一种从太白楤木中制备高纯度齐墩果酸的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从太白楤木中制备高纯度齐墩果酸的方法，属于天然产物提取分离【技术领域】，包括以下步骤：将太白楤木齐墩果酸粗品水洗，取不溶物，向不溶物中加入分析甲醇，充分混匀，过滤取上清，得到上样液；2)用十八烷基硅烷键合硅胶填充高压制备液相色谱柱后，将上样液上样于高压制备液相色谱柱，以甲醇-水系统为洗脱液进行洗脱；3)在紫外检测器检测下进行分段收集，得到齐墩果酸液，将齐墩果酸液减压浓缩后水洗得到高纯度齐墩果酸。本发明能够直接、快速的分离得到齐墩果酸，分离时间短，分离量大，收率达到85％以上，纯度高达到98％以上，且产生的废料少，所需的洗脱液体积小，填料及溶剂可回收利用，环境友好，适合工业化生产。
【专利说明】一种从太白锪木中制备高纯度齐墩果酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然产物提取分离【技术领域】，具体涉及一种从太白惚木中分离提取齐墩果酸的方法。
【背景技术】
[0002]太白惚木又名飞天蜈蚣七，系五加科惚木属多年生植物，分布于我国的西部地区，有着非常丰富的野生资源。太白惚木亦称惚木白皮，中药大辞典以惚木白皮收载。本药材具有健胃收敛利尿及制糖作用，可补腰肾、壮筋骨、舒蕺活血等多种功效。
[0003]齐墩果酸，临床用于治疗传染性急性黄疸型肝炎，具有明显的降低谷丙转氨酶及退黄效果，改善病毒性和慢性迁延性肝炎患者的症状，体征和肝功能；还可用于银屑病，风湿性关节炎，肾炎水肿，肝硬化腹水，急慢性肝炎，胃痛淋浊，血崩，跌打损伤，痈肿，腰膝酸软，胎动不安等症。
[0004]目前，齐墩果酸在分离纯化方面已报道的提取方法主要以有机溶液浸提结合一定分离手段为主，但只能得到齐墩果酸粗品。制备周期长而且成本较高，基于以上原因开发新型分离纯化工艺，寻找更加经济、高效、快捷的分离纯化技术，越来越多的成为研究者关注的焦点。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种从太白惚木中分离高纯度齐墩果酸的方法，该方法操作简单，分离时间短，成本低，得到的产物纯度高，收率高。
[0006]本发明是通过以下技术方案来实现:
[0007]一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，包括以下步骤:
[0008]I)将太白惚木齐墩果酸粗品水洗，取不溶物，按照Ig: (3~7)mL的料液比，向不溶物中加入分析甲醇，充分混匀，过滤取上清，得到上样液；
[0009]2)用十八烷基硅烷键合硅胶填充高压制备液相色谱柱后，将上样液上样于高压制备液相色谱柱，以甲醇-水系统为洗脱液，以10~200mL/min的速度恒流洗脱30~40min ；所述洗脱液中甲醇与水的体积比为(90~97):(10~3)；
[0010]3)在紫外检测器检测下根据色谱出峰时间进行分段收集，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，当该峰下降至整个峰高的五分之一时结束收集，得到齐墩果酸液，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸水水洗，得到高纯度齐墩果酸。
[0011]步骤2)所述的上样采用分次上样，每次上样10~20mL。
[0012]所述的十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5~20 μ m ;高压制备液相色谱柱的柱长15~25cm ;所述高压液相色谱柱检测波长为210nm。
[0013]步骤3)所述齐墩果酸液减压浓缩是在40~60°C下，真空度为0.09~0.15Mpa的条件下进行。
[0014]所述太白惚木齐墩果酸粗品的制备包括以下步骤:[0015]I)将经预处理的太白惚木药材用水提取后过滤，取滤渣，将滤渣用质量分数为85%~95%的乙醇溶液回流提取后再次过滤，得到乙醇提取液；
[0016]2)将乙醇提取液用活性炭脱色，然后滤除活性炭，再调节乙醇提取液pH值至碱性，静置后过滤除杂，将滤液减压浓缩后再次过滤，得到惚木齐墩果酸粗品。
[0017]所述经预处理的太白惚木药材是将太白惚木的茎皮及根经水洗、干燥及粉碎处理后得到的。
[0018]步骤I)所述的用水提取是将经预处理的太白惚木药材用水浸提三次，每次I~2h，其中，经预处理的太白惚木药材与水的用量比为Ig: (10~15)mL ;所述回流提取的次数为2~3次，每次1.5~2h，其中，经预处理的太白惚木药材与质量分数为85%~95%的乙醇溶液的用量比为Ig: (8~12)mL。
[0019]步骤2)是用0.5~1.0moI/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液pH值至9~11。
[0020]步骤2)中滤液减压浓缩后的体积为浓缩前体积的1/3~1/5 ;减压浓缩是在40~60°C下，真空度为0.09~0.15Mpa的条件下进行。
[0021]步骤2)脱色用活性炭的用量为乙醇提取液体积的0.1%~1.0%，脱色是在50~70°C下，充分搅拌15~60min ;重复加入活性炭脱色处理2~3次。
[0022]与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果: [0023]本发明将高压制备色谱分离首次应用到太白惚木齐墩果酸的提取工艺中，使用十八烷基硅烷键合硅胶为高压制备色谱柱填料，成功分离得到高纯度齐墩果酸，分离过程中只使用甲醇和水这一种色谱体系，进行恒流等速等梯度洗脱，采用紫外检测器在线监测法分离产物和杂质，能够做到精确收集，本发明方法分离过程简单快捷，一次分离就能达到目的，不需要任何化学处理方法，不会损失齐墩果酸，能直接、快速的分离得到齐墩果酸，且分离时间短，分离量大，且得到的齐墩果酸纯度高达到98%以上。
[0024]本发明方法产生的废料少，柱效高，所需的洗脱液体积小，占地面积小，降低了整个工艺的消耗成本，溶剂可回收利用，环境友好，适合工业化生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1为本发明分段收集齐墩果酸粗粗品中各成分的HPLC色谱图；
[0026]图2为本发明分离得到的齐墩果酸的HPLC测定色图谱。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
[0028]本发明所用的试剂及实验仪器
[0029]1、试剂:制备用氢氧化钠、乙醇、甲醇、盐酸均为分析纯，分析用乙腈为色谱纯，水为二次重蒸水；
[0030]2、实验仪器:本发明采用了大直径制备柱为美国安捷伦高压色谱柱，高压制备液相系统为安捷伦公司产品，制备用紫外检测器为安捷伦产品，自动馏分收集系统为安捷伦生产，产品分析使用高效液相色谱仪为美国(Waters)生产。
[0031]本发明的技术方案如下:[0032]—种从太白惚木中分离高纯度齐墩果酸的方法，包括以下步骤:
[0033]I)将惚木茎皮及根用水洗涤干净、晾干，然后进行粉碎，再以纯水为提取液浸提三次,过滤,除去糖类、鞣质等水溶性杂质,将药渣以用质量分数为85%~95%的乙醇溶液为溶剂回流提取后过滤，得到乙醇提取液；
[0034]2)将乙醇提取液用活性炭脱色，滤除活性炭，用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液pH值为11左右，静置过滤杂质后，在40~60°C下，真空度达到0.09~0.15Mpa将滤液减压浓缩至小体积(浓缩前体积的1/3-1/5)，过滤，滤出物为惚木齐墩果酸粗品；
[0035]3)将太白惚木齐墩果酸粗品用纯水洗，取不溶物，将不溶物与分析甲醇按照Ig:(5~10)mL的料液比，充分混匀后，过滤，除去不溶物，得到上样液；
[0036]4)将上样液分次上样于高压制备液相进行分离，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水系统为洗脱液；检测波长为210nm ;以10~200ml/min的速度恒流洗脱30~40min，所述洗脱液中甲醇与水的体积比为(90~97): (10~3);所述的分次上样，是每次上样10~20ml样品；
[0037]5)在紫外检测器检测下依据色谱出峰时间进行分段收集，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，当该峰下降至整个峰高的五分之一时结束收集，得到齐墩果酸液，在40_60°C下，真空度达到0.09~0.15M pa，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸；
[0038]本发明的色谱分离中，齐墩果酸峰型比较对称，但峰没有达到基线分离因此分离过程中在峰开始上升时收集，峰下降至整高的五分之一时结束收集。
[0039]色谱分离过程中收集到的齐墩果酸洗脱液，通过旋转蒸发仪在40~60°C下，真空度为0.09~0.15Mpa下，进行回收溶剂，析出物用沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸，通过高效液相色谱法定量分析纯度在98%以上。
[0040]经过多次色谱分离，高压制备液相色谱柱的分离柱效降低，此时可用质量浓度为5%的盐酸溶液进行反向冲洗制备柱，柱流速为色谱分离流速的10~20%，然后使用3%乙腈水溶液冲去色谱柱上多余的氯离子，来恢复色谱柱柱效。
[0041]实施例1
[0042]一种从太白惚木中分离高纯度齐墩果酸的方法，包括以下步骤:
[0043]I)取太白惚木根茎干品lKg，用水洗涤干净，晾干，粉碎；加入到1L水煮沸1.5小时，倾去水煮液，药渣用95%乙醇分3次回流提取，每次乙醇用量为6L ；
[0044]2)合并醇提液加醇提液体积0.3%的活性炭，在50°C下搅拌脱色I小时；滤除活性炭，脱色醇提液用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液pH值为11左右，静置12小时后过滤，除沉淀，过滤杂质后，滤液在40°C下，真空度达到0.15Mpa将滤液减压浓缩至浓缩前体积的1/3左右(5L)，有大量不溶物析出，过滤，滤出不溶物为齐墩果酸粗品8.6g ；
[0045]3)将上述得到的齐墩果酸粗品8.6g用适量纯水洗,水不溶物用50ml分析甲醇溶解，充分混匀后，过滤，除去不溶物，得到上样液；
[0046]4)将上样液分次上样于高压制备液相进行分离，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水系统为洗脱液；检测波长为210nm ;以20ml/min的速度恒流洗脱30~40min，所述洗脱液中甲醇与水的体积比为97:3 ;所述的分次上样，是每次上样10~20ml样品；[0047]5)在紫外检测器检测下依据色谱出峰时间进行分段收集，通过软件观察色谱峰，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，在8.4min齐墩果酸产物峰上升，通过自动馏分收集器进行收集，参见图1，收集时间为齐墩果酸峰开始上升阶段8.45分钟，峰下降整峰高五分之一结束收集。30min后结束本次洗脱系统，进行重复进样收集，直至配制的齐墩果酸上样液进样完毕，收集液在旋转蒸发仪中回收溶剂，在40°C下，真空度达到0.15Mpa，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸；得到干燥粉末1.03g，通过高效液相色谱法定量分析，参见图2，齐墩果酸含量为98.9%。
[0048]实施例2
[0049]一种从太白惚木中分离高纯度齐墩果酸的方法，包括以下步骤:
[0050]I)取太白惚木根茎干品lKg，用水洗涤干净，晾干，粉碎；加入到12L水煮沸1.0小时，倾去水煮液，药渣用90%乙醇分3次回流提取，每次乙醇用量为8L ；
[0051]2)合并醇提液加醇提液体积0.6%的活性炭，在60°C下搅拌脱色0.8小时；滤除活性炭，脱色醇提液用0.6mol/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液pH值为11左右，静置10小时后过滤，除沉淀，过滤杂质后，滤液在55°C下，真空度达到0.12Mpa将滤液减压浓缩至浓缩前体积的1/4左右(6L)，有大量不溶物析出，过滤，滤出不溶物为齐墩果酸粗品8.1g ；
[0052]3)将上述得到的齐墩果酸粗品8.1g用适量纯水洗，水不溶物用70ml分析甲醇溶解，充分混匀后，过滤，除去不溶物，得到上样液；
[0053]4)将上样液分次上样于高压制备液相进行分离，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水系统为洗脱液；检测波长为210nm ；以40ml/min的速度恒流洗脱40min，所述洗脱液中甲醇与水的体积比为95:5 ;所述的分次上样，是每次上样10~20ml样品；
[0054]5)在紫外检测器检测下依据色谱出峰时间进行分段收集，通过软件观察色谱峰，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，在8.7min齐墩果酸产物峰上升，通过自动馏分收集器进行收集，收集时间为齐墩果酸峰开始上升阶段8.75分钟，峰下降整峰高五分之一结束收集。40min后结束本次洗脱系统，进行重复进样收集，直至配制的齐墩果酸上样液进样完毕，收集液在旋转蒸发仪中回收溶剂，在50°C下，真空度达到0.lOMpa，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸；得到干燥粉末0.96g，通过高效液相色谱法定量分析，齐墩果酸含量为98.7%。
[0055]实施例3
[0056]一种从太白惚木中分离高纯度齐墩果酸的方法，包括以下步骤:
[0057]I)取太白惚木根茎干品lKg，用水洗涤干净，晾干，粉碎；加入到15L水煮沸2.0小时，倾去水煮液，药渣用85%乙醇分3次回流提取，每次乙醇用量为12L ；
[0058]2)合并醇提液加醇提液体积1.0%的活性炭，在55°C下搅拌脱色0.6小时；滤除活性炭，脱色醇提液用0.8mol/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液pH值为11左右，静置8小时后过滤，除沉淀，过滤杂质后，滤液在60°C下，真空度达到0.09Mpa将滤液减压浓缩至浓缩前体积的1/5左右(7L)，有大量不溶物析出，过滤，滤出不溶物为齐墩果酸粗品7.Sg ；
[0059]3)将上述得到的齐墩果酸粗品7.Sg用适量纯水洗，水不溶物用80ml分析甲醇溶解，充分混匀后，过滤，除去不溶物，得到上样液；
[0060]4)将上样液分次上样于高压制备液相进行分离，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水系统为洗脱液；检测波长为210nm ;以10ml/min的速度恒流洗脱40min，所述洗脱液中甲醇与水的体积比为93:7 ;所述的分次上样，是每次上样1~20ml
样品；
[0061]5)在紫外检测器检测下依据色谱出峰时间进行分段收集，通过软件观察色谱峰，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，在9.4min齐墩果酸产物峰上升，通过自动馏分收集器进行收集，收集时间为齐墩果酸峰开始上升阶段9.45分钟，峰下降整峰高五分之一结束收集。30min后结束本次洗脱系统，进行重复进样收集，直至配制的齐墩果酸上样液进样完毕，收集液在旋转蒸发仪中回收溶剂，在60°C下，真空度达到0.09Mpa，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸；得到干燥粉末0.87g，通过高效液相色谱法定量分析，齐墩果酸含量为98.3%.[0062]综上，本发明所提供的高效制备液相色谱分离齐墩果酸的方法，在紫外检测器在线监测下进行分离产物和杂质的精确收集，分离过程简单快捷，一次分离就能达到目的，有效保证了齐墩果酸不会损失，分离过程用时短，分离量大，特别是纯度能够达到98%以上。本方法运行成本低，填料可以长期重复循环使用，溶剂可回收重复使用，分离时间短，分离量大，适合工 业化生产。
【权利要求】
1.一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)将太白惚木齐墩果酸粗品水洗，取不溶物，按照Ig: (3~7)mL的料液比，向不溶物中加入分析甲醇，充分混匀，过滤取上清，得到上样液； 2)用十八烷基硅烷键合硅胶填充高压制备液相色谱柱后，将上样液上样于高压制备液相色谱柱，以甲醇-水系统为洗脱液，以10~200mL/min的速度恒流洗脱30~40min ;所述洗脱液中甲醇与水的体积比为(90~97):(10~3)； 3)在紫外检测器检测下根据色谱出峰时间进行分段收集，在齐墩果酸对应峰开始上升时收集，当该峰下降至整个峰高的五分之一时结束收集，得到齐墩果酸液，将齐墩果酸液减压浓缩至无甲醇味，析出物用沸水水洗，得到高纯度齐墩果酸。
2.根据权利要求1所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤2)所述的上样采用分次上样，每次上样10~20mL。
3.根据权利要求1所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，所述的十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5~20 μ m ;高压制备液相色谱柱的柱长15~25cm ;所述高压液相色谱柱检测波长为210nm。
4.根据权利要求1所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤3)所述齐墩果酸液减压浓缩是在40~60°C下，真空度为0.09~0.15Mpa的条件下进行。
5.根据权利要求1~4中任意一项所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，所 述太白惚木齐墩果酸粗品的制备包括以下步骤: 1)将经预处理的太白惚木药材用水提取后过滤，取滤渣，将滤渣用质量分数为85%~95%的乙醇溶液回流提取后再次过滤，得到乙醇提取液； 2)将乙醇提取液用活性炭脱色，然后滤除活性炭，再调节乙醇提取液pH值至碱性，静置后过滤除杂，将滤液减压浓缩后再次过滤，得到惚木齐墩果酸粗品。
6.根据权利要求5所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，所述经预处理的太白惚木药材是将太白惚木的茎皮及根经水洗、干燥及粉碎处理后得到的。
7.根据权利要求5所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤I)所述的用水提取是将经预处理的太白惚木药材用水浸提三次，每次I~2h，其中，经预处理的太白惚木药材与水的用量比为Ig:(10~15)mL;所述回流提取的次数为2~3次，每次1.5~2h，其中，经预处理的太白惚木药材与质量分数为85%~95%的乙醇溶液的用量比为Ig: (8~12)mL。
8.根据权利要求5所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤2)是用0.5~1.0moI/L氢氧化钠水溶液调节乙醇提取液的pH值至9~11。
9.根据权利要求5所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤2)中滤液减压浓缩后的体积为浓缩前体积的1/3~1/5 ;减压浓缩是在40~60°C下，真空度为0.09~0.15Mpa的条件下进行。
10.根据权利要求5所述的一种从太白惚木中制备高纯度齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤2)脱色用活性炭的用量为乙醇提取液体积的0.1%~1.0%，脱色是在50~70°C下，充分搅拌15~60min ;重复加入活性炭脱色处理2~3次。
【文档编号】C07J63/00GK104031113SQ201410273605
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2014年6月18日
【发明者】肖志强, 杨建刚, 朱爱华, 郭晨, 史文静, 任哲, 张俏, 张建辉 申请人:陕西新药技术开发中心