专利名称：新抗菌素蜜环菌酸的制取方法
技术领域：
本发明是属于从人工发酵生产的蜜环菌丝体中提取分离新抗菌素的方法。
已知美国人S.L.Midland等在《Tetrahedron Lett.》1982年，23卷，2515页发表了从人工发酵生产的蜜环菌中分离得到新抗菌素melleolide；爱尔兰和法国人D.Domelly等在《J.Chem.Soc.Chem.Commun.》1982年，135页发表从人工发酵生产的蜜环菌中分离得到新抗菌素Orsellinateof Armillol；后又在《J.Nat.Prod.》1985年，48卷，10页发表了分离得到了新抗菌素4-O-methyl melleolide和Jndeol。他们均是以人工发酵生产的蜜环菌菌丝体为原料，以甲醇提取，除去甲醇后的提取物溶于水中，然后用氯仿或乙醚萃取。其氯仿或乙醚萃取物再于Sephadex LH-20柱和低压柱层析法或制备性高压液相层析法，得到上述的新抗菌素，但尚未得到过蜜环菌酸(Armillaric acid)。
本发明的目的在于提出一种以人工发酵生产的蜜环菌菌丝体为原料，提取分离新抗菌素蜜环菌酸的提取分离方法。
本发明的特征在于用相似的生产方法，即以人工发酵生产的蜜环菌菌丝体为原料，用50％甲醇水溶液回流提取，提取液在真空下除去甲醇，残留的水溶液用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯层用无水硫酸钠干燥后，真空下除去溶剂，得到的残留物在硅胶柱中进行层析，以氯仿—甲醇(95∶5)混合溶剂洗脱的部分，再于苯—丙酮平衡的硅胶柱中层析，有抗菌活性的部分进一步用Sephadex LH-20柱层析，甲醇洗脱部分，在制备性高压液相层析议中层析，得到一无色粉末状物，命名为蜜环菌酸(armillaric acid)该物质可溶于甲醇和丙酮中，氯仿难溶。
分子量CIMSm/z 417(M+H)+FDMSm/z 417(M+H)+分子式C23H28O7紫外吸收光谱λmaxCH3OHnm(ε)222(25200)，266(15198)302(5930)红外吸收光谱γmaxKBrcm-13400(br)，2500-2800(br)1720，1630，1580，1440，1250，1160，845，800核磁共振氢谱(以重氢甲醇为溶剂，TMS为内标，在400MHz型仪中测定)δ7.40(1H，d.，J＝1.8Hz.，8-H)6.12(1H，d.，J＝2.5Hz.，3′-H)6.15(1H，d.，J＝2.5Hz.，5′-H)5.70(1H，t.，J＝8.6Hz.，5-H)2.91(1H，dddd.，J＝9.0，7.0，2.2，1.8Hz.，9-H)2.37(3H，s.，6′-CH3)1.29(3H，s.，12-CH3)1.02(3H，s.，14-CH3)0.99(3H，s.，15-CH3)
1.46(1H，dd.，J＝7.4，12.9Hz.，1-Hα)1.36(1H，t.，J＝12.9Hz.，1-Hβ)1.96(1H，dd.，J＝9.0，13.2Hz.，10-Hα)1.55(1H，dd.，J＝2.2，13.2Hz.，10-Hβ)1.98(1H，dd.，J＝8.6，10.9Hz.，4-Hα)1.68(1H，dd.，J＝8.6，10.9Hz.，4-Hβ)2.23(1H，ddd.，J＝7.0，7.4，12.9Hz.，2-H)核磁共振氢谱(重氢甲醇为溶剂，四甲基硅烷为内标，在100MHz型仪中测定)δ42.84(C-1)，45.04(C-2)，38.77(C-3)，33.78(C-4)，77.98(C-5)，76.50(C-6)，128.49(C-7)，148.44(C-8)，40.86(C-9)，47.79(C-10)，38.85(C-11)，22.16(C-12)，170.98(C-13)，31.64(C-14)，32.06(C-15)，105.35(C-1′)，166.71(C-2′)，101.67(C-3′)，163.78(C-4′)，112.49(C-5′)，144.95(C-6′)，24.59(C-7′)，172.22(C-8′)其化学结构为
实施例本发明在于以人工发酵生产的蜜环菌10kg为原料，用90立升50％甲醇水溶液分三次回流提取，甲醇提取液在真空下除去甲醇，残留10立升水溶液，用20立升醋酸乙酯分二次萃取，醋酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，在真空下除去醋酸乙酯，得到褐色残留物292.5g，其中49.73g干燥的醋酸乙酯提取物熔解在100ml氯仿中，在氯仿平衡的硅胶柱(Vt＝700ml)中进行层析，以2100ml氟仿—甲醇(逐渐增加后者的比例)混合溶剂洗脱，其中氯仿—甲醇(95∶5)洗脱部分在真空下蒸发至干后，溶解于10ml苯—丙酮(9∶1)混合溶液中，在苯丙酮平衡的硅胶柱(Vt＝200ml)中进行再层析，合并有抗菌活性的各份，在真空下除去溶剂，给出黄色粉状物(103.9μg)，进一步用Sephadex LH-20柱(Vt＝200ml)进行层析，用甲醇洗脱的部分，在制备性高压液相层析仪(Watara公司产品，6000A型仪)中层析，层析柱为Nuolaoall 5o18，20×280mm，以50％甲醇水洗脱，流速15ml/分，在254nm波段检出，收集9.84-12.00分为保留时间的部分，除去溶剂后得10μg蜜环菌酸。
蜜环菌酸的抗菌活性及与已知化合物melleolide的抗菌活性比较用纸片琼脂扩散法试验。
试验菌种为(1)Mlcrococcus luteus ATCC9341(2)Staphylococcus aureus 209JC(3)Bacillus subtilis ATCC 6633(4)Candida albicans NHL4019
*在培养皿中抑菌圈的直径(mm)下同
权利要求
一种从人工发酵生产的蜜环菌(Armillaria mellea)的菌丝体中分离提取新抗菌素蜜环菌酸的方法，其特征在于蜜环菌酸的结构为
提取分离该化合物所采用的是常规方法即以人工发酵生产的蜜环菌菌丝体为原料，用50％甲醇水溶液回流提取，除去甲醇的残留水溶液用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯萃取物经硅胶柱层析法，Sephadex LH-20柱层析法以及制备性高压液相层析法而得。
全文摘要
用人工发酵生产的蜜环菌(Armillaria mellea)菌丝为原料，以50％甲醇水液提取，除去甲醇后的提取物溶于水中，经醋酸乙酯苯取，醋酸乙酯苯取物。经硅胶柱层析法，Sephades LH-20柱层析法以及制备性高压液相层析法得到一新的抗菌素，命名为蜜环菌酸(armillaric acid)，其结构为(见上图)
文档编号C07C69/757GK1034956SQ8810035
公开日1989年8月23日 申请日期1988年2月9日 优先权日1988年2月9日
发明者杨峻山, 冯孝章, 岳德超, 苏亚伦, 小渕忠, 渡边修治, 玉井正晴, 大村贞文 申请人:中国医学科学院药物研究所, 日本国大正制药株式会社