利要求I所述的低效价肝素钠的提取方法，其特征在于步骤(3)氯化钙的添加量为酶解液重量的I. 5%。
5.根据权利要求I所述的低效价肝素钠的提取方法，其特征在于步骤(5)中上层液中乙醇的体积分数为40%-45%。
全文摘要
本发明涉及生化药物领域，特别涉及一种低效价肝素钠的提取方法。该低效价肝素钠的提取方法，其特殊之处在于包括如下步骤(1)溶解；(2)酶解；(3)去除蛋白；(4)去除钙离子；(5)沉淀；(6)脱水、烘干。本发明的有益效果为在传统肝素钠生产工艺基础上，对肝素钠料渣进一步酶解，去除蛋白，将肝素钠-蛋白复合体中未完全解离的肝素钠,完全提取出来，提高了肝素钠收率。从料渣中提取出来的肝素钠效价一般在50-60uspu/mg左右，可以作为肝素钠粗品使用，有效提高了利润。
文档编号C08B37/10GK102898546SQ20121039940
公开日2013年1月30日 申请日期2012年10月19日 优先权日2012年10月19日
发明者谢成君, 李鑫 申请人:山东绅联生物科技有限公司