专利名称：一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药用真菌桦褐孔菌多糖的提取及多糖水溶液的制备方法。
背景技术：
桦褐孔菌Inonotusobliquus (Fr. )Pilat是一种珍稀而且名贵的药用真菌。在生物分类学上桦褐孔菌属于担子菌亚门(Basidiomyco tina)-层菌纲(HymenomyCetes)-非裙菌目(Aphyllophorales)-多孔菌科(Polyporaceae)-揭卧孔菌属(Poriahy pobrunnea Peteh) ο 样褐孔菌学名为 Phaeoporusobliquus (pers :Fr. ) J. Schroet.在许多外文资料中，样褐孔菌写为 Fuscoporia oblique (Pers. Fr) Aoshi 或 Inontus obliquus (Fr.) Pi Iat。其俗名中的中文名为白桦鸾、黒桦菌、桦菌等，及外文名blaekbirehtuehwood、 Malalonmushroom、力/S'^ 了于夕 > 等,俄语名为Chaga。桦褐孔菌极其耐寒,生活在桦木等木材中的菌丝体能够耐受_40°C的低温。桦褐孔菌主要分布在北半球的北纬45° -50°的地区，比如波兰、芬兰、北美(北部)、俄罗斯(西西伯利亚、远东部分地区、勘察加半岛)、日本(北海道)等国家、中国(黑龙江、吉林省长白山地区)。桦褐孔菌生长在白桦、榆树、银桦、赤杨等活立木的树皮下或砍伐后树木的枯干上，桦褐孔菌的菌核在砍伐以后的树木枯干上可以生存超过六年以上。俄罗斯Komsomlski制药公司生产的桦褐孔菌精粉对糖尿病的治愈率达93%，降糖作用可持续48h。桦褐孔菌、桦褐孔菌菌核和菌丝体的多糖粗提物，对四氧嘧啶糖尿病小鼠均有降血糖作用，并且三者降糖效果无显著差异。临床上糖尿病患者应用桦褐孔菌治疗后的全血粘度、血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积、红细胞聚集指数比治疗前明显降低。桦褐孔菌的菌丝、菌核中的多糖有降低血糖的作用，活性成分主要是其中的β_葡聚糖、杂多糖和蛋白复合物，在给小鼠注射了从桦褐孔菌的菌丝体和菌核中提纯的多糖后，其降低血糖的作用可维持3 48h。在桦褐孔菌菌核中含有I种糖蛋白和I种水溶性多糖，均有明显的降血糖作用，尤其是桦褐孔菌多糖提取液，此外还发现桦褐孔菌的水提物中的栓菌酸对非胰岛素依赖型糖尿病有效。桦褐孔菌多糖作为一种极为重要的药物成分，具有广阔的开发前景，但桦褐孔菌多糖水溶液在存放过程中产生沉淀、浑浊等现象，从而影响产品的质量与商品价值。
发明内容
针对上述不足，本发明的目的是提供一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法。本发明的技术方案为—种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，包括以下步骤I)三氯乙酸(TCA)脱蛋白向桦褐孔菌提取物中加入三氯乙酸，静置，然后固液分离，取分离得到的固体物质；2)活性炭脱色向步骤2)所得固体物质按体积加入50 100倍的水，然后加入活性炭脱色，然后固液分离，取所得上清液；
3)用天然澄清剂澄清向步骤3)所得上清液加入天然澄清剂澄清。其中，所述步骤I)中的桦褐孔菌提取物是使用微波浸提方法获得的。其中，所述微波浸提是将粉碎后的桦褐孔菌加入其体积50 70倍的水，置于微波提取设备中，微波功率600 800W，提取时间20 40分钟获得的。其中，所述步骤I)中，所述加入三氯乙酸的体积比例为20% 50%，所述静置的时间是20 50分钟，静置的温度是60°C 80°C。其中，所述步骤2)中，加入活性炭的质量比例为1% 4%，脱色的温度50°C 80°C，脱色的时间为90 120分钟。其中，所述步骤3)中加入的天然澄清剂是ZTC1+1III型澄清剂，先加入ZTC1+1III 型澄清剂的质量比例为1%的B组份溶液，后加入ZTC1+1III型澄清剂的质量比例为1%的 A组份溶液，其中I %的B组份溶液质量为桦褐孔菌溶液质量的4 8 %，I %的A组份溶液质量为桦褐孔菌溶液质量的2 4%，加入B组份的温度为60 90°C，保温时间15 35 分钟；加入A组份的温度为30 60°C，保温时间为15 35分钟。其中，所述I %的B组份溶液用量为6 8 %，I %的A组份溶液用量为3 4 %， 加入B组份的温度为70°C，保温时间25分钟；加入A组份的温度为50°C，保温时间为25分钟。其中，所述步骤3)之后还要固液分离，取上清液。所述的制备方法得到的桦褐孔菌多糖水溶液。所述的桦褐孔菌多糖水溶液在制备保健品或药品中的应用。本发明的优良效果在于本发明提供的桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，操作简单，对桦褐孔菌多糖的损失小，得到的多糖水溶液性质稳定，有效成分含量高，适用于保健品或药品的制备。本发明使用“ZTC1+1III型澄清剂”，是从食品中提取的高分子物质，以天然多糖为原料制成，是替代聚丙烯酰胺，聚合氯化铝等人工合成絮凝剂的理想品种，使用“ZTC1+1III型澄清剂”的澄清方法成本低、效率高、安全无毒。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例I :ZTC1+1III型天然澄清剂溶液的配制A组分溶液的配制称取ZTC1+1III型天然澄清剂(天津振天成科技有限公司)A 组分5. 0g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至500mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得1% A组分黏胶状的溶液。B组分溶液的配制称取ZTC1+1III型澄清剂B组分5. 0g，用少量I %乙酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1%乙酸至500mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得1% B组分黏胶状的溶液。实施例2将粉碎过筛的桦褐孔菌加入50倍体积的水，置于微波提取设备中(青岛澳柯玛， AM-C23)，微波功率600W，波长Imm lm，微波提取20min，将提取液体积真空浓缩到原来的 1/10，加入无水乙醇至最终乙醇浓度为80%，静置过夜，离心收集沉淀，干燥称重，得到的桦
4褐孔菌提取物是桦褐孔菌粗多糖，得率为18%，其中含有蛋白质、色素、桦褐孔菌多糖等。将提取的桦褐孔菌提取物用三氯乙酸(TCA)法脱蛋白，TCA量20% (体积比)，温度60°C，加热时间20min，分析所得溶液，其蛋白脱出率50%，多糖损失率19. 8%。将脱蛋白后的桦褐孔菌提取物加水稀释50倍并用活性炭进行脱色，活性炭用量 1% (质量比)，脱色温度50°C，加热时间90min。脱色率95%，多糖损失率21 %。脱色后的桦褐孔菌提取物水溶液的pH值为5. 3。采用ZTC1+1III型澄清剂澄清，ZTC1+1III型澄清剂用量(1% B组份/1% A组份)为4% /2%，澄清温度(B/A)为 600C /300C，保温时间15min，吸光度值O. 75 (在650nm处测得的吸光度值能够反映口服液的澄清程度)，多糖损失率17%。该多糖水溶液常温放置3个月后，在同样波长下溶液的吸光度为O. 75。实施例3将粉碎过筛的桦褐孔菌加入70倍体积的水，置于微波提取设备中(青岛澳柯玛， AM-C23)，微波功率800W，波长Imm lm，微波提取25min，将提取液体积真空浓缩到原来的 1/10，加入无水乙醇至最终乙醇浓度为80%，静置过夜，离心收集沉淀，干燥称重，得到的桦褐孔菌提取物是桦褐孔菌粗多糖，粗多糖的得率为24%。将提取的桦褐孔菌提取物用三氯乙酸(TCA)法脱蛋白，TCA量50%，温度80°C，加热时间50min，蛋白脱出率48%，多糖损失率21 %。将脱蛋白后的桦褐孔菌提取物用水稀释60倍并用活性炭进行脱色，活性炭用量 4%，脱色温度80°C，加热时间120min。脱色率91 %，多糖损失率25%。将脱色后的桦褐孔菌提取物水溶液的pH值为5. 4。采用ZTC1+1III型澄清剂澄清，ZTC1+1III型澄清剂用量(1% B组份/I % A组份)为8% /4%，澄清温度(B/A)为 900C /600C，保温时间35min，吸光度值O. 78 (在650nm处测得的吸光度值能够反映口服液的澄清程度)，多糖损失率22%。该多糖水溶液常温放置3个月，在同样波长下该溶液的吸光度为O. 78。实施例4将粉碎过筛的桦褐孔菌加入60倍体积的水，置于微波提取设备中(青岛澳柯玛， AM-C23)，微波功率750W，波长Imm lm，微波提取40min，将提取液体积真空浓缩到原来的 1/10，加入无水乙醇至最终乙醇浓度为80%，静置过夜，离心收集沉淀，干燥称重，得到桦褐孔菌提取物粗多糖的得率为20%。将提取的桦褐孔菌粗多糖用三氯乙酸(TCA)法脱蛋白，TCA量36%，温度70°C，加热时间30min，蛋白脱出率79. 3%，多糖损失率17.2%。将脱蛋白后的桦褐孔菌粗多糖加水稀释50倍并用活性炭进行脱色，活性炭用量 3%，脱色温度60°C，加热时间IOOmin0脱色率97. 2%，多糖损失率26. 7。脱色后的桦褐孔菌粗多糖溶液的pH值为5. 2。采用ZTC1+1III型澄清剂澄清，ZTC1+1III型澄清剂用量(1% B组份/1% A组份)为6% /3%，澄清温度(B/A)为 700C /500C，保温时间25min，吸光度值O. 69 (在650nm处测得的吸光度值能够反映口服液的澄清程度)，多糖损失率16. 3%。该多糖水溶液常温放置3个月，在同样波长下溶液的吸光度为O. 69。
权利要求
1.一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，包括以下步骤1)三氯乙酸脱蛋白向桦褐孔菌提取物中加入三氯乙酸，静置，然后固液分离，取分离得到的固体物质；2)活性炭脱色向步骤2)所得固体物质按体积加入50 100倍的水，然后加入活性炭脱色，然后固液分离，取所得上清液；3)用天然澄清剂澄清向步骤3)所得上清液加入天然澄清剂澄清。
2.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中的桦褐孔菌提取物是使用微波浸提方法获得的。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述微波浸提是将粉碎后的桦褐孔菌加入其体积50 70倍的水，置于微波提取设备中，微波功率600 800W，提取时间20 40分钟获得的。
4.如权利I要求所述的制备方法，其特征在于，所述步骤I)中，所述加入三氯乙酸的体积比例为20% 50%，所述静置的时间是20 50分钟，静置的温度是60°C 80°C。
5.如权利I要求所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，加入活性炭的质量比例为I % 4%，脱色的温度50°C 80°C，脱色的时间为90 120分钟。
6.如权利I要求所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中加入的天然澄清剂是 ZTC1+1III型澄清剂，先加入ZTC1+1III型澄清剂的质量比例为1%的B组份溶液，后加入 ZTC1+1III型澄清剂的质量比例为1%的A组份溶液，其中1%的B组份溶液质量为桦褐孔菌溶液质量的4 8%，I %的A组份溶液质量为桦褐孔菌溶液质量的2 4%，加入B组份的温度为60 90°C，保温时间15 35分钟；加入A组份的温度为30 60°C，保温时间为 15 35分钟。
7.如权利6要求所述的制备方法，其特征在于，所述I%的B组份溶液用量为6 8 %，I%的A组份溶液用量为3 4%，加入B组份的温度为70°C，保温时间25分钟；加入A组份的温度为50°C，保温时间为25分钟。
8.如权利I要求所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)之后还要固液分离，取上清液。
9.权利要求I 8任一所述的制备方法得到的桦褐孔菌多糖水溶液。
10.权利要求9所述的桦褐孔菌多糖水溶液在制备保健品或药品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，是将粉碎后的桦褐孔菌用微波浸提、脱蛋白、脱色制得的多糖水溶液。选用ZTC1+1III型澄清剂对桦褐孔菌多糖水溶液进行澄清，澄清条件为ZTC1+1III型澄清剂用量(1％B组份/1％A组份)8％/4％～4％/2％，澄清温度(B/A)90℃/60℃～60℃/30℃，保温时间15min～35min。本发明提供的桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，操作简单，对桦褐孔菌多糖的损失小，有效成分含量高，适用于保健品或药品的制备。
文档编号C08B37/00GK102603906SQ20111046163
公开日2012年7月25日 申请日期2011年12月30日 优先权日2011年12月30日
发明者李荣杰 申请人:安徽丰原发酵技术工程研究有限公司