体内蛋白质合成的方法

专利名称：体内蛋白质合成的方法
技术领域：
本发明的相关技术甲硫氨酸是唯一已知的起始蛋白质合成的天然氨基酸[Lucas-Lenard,J.and F.Lipmann,Ann.Rev.Biochem.,40:409-448(1971)]。在原核生物中，氨基酸首先通过甲硫氨酰-tRNA合成酶连接到启动子甲硫氨酸tRNA上面，然后由甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶进行甲酰基化。所得到的f-Met-tRNAfMet启动在依赖启动因子2(IF-2)的反应中的蛋白质合成。
大肠杆菌(E.coli)甲硫氨酸tRNA的氨基化依赖大肠杆菌甲硫氨酰-tRNA合成酶对甲硫氨酸反密码子的识别[Schulman,L.H.and H.Pelka,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,80:6755-6759(1983)]。在该序列中的突变导致甲硫氨酸受体活性的损失，而且在某些情况下导致获得了相应于被改变了的反密码子序列的新的氨基酸受体活性[Schulman,L.H.and H.Pelka,Biochemistry,24:7309-7314(1985)；Schulman,L.H.and H.Pelka,Science,242:765-768(1988)；Schulman,L.H.and H.Pelka,Science,246:1595-1597(1989)；Schulman L.H.and H.Pelka,Nucleic AcidsRes.,in press(1990)]。
本发明概述本发明提供了在适宜的宿主细胞(例如，细菌，如大肠杆菌)中对除了甲硫氨酸以外的氨基酸起始的蛋白质(即终端氨基酸不是甲硫氨酸的蛋白质)的体内超级表达方法。在该方法中，宿主细胞被使用已知的方法(例如，转化、转染、感染)修饰，即引入了a)编码所需生产的蛋白质并包括非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子的DNA；b)编码含有相应的反密码子(对于编码所需生产的蛋白质的DNA的启动密码子而言)的突变的启动子tRNA的DNA；c)编码甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶的DNA。所得到的被修饰了的宿主细胞，被保持在适宜超级生产甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶(MTF)和适宜对编码所需生产的蛋白质(该蛋白质的终端氨基酸不是甲硫氨酸)的DNA进行表达的条件下。结果是，以非甲硫氨酸的氨基酸开始的蛋白质被超级生产了。另外，还可以将编码适宜的氨酰基tRNA合成酶(根据蛋白质的起始氨基酸来决定)的DNA引入或不引入到宿主细胞中并在其中进行超级生产。在本发明的具体的实施方案中，所生产的蛋白质是以缬氨酸、异亮氨酸、或苯丙氨酸起始的。本发明的方法可以用于生产带有治疗或诊断作用的蛋白质，例如，血红蛋白和生长激素。根据本发明的方法生产的蛋白质也是本发明的一部分。
附图的简要说明

图1A表示用于表达CAT报道基因和起始tRNA基因的质粒。用于克隆CAT基因和tRNA基因的位点都用箭头指示。
图1B显示用于表达IF2、FMT或FMS-FMT基因(编码FMT)和ValRS基因的质粒。垂直的箭头指示用于对各种基因克隆化的pACD载体的位点。
图2A表示在起始tRNA2fMet中突变的位点。所用的两个突变tRNA是G34C36和G34，分别带有GAC和GAU反密码子，并且分别与缬氨酸和异亮氨酸氨酰基化。
图2B表示所使用的CAT基因的起始区域。CAT2.5基因，也被称为野生型基因，具有AUG作为起始密码子，并且在第二和第五密码子有改变，即通过事先去除较弱的次级起始位点而被改变。为此而建立的两个突变被称为CATV1.2.5和CAT11.2.5。这些突变的CAT基因带有与CAT2.5相同的在第二和第五密码子的改变，分别以GUC和AUC作为起始密码子。
本发明的详细描述本发明涉及对以非甲硫氨酸的氨基酸为起始氨基酸(即终端氨基)的体内生产蛋白质的方法。现在已经显示了的是那些包括了非甲硫氨酸的氨基酸的蛋白质可以在宿主细胞中超级生产，宿主细胞中含有编码所需生产的蛋白质的DNA，并且具有对非甲硫氨酸的氨基酸的起始密码子(即非甲硫氨酸起始密码子)，含有相应的反密码子序列的突变的起始tRNA，编码甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶(MTF)的DNA，其在宿主细胞中超级表达，以及含有或不含有对所生产的蛋白质为适宜的氨酰基tRNA合成酶进行编码的DNA。在此所述的工作显示，在MTF被超级表达(即其生产水平高于常规宿主细胞，含有一份MTF编码基因)的宿主细胞中，以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质被超级表达。特别是，已经显示了在MTF被超级表达的宿主细胞中以缬氨酸或异亮氨酸起始的蛋白质都被超级生产，对于以缬氨酸起始的蛋白质，只要在宿主细胞中也使适宜的氨酰基tRNA合成酶(ValRS)被表达，则其生产就可以获得进一步的提高。
本申请在此描述的评价是关于对非甲硫氨酸的启动密码子进行阅读的突变启动子tRNA是否能够对选择的由非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质的生产以比野生型启动子tRNA和其相应的野生型基因结合的形式而更高的水平来在活体中进行，以及其所得到的结果。此外，还描述了分别带有GAC或GAU反密码子的两种突变启动子tRNA和相应的带有GUC或AUC起始密码子的基因突变体。如本文所述，这些突变启动子tRNA/选择的基因突变的结合比野生型启动子tRNA/野生型基因的结合产生更多的蛋白质。特别是，本申请人已经显示了以缬氨酸或异亮氨酸起始的蛋白质在对MTF进行超级表达的大肠杆菌中结合或不结合适宜的氨酰基tRNA合成酶都可以被以增强水平生产。
本发明涉及以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质合成的体内生产方法，以及对以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质合成进行增强的(即称为超级生产)生产的体内方法，其结果是蛋白质产物在其终端的氨基酸不是甲硫氨酸。氨基终端的氨基酸可以是其它的19种天然氨基酸中的任何一种。在具体的实施方案中，以异亮氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸起始的蛋白质的生产被增强，分别得到终端氨基是异亮氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸的蛋白质。本发明进一步涉及被超级生产的蛋白质，这些蛋白质在氨基终端含有的氨基酸不是甲硫氨酸(例如，是异亮氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸)。此外，本发明涉及对那些一般对其生产宿主为毒性的蛋白质的体内生产方法。在具体的实施方案中，本发明的方法可以用于生产血红蛋白(其氨基终端为缬氨酸)、人或猪生长激素(其氨基终端是缬氨酸)、或任何以缬氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸起始的蛋白质。
对氨基终端不是甲硫氨酸的蛋白质的体内增强生产方法按照下述进行将下述的物质引入适宜的宿主细胞，原核或真核细胞都可以a)编码所需生产的蛋白质的DNA并包括非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子(即非甲硫氨酸启动密码子)；b)编码含有相应的反密码子序列的启动子tRNA的DNA；c)编码甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶(MTF)的DNA。在一个实施方案中，除了上述的a-c)之外，还向宿主细胞中引入了编码适宜的氨酰基tRNA合成酶的DNA。编码MTF的DNA用载体引入到宿主细胞中，载体是使MTF在受体中能被超级表达的载体。在MTF和适宜的氨酰基tRNA合成酶被在宿主细胞中表达的实施方案中，编码MTF的DNA和编码适宜的氨酰基tRNA合成酶的DNA是通过载体引入到宿主细胞中的，载体是可以使MTF和适宜的氨酰基tRNA合成酶都被以充足的水平表达的那些载体。所得到的被修饰的宿主细胞(即现在含有上述的a)和b)的DNA)，突变的启动子tRNA，以及包括或不包括编码适宜的氨基酸tRNA合成酶的DNA，都被保持在适宜MTF超级生产的条件下，这些条件还可以是对适宜的tRNA合成酶和所需产生的蛋白质的超级生产为适宜的条件。所得到的蛋白质利用已知的方法从细胞中获得。
上述方法的结果不但实现了对以甲硫氨酸以外的氨基酸起始的蛋白质的生产，而且还使生产被提高(即获得的所需蛋白质的数量高于在MTF或MTF和适宜的氨酰基tRNA合成酶没有被超级表达时的数量)。在本文中，蛋白质的增强生产指的是所生产的蛋白质的水平比对照细胞的生产水平高至少两倍，优选地高3倍，更优选地高5-6倍。对照细胞是同类的细胞，它们带有野生型基因，具有编码所需蛋白质的甲硫氨酸起始密码子。
在本文中所述的具体实施方案中，当MTF自己或其与缬氨酰tRNA合成酶(ValRS)一起被超级表达时，以缬氨酸起始的所需蛋白质就被在适宜的宿主细胞中超级生产。在一个实施方案中，所需的蛋白质是血红蛋白。在另一个实施方案中，被超级生产的所需的蛋白质是以异亮氨酸起始的，当MTF被超级生产时，其就被在适宜的宿主细胞(如大肠杆菌)中超级生产。
本发明由下面的实施例给予具体的描述，这些实施例都不是对本发明的任何限制。实施例材料和方法以下的实施例中使用了下述的材料和方法。质粒和菌株野生型和各种突变CAT报道基因和tRNAfMet基因被克隆到pRSVp质粒中[Li et al.,J.Biol.Chem.,271:1022-1028(1996)；图1]。使用pACD质粒[Mangroo and RajBhandary,J.Biol.Chem.,270:12203-12209(1995)]进行对ValRS、IF2和MTF的超级生产。ValRS、IF2和FMT[编码MTF和FMS-FMT基因(编码肽基去甲酰基酶，该酶将甲酰基从蛋白质和MTF的N-终端去掉；Guillonet al.,J.Mol.Biol.,234:359-367(1992)]分别被克隆到EcoRⅠ、Notl、Ncol和Espl位点[Mangroo and RajBhandary,J.Biol.Chem.,270:12203-12209(1995)]。FMS-FMT基因超级生产的MTF比FMT基因单独生产的多，并且用于对MTF和ValRS的共同超级生产。使用大肠杆菌CA274菌株(hfrH LacZ125am trpEam)作为这些质粒转化的宿主细胞[Smith and Cells,Nature New Biol.,243:66-71(1973)]。突变发生突变发生和将突变的DNA亚克隆到pRSVp载体中都按照以前的描述进行[Seong and RajBhandary,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,84:3343-338(1987)；Varshney and RajBhandary,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,87:1586-1590(1990)]。为CAT和β-内酰胺酶活性检测制备细胞提取物转化的大肠杆菌在含有氨苄青霉素(100μm/ml)的2X YT培养基中以37℃培养过夜。过夜培养物被以50-100倍稀释于新鲜的含有同样抗生素的2X YT培养基后再培养4-6小时。细胞提取物按照所述[Varshney et al.,J.Biol.Chem.,266:18018-18024(1991)]进行，并用于测量CT和β-内酰胺酶活性。为了尽量避免在不同的转化体中pRSVpCAT拷贝数目的变化的效应，对CAT的特异性活性转换为在同样提取物中β-内酰胺酶的特异性活性(Varshney et al.,1991b)。对CAT和β-内酰胺酶的免疫印迹分析含有0.2 U β-内酰胺酶的细胞提取物的等份试样用来进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳和将蛋白质从凝胶转移到immobilon转移膜上都按照以前所述进行(Varshney et al.,J.Biol.Chem.,1991b)。免疫印迹分析中使用了Amersham Corp.的ECL试剂盒。对大肠杆菌ValRS基因的分离和克隆利用PCR方法将ValRS基因从大肠杆菌TGI染色体DNA中扩增出来。使用的引物的根据是公开的ValRS基因序列(Hartleinet al.,1987)，即CGGAATTCTGCGAAACAAGCTTTGCAGA和ATGAATTCTTTACCATTTTGTATAAGAGA。染色体DNA的制备按照以前所述进行(Wilson,1992)。用于PCR的混合物含有0.5μg基因组DNA,50 mM KCl,10 mM Tris-HCl,pH 9.0,0.1％TritonX-100,2.5 mM MgCl2,0.32 mM dNTP,50 pmol各种引物，以及1U Taq DNA聚合酶。扩增在Perkin-Elmer热调节器中进行，一个循环培养，即95℃下5分钟，55℃下40秒，72℃下4分钟，然后进行30个循环培养，即94℃下1分钟，55℃下40秒，72℃下4分钟。混合物最后在72℃下培养10分钟。约3.2 kbp的PCR产物用EcoRⅠ(VAlRS编码序列不具有EcoRⅠ位点)酶解，并克隆到质粒pACD的EcoRⅠ位点(图1)。在表达G34C36突变tRNA的细胞中的CAT活性；IF2,ValRS，MTF和ValRS及MTF的超级生产效果表中显示的是在带有突变启动子tRNA基因和突变CAT基因的细胞中的相对CAT活性。有意思的是，在带有G34G36突变启动子tRNA基因和CATV1.2.5基因的细胞中的CAT活性高于(约1.6倍)带有野生型CAT基因的细胞。在同一质粒上带有CATV1.2.5基因和野生型启动子tRNA基因的细胞中，其CAT活性是＜2％(数据未给出)。因此，对CATV1.2.5 mRNA的翻译依赖于是否有相应的G34G36突变启动子tRNA的存在。
缬酰基-tRNA合成酶(ValRS)、甲硫氨酰tRNA转甲酰基酶(MTF)、或ValRS和MTF一起都导致带有G34G36突变启动子tRNA的细胞中的CAT活性的进一步提高(见表中)。在仅超级生产ValRS自身的细胞中，CAT活性稍有上升。在仅超级生产MTF的细胞中，CAT活性增加约2倍。在对ValRS和MTF都超级生产的细胞中，CAT活性进一步提高，所以其相对CAT活性比含有野生型CAT基因的细胞高5-6倍。对IF2的超级生产，只对带有G34G36突变启动子tRNA的细胞的CAT活性有很少的影响。
表IF2和MTF的超级生产对带有G34G36和G34突变启动子tRNA的细胞的相对CAT活性a的影响
显示的相对CAT活性是从不同克隆的提取物和/或从相同的克隆的不同细胞的提取物中的平均值。
在带有野生型CAT基因(CAT2.5)的细胞的提取物中的相对CAT活性，对野生型起始tRNA的超级生产定为100％。
对细胞提取物的免疫印迹分析确认了上述的结果，并显示在各种提取物中CAT活性的升高的原因是CAT蛋白质的数量的升高。例如，当β-内酰胺酶这种在同一质粒中编码的蛋白质的水平在所有各道都大约相同时，某些提取物中的CAT蛋白质就比其它的多，而且各条带的相对强度与表中的相对CAT活性对应。ValRS、MTF、ValRS和MTF对体内G34G36突变起始tRNA的氨酰基化和甲酰基化的作用从表达G34G36突变起始tRNA的CA274转化体中分离的总tRNA在酸性脲聚丙烯酰胺凝胶上分离。用Northern印迹杂交检测到相应于脱酰基tRNA、氨酰基-tRNA和甲酰基氨酰基-tRNA的各种形式的突变tRNA[Varshney et al.,J.Biol.Chem.,266:24712-24718(1991)]。用内源性tRNATyr探针作为内部对照。在那些不超级生产ValRS或MTF的细胞中，大约50％的G34G36突变启动子tRNA是Val-tRNA(57％)，并且只有约20％为fVal-tRNA[根据对数据的磷光分析(phosphorimager analysis)]。MTF的超级生产导致所有的Val-tRNA转换为fVal-tRNA，而对ValRS和MT的超级生产导致几乎完全的G34G36突变起始tRAN向fVal-tRNA的转换。因此，对ValRS、MTF、ValRS和MTF的超级生产在一方面与细胞的CAT活性有直接的相关性，并且在另一方面与fVal-tRNA的水平有直接的相关性。
如前所述，内源性tRNATyr是在各种条件下基本上全部氨酰基化的[Varshney et al.,J.Biol.Chem.,266:24712-24718(1991)]。
在表达G34突变tRNA的细胞中的CAT活性用G34突变启动子tRNA和CAT11.2.5报道基因进行类似的实验。表中显示，在表达该tRNA和CAT1.1.2.5基因的细胞的提取物中的CAT活性与表达野生型CAT基因的细胞相似。然而，对IF2或MTF的超级生产导致CAT活性分别提高2或3倍以上。因此，对U35A36和G34G36突变启动子tRNA而言，G34突变启动子tRNA与CAT1.1.2.5基因结合所产生的CAT蛋白质比野生型CAT基因和野生型启动子tRNA基因的结合更多。对细胞提取物的免疫印迹分析结果也与CAT活性检测的结果相吻合。对G34突变启动予tRNA的酸性脲凝胶电泳分析的结果显示在超级生产MTF的细胞中的fIle-tRNA的水平被明显提高。这一点与表中显示带有G34突变启动子tRNA和超级生产MTF的细胞的CAT活性的升高相吻合。然而，G34突变启动子tRNA的相当部分(约60％)还是在体内没有改变(根据对Northern印迹的磷光分析，数据未给出)，这就建议该tRNA对异亮氨酰-tRNA合成酶(IleRS)是比较差的底物。这些结果意味着，如果通过对IleRS和MTF的超级生产可以将tRNA完全转换为fIle-tRNA，则在表达G34突变启动子tRNA和超级生产MTF(见表)的细胞的325％相对CAT活性还可以进一步被提高。
在上述实施例中描述的工作显示，带有GUC和AUC起始密码子的突变CAT基因，在有相应的突变启动子tRNA存在的大肠杆菌中产生的CAT蛋白质比带有AUG起始密码子(见表)的CAT基因产生的更多。这些结果证明，与野生型CAT mRNA/野生型启动子tRNA结合相比，突变CAT mRNA/突变启动子tRNA结合所产生的CAT蛋白质更多是一种普遍现象，并且，以不是甲硫氨酸的氨基酸为N-终端的蛋白质可以在大肠杆菌中被超级生产。
体内提高CAT蛋白质生产的所需条件依赖于所使用的突变启动子tRNA。(ⅰ)对于G34G36突变体，即被缬氨酸所氨酰基化的，IF2的超级生产没有效果。然而，对ValRS和MTF的超级生产显著地提高了对CAT蛋白质的合成(见表)。这是因为G34G36突变tRNA是ValRS的比较差的底物。而且，对MTF而言，被缬氨酸所氨酰基化的tRNA与被甲硫氨酸所氨酰基化的tRNA相比是比较差的底物[Giege et al.,FEBS Lett.,30:291-295(1973)；Guillon et al.,J.Bacteriol.,174:4294-4301(1992)]。结果是，对G34G36突变的体内fVal-tRNA水平相当低，大约为20％。对ValRS和MTF的超级生产将全部的G34G36 tRNA转换为fVal-tRNA，并且提高CAT活性的水平。(ⅱ)对G34突变启动子tRNA而言，即被异亮氨酸所氨酰基化的，在带有该突变tRNA的细胞中的CAT活性被IF2或MTF的超级生产所提高。这种tRNA中的相当部分没有改变。然而，IleRS与MTF一起的超级生产可以导致体内CT水平的进一步提高。(ⅲ)对U35A36突变tRNA，即在体内基本都被谷氨酸所氨酰基化并甲酰基化的，要提高CAT蛋白质合成就需要对MetRS或IF2的超级生产。我们对MetRS的超级生产的效果的解释是，fGln-tRNA比fMet-tRNA的起始活性差，而且MetRS的超级生产导致该tRNA被甲硫氨酸部分氨酰基化，从而将其转换为“更活性”的启动子tRNA。相似地，IF2超级生产的效果的原因是fGln-tRNA对结合IF2为比较差的底物。对IF2的超级生产可能导致fGln-tRNA对IF2结合的增强，从而导致其在起始中的应用被提高。这样，有多个因子影响在大肠杆菌中使用突变启动子tRNA合成CAT蛋白质。它们包括:(ⅰ)tRNA的氨酰基化和甲酰基化的程度；(ⅱ)甲酰基氨酰基化的tRNA对结合IF2和/或核糖体的活性；以及(ⅲ)对突变启动子tRNA的超级生产的程度。第三个因子的重要性被低估了，因为在此所用的两种突变tRNA产生的另一种报道蛋白，即二氢叶酸还原酶，在被克隆到低拷贝载体时比较低[Pallanck and Schulman,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,88:3872-3876(1991)]。CAT蛋白质水平对细胞中甲酰基氨酰基-tRNA水平的依赖强烈表明起始是CAT mRNA翻译的限制性步骤阻[Hershey,“Protein Synthesis”,In Neidhart et al.,(Eds),Escherichia coli andSalmonella Typhimurium,Cellular and Molecular Biology,Amer.Soc.Microbiology,Washington,DC,Chapter 40,pp.613-647(1987)]。等同物本领域的技术人员的人将知道或者通过不多的例行试验就能确定许多与本文介绍的具体实施方案等价的方案。这些方案和其他等价方案没有脱离本发明的权利要求规定的范围。
权利要求
1．一种在宿主细胞中超级生产蛋白质的方法，所述的蛋白质是以非甲硫氨酸的氨基酸起始的，该方法包括下述步骤(a)向宿主细胞中引入(1)编码蛋白质的并具有对非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子的DNA；(2)编码含有相应的反密码子的突变启动子tRNA；以及(3)编码甲硫氨酰tRNA转甲酰基酶的DNA；从而产生修饰的宿主细胞；和(b)将修饰的宿主细胞保持在对超级生产甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶和表达具有对非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子并编码蛋白质的DNA为适宜的条件下；从而对以非甲硫氨酸的氨基酸为起始的蛋白质进行超级生产。
2．根据权利要求1所述的方法，其中所述的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质是以缬氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸起始的蛋白质。
3．根据权利要求2所述的方法，其中所述的宿主细胞是大肠杆菌(E.coli)。
4．根据权利要求2所述的方法，其中所述的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质是血红蛋白或生长激素。
5．根据权利要求1所述的方法，进一步包括在步骤(a)中向宿主细胞中引入编码适宜的氨酰基tRNA合成酶的DNA，和在步骤(b)中保持修饰的宿主细胞在对适宜的tRNA合成酶的生产为适宜的条件下。
6．一种在宿主细胞中超级生产蛋白质的方法，其中所述的蛋白质以非甲硫氨酸的氨基酸起始，该方法包括下述步骤(a)向宿主细胞中引入(1)编码蛋白质的并具有对非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子的DNA；(2)编码含有相应的反密码子的突变启动子tRNA；(3)编码甲硫氨酰tRNA转甲酰基酶的DNA，从而产生修饰的宿主细胞；以及(4)编码适宜的氨酰基tRNA合成酶的DNA，从而生产修饰的宿主细胞；和(b)将修饰的宿主细胞保持在对超级生产甲硫氨酰-tRNA转甲酰基酶和表达具有对非甲硫氨酸的氨基酸的启动密码子并编码蛋白质的DNA为适宜的条件下；从而对以非甲硫氨酸的氨基酸为起始的蛋白质进行超级生产。
7．根据权利要求6所述的方法，其中所述的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质是以缬氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸起始的蛋白质。
8．根据权利要求7所述的方法，其中所述的宿主细胞是大肠杆菌。
9．根据权利要求7所述的方法，其中所述的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质是血红蛋白或生长激素。
10．由权利要求1所述的方法生产的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质。
11．由权利要求6所述的方法生产的以非甲硫氨酸的氨基酸起始的蛋白质。
全文摘要
本发明提供了由除了甲硫氨酸以外的氨基酸起始的蛋白质的超级生产,其中,甲硫氨酶tRNA转甲酰基酶加上或不加上tRNA合成酶在宿主细胞中被超级表达。
文档编号C07K14/245GK1231697SQ97198313
公开日1999年10月13日 申请日期1997年8月28日 优先权日1996年8月29日
发明者尤他曼·L·瑞杰布汉德瑞 申请人:麻省理工学院