专利名称：决明子蛋白质的提取工艺的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种蛋白质的提取工艺，特别涉及一种决明子蛋白质的提取工艺。
蛋白质的种类很多，性质上的差异也很大，又处于不同的体系中，因此，不可能有一个固定的程序适用于各类蛋白质的分离工作。但多数分离工作中的关键部分，基本手段还是共同的。
首先，提纯过程中始终要控制PH值，尽量避免由于过酸或过碱而引起蛋白质可解离基因发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化。缓冲液要有合适的PH值，又要对蛋白质无害。提纯植物和菌类中的蛋白质，需要较大的缓冲容量，因此，要注意缓冲液的浓度。
提纯过程中，通常要保持低温，因为细胞内有蛋白水解酶存在，能降解要分离的蛋白质。因此，必须保持低温，降低降解酶的作用。通常蛋白质在0℃最稳定，但丙酮酸羧化酶对冷敏感，25℃时稳定。有些酶需在-20℃或-70℃条件下才能稳定活力。
利用蛋白质性质上的差异进行蛋白质分离有许多方法，如①核酸沉淀剂法；②蛋白质沉淀剂法；③调PH值或加热沉淀法；④控制电荷密度沉淀法；⑤硫酸铵控制水合沉淀分级法等等。
硫酸铵控制水合沉淀分级法的操作工艺如下先用少量样品作试验，以确定沉淀某个蛋白质所需要的硫酸铵浓度，将少量样品冷却到0℃～5℃，然后搅拌下加入固体硫酸铵粉末，直到可以看见蛋白质沉淀产生。离心除去蛋白质沉淀，分析上清液，以确定所要蛋白质的浓度，如果它仍在溶液中，则弃掉沉淀，然后加入更多的硫酸铵于上清液中，直到产生蛋白质沉淀为止。如此重复这个过程，直到所需要的蛋白质沉淀为止。可见，对要提纯的蛋白质，必须有一个特异的分析方法，以找到沉淀它的硫酸铵的浓度。
根据对相关文献的检索(中国专利文献数据库1985～1998，中国科技期刊数据库1989～1998)，有关决明子的研究文献96篇，专利文献119篇，但决明子蛋白质的提取工艺未见报道。
本发明的目的在于提供一种决明子蛋白质的提取工艺，在该工艺条件下所提取的蛋白质具有降血脂的作用。
决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明C.tora L.的干燥成熟种子。本品性微寒，微苦、咸，归肝、大肠经。早在2000多年前的本草经典著作《神农本草》中就有“久服能益精光，轻身”等记载。近年来发现本品能降血压、降血脂而更受人们的关注。因为随着人们生活水平的提高，高血压、高血脂症已成为文明社会的常见多发及慢性中年人疾病。开发寻找一种降压或降脂有效的、副作用少的药物已成为一种社会性的需求。
实验显示，决明子Cassia obtusifolia L.(经西安医科大学药学院李映丽教授鉴定)含有丰富的蛋白质(用日本VS-KTP自动定氮仪测得其粗蛋白含量为18.69％)，那么决明子蛋白质是否具有显著的降脂作用？于是就需要先把决明子的蛋白质提取出来，同时通过对用不同饱和度硫酸铵所提取的蛋白质的降脂实验来说明问题。若能获得降脂蛋白，确定其提取工艺，对进一步研究开发该蛋白的医用作用具有重要意义。
本发明的特点是①确定了用50mM，PH值8.0的KH2PO4-NaOH缓冲液于4℃～7℃提取该蛋白；②蛋白质沉淀离心条件为7℃、20min、10000r/min；③提取目标蛋白时的硫酸铵饱和度为40～55％；④硫酸铵沉淀的蛋白透析后，冷冻干燥。
本发明的具体工艺如下一定量的决明子Cassia obtusifolia L.的干燥成熟种子粉末，加入正已烷浸没决明子粉末，脱脂两次，风干，按1g干粉50ml的比例向决明子粉末中加入50mM，PH值8.0的KH2PO4-NaOH缓冲液，于4℃～7℃下搅拌10小时，冷冻离心(条件7℃、20min、10000r/min)，得上清液(a)。残渣再加入上述缓冲液，其比例为1g干粉30ml，于4℃～7℃下搅拌6小时，冷冻离心(条件7℃、20min、10000r/min)，得上清液(b)。合并上清液(a)和(b)即得缓冲提取液，向其中缓慢加入粉末状硫酸铵至40％饱和度，冷冻离心(条件7℃、20min、10000r/min)；向所得上清液中继续缓慢加入粉末状的硫酸铵至55％的饱和度，冷冻离心(条件7℃、20min、10000r/min)；对所得沉淀进行透析，冷冻干燥即可，如流程图所示。
实施例取缓冲提取液样本5个，分别向其中加入不同量的硫酸铵，其饱和度取值范围分别是35～40％、40～45％、45～50％、50～55％、55～60％，其它工艺过程均同上述工艺。所得蛋白质分别用A1、A2、A3、A4、A5表示。其降脂结果如下表。
决明子蛋白质对高脂血瘀大鼠血清血脂的影响*(n＝10)
*①与模型组比较X表示P＞0.05；XX表示P＜0.05；XXX表示P＜0.01。
②多烯康胶丸，浙江海力生制药公司生产，批号980417。
③试验动物SD品系大白鼠，封闭群，颗粒饲料喂养，皆由西安医科大学实验动物中心提供，质量合格证为陕医动证字05号。
④模型制备、动物分组等实验方法参考徐叔云等，药理实验方法学，第二版，北京，人民卫生出版社，1991，1047。
实验结果表明①高脂血瘀大白鼠的TC，TG及LDL皆较正常对照组显著升高(P＜0.01)，HDL与对照组比较，差别不显著(P＞0.05)。
②A2、A3、A4(1g/kg)组对高脂血瘀大白鼠的TC，TG及LDL皆有显著降低作用(P＜0.05)，但对高脂血瘀大鼠的HDL均无显著影响(P＞0.05)。
③A1、A5(1g/kg)组对高脂血瘀大白鼠的TC，TG、LDL及HDL均无显著影响(P＞0.05)。
结论决明子中降脂蛋白的提取按上述工艺进行是可信的。
权利要求
降脂决明子蛋白质的提取工艺，将一定量的决明子干燥成熟种子粉末，加入正已烷浸没决明子粉末，脱脂两次，风干，本发明的特征是，按1g干粉50ml的比例向决明子粉末中加入50mM，PH值8.0的KH2PO4-NaOH缓冲液，于4℃～7℃下搅拌10小时，在7℃、20min、10000r/min条件下冷冻离心，得上清液(a)，残渣再加入上述缓冲液，其比例为1g干粉30ml，于4℃～7℃下搅拌6小时，在7℃、20min、10000r/min条件下得上清液(b)，合并上清液(a)和(b)即得缓冲提取液，向其中缓慢加入粉末状硫酸铵至40％饱和度，在7℃、20min、10000r/min条件下冷冻离心；向所得上清液中继续缓慢加入粉末状的硫酸铵至55％的饱和度，在7℃、20min、10000r/min条件下冷冻离心；对所得沉淀进行透析，冷冻干燥即可。
全文摘要
一种降脂决明子蛋白质的提取工艺,在脱脂后的决明子粉末中加入KH
文档编号C07K1/30GK1252407SQ99115860
公开日2000年5月10日 申请日期1999年9月20日 优先权日1999年9月20日
发明者李续娥 申请人:西安交通大学