专利名称：：硫酸角质素寡聚糖级分及含该级分的药剂的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及作为抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、细胞分化诱导剂及可以作为药剂有效成分的硫酸角质素寡聚糖。
背景技术：
：硫酸角质素是以N-乙酰基葡萄糖胺残基的6位O-硫酸化的N-乙酰基乳糖胺作为基本结构的葡萄糖胺聚糖。特别是已知构成二糖单元中的N-乙酰基葡萄糖胺残基的6位以外的羟基进一步被硫酸化的高硫酸化硫酸角质素，存在于鲨鱼等软骨鱼类、鲸鱼、牛等的哺乳动物的软骨、骨、角膜中。作为生成其降解物硫酸角质素寡聚糖的方法，有在硫酸角质素中使用来自杆菌属细菌的硫酸角质素降解酶(角质素酶II；日本专利申请公开2-57182号公报)的报告。另外，对于用角质素酶II降解来自牛软骨的硫酸角质素后，分级得到的25种低聚物糖级分进行分析，推定用下述(I)式表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖(以下，称为“硫酸角质素四糖(I)”用下述(II)式表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖(以下，称为“硫酸角质素五糖(II)”、用下述(III)式表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖(以下，称为“硫酸角质素二糖(III)”等结构的报告[Biochemistry，33，4836-4846(1994)。Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键。)可是，到目前为止，还没有高效地，大量制备除去杂质(例如内毒素、核酸、蛋白质、蛋白酶、硫酸角质素寡聚糖以外的葡萄糖胺聚糖类等)的纯的硫酸角质素寡聚糖，特别是硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)的报告。特别是这类杂质的存在，对于以硫酸角质素寡聚糖作为医药品使用时，存在致命的缺点。进而，对于该硫酸角质素寡聚糖的药理作用(特别是抗炎症作用、抗过敏作用、免疫调节作用、细胞的分化诱导作用、细胞凋亡诱导作用)却全然不知。发明公开本发明就是从上述观点进行研究的，是以基本上不混有杂质的硫酸角质素寡聚糖作为抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、细胞分化诱导剂(以下，称为“分化诱导剂”)或细胞凋亡诱导剂利用，作为研究课题。本发明人，为了解决上述课题，用硫酸角质素降解酶降解高硫酸化硫酸角质素，从其降解产物中，制备二～五糖单元的寡聚糖、特别是二糖、四糖及五糖单元的寡聚糖，对其药理作用进行认真研究结果发现，这些寡聚糖及其盐显示了优良的抗炎症作用、抗过敏作用、免疫调节作用、细胞的分化诱导作用、细胞凋亡诱导作用，从而完成了本发明。即，本发明的抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、分化诱导剂或细胞凋亡诱导剂(以下，将这些药剂，总称为“本发明的药剂”)，是含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分的。本说明书中的“硫酸角质素寡聚糖”是指用内(endo)-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶型硫酸角质素降解酶，将硫酸角质素进行降解得到的硫酸角质素的降解产物。作为本发明药剂所用的硫酸角质素寡聚糖，列出的是具有唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖、在其还原末端上具有硫酸化的N-乙酰基葡糖胺的二～五糖单元的寡聚糖，在1个分子中至少有2处的烃基硫酸化的硫酸角质素寡聚糖，特别是上述的硫酸角质素寡聚糖至少含有用Gal(6S)-GlcNAc(6S)(其中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。)所示的二糖作为其构成成分。进而，作为上述硫酸角质素寡聚糖，作为适宜的例子，可举出用下述(I)式表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用(II)式表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用(III)式表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖等。Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键、或α2，6键。)本发明还提供了在还原末端具有硫酸化了的N-乙酰基葡萄糖胺的二～五糖单元的寡聚糖；提供了在1个分子中至少有2处羟基被99％以上硫酸化的硫酸角质素寡聚糖的，并具有下述特性的硫酸角质素寡聚糖级分。(a)基本上不含内毒素，另外，核酸、蛋白质、蛋白酶的含量在检出界限以下。(b)基本上不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素。另外，本发明提供含有99％以上的，至少以Gal(6S)-GlcNAc(6S)表示的二糖作为构成成分的硫酸角质素寡聚糖，且具有上述(a)及(b)特性的硫酸角质素寡聚糖级分。另外，作为含在上述寡聚糖级分的硫酸角质素寡聚糖，可举出用上述(I)式表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用(II)式表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用(III)式表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖等优选例子。进而，作为这些硫酸角质素寡聚糖，可举出用内-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶型硫酸角质素降解酶，将来自软骨鱼类的高硫酸化硫酸角质素降解后、分级分离得到的硫酸角质素寡聚糖。本发明进一步包括将硫酸角质素用具有下述理化性质的硫酸角质素降解酶降解的步骤和从降解生成物分离出具有下述性质的硫酸角质素寡聚糖的步骤，从而提供了硫酸角质素寡聚糖的制备方法。①作用与硫酸角质素作用，将其N-乙酰基氨基葡萄糖苷键进行水解；②底物特异性与硫酸角质素I、硫酸角质素II及多硫酸角质素作用，作为主要的降解物，生成硫酸化硫酸角质素二糖及硫酸化硫酸角质素四糖；优选的，进而还具有下述理化性质③最适反应pH4.5～6(0.1M醋酸缓冲液及10mMTris-醋酸缓冲液中，37℃)；④pH稳定性6～7(0.1M醋酸缓冲液及10mMTris-醋酸缓冲液中，37℃、放置1小时)；⑤最适反应温度50～60℃(0.1M醋酸缓冲液、pH6.0、反应10分钟)；⑥热稳定性至少在45℃以下稳定(0.1M醋酸缓冲液、pH6.0、放置1小时)。硫酸角质素寡聚糖具有以下的性质(A)以硫酸化N-乙酰乳糖胺为基本骨架的硫酸角质素寡聚糖作为主成分；(B)基本上不含内毒素，核酸、蛋白质及蛋白酶含量在微量或检出界限以下；(C)基本上不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素。另外，在上述硫酸角质素寡聚糖级分的制备方法中，例如，作为原料的硫酸角质素，使用高硫酸化硫酸角质素时，可得到用上述(I)式表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用(II)式表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用(III)式表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖等的硫酸角质素寡聚糖、特别是可得到用(I)式表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖及(III)式表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖为主成分的硫酸角质素寡聚糖。另外，在本发明中，优选的二～五糖单元的硫酸角质素寡聚糖，通常有2～4处被硫酸化。另外，在含有本发明可以使用的含唾液酸的硫酸角质素寡聚糖中，作为唾液酸，可举出N-乙酰基神经氨酸及N-乙酰神经氨酸，但优选的是N-乙酰基神经氨酸。另外，唾液酸也可以使用α2，3键或α2，6键中的任何一种，但优选的是α2，3键的。以下，详细地说明本发明。<1>本发明所用的硫酸角质素寡聚糖及硫酸角质素寡聚糖级分本发明所用的，成为硫酸角质素寡聚糖原料的硫酸角质素，主要是以半乳糖或半乳糖-6-硫酸和N-乙酰基葡萄糖胺-6-硫酸的二糖重复结构而构成，依据动物种类及器官等，硫酸含量不同，但通常从鲨鱼等软骨鱼类、鲸鱼、牛等哺乳动物的软骨、骨和角膜等原材料制备。作为原料使用的硫酸角质素，通常只要是容易得到的，就没有特别的限制，但优选的是使用构成糖的半乳糖残基被硫酸化了的高硫酸化硫酸角质素(将每个组成二糖，含有1.5～2分子硫酸基的高硫酸化硫酸角质素，称为多硫酸角质素)。另外，作为半乳糖残基的硫酸基位置，优选的是6位。这样的高硫酸化硫酸角质素，例如可从鲨鱼等软骨鱼类的软骨的蛋白聚糖中取得。另外，也可使用市售的。本发明的硫酸角质素寡聚糖，可通过在硫酸角质素、优选的是高硫酸化硫酸角质素的缓冲溶液中，使内-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶型硫酸角质素降解酶，例如来自杆菌属细菌的角质酶II(日本专利申请公开2-57182号公报)，或本发明者们，从属于杆菌属细菌中新发现的新的硫酸角质素降解酶作用、降解后，将得到的降解物分级分离后而得到。该降解反应是在硫酸角质素浓度为1.0～100mg/ml、调节成pH为6.0～7.0的缓冲溶液，温度在25～40℃下，反应1～72小时下进行的。此时，缓冲溶液的浓度通常是0.01-0.2M。作为缓中液，只要可调节到上述pH范围，就可以，对于种类没有特别限制，例如可举出醋酸缓中液、磷酸缓中液、Tris缓冲液。另外，用于降解反应的酶量，对于硫酸角质素1g，可使用从0.1～1.0单位。在此，所说的1单位，是指在1分钟内，生成相当于1μmol的N-乙酰基葡萄糖胺的还原末端的酶量。上述新的硫酸角质素降解酶是产生环状芽胞杆菌，例如由本发明者们分离的环状芽胞杆菌KsT202株产生的酶，是热稳定性优良的硫酸角质素降解酶。该酶是通过在适宜的培养基中培养环状芽胞杆菌KsT202株，从该培养基或/和细菌菌体，按照通常的酶的精制法进行纯化而得到的。于平成6年9月5日，将环状芽胞杆菌KsT202株，以微生物保藏号FERMP-14516，保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(邮政编码305日本国茨城县筑波市东一丁目1番3号)中，于平成7年11月6日，根据布达佩斯条约，转移到国际保藏，以保藏号为FERMBP-5285进行保藏。另外，以下，表示上述新的硫酸角质素降解酶的理化性质。①作用与硫酸角质素作用，将其N-乙酰基氨基葡萄糖苷键进行水解。②底物特异性与硫酸角质素I、硫酸角质素II及多硫酸角质素作用，作为主要的降解物，生成硫酸化硫酸角质素二糖及硫酸化硫酸角质素四糖。另外，也可确认生成硫酸化硫酸角质素五糖。③最适反应pH4.5～6(在0.1M醋酸缓冲液及10mMTris-醋酸缓冲液中，37℃)④pH稳定性6～7(在0.1M醋酸缓中液及10mMTris-醋酸缓中液中，37℃、放置1小时)⑤最适反应温度50～60℃(0.1M醋酸缓中液、pH6.0、反应10分钟)⑥热稳定性至少在45℃以下稳定(0.1M醋酸缓冲液、pH6.0、放置1小时)。在制备本发明的硫酸角质素寡聚糖级分时，可使用这样新的硫酸角质素降解酶和上述角质酶II等的硫酸角质素降解酶进而使用常规方法固定化的固定化酶来进行反应。通过上述的酶的降解反应，可将硫酸角质素降解寡聚糖。接着，通过通常的分离提纯方法，例如用乙醇沉淀和各种色谱进行纯化，可分离提纯出作为目的物的硫酸角质素寡聚糖。以二糖、四糖及五糖的硫酸角质素寡聚糖为例，进一步详细地说明该提纯方法，通常，首先通过乙醇沉淀，浓缩上述降解产物，接着，进行凝胶过滤(分级分离分子量范围100～10,000)，分别大致粗分级为二糖、四糖、五糖附近的硫酸角质素寡聚糖。进而，通过阴离子交换色谱，将该粗级分分离、分级成基本上不含内毒素，另外核酸、蛋白质、蛋白酶的含量在检出界限以下，进而，基本上，不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素，即基本上分离、分级成纯的二糖、四糖及五糖。本发明中，所说“基本上不含”是指可通过灵敏度高的检出法检出，但对于硫酸角质素寡聚糖的药理作用(抗炎症作用、抗过敏作用、免疫调节作用、细胞分化诱导作用、细胞凋亡诱导作用等)是没有作用的含量。另外，本发明的硫酸角质素寡聚糖，是以硫酸角质素作为原料，通过内-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶，将其降解，分级成二～五糖单元的寡聚糖级分，实质上，不含有作为原料的硫酸角质素。另外，也可通过优选地或特异地切断构成硫酸角质素的半乳糖或半乳糖-6-硫酸和N-乙酰基葡萄糖胺-6-硫酸的N-乙酰基氨基葡萄糖苷键，这种化学降解法，从降解硫酸角质素的降解物，取得硫酸角质素寡聚糖。如上所述那样，可得到硫酸角质素寡聚糖，特别是用上述(I)式表示的四硫酸化N-乙酰乳糖胺四糖、用(II)式表示的三硫酸化N-乙酰乳糖胺五糖、用(III)式表示的二硫酸化N-乙酰乳糖胺二糖等。另外，通过用式(I)、式(II)、式(III)表示的物质的核磁共振谱(1H-NMR、13C-NMR)及高速原子冲击质谱分析的分析结果，如后面的实施例所示。本发明所使用的硫酸角质素寡聚糖，也包括电离状态的、附加质子结构的、或与碱金属(钠、钾、锂等)和碱土类金属(钙等)、铵等的无机碱之间形成的盐、或二乙醇胺盐、环己铵盐、氨基酸盐等的有机碱之间形成的盐中，药学上可接受的盐。另外，本发明所用的硫酸角质素寡聚糖和/或其盐和，通常药物上使用的载体、赋形剂、其他的添加物等组成的药物组合物也是新的，可以抗炎症、抗过敏、免疫调节、细胞分化诱导、细胞凋亡诱导等为目的而给药。本发明的硫酸角质素寡聚糖级分可通过上述方法，从硫酸角质素，特别是高硫酸化硫酸角质素的酶降解物，除去内毒素、核酸、蛋白质、蛋白酶，目的物的硫酸角质素寡聚糖以外的葡萄糖胺聚糖类等杂质，制成99％以上含量的硫酸角质素寡聚糖。<2>本发明的药剂上述的硫酸角质素寡聚糖和/或其在药学上可接受的盐，可作为抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、分化诱导剂或细胞凋亡诱导剂等及其他用途的药品而被广泛应用。本发明的抗炎症剂，对于炎症方面的任何疾病是有效的，具体的适应症，例如可举出慢性风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、变形性脊椎炎、骨关节炎、腰痛症、手术后及外伤后的炎症及肿胀的缓解、肩周炎、颚关节症、腱鞘炎、腱周围炎、肱骨髁炎(网球肘)、肌肉痛、角结膜炎等。本发明的抗炎症剂，由于含有的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作用，对于这些疾病及症状，具有镇痛消炎、解热等抗炎症作用。本发明的抗过敏剂，对于与过敏有关的任一病是有效的。但作为具体的适应症，可举出例如过敏性鼻炎、过敏性角结膜炎，春季结膜炎、湿疹、皮炎、荨麻疹、特应性皮炎等。本发明的免疫调节剂，对于由于免疫系统异常引起的疾病是有效的，作为具体的适应症，例如可举出人体自身免疫性淋巴细胞增生性综合症(humanautoimmunelymphoproliferativesyndrome；细胞81，935-946(1995)，科学268，1347-1349(1995))、淋巴细胞增生性疾病(lymphoproliferativedisorder；白血病和淋巴瘤363-368(1995))、血管免疫母细胞性淋巴结症(angioimmunoblasticlymphadenopathy；Blood85(10)，2862-2869(1995))、免疫母细胞性淋巴结症(immunoblasticlymphadenopathy；TheAmericanJournalofMedcicine63，849-(1977))、慢性类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、园板状红斑狼疮、多发性肌炎(平滑肌瘤)、硬皮症、混合结缔组织症、慢性甲状腺炎、原发性粘液水肿、甲状腺中毒症、恶性贫血、古德帕斯彻氏(Good-pasture)综合症、急性进行性肾小球肾炎、重症肌无力症、寻常性天疱疮、水疱性类天疱疮、胰岛素抵抗性糖尿病、少年性糖尿病、阿狄森病、萎缩性胃炎、男性不育症、早发性更年期、晶状体原性葡萄膜炎、交感性脉管炎、多发性硬化症、进行性全身性硬化症、炎症性肠疾病(克罗恩氏病溃疡性结肠炎等)、原发胆汁性肝硬变、慢性活动性肝炎、自身免疫性溶血性贫血、发作性血色素尿症、特发性血小板减少性紫癜病、干燥综合症、抗磷脂抗体综合症等。本发明的分化诱导剂，对于由于生理细胞分化不全、免疫系统异常、恶性肿瘤等引起的一切疾病是有效的，作为具体的适当症，例如可举出人体自身免疫性淋巴细胞增生性综合症、淋巴细胞增殖紊乱、血管免疫母细胞性淋巴结症、免疫细胞性淋巴结症、慢性类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、炎症性肠疾病(克罗恩氏病、溃疡性结肠炎等)、进行性全身性硬化症、多发性肌炎(平滑肌瘤)、干燥综合症、肉瘤、白血病、淋巴瘤、癌转移的抑制、增生形成的预防(牛皮癣等的治疗)、创伤治愈、骨髓发育不良缩合症、硬皮症等。本发明的细胞凋亡诱导剂，对于由于生理的细胞凋亡障碍、免疫系统异常、恶性肿瘤等引起的一切疾病，是有效的，但作为具体的适应症，例如可举出人体自身免疫性淋巴细胞增生综合症、淋巴细胞增殖紊乱、血管免疫母细胞性淋巴结症、免疫母细胞性淋巴节症、慢性风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、进行性全身性硬化症、多发性肌炎(平滑肌瘤)、干燥综合症、癌、白血病、淋巴肿瘤、癌转移的抑制、增生形成的防止(牛皮癣等的治疗)、骨髓发育不良症候群、硬皮症、异常肾小球膜细胞的细胞凋亡诱导(肾小球肾炎的治疗)等。对于淋巴结重量的抑制、分化诱导、及细胞凋亡诱导、在MRL-lpr/lpr小鼠上已看到它们的效果。人体自身免疫性淋巴细胞增生性综合症(autoimmunelymphoproliferativesyndrome)与MRL-lpr/lpr小鼠相同地，由于Fas基因异常的原因，另外，可看到淋巴结肿胀等，与MRL-lpr/lpr小鼠的病态的类似性高。MRL-lpr/lpr小鼠可以说是人体自身免疫性淋巴细胞增生性综合症的适当模型。因此在免疫调节剂、分化诱导剂及细胞凋亡诱导剂中，最优选的本发明药剂的适应症是人体自身免疫性淋巴细胞增生性综合症(autoimmunelymphoproliterativesyndrome)。本发明的药剂可按照注射(肌肉内、皮下、皮内、静脉内、关节腔内、眼内、腹腔内等)、点眼、滴注、经皮、经口、吸入等的给药方法、进行制备。作为剂型、可举出注射剂(溶液、悬浮液、乳浊液、使用时溶解的固形剂等)、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液剂、脂质体包涵体、软膏剂、凝胶剂、外用散剂、喷雾剂、吸入散剂、点眼剂、眼软膏剂等。对于制剂配制，可使用常用的赋形剂、粘合剂、润滑剂、其他的着色剂、崩解剂等通常药剂所用的成分。另外，在本发明的药剂中，也可与硫酸角质素寡聚糖同时，同时使用抗炎症成分、抗过敏剂成分、免疫调节成分、分化诱导成分、细胞凋亡诱导成分等。在上述的给药方法及剂型中，在抗炎症剂及抗过敏剂中，优选的是表1中所示的。另外，在免疫调节剂、分化诱导剂及细胞凋亡诱导剂中，优选的给药方法及剂型表示在表2中。表1表2本发明的抗炎症剂、抗过敏剂的推定有效给药量，在全身给药时，按硫酸角质素寡聚糖量，是30～300mg/人/天，另外，局部给药时，是1～10mg/人/天。另外，本发明的免疫调节剂，分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂的推定有效给药量，按硫酸角质素寡聚糖量，是30～6000mg/人/天。附图简述图1是表示在实施例1中制备的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖(硫酸角质素四糖(I))，用HPLC进行凝胶过滤时色谱时的图。图2是表示对于实施例1中制备的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖(硫酸角质素五糖(II)，用HPLC进行凝胶过滤时的色谱图。图3是表示对于实施例1中制备的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖(硫酸角质素二糖(III)，用HPLC进行凝胶过滤时的色谱图。图4是表示实施例1中制备的硫酸角质素五糖(II)的400MHz的1H-NMR光谱图。图5是表示给与硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)或硫酸角质素二糖(III)的木瓜蛋白酶关节炎模型兔子的关节液量图。图6是表示对于引起炎症的大鼠，在诱导炎症的5分钟前，给与硫酸角质素四糖(I)或各种试验物质时的足浮肿率的对时间的变化图。图7是表示对于引起炎症的大鼠，在诱导炎症的3分钟前，给与硫酸角质素四糖(I)或各种试验物质时的足浮肿率的对时间的变化图。图8表示给与硫酸角质素四糖(I)或醋酸地塞米松的角叉菜胶胸膜炎大鼠的胸水液量图。图9表示给与硫酸角质素四糖(I)或醋酸地塞米松的角叉菜胶胸膜炎大鼠的胸水中的白细胞数图。图10表示硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)对于由于N-甲酰基-Met-Leu-Phe(FMLP)刺激引起的豚鼠中性白细胞、产生活性氧(O2-)抑制效果图。图11是表示硫酸角质素四糖(I)给药及非给药的过敏性结膜炎模型豚鼠结膜炎程度的评价图。图12是表示硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)或硫酸角质素二糖(III)给药及非给药的对过敏性结膜炎模型豚鼠结膜炎程度的评价图。图13是表示对于过敏性结膜炎模型豚鼠，以各种浓度给与硫酸角质素四糖(I)时的结膜炎程度的评价图。图14是表示对于是自身免疫疾患模型小鼠MRL小鼠，以各种投药量反复给与硫酸角质素二糖(III)28天时的小鼠颌下淋巴结重量图。图15是表示以各种给药量，反复给与硫酸角质素二糖(III)56天时的MRL小鼠的肠系膜淋巴结重量图。图16表示以各种给药量，反复给与硫酸角质素二糖(III)56天时的MRL小鼠的颌下淋巴结重量图。图17表示对于以各种给药量，给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠的肠系膜淋巴结切片标本(HE染色)的染色浓度的分析结果图。图18表示对于以各种给药量给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠的颌下淋巴结切片标本(HE染色)的染色浓度的分析结果图。图19是表示以各种给药量，给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠淋巴细胞的CD3及CD4阳性细胞的比例(％)图。图20是表示以各种给药量，给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠淋巴细胞的CD3及CD8a阳性细胞的比例(％)图。图21是表示以各种给药量，给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠淋巴细胞的CD3及B220阳性细胞的比例(％)图。图22是表示以各种给药量，给与硫酸角质素二糖(III)时的MRL小鼠颌下淋巴结中的细胞凋亡细胞数图。实施本发明的最佳方案以下，通过实施例更具体地说明本发明。另外，制备例是表示从杆菌属细菌得到的新的硫酸角质素降解酶的制备例，实施例1分别表示硫酸角质素寡聚糖级分的制备实施例，实施例2表示硫酸角质素寡聚糖的急性毒性及各种药理作用的实施例。另外，实施例3、4、5及6是制剂的实施例。制备例硫酸角质素降解酶的制备<1>环状芽胞杆菌KsT202株的分离在含有氮源、无机盐类及硫酸角质素的液体培养基5ml中，添加少量土壤，在45℃下，振动培养3天。培养后，将培养上清液10μl点在滤纸上。同样地，也将培养基(对照)10μl点在滤纸上。风干后，将滤纸浸入甲苯胺兰液中。用稀醋酸液充分洗净滤纸后，将培养上清液与对照的斑点部位色调进行比较。由于甲苯胺兰与硫酸角质素结合，显示兰色，所以与对照进行比较，可确认，颜色浅的试样中存在硫酸角质素同化菌，可使用平板培养基(例如心脏灌注琼脂培养基HeartinfusionAgar)，用通常方法从培养液纯化分离菌。对于纯粹分离了的各种菌，使用液体培养基，与上述相同地，检查硫酸角质素的同化性能，得到硫酸角质素同化菌。研究该株的形态学的性质、生育特性、生理学的性质的结果，本菌株确定为环形芽胞杆菌(Bacilluscirculans)。本菌株是在利用硫酸角质素上，与公知的菌株有区别的新菌株。另外，环形芽胞杆菌KsT202株，在平成6年9月5日，在工业技术院生命工学工业技术研究所，以保藏号FERMP-14516进行保藏，在平成7年11月6日，按照布达佩斯条约转移到国际保藏，以保藏号FERMBP-5285进行保藏。<2>硫酸角质素降解酶的制备将胨(极东制药工业(株)制)1.5％、啤酒酵母浸膏(日本制药(株)制)0.75％、从鲨鱼软骨制备的多硫酸角质素(生化学工业(株)制)0.75％、K2HPO40.5％、MgSO47H2O0.02％、NaCl0.5％消泡剂阿卡尔(Adekanol)LG109(商品名，旭电化工业(株)制)0.0015％(pH8.0)组成的培养基20L，加入到30L容量的发酵罐中，在121℃下，高压蒸汽灭菌20分钟后，将预先在相同培养基下，37℃下，振动培养16小时的KsT202株的培养液1L(5％)进行无菌地接种，在45℃下，通气(1vvm)，搅拌(300rpm)、培养24小时。在20L培养液连续离心机中，进行离心除去菌体，得到约20L的菌体外液。在该菌体外液中，加入硫酸铵，以达到0.7饱和，用离心分离，收集生成的沉淀，使其溶解在2.5L的10mMTris醋酸缓冲液(pH7.5)中。在该溶液中，加入硫酸铵，达到0.35饱和，用离心分离除去生成的沉淀，进而，添加硫酸铵，达到0.55饱和后，用离心分离，回收生成的沉淀。将沉淀溶解在2.5L的10mMTris醋酸缓冲液(pH7.5)中，通过用同一缓中液平衡了的DEAE-纤维素DE52(Whatman公司)柱(5.2×24cm)，吸附酶。用同一缓冲液1.5L洗柱后，在同一缓冲液中，将NaCl浓度，从0～0.3M直线地上升，使酶洗脱出。收集活性级分，添加硫酸铵，以达到0.55饱和，用离心分离收集沉淀，溶解到少量的10mMTris醋酸缓中液(pH7.5)中。然后，加在SephacrylS-300(弗尔马西亚公司)柱(3.4×110cm)中，用含有0.5MNaCl的50mMTris醋酸缓中液(pH7.5)进行凝胶过滤。通过使用UK-10膜(AdvantecToyo)的超滤，将活性级分浓缩，在约100倍量的10mMTris醋酸缓冲液(pH7.5)中透析。将透析后内液通过预先用同一缓冲液平衡了的DEAE-Toyopearl(Tosoh公司)柱(2.2×15cm)，使酶吸附，用含有0.1MNaCl的同一缓中液150ml洗柱后，在同一缓冲液中，将NaCL浓度，从0.1M直线上升到0.2M，使酶洗脱出。通过超滤，将活性级分浓缩，加到SephacrylS-300柱(2.2×101cm)中，进行凝胶过滤。在活性级分中，添加NaCl，以达到4M后，加到用含有4MNaCl的10mMTris醋酸缓冲液(pH7.5)平衡了的苯基琼脂糖(Pharmacia公司)柱(1.6×15cm)，吸附酶，在同一缓冲液中，将NaCl浓度，从4M，线性地减少到0，使酶洗脱出。得到的酶是29单位或U，比活性是2.09单位或U/mg(换算成牛血清白蛋白重量)。在精制酶中，不含糖苷酶类的杂质酶。这样得到的硫酸角质素降解酶，具有以下性质。①作用与硫酸角质素作用，将其N-乙酰基氨基葡萄糖苷键进行水解。②底物特异性与硫酸角质素I、硫酸角质素II及多硫酸角质素作用，作为主要的降解物，生成硫酸化硫酸角质素二糖及硫酸化硫酸角质素四糖。另外，可确认也生成硫酸化硫酸角质素五糖。③最适反应pH4.5～6(在0.1M醋酸缓冲液及10mMTris-醋酸缓冲液中，37℃)④pH稳定性6～7(在0.1M醋酸缓中液及10mMTris-醋酸缓冲液中，37℃、放置1小时)⑤最适反应温度50～60℃(0.1M醋酸缓中液、pH6.0、反应10分钟)⑥热稳定性至少在45℃以下，稳定(0.1M醋酸缓冲液、pH6.0、放置1小时)。对于以下的实施例，使用上述得到的硫酸角质素降解酶，但本发明不受该酶的限制，例如也可使用角质素酶II等其他的内-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶型硫酸降解酶。实施例1将来自鲨鱼软骨的高硫酸化硫酸角质素50g，溶解在300ml的0.1M醋酸缓冲液(pH6.0)中。在该液中，加入25单位的上述硫酸角质素降解酶，在37℃下，进行降解24小时。反应终了后，加入2倍体积(体积、以下相同)的乙醇，搅拌，在室温下放置1夜。第二天，用离心分离(4000rpm、15分钟)，将反应液分离成上清液及沉淀，减压浓缩上清液(以下，将该浓缩物称为上清A)。另一方面，在沉淀中，加入300ml蒸馏水，进行溶解，加入3倍量的乙醇，搅拌后，在室温下，放置1夜。第二天，用离心分离，分离上清液及沉淀，将上清液减压浓缩(以下，将该浓缩物称为上清B)。将上清A，溶解在少量蒸馏水中，使用Bio-Gel-P-2柱(Bio-Rad)(3.6×134cm)，以蒸馏水作为溶剂，进行凝胶过滤色谱分离，进而，进行离子交换色谱分离，分别取得含有硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)级分，进行冷冻干燥。将这些硫酸角质素寡聚糖级分，分别溶解到少量蒸馏水中，通过使用预先用蒸馏水平衡了的Muromac柱(室町化学工业(株)制)(4.3×35cm)进行阴离子交换色谱分离，分别进一步纯化。对于洗脱溶剂，使用NaCl水，将NaCl浓度，从0直线地上升到3M，分别使硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)、硫酸角质素二糖(III)洗脱出。将得到的硫酸角质素四糖(I)级分、硫酸角质素五糖(II)级分、硫酸角质素二糖(III)级分分别进行减压浓缩后，通过使用CellulofineGcl-25柱(Seikagaku公司)(3.2×125cm)的凝胶过滤色谱，进行脱盐、冷冻干燥。从上清B，通过同样的操作，也可得到硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)、硫酸角质素二糖(III)。对于这样得到的硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)，用HPLC(高效液相色谱)进行凝胶过滤时的色谱图，分别如图1、图2、图3所示。由硫酸角质素50g得到的硫酸角质素四糖(I)是7.8g(15.6％)、硫酸角质素五糖(II)是1.3g(2.6％)、硫酸角质素二糖(III)是10.4g(20.8％)，其中任何一种都不含内毒素、核酸、蛋白质、蛋白酶、其他的葡萄糖胺聚糖类。以3-(三甲基硅烷基)丙酸钠-D4作为内部标准物质，使用日本电子JNM-EX400(400MHz)测定得到的硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)的1H-NMR谱、使用日本电子JNM-EX400(100MHz)，测定13C-NMR谱。化学位移用δ(ppm)表示、偶合常数用Hz表示。测定结果如下。硫酸角质素四糖(I)1H-NMRδ(D2O，40℃)4.757(1H，d)，4.565(1H，d)，4.561(1H，d)，4.402(1H，dd)，4.342(2H，dd)，3.711(1H，dd)，3.626(1H，dd)，3.555(1H，dd)，2.069(3H，s)，2.047(3H，s)13C-NMRδ(D2O，25℃)177.81，177.63，177.30，105.87，105.69，97.84，93.34，84.98，82.41，81.91，81.25，75,55，75.44，75.20，75.13，75.02，73.70，72.68，72.07，71.10，71.01，70.61，69.82，69.59，69.29，58.92，57.94，56.42，25.09，25.76硫酸角质素五糖(II)1H-NMRδ(D2O，25℃)图4为测定图13C-NMRδ(D2O，25℃)177.80，177.32，176.86，105.92，105.78，104.94，102.60，97.86，93.32，85.08，82.55，82.04，79.75，78.16，77.93，75.69，75.59，75.48，75.24，74.98，74.36，72.68，72.33，72.07，71.38，71.01，70.65，70.35，69.62，69.13，65.38，63.94，58.92，57.99，56.42，54.57，42.47，25.07，24.93，24.76硫酸角质素二糖(III)1H-NMRδ(D2O，40℃)5.235(0.64H，d，J＝1.46Hz)，4.766(0.41H，d，J＝4.88Hz)，4.562(1.15H，d，J＝7.82Hz)，4.44(0.15H，br)，4.42(0.22H，br)，4.357(1.30H，d，J＝3.42Hz)，4.313(0.22H，d，J＝4.88Hz)，4.286(0.15H，d，J＝3.90Hz)，4.213(2.37H，d.，J＝5.37Hz)，4.183(0.37H，t，J＝3.42，2.93Hz)，4.01-3.97(2.06H，m)，4.006(d，J＝2.44Hz)，3.927(1.27H，d，J＝5.37Hz)，3.86-3.83(0.37H，br)，3.78-3.69(2.78H，m)，3.59-3.56(1.04H，m)，2.052(3.00H，m)13C-NMRδ(D2O，25℃)177.61，177.30，105.80，105.63，97.82，93.38，82.02，81.55，75.60，75.47，75.15，75.09，73.70，72.04，71.12，71.07，69.93，69.51，59.00，56.44，25.05，24.76另外，用高速原子轰击质谱分析法(FABMS)分析得到的硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)。(1)阳离子FABMS(阳离子高速原子轰击质谱分析法)分别将硫酸角质素四糖(I)制备成25nmol/μl的水溶液、将硫酸角质素五糖(II)制备成40nmol/μl的水溶液、将硫酸角质素二糖(III)制备成50nmol/μl的水溶液，分别以其1.0μl与α-硫代甘油(作为基质使用)1.0μl混合，用于测定。测定是用finniganMATTSQ700三段四极杆型质谱分析仪进行的。另外，轰击原子是使用氙(8KV)。其结果如表3所示。另外，表中括弧内的数字，表示峰的相对强度(％)。表3</tables>[M-2H+3Na-102]+及[M-2H+3Na-102-102]+是碎片离子。(2)阴离子FABMS(阴离子高速原子轰击质谱分析法)分别将硫酸角质素四糖(I)制备成25nmol/μl的水溶液、将硫酸角质素五糖(II)制备成40nmol/ul的水溶液、将硫酸角质素二糖(III)制备成40nmol/μl的水溶液。将得到的各个硫酸角质素寡聚糖的水溶液，分别取1.0μl、1.0μl、0.5μl，分别与1.0μl的α-硫代甘油(作为基质使用)混合，进行测定。测定是用finniganMATTSQ700三段四极杆型质谱分析仪进行的。另外，轰击原子是使用氙。其结果如表4所示。另外，表中括弧内的数字表示峰的相对强度。表4([M+Na-2H-102]-是碎片离子。)进而，测定得到的纯化硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)中的内毒素、核酸、蛋白质、及蛋白酶的含量。其结果如表5所示。表5注)a)每1mg硫酸角质素寡聚糖的内毒素含量是使用Toxicolor(商标)系统(Seikagaku公司(株)制)测定的。EU内毒素单位(EndotoxinUnit)b)对于DNA，用临界值法[DNA测定装置临界值(美国分子装置社制)]进行测定。c)将牛血清白蛋白，作成标准物，用Lowry法进行测定。d)以FITC酪蛋白，作为底物进行测定。另外，在使用醋酸纤维素膜(Cepallax富士照片(株)制)的电泳法(缓冲液0.1M吡啶·甲酸、pH3.0、电流0.5mA/cm、电泳时间30分钟、染色0.5％Alucian蓝溶液)，确认纯化硫酸角质素四糖(I)，硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)中的透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素等的葡萄糖胺聚糖类的含量时，从任何的硫酸角质素寡聚糖中都检测不出任何化合物(检出界限以下)。实施例2对于以上得到的硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)，进行急性毒性试验及各种药理作用试验。<急性毒性试验>使用5周龄的ICR系的雌雄性小鼠，对于由实施例1生产的各个纯化硫酸角质素寡聚糖，进行急性毒性试验。将硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)的各个PBS(磷酸盐缓冲液生理NaCl水)溶液，以1000mg/kg或2000mg/kg的用量，给药到静脉内，给药后14天，对于一般状态及生死进行观察及测定体重。然后，杀死动物，进行解剖检查。其结果，未发现死亡的动物，且观察一般状态、测定体重、剖检中也未发现异常。从以上结果得到结论，即将上述硫酸角质素寡聚糖的任何一种，给药于小鼠的静脉内，其最少死亡量都在2000mg/kg以上。<抗炎症作用试验>(1)使用木瓜蛋白酶诱发的兔关节炎模型的抗炎症作用试验使用木瓜蛋白酶诱发的兔关节炎模型，以关节液量作为指标，对于硫酸角质素寡聚糖的抗炎作用进行试验。(1-1)使用两膝关节炎模型，硫酸角质素四糖关节腔内给药的抗炎症效果将150μl的木瓜蛋白酶的生理NaCl水溶液(1％)注入到体重约3kg的日本白色本地种兔子(雌性)的两膝关节腔内，制作关节炎模型。注入木瓜蛋白酶后的第1天，将150μl(1.5mg/关节)的用实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(1％)，注入到左侧膝关节腔内(以下，称为硫酸角质素四糖(I)给药足)、另外，在右侧膝关节腔内，注入150μl的PBS(以下，称为硫酸角质素四糖(I)非给药足。另外，以下将给与硫酸角质素四糖(I)的兔子称为投药组)。另外，对于只注入木瓜蛋白酶的兔子(以下，称为对照组)及不注入木瓜蛋白酶的正常兔子(以下，称正常组)，也进行同样地试验。在注入后的第七天，从兔子耳朵动脉采血，分离含肝素血浆。解剖采血后的兔子，分离两膝关节。用2ml的生理NaCl水，洗涤关节腔3次，回收关节液。测定血浆和回收关节液中的钙浓度，从下式计算关节液量关节液量(μl/关节)＝回收关节液中的钙量(μg/关节)/血浆中的钙浓度(μg/μl)以上结果如表6所示。另外，表中的n表示用于实验的各组兔子的只数。表6</tables>注)*显著性是通过Duncan多重比较检定的。从该结果明显地可看到，本发明的硫酸角质素四糖(I)给药组的关节液量，与对照组比较，明显地少，可以确定硫酸角质素四糖(I)，对于关节炎有改善作用。(1-2)使用两膝关节炎模型，硫酸角质素四糖肌内给药的抗炎症效果用(1-1)所述的方法，制作关节炎模型，在木瓜蛋白酶注入后的第1天，在左臀部的肌肉内注入150μl(0.5mg/kg体重)的用实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(1％溶液)(以下，称为硫酸角质素四糖(I)给药组)。对照是以注入150μlPBS，代替硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(以下，称为对照组)。对于不注入木瓜蛋白酶的正常兔子(以下，称为正常组)，也进行同样地试验。在注入后第7天，用与(1-1)相同方法，计算关节液量。以上结果如表7所示。另外，表中的n表示用于实验的各群兔子的只数。表7</tables>注)*显著性，按照Duncan多重比较测定进行。该结果表明，本发明的硫酸角质素四糖(I)给药组的关节液量，与对照组相比，明显地少，可看到硫酸角质素四糖(I)，对于关节炎有改善作用。(1-3)使用单膝关节炎模型，将硫酸角质素四糖给药于肌肉内的抗炎症效果在体重约3kg的日本白色本地种兔(雌性)的左膝关节腔内，注入150μl木瓜蛋白酶的生理盐水溶液(1％)，右膝不做任何置地，制作单膝关节炎模型。在注入木瓜蛋白酶后的第1天，在左臀部的肌肉内，注入150μl(1.0mg/kg、0.5mg/kg、0.25mg/kg)的用实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(2％、1％及0.5％溶液)(以下，称为硫酸角质素四糖(I)给药组)。对照是注入150μl的PBS，代替硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(以下，称为对照组)。对于未注入木瓜蛋白酶的正常兔子(以下，称正常组)，也进行同样的试验。在注入后第七天，用与(1-1)相同方法，计算关节液量。以上的结果，如表8所示。另外，表中的n表示用于实验的各组兔子的只数。表8注)*显著性是通过TUKEY多重比较检定的。从该结果表明，本发明的硫酸角质素四糖(I)的给药组的关节液量，与各对照组相比，明显地少，可看出硫酸角质素四糖(I)，对于关节炎有改善作用。(1-4)使用单膝关节炎模型，各种硫酸角质素寡聚糖，肌肉内给药的抗炎效果除了使用150μl(0.5mg/kg)的由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)及硫酸角质素二糖(III)的1.0.％PBS溶液之外，其他用与(1-3)完全相同的方法进行实验。其结果如图5所示。另外，图中的*、**、及***，分别表示在p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001下，有显著性差异。另外，用于试验的兔子，每组都是10只。从该结果可看到，硫酸角质素四糖(I)给药组、硫酸角质素五糖(II)给药组及硫酸角质素二糖(III)给药组的关节液量，与对照组比较，哪一种都明显地少，说明上述各硫酸角质素寡聚糖，对关节炎有改善作用。(2)使用大鼠逆转被动足浮肿阿图斯(Arthus)反应的抗炎症作用试验用作为III型过敏炎症模型的大鼠足浮肿逆转被动阿图斯反应检测硫酸角质素寡聚糖效果。即，在给与试验物质的大鼠足底部，皮下注射兔子抗卵白蛋白血清，进而，从尾静脉注射卵白蛋白，诱发炎症(浮肿)，研究试验物质对于浮肿的抑制效果。(试验物质的给药)将5周龄的CrjSD系雄性大鼠，预备饲养1周后，禁食约17小时，在诱发炎症前，作为试验物质，给与由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)、消炎痛(西格玛祠、LotNo.19F0018)或地塞米松(万有制药(株)、地塞米松注射液、LotNo.8D307P)、或者，作为阴性对照，给与生理盐水((株)大塚制药工业、LotNo.K3H72)。分别使用将硫酸角质素四糖(I)及地塞米松溶解在生理盐水的溶液、将消炎痛溶解在0.5％羟甲基纤维素钠(CMC-Na和光纯药工业(株)、LotNo.PTN1418)的溶液。每100g体重，给药体积为0.5ml。另外，作为给药途径，硫酸角质素四糖(I)、生理盐水及地塞米松从尾静脉给药，消炎痛经口给药。另外，除去消炎痛的药物是通过盲法给药。各试验物质的给药量及给药顺序如下。每组以5只构成。(i)诱发炎症5分钟前给药①生理盐水(阴性对照)②硫酸角质素四糖(I)1mg/kg③硫酸角质素四糖(I)3mg/kg④硫酸角质素四糖(I)10mg/kg(ii)诱发炎症30分钟前给药⑤消炎痛(阳性对照)5mg/kg(iii)诱发炎症3小时前给药⑥硫酸角质素四糖(I)1mg/kg⑦硫酸角质素四糖(I)3mg/kg⑧硫酸角质素四糖(I)10mg/kg⑨地塞米松(阳性对照)1mg/kg(炎症的诱发)在上述的各大鼠的足底部，皮下注射兔子抗卵白蛋白血清，进而，从尾静脉注射卵白蛋白，诱发炎症(足浮肿)，所使用的抗血清是如下方法制备的。在兔子背部皮内，每周1次，共3次注射含有2％卵白蛋白(EggAlbumin5×Cryst，LotNo.P93601，生化学工业(株))的生理盐水和弗氏完全佐剂的等量混合液(乳浊液)1ml(每1只注射卵白蛋白10mg)，致敏。从最终致敏后约34天采血，得到抗血清。对于得到的抗血清，用双层法测定抗体值效价。即，以用生理盐水稀释的抗血清和含有0.1％卵白蛋白的生理盐水(1mg/ml)的白色沉淀反应作为指标，进行测定。其结果，得到的抗血清的抗体效价是×27。在给与各试验物质的大鼠左后肢足底部，经过对各组所设定的时间后，皮下给药0.1ml的6倍稀释的抗血清。接着，从尾静脉注射含有0.5％卵白蛋白的生理盐水(25mg/5ml/kg)，诱发炎症。使用足体积测定装置(TK-101、Unicom(株))测定诱发炎症前与后的1、2、3及4小时各组处置足的体积，从与诱发前值的差，求出足浮肿率，进而，算出试验物质给药组，对于对照组的浮肿抑制率。对于得到的各个浮肿率，由最小明显差检定，进行平均值差的检定。各给药组的足浮肿率及浮肿抑制率如表9所示，诱发炎症5分钟前及3小时前给药组的足浮肿率如图6、7所示。图中，*及**分别表示P＜0.05、P＜0.01时，有显著性差异。表9*，**在P＜0.05(*)及P＜0.01(**)时，与对照有显著性差异其结果，对于作为阴性对照的生理盐水给药组，14时后的足浮肿率是40.9％，而对于硫酸角质素四糖(I)诱发炎症5分钟前给药组，是29.1～34.4％，在1mg/kg给药组与10mg/kg给药组中可看到显著性差异。在诱发炎症1小时后，未看到与用量有关的反应，但在4小时后，在3mg/kg给药组及10mg/kg给药组是37.2％及35.4％值明显降低。另外，对于硫酸角质素四糖(I)诱发炎症3小时前给药组，诱发炎症1小时后，未看到显著性差异，但2小时后，3mg/kg给药组是35.3％、3小时后，10mg/kg给药组是41.5％、进而，4小时后，1mg/kg给药组是38％值明显降低。另外，对于消炎痛给药组，2小时后及4小时后，显示值明显降低。另外，对于地塞米松给药组，1～4小时后，任何一个测定点都是值明显降低。足浮肿抑制率，对于消炎痛给药组，1～4小时后，是9～17.5％，对于硫酸角质素四糖(I)-诱发炎症前5分钟给药组，计算出8.6～36.5％的高足浮肿抑制率。另外，硫酸角质素四糖(I)-3小时前给药组，是-8.1～24.4％。另一方面，对于地塞米松组药组，是31.7～58.1％的高足浮肿抑制率。(3)对大鼠角叉菜胶胸膜炎模型的抗炎症作用试验使用一般用于抗炎症剂评价的炎症模型的大鼠的角叉菜胶胸膜炎模型，研究硫酸角质素寡聚糖的作用。试验中，使用了体重约150～170g的S.D.大白鼠(雌)37只。用生理盐水，将λ-角叉菜胶(西格玛社制)溶解成2％浓度，用0.8μm的过滤器进行过滤。将得到的角叉菜胶溶液，以100μl/只的比例，给与大鼠的胸腔内，制成胸膜炎模型。在19只上述胸膜炎模型大鼠中，将溶解在PBS中的硫酸角质素四糖(I)，以20mg/kg或10mg/kg的给药量，进行皮下(s.c.)给药。另外，作为阳性对照，在8只上述大鼠中，将甾体类(醋酸地塞米松(万有制药(株))，以临床给药量的150μg/kg，皮下给药。作为阴性对照，在10只中，将PBS皮下给药。各个给药是在给与角叉菜胶之后进行。给药情况如表10所示。表10将各个大鼠，在λ-角叉菜胶给药6小时后进行解剖。打开大鼠的胸腔，用带有针头的2ml注射器取出贮留的胸液。然后，用1ml的生理盐水洗涤胸腔，回收洗涤液。测定用注射器回收的胸液量，进而，用自动血球计数装置测定胸液中的白血球数(细胞数)。其结果如图8、9所示。图中*及**，分别表示在P＜0.05、P＜0.01(P是Duncan检验的显著性)，水平有显著性差异。如图8所示，硫酸角质素四糖(I)10mg/kg给药组的胸水液量，与阴性对照组相比较，明显少，但与硫酸角质素四糖(I)20mg/kg给药群相比较，没有差别，认为无剂量依赖性。醋酸地塞米松给药组的胸水液量，与阴性对照组相比较，明显少。另外，胸水中的白血球数硫酸角质素四糖(I)10mg/kg给药组及20mg/kg给药组中任何一个与阴性对照组相比较，明显少，剂量依赖减少(图9)。醋酸塞地米松给药组的白血球数，与对照组相比较，明显少(图9)。从上述结果表明，硫酸角质素四糖(I)，对于大鼠的角叉菜胶胸膜炎模型，显示了抗炎作用。(4)对豚鼠嗜中性白细胞的活性氧(O2-)产生的抑制作用将溶解于生理盐水的糖原(TypeII、Oyster；西格玛社制)的0.2％水溶液，进行高压蒸汽灭菌后，在5周龄的Hartley系豚鼠(雌性；从日本SLC社购入)的腹腔内，给药20ml。在给药的16小时后，使豚鼠失血而死，将含有肝素10U/ml的生理盐水20ml注入腹腔内，回收腹腔浸出液。然后，除了培养时外，完全在冰水下操作。将回收了的液体，以1000rpm离心分离10分钟，用纯化水，将得到的沉淀溶血后，将其以2倍浓度的Hanks液(不含酚红；日水制药厂)回到等渗透状态，进而，以1000rpm，离心分离10分钟。将得到的沉淀悬浮在Hanks液中，进行2次离心分离操作，得到嗜中性白细胞。将采取的豚鼠嗜中性白细胞悬浮在Hanks液中，用血球测定装置(systemK-2000，东亚医用电子(株)制)，测定白血球数，用Hanks液稀释成2×106个/ml的液体，作为细胞悬浮液，用于测定。将细胞悬浮液1ml和用上述实施例1制备的纯化硫酸角质素寡聚糖(硫酸角质素四糖(I)、硫酸角质素五糖(II)或硫酸角质素二糖(III)10μl混合后，在37℃下，预培养1小时。然后，在其中，顺序加入1.6mM的细胞色素c(TYpeIII，HorseHeart；西格玛社制)液50μl、100μM的N-甲酰基-Met-Leu-Pue(以下称为FMLP。西格玛社制)10μl，进行混合。将其，在37℃下，培养10分钟后，进行冰冷，使反应停止，用3000rpm，离心分离5分钟。取出由离心分离得到的上清液，测定其550nm的吸光度，求出培养10分钟后的每2×106细胞的还原型细胞色素c量。若产生活性氧(O2-)，还原型细胞色素c量增加。另外，以终浓度20μg/ml添加重组人体SOD(recombinanthumansuperoxidedismutase)，作为空白。另外，所用的豚鼠是6只，分别独立进行试验。分别算出将对照组(不添加硫酸角质素寡聚糖的)的还原型细胞色素量作为100％时的各硫酸角质素寡聚糖添加组的比例，将与对照组的差，作为活性氧(O2-)产生抑制率(％)进行计算，进而，求出各实验的平均值。其结果如图10所示。另外，图中的各硫酸角质素寡聚糖的浓度是最终浓度。从该结果表明，硫酸角质素四糖(I)，以0.01、0.1及1.0mg/ml的浓度，浓度依赖性地，显著地抑制活性氧(O2-)产生，这就表明硫酸角质素四糖(I)具有抗炎症作用。另外，也看出硫酸角质素二糖(III)及硫酸角质素五糖(II)也有轻微地活性氧产生抑制作用。从该结果看，硫酸角质素寡聚糖，由于抑制了中性白细胞的活性氧(O2-)的产生，而发挥了抗炎症作用。<抗过敏作用>对于诱发变应性结膜炎的豚鼠，用各种硫酸角质素寡聚糖点眼，研究其效果。(1)对于过敏性结膜炎的硫酸角质素四糖(I)的效果用乙酸乙酯，将甲苯·二异氰酸盐(toluenediisocyanate，以下，称为TD1)稀释成10％浓度。将得到的10％TD1，在体重约900～1000g的Hartley系豚鼠(雌性)10只的左右鼻前庭(10μl/只)上，1天1次，涂敷5天，制成TD1致敏模型。在TD1致敏模型的左眼上，点上由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(100mg/ml)，在右眼上，作为对照，点上PBS。点眼用量，每次点眼容器都是1商(48±4.6μl(S.D))。10分钟后，在两眼上，点上6.5ul的10％TD1，诱发结膜炎。放置5分钟后，进而，在左眼上点硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(100mg/ml)，在右眼上点PBS。15分钟后，观察两眼。用0、+1、+2、+3的4个阶段，对于充血、浮肿、流泪3项，评价结膜炎的程度。其结果，将评价的平均值与标准偏差一起表示在图11中。另外，图中*表示在P＜0.05(P是X2检定的显著性水平)下有显著性差异。其结果，硫酸角质素四糖(I)，对于观察的充血、浮肿、流泪的3项都有抑制趋势，特别是对于浮肿，与对照相比较，有明显抑制作用。(2)对于过敏性结膜炎的各种硫酸角质素寡聚糖的效果在与上述(1)相同制作的各组10只的TD1致敏模型的左眼上，点入作为被检物质的用上述实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)、硫酸角质素四糖(I)或硫酸角质素五糖(II)的PBS溶液(都是6.0mg/ml)，在右眼上作为对照，点入PBS。结膜炎的程度，与上述(1)的评价相同。作为结果，将评价的平均值与标准偏差一起表示于图12中。另外，图中*表示在P＜0.05(P是X2检定的显著性)下，有显著性差异。其结果表明，硫酸角质素二糖(III)、硫酸角质素四糖(I)及硫酸角质素五糖(II)中的任何一种，对于充血、浮肿、流泪3项，都有抑制趋势，特别是硫酸角质素四糖(I)，显示了明显抑制浮肿的效果。(3)各种浓度的硫酸角质素四糖(I)对于过敏性结膜炎的效果在与上述(1)相同制作的各组10只的致敏模型的左眼中，作为被检物质，以各种浓度(6mg/ml、3mg/ml、1.5mg/ml或0.75mg/ml点上含有用实施例1配制的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液，在右眼上，作为对照，点上PBS。结膜炎的程度，与上述(1)相同地评价。作为结果，将评价的平均值与标准偏差一起表示在图13中。另外，图中*表示在P＜0.05(P是X2检定的显著性)是有显著性差异的。其结果表明，任何一种浓度的硫酸角质素四糖(I)PBS溶液中，对于充血、浮肿、流泪等3项都有抑制趋势，特别是，6mg/ml、3mg/ml及1.5mg/ml浓度的硫酸角质素四糖(I)PBS溶液，对于浮肿，有明显的抑制效果。<免疫调节作用·细胞分化诱导作用·细胞凋亡诱导作用>研究硫酸角质素寡聚糖，对于作为自身免疫疾病模型的MRL小鼠的效果。(1)淋巴结重量抑制作用(1-1)MRL小鼠中的硫酸角质素四糖(I)的4周反复肌肉内给药试验对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以5次/周、4周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)的PBS溶液(100mg/ml)，1次10mg/kg体重注射大腿肌肉(以下，称给药组)，另外，作为对照，将PBS也注射在大腿肌内。然后，解剖小鼠，测定脾脏及肠系膜淋巴结的重量，求出平均重量。将结果与标准误差一起表示在表11中。另外，表中的n表示所用小鼠的只数。表11结果，注射硫酸角质素四糖(I)的组中，可看到脾脏及肠系膜淋巴结重量增加抑制倾向，显示了硫酸角质素四糖(I)的免疫调节作用。(1-2)MRL小鼠的硫酸角质素二糖(III)的28天反复肌肉内给药试验对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以7次/周，4周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)的PBS溶液，每次1mg/kg体重、5mg/kg体重或25mg/kg体重注射大腿肌(以下，分别称为1mg/kg给药组、5mg/kg给药组、25mg/kg给药组)，另外，作为对照，将PBS注射到大腿肌肉内(以下，称对照组)。然后，解剖小鼠，测定颌下淋巴结重量，求出平均重量。将其结果与标准误差一起表示在图14中。另外，所使用的小鼠，每组都是6只。另外，图中*表示P＜0.05(P是Bonferroni多重比较检定的显著性)下，有显著性差异。其结果，即使在任何给药量的硫酸角质素二糖(III)给药组，都可以看到颌下淋巴结重量增加抑制效果，特别是，在5mg/kg给药组中，与对照组相比较，有明显重量增加抑制效果，显示了硫酸角质素二糖(III)具有免疫调节作用。(1-3)MRL小鼠中的硫酸角质素二糖(III)的56天反复肌肉内给药试验对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以7次/周，8周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)的PBS溶液，以1次2.5mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重，注射到大腿肌肉内(以下分别称为2.5mg/kg给药组、5mg/kg给药组、10mg/kg给药组)，另外，作为对照，将PBS(以下称为对照组)也注射到大腿肌肉内。然后，解剖小鼠，分别测定肠系膜淋巴结及颌下淋巴结重量，求出平均重量。关于肠系膜淋巴结的结果与标准误差一起如图15所示、关于颌下淋巴结的结果与标准误差一起表示在图16中。另外，所用的小鼠，每组都是7只。从该结果可看到在硫酸角质素二糖(III)的2.5mg/kg给药组中，肠系膜淋巴结的重量抑制效果、在10mg/kg给药组中，肠系膜淋巴结及颌下淋巴结重量增加抑制效果，由此，显示了硫酸角质素二糖(III)的免疫调节作用。(2)细胞的分化诱导作用(2-1)以细胞染色浓度作为指标的细胞分化诱导的分析对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以7次/周，4周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)的PBS溶液，以1次1mg/kg体重、5mg/kg体重或25mg/kg体重，注射到大腿肌肉内(以下，分别称为1mg/kg给药组、5mg/kg给药组、25mg/kg给药组)，另外，作为对照组，将PBS(以下，称为对照组)，注射到大腿肌肉内。然后，解剖小鼠，制作肠系膜淋巴结及颌下淋巴结的切片标本(HE染色)。对于该标本，使用图像分析装置(PIAS制)分析每单位面积的染色浓度。另外，由于未分化细胞的细胞质的比例多，核染色浅，所以每单位面积的染色浓度低。分化了的细胞，由于核所占的比例大，且核染色深，所以单位面积的染色深。将肠系膜淋巴结的分析结果、颌下淋巴结的分析结果，分别与标准误差一起表示在图17、图18中。另外，图中**表示在P＜0.01(P是Bonferroni多重比较检定的显著性)下，有显著性差异。另外，所使用的小鼠，都是6只。从该结果，可看到，在上述任何一个给药量的硫酸角质素二糖(III)给药组，每单位面积的染色浓度都增加。(相对亮度减少)，特别是在5mg/kg给药组及25mg/kg给药组中，与对照组比较，染色浓度明显地增加。这显示出，通过硫酸角质素二糖(III)分化的细胞增加，硫酸角质素二糖(III)具有细胞分化诱导作用。(2-2)以淋巴结的淋巴细胞表面抗原作为指标的分化诱导的分析对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以7次/周，8周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)的PBS溶液，以1次2.5mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重注射到大腿肌肉内(以下，分别称为2.5mg/kg给药组、5mg/kg给药组、10mg/kg给药组)，另外，作为对照，将PBS(以下，称为对照组)，也注射到大腿肌肉内。然后，解剖小鼠，将淋巴结在细胞筛网(Cellstrainer)(Falcon2350)上磨碎，制备淋巴细胞。对于制备的各给药组的淋巴细胞，分别进行使用抗CD3抗体(生化学工业(株)制)及抗CD4抗体(pharminjen制)的二重免疫染色、使用抗CD3抗体和抗CD8a抗体(pharminjen制)的二重免疫染色、及使用抗CD3抗体及抗B220抗体(pharminjen制)的二重免疫染色。另外，CD3、CD4及CD8a是在T细胞中表达的细胞表面抗原，B220是在B细胞中表达的细胞表面抗原。另外，众所周知在无标志的淋巴细胞上还未发现这些细胞表面抗原表达。分别将CD3及CD4阳性细胞(以下，也称CD3+CD4+细胞；主要是辅助T细胞)对于全部淋巴细胞的比例(％)，与标准误差一起表示在图19中；将CD3及CD8a阳性细胞(以下，也称CD3+CD8a+细胞；主要是抑制性T细胞及细胞毒性T细胞)的比例(％)与标准误差一起表示在图20中；另外将CD3及B220阳性细胞(以下，也称CD3+B220+细胞；虽然是T细胞，但又具有B细胞表面抗原的异常细胞)的比例(％)与标准误差一起，表示在图21中。另外，图中*表示在P＜0.05(P是Pyan多重比较检定的显著性)下具有显著性差异。另外，所用的小鼠，每组都是7只。图19表明，在硫酸角质素二糖(III)的10mg/kg给药组中，看到了相对于对照组、2.5mg/kg给药组及5mg/kg给药组的CD3+CD4+细胞明显地增加。这表示无标志的淋巴细胞，通过相当量的硫酸角质素二糖(III)的给药，分化成CD3+CD4+细胞。从图20表明，在硫酸角质素二糖(III)的10mg/kg给药组中，对于对照组、2.5mg/kg给药组及5mg/kg给药组，看到了CD3+CD8a+细胞的增加。这表明通过相当量的硫酸角质素二糖(III)的给药无标志的淋巴细胞分化成CD3+CD8a+细胞。从图21表明，在硫酸角质素二糖(III)的10mg/kg给药组中，看到了对于对照组、2.5mg/kg给药组及5mg/kg给药组的CD3+B220+细胞减少。这表示通过相当量的硫酸角质素二糖(III)的给药，所谓的CD3+B220+细胞的异常细胞减少，支持向正常淋巴细胞诱导分化的结果。从以上结果看，硫酸角质素二糖(III)具有诱导细胞分化的作用。(3)细胞凋亡诱导作用对于MRL-1pr/1pr小鼠，分别以7次/周，4周时间，将由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)的PBS溶液，1次1mg/kg体重、5mg/kg体重或25mg/kg体重，注射到大腿肌肉内(以下，分别称为1mg/kg给药组、5mg/kg给药组、25mg/kg给药组)，另外，作为对照，将PBS(以下，称对照组)，注射到大腿肌肉内。然后，解剖小鼠，制作颌下淋巴结的切片标本(用Gavvieli的等方法，染色，末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺刻标记方法细胞生物学杂志。)119，493-501(1992)。该染色方法，是通过检出断片化的DNA的末端，检出能引起细胞凋亡的细胞的方法。用光学显微镜观察该标本，测定每单位面积的染色细胞数(引起细胞凋亡的细胞。以下，简称细胞凋亡细胞)。其结果，与标准误差一起表示在图22中。另外，图中*表示在P＜0.05下、**表示在P＜0.01(P是Bonferroni多重比较检定的显著性)下有明显差异。另外，所用的小鼠各组都是6只。从该结果表明，在任何给药量的硫酸角质素二糖(III)给药组中，都可看到细胞凋亡细胞数增加，特别是5mg/kg给药组中，对于对照组，明显增加细胞凋亡细胞数。另外，也制作上述各组小鼠的颌下淋巴结的切片标本(HE染色)，用光学显微镜观察有无细胞凋亡小体(apopticbody)。其结果表明，对于任何一种给药量的硫酸角质素二糖(III)给药组都散在有细胞凋亡小体。从这些结果可表明，硫酸角质素二糖(III)具有细胞凋亡诱导作用。从以上结果确认，硫酸角质素寡聚糖的免疫调节作用、细胞分化诱导作用及细胞凋亡诱导作用。实施例3软膏在用根据日本药典的常规方法制备的软膏中，以10mg/ml的浓度，溶解由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)；制成软膏。本软膏，也可用作抗炎症剂、抗过敏剂中的任何一种。实施例4点眼药在用常规方法，用磷酸盐调节成pH6.8-7.6的生理盐水中，以10mg/ml的浓度溶解由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)，另外，以2mg/ml的浓度溶解透明质酸钠，制成点眼剂。本点眼剂也可用作抗炎症剂、抗过敏剂中的任何一种。实施例5脂质体包涵体在含有卵磷脂的脂质化剂(AquasomeLA、日光化学株式会社)中，以10mg/ml的浓度溶解由实施例1制备的纯化硫酸角质素四糖(I)，通过超声波处理，进行包合作用。本脂质体包涵体也可用作抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂中的任何一种。实施例6注射剂在用常规方法，用磷酸盐调节成pH6.8-7.6的生理盐水中，以10mg/ml的浓度，溶解由实施例1制备的纯化硫酸角质素二糖(III)，用0.22μm的过滤器，通过无菌过滤，制备注射剂。本注射剂也可用作抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂中的任何一种。产业上的利用性本发明的纯化高硫酸化硫酸角质素寡聚糖级分的纯度极高，基本上不含内毒素、核酸、蛋白质、蛋白酶，及上述寡聚糖以外的葡萄糖胺聚糖类等，所以可作为新的抗炎症剂等的医疗品使用。权利要求1.抗炎症剂，作为有效成分，其含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐。2.抗炎症剂，其含有唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化了的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。3.权利要求1或2所述的抗炎症剂，其中，上述硫酸角质素寡聚糖是在还原末端上，具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖，且在1个分子中，至少2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖。4.权利要求1～3中任何一项所述的抗炎症剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖至少含有用下式表示的二糖作为构成成分，Gal(6S)-GlcNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。5.权利要求4所述的抗炎症剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖选自式(I)表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。6.抗过敏剂，其含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。7.抗过敏剂，其含有唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。8.权利要求6或7所述的抗过敏剂，上述硫酸角质素寡聚糖是在还原末端上，具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2-5糖单元的寡聚糖，且在1个分子中至少2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖。9.权利要求6～8中任何一项所述的抗过敏剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖，至少含有用下式表示的二糖，作为构成成分，Gal(6S)-GlcNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。10.权利要求9所述的抗过敏剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖选自用式(I)表示的四硫酸化-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。11.免疫调节剂，其含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐，作为有效成分。12.免疫调节剂，其含有唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。13.权利要求11或12所述的免疫调节剂，上述硫酸角质素寡聚糖是在还原末端上具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖，是在1个分子中至少2处的羟基硫酸化的硫酸角质素寡聚糖。14.权利要求11～13中的任何一项所述的免疫调节剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖，含有至少用下式表示的二糖，作为构成成分，Gal(6S)-GlcNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。15.权利要求14所述的免疫调节剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖选自用式(I)表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。16.细胞的分化诱导剂，其含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。17.细胞的分化诱导剂，其包括唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。18.权利要求16或17所述的细胞分化诱导剂，上述硫酸角质素寡聚糖是在还原末端上，具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖，且在1个分子中，至少2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖。19.权利要求16～18中的任何一项所述的细胞分化诱导剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖，至少含有用下式表示的二糖，作为构成成分，Gal(6S)-GlcNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。20.权利要求19所述的细胞分化诱导剂，其特征是，上述硫酸角质素寡聚糖选自用式(I)表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯；另外，～表示α2，3键或α2，6键)。21.细胞凋亡诱导剂，其含有硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为有效成分。22.细胞凋亡诱导剂，其含有唾液酸和/或岩藻糖的硫酸化的N-乙酰基乳糖胺单元的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐，作为有效成分。23.权利要求21或22所述的细胞凋亡诱导剂，其中，上述硫酸角质素寡聚糖是在还原末端，具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖，且是在1个分子中，至少2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖。24.权利要求21～23中任何一项所述的细胞凋亡诱导剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖，至少含有用下式表示的二糖作为构成成分，Gal(6S)-GlcNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。25.权利要求24所述的细胞凋亡诱导剂，其特征是上述硫酸角质素寡聚糖选自用式(I)表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。26.硫酸角质素寡聚糖级分，是在还原末端上具有硫酸化的N-乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖，其含有99％以上的，在1个分子中，至少有2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖，具有如下特性；(a)基本上不含内毒素，另外，核酸、蛋白质、蛋白酶的含量在检出界限以下，(b)基本上不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素。27.硫酸角质素寡聚糖级分，其含有99％以上的，以至少用下式表示的二糖作为构成成分的硫酸角质素寡聚糖，其具有如下特性，Gal(6S)-G1cNAc(6S)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯)。(a)基本上不含内毒素，另外，核酸、蛋白质、蛋白酶的含量在检出界限以下。(b)基本上不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸类肝素及硫酸角质素。28.权利要求26或27所述的硫酸角质素寡聚糖级分，其特征是，上述硫酸角质素寡聚糖选自用式(I)表示的四硫酸化N-乙酰基乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰基乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰基乳糖胺二糖，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。29.权利要求26～28中任何一项所述的硫酸角质素寡聚糖级分，其是用内-β-N-乙酰基葡萄糖胺酶型硫酸角质素降解酶将来自软骨鱼类的高硫酸化硫酸角质素进行降解后，分级得到的。30.硫酸角质素寡聚糖级分的制备方法，其包括如下两个步骤，即通过具有下述理化性质的硫酸角质素降解酶将硫酸角质素降解的步骤，①作用与硫酸角质素作用，将其N-乙酰基氨基葡萄糖苷键进行水解；②基质特异性与硫酸角质素I、硫酸角质素II及多硫酸角质素作用，作为主要降解物，生成硫酸化硫酸角质素二糖及硫酸化硫酸角质素四糖；和，从该降解生成物，分流出具有下述性质的硫酸角质素寡聚糖步骤，(A)以硫酸化N-乙酰基乳糖胺作为基本骨架的硫酸角质素寡聚糖为主要成分；(B)基本上不含内毒素、而核酸、蛋白质及蛋白酶的含量是微量或检出界限以下；(C)基本上不含透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素B、硫酸类肝素及硫酸角质素。31.权利要求30所述的硫酸角质素寡聚糖级分的制备法，其特征是在通过上述硫酸角质素降解酶进行降解的步骤中，除了利用权利要求30所述的理化性质之外，还使用具有下述理化性质的硫酸角质素降解酶，①最适反应pH4.5～6(0.1M醋酸缓冲液及10mMTris醋酸缓冲液中，37℃)；②pH稳定性6～7(0.1M醋酸缓冲液及10mMTris醋酸缓冲液中，在37℃下、放置1小时)；③最适反应温度50～60℃(0.1M醋酸缓冲液、pH6.0、反应10分钟)；④热稳定性至少在45℃以下稳定(0.1M醋酸缓中液、pH6.0、放置1小时)。32.权利要求30或31所述的硫酸角质素寡聚糖级分的制备方法，上述硫酸角质素是高硫酸化硫酸角质素，硫酸角质素寡聚糖是用式(I)表示的四硫酸化N-乙酰乳糖胺四糖、用式(II)表示的三硫酸化N-乙酰乳糖胺五糖、用式(III)表示的二硫酸化N-乙酰乳糖胺二糖中任何一种，Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(I)NeuAc～Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(II)Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)…(III)(式中，Gal表示半乳糖、GlcN表示葡萄糖胺、Neu表示神经氨酸、Ac表示乙酰基、6S表示6-0-硫酸酯。另外，～表示α2，3键或α2，6键)。全文摘要是在还原末端具有硫酸化的N－乙酰基葡萄糖胺的2～5糖单元的寡聚糖,是以1个分子中至少有2处的羟基被硫酸化的硫酸角质素寡聚糖,优选的是作为其构成成分,含有用Gal(6S)－G1cNAc(6S)(其中,Ga1表示半乳糖、G1cN表示葡萄糖胺、Ac表示乙酰基、6S表示6—0－硫酸酯)表示的二糖的硫酸角质素寡聚糖和/或其药学上可接受的盐作为抗炎症剂、抗过敏剂、免疫调节剂、细胞的分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂的有效成分。文档编号C07H13/04GK1174557SQ9519749公开日1998年2月25日申请日期1995年11月22日优先权日1994年12月1日发明者丸山浩,森川清志,多和田明,宫内聪,吉田圭一,浅利晃申请人:生化学工业株式会社