专利名称：列玻汀拮抗剂在治疗糖尿病中的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及新的用途，并且具体涉及在治疗糖尿病及其并发症中的用途。
已知非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)是由于对胰岛素的耐受性(特别是在骨骼肌、脂肪组织和肝脏中)以及胰腺内胰岛β-细胞的胰岛素分泌不充分而引起的。所以，尽管血胰岛素增多，但仍然缺乏足够的胰岛素来补偿胰岛素耐受性，以将血糖维持在所需的范围内。
Pelleymoumnter等人(科学，1995，269，540-543)报导称，在遗传性肥胖ob/ob小鼠中，ob多肽或“列玻汀”(leptin)可降低血浆内的胰岛素和葡萄糖水平。
英国专利申请公开2292382涉及了多肽、OB多肽及其拮抗剂和它们在调控体重中的用途。GB 2292382公开文本在此引入作为参考。
如今我们已发现，重组列玻汀可直接抑制ob/ob小鼠的分离胰岛和灌注胰腺分泌胰岛素。所以，列玻汀拮抗剂被认为是具有提高胰岛素分泌并有助于调制血糖水平的价值。我们还发现，列玻汀可抑制ob/ob小鼠离体比目鱼肌中的基础性和胰岛素刺激性糖原合成。所以，列玻汀拮抗剂也可被认为是可在提高葡糖利用以及胰岛素作用中具有提高葡糖利用的价值。所以，可将拮抗剂直接用于治疗由胰岛素分泌不足和高血糖作用导致的疾病。此外，血糖过多必定会导致多种慢性糖尿病并发症，所以，那些可增加胰岛素分泌并有助于血糖调控的拮抗剂能够有效地治疗糖尿病并发症，例如视网膜病、肾病和血管病。
所以，本发明提供了列玻汀拮抗剂在治疗由胰岛素分泌不足和血糖过多导致的疾病如非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)中的应用。
另一方面，本发明提供了列玻汀拮抗剂在用于制造治疗由胰岛素分泌不足和高血糖引起的疾病(如非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM))的药物中的应用。
GB 2292382中公开了适用的列玻汀拮抗剂，也可以通过公开了的方法制备这些拮抗剂。
具体的拮抗剂包括蛋白质拮抗剂。
具体的拮抗剂还包括非蛋白质拮抗剂，尤其是有机小分子拮抗剂。
本发明也涉及治疗人或非人哺乳动物的因胰岛素分泌不足和高血糖导致的疾病，如非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的治疗方法，该方法包括给需此治疗的人或非人哺乳动物施用有效、可药用且无毒量的列玻汀拮抗剂。
本发明还涉及一种药物组合物，其中含有列玻汀拮抗剂或其可药用衍生物以及可药用载体。
具体的本发明药物组合物是那些可有效治疗由胰岛素分泌不足和高血糖引起的疾病，如非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的药物组合物。
适用的可药用载体是常规载体，例如公开在GB2292382或国际专利申请公开WO 94/01420中的那些。
按照常规方法，如上述专利申请所述的方法可以制备本发明的组合物。
按照常规方法，如公开在上述专利申请中的那些方法可以决定所述拮抗剂的剂量。
本申请附图(
图1-5和表1)简述如下图1和表1表示列玻汀(100nM)对ob小鼠灌注胰腺的基础胰岛素分泌的作用；图2表示列玻汀(100nmol/l)对ob/ob胰岛的糖刺激(16.7mmol/l)性胰岛素分泌的影响；图3表示重组列玻汀的剂量依赖性抑制作用对ob/ob小鼠离体胰岛的糖刺激(16.7mmol/l)性胰岛素分泌作用的影响；图4表示列玻汀对ob/ob小鼠离体比目鱼肌内的糖原合成的作用；图5表示列玻汀对ob/ob小鼠离体比目鱼肌内糖原合成的作用。
Lee等人(自然，1995，379，632-635)认为存在多种形式的列玻汀受体。若胰岛内的一种或多种列玻汀受体在性质或比例上不同于其它组织中的列玻汀受体，那么特效拮抗剂将成为一种拮抗胰岛和/或骨骼肌内列玻汀受体的拮抗剂，但却无法拮抗其它的列玻汀受体(例如，在下丘脑中)，由此加剧胰岛素耐受性。
小鼠ob基因(J.Hered.41，317-318，(1950))和db基因(科学153，1127-1128(1966))中的突变导致肥胖症和非胰岛素依赖型糖尿病。ob基因的产物，列玻汀仅仅被表达在脂肪组织内(自然(伦敦)，372，425-432，(1994))，而且还证实，每天注射重组列玻汀可以在ob/ob小鼠中抑制对食物的摄取，减轻体重和脂肪质量(科学269，543-546(1995)；科学269，540-543(1995)；科学269，546-549(1995))。这种治疗方式还可以降低高胰岛素血症(科学269，540-543(1995))。近期，已识别出ob基因受体的基因编码(细胞学83，1263-1271(1995))。列玻汀受体存在数种不同的剪接变体。这些剪接变体之一在下丘脑中以高水平表达，并且被认为是调节能量平衡的功能受体。在C57B1/KSJ db/db小鼠(自然(伦敦)379，622-635，(1996)；细胞84，49l-495(1996)；科学27l，994-996(1996))，从而使胞质区消失，导致缺损信号转导。如今报导，在ob/ob小鼠中，除了下丘脑以外，预知的列玻汀功能受体ob-Rb还在若干组织中表达，其中包括胰岛。此外，重组列玻汀可直接抑制ob/ob小鼠离体胰岛和灌注胰腺释放出胰岛素，并且抑制ob/ob小鼠离体比目鱼肌中的基础性和胰岛素刺激性糖原合成，这证明列玻汀具有中枢及外周作用。
已确定小鼠中的糖尿病(db)基因产物是列玻汀受体。迄今至少已鉴别出六种不同剪接形式的列玻汀信息(自然(伦敦)379，622-635，(1996))。其中之一，Ob-Rb具有广泛地胞内区，其中含有Box 2序列基元，它是JAK蛋白激酶结合所需要的，并且被认为是可编码的功能受体。已设计出30-34元的短链反义寡脱氧核苷酸探针(Trayhurn等人，Biochem.Soc.Trans.23卷，4945页，1995)与小鼠列玻汀受体的mRNA序列杂交，并且可用于检测列玻汀受体所有转录物的表达，或只用于检测列玻汀受体长形(long-form)，Ob-Rb。各个寡核苷酸探针的序列对于列玻汀受体来说均是单一的，并且与其它任何已知序列没有明显的同源性。
检测瘦型+/+小鼠(lean+/+mice)的全部列玻汀受体mRNA在下丘脑、肾脏、肺、肝脏、全胰腺、脑、比目鱼肌和脾中的表达，未对白色脂肪组织、脑垂体或心脏进行检测。与瘦型的同窝动物(littermate)相比，相对于聚(A)mRNA水平标准化了的整列玻汀受体mRNA在ob/ob小鼠中过度表达。然而，在过度表达中存在组织特异性区别。所以，在瘦型小鼠中表达水平最高的下丘脑在ob/ob小鼠仅仅过度表达2倍。在肾脏内，整列玻汀mRNA过度表达4倍；但对于一些在瘦型小鼠中整列玻汀mRNA低表达的其它组织，其整列玻汀mRNA在ob/ob小鼠中过度表达至10倍。
用与碱基3329-3363相应的34元物探测的下丘脑诺慎印迹分析显示出一个窄信号带，所述的相应碱基3329-3363是仅仅存在于长形列玻汀受体Ob-Rb中的胞内环形结构。当用和碱基1877-1910相应的33元物探测时，该信号带与复合带(multiple band)形成反差，所述碱基1877-1910是列玻汀受体的所有已知剪接变体所共有的序列。分子量标记物显示，34元物与一个mRNA片段杂交，该mRNA片段含有约3400个与推定功能列玻汀受体相一致的碱基对。在下丘脑中发现以高水平表达，这与Lee等人的近期研究(自然(伦敦)379，622-635，(1996))相吻合。此外，ob/ob小鼠下丘脑(hypothalami)的过度表达是+/+小鼠的2倍。Ob-Rb还存在于(并且比+/+小鼠过度表达)肝脏、肾脏和肺中，但不存在于全脑、心脏、比目鱼肌或脑垂体中。对ob/ob小鼠中Ob-Rb的相对过度表达(与瘦型+/+小鼠相比)的发现与若干著作(科学269，540-543(1995)；美国国家科学院学报(Pro.Natl，Acad.Sci.)，USA 93，1726-1730(1996))中的发现一致，也就是说，重组列玻汀在ob/ob小鼠中可更有效地减少食物摄取和减轻体重。还可以提高列玻汀调控其受体表达的可能性。这将导致列玻汀耐受态，并且可以解释为什么重组列玻汀在食物减肥中缺乏活性的原因(科学269，540-543(1995))。
利用狭线印迹技术，在瘦型+/+小鼠或ob/ob小鼠的全胰腺中皆为检测数长形列玻汀受体的表达。但是，利用mRNA可以从ob/ob小鼠的全胰腺获得强信号。
上述研究证实了，每天腹膜内注射重组列玻汀共28天后可以明显降低ob/ob小鼠的血清胰岛素和血糖，但不能降低瘦型小鼠的血清胰岛素和血糖，这种降低作用是依赖于剂量的(科学269，540-543(1995))。得出ob/ob小鼠胰岛中高度表达的长形列玻汀受体(推定功能受体)后，我们决定用ob/ob小鼠灌注胰腺测试对胰岛素分泌的功能反应(图1，表1)。
列玻汀(100nM)立刻使离体胰腺的胰岛素释放减少。
灌注胰腺标本中的列玻汀可直接对胰岛产生作用，或通过脉管系统释放出另外的介质来产生作用。为了澄清这点，测试列玻汀对ob/ob小鼠离体胰岛释放胰岛素的作用。列玻汀(100nM)可彻底抑制16.7mM葡萄糖对胰岛释放胰岛素的刺激作用，所述胰岛分离自过夜禁食小鼠(图2)。列玻汀的抑制作用在1-100nM内与剂量相关(图3)。列玻汀(10nm)还可以抑制野生型小鼠胰岛的糖刺激性胰岛素分泌作用，但列玻汀(100nM)对ob/ob小鼠胰岛的胰岛素分泌作用没有影响。
为了评估列玻汀直接抑制葡萄糖摄取和胰岛素作用的可能性，利用Challiss等人所述的方法(生化药理学，1988，37，947-950)，在由ob/ob小鼠分离出的完整比目鱼肌(重4-5mg)中，对掺入到糖原中的〔14C〕葡萄糖进行测定。重组鼠列玻汀在100nM时可抑制比目鱼肌中的糖原合成(图4)，其中，在基础处的抑制率为35％(P＜0.01)，在低浓度胰岛素时抑制率为28％、30％和45％(分别为10、50和100uU/ml，P＜0.05)。列玻汀对胰岛素的最大反应没有显著影响。在胰岛素不存在和存在100uU/ml胰岛素的条件下试验较低浓度(1和10nM)列玻汀的作用。10uM列玻汀对基础的和胰岛素刺激的糖原合成产生显著的抑制作用(分别为32％和35％；P＜0.05)。而1nM列玻汀不产生明显的作用(图5)。
肥胖在西方国家和许多发展中国家中是最常见的营养疾病。它与非胰岛素依赖型糖尿病密切相关。这种关系的基础很大程度被推测与进行性肥胖症中出现的胰岛素耐受性的提高有关。胰岛素耐受性被认为可引起葡糖耐量，但普遍认为非胰岛素依赖型糖尿病的恶化需要另外依赖于胰腺损害的恶化。
采用向ob/ob小鼠及其瘦型同窝动物输注重组列玻汀的初期研究表明，列玻汀的初级作用是控制食欲，这可能是提高抑制中枢NPY的释放来实现的(自然(伦敦)337，530-532，(1995))。然而，近期的研究采用了一组摄入等量食物的ob/ob小鼠作为列玻汀输注对象，试验证明列玻汀具有显著的代谢作用(美国国家科学院院报(Proc.Natl，Acad.Sci.)，USA 93，1726-1730(1996))。对成对饲养的小鼠相比，向ob/ob小鼠输注列玻汀将使体重和脂肪垫重量明显降低。但是，输注了列玻汀的小鼠与成对饲养动物之间最大的区别在于血清胰岛素浓度。成对饲养的小鼠的胰岛素浓度从30.6±6.2mg/ml降低到14.2±4.2mg/ml。在被列玻汀输注的小鼠中，胰岛素浓度0.09±0.08mg/ml与瘦型小鼠的没有明显不同(美国国家科学院院报(Proc.Natl，Acad.Sci.)，USA 93，1726-1730(1996))。本试验证明，编码功能受体的列玻汀受体剪接变体存在于ob/ob小鼠的胰岛内，并且列玻汀可直接抑制灌注胰腺内的基础胰岛素分泌和ob/ob小鼠离体胰岛的葡糖刺激性胰岛素释放作用。这些数据首次显示，过度肥胖后的列玻汀过量生产可直接改变胰岛素的分泌作用，并且参与糖尿病综合征的恶化。上述数据还表明，与肥胖有关的列玻汀过量生产是肥胖症中众多对诱发胰岛素耐受性产生反应的因素中的一个。
所以，本发明的另一方面是提供列玻汀拮抗剂在胰岛素耐受性，具体如与肥胖症有关的胰岛素耐受性治疗中的应用。
本发明还提供列玻汀拮抗剂在用于制造治疗胰岛素耐受性，具体如与肥胖症有关的胰岛素耐受性的药物中的应用。
本发明也提供一种在人或非人哺乳动物中治疗胰岛素耐受性，具体如与肥胖症有关的胰岛素耐受性的方法，该方法包括给需此治疗的人体或非人体哺乳动物施用有效、可药用、无毒量的列玻汀拮抗剂。
所以，本发明一种具体药物组合物是用于治疗胰岛素耐受性，具体如与肥胖症有关的胰岛素耐受性的药物组合物。
除胰岛以外，我们还检测了肝脏、肾脏和肺中的长形列玻汀受体。列玻汀在这些组织中的作用功能迄今未知。但是，Levin等人(美国国家科学院院报(Proc.Natl，Acad.Sci.)，USA 93，1726-1730(1996))注意到，肝脏内的肝糖原含量在列玻汀输注的ob/ob小鼠中明显降低，但在成对饲养的小鼠中则不然。结合现有的数据，上述发现表明，列玻汀可直接影响肝糖原代谢。
总之，本申请的结果为具有广泛外周代谢活性和摄食中枢作用的列玻汀提供了生物学和功能的证据。
上述参考文献的公开内容(包括GB2292382和WO 94/01420)在此引入作为参考。
下图和下表说明本发明，但不是限定本发明。
0-15分钟稳定化期16-30分钟治疗期(PBS或列玻汀)AUC曲线下面积变化率％16-30分钟的平均值/0-15分钟的平均值结果＝平均值±SEM(n＝4.5)，*P＜0.05(未成对试验)
权利要求
1.列玻汀拮抗剂在用于制造治疗由胰岛素分泌不足和高血糖引起的疾病的药物中的应用。
2.权利要求1的用途，其中所述药物用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)。
3.列玻汀拮抗剂在用于制造治疗由胰岛素耐受性的药物中的应用。
4.权利要求3的用途，其中所述药物用于治疗与肥胖症有关的胰岛素耐受性。
5.一种在人体或非人体哺乳动物中治疗由胰岛素分泌不足和高血糖引起的疾病的方法，该方法包括给需此治疗的人或非人哺乳动物施用有效、可药用、无毒量的列玻汀拮抗剂。
6.一种治疗胰岛素耐受性的方法，该方法包括该方法包括给需此治疗的人或非人哺乳动物施用有效、可药用、无毒量的列玻汀拮抗剂。
7.一种用于治疗由胰岛素分泌不足和高血糖引起的疾病的药物组合物，其中含有列玻汀拮抗剂或其可药用衍生物以及可药用载体。
8.一种用于治疗胰岛素耐受性的药物组合物，其中含有列玻汀拮抗剂或其可药用衍生物以及可药用载体。
9.权利要求1-8任一项的用途，其中所述列玻汀拮抗剂是有机小分子拮抗剂。
全文摘要
本发明涉及列玻汀拮抗剂在用于制造治疗由胰岛素分泌不足、高血糖和胰岛素耐受性引起的疾病的药物中的应用。
文档编号C07K16/28GK1254291SQ97182228
公开日2000年5月24日 申请日期1997年6月6日 优先权日1997年6月6日
发明者M·A·考托尼, V·埃米尔森, Y－L刘 申请人:史密丝克莱恩比彻姆有限公司