一种从植物中提取雷公藤红素的方法
【专利摘要】一种自雷公藤属及南蛇藤属植物根皮或根茎中提取雷公藤红素的方法，以雷公藤属及南蛇藤属植物根皮或根茎为原料，包括酶解、超声提取、分离、纯化和重结晶等步骤。所述的提取首先以酶进行酶解后超声提取，提取液浓缩后得到浸膏状初提物，然后初提物用水悬浮后以乙酸乙酯萃取，萃取剂浓缩得到稠膏状提取物；所述纯化是粗提物用硅藻土或硅胶拌样后以硅胶柱色谱分离纯化，收集洗脱液，浓缩干燥后得到粉末状粗晶体，最后用甲醇-水或乙醇-水混合溶剂重结晶。本法分离、纯化工艺简单，得到纯度达98%的雷公藤红素，提取收率高于90%。
【专利说明】一种从植物中提取雷公藤红素的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种从植物中提取雷公藤红素的方法。
【背景技术】
[0002]雷公藤红素(celastrol)，又名南蛇藤素，是一种从卫矛科雷公藤属及南蛇藤属植物中分离出的五环三萜类物质，外观呈红色针状结晶体，具有抗炎、免疫抑制、抗病毒及抗肿瘤等多种药理活性。雷公藤红素的抗肿瘤新机制的发现，又掀起了研究其抗癌活性的新热潮，同时其经济价值也逐渐走高。
[0003]根据雷公藤红素的溶解性，利用有机溶剂从雷公藤红素含量较高的植物中提取雷公藤红素，是生产雷公藤红素普遍采用的一种方法。截至目前，文献报道的雷公藤红素提取工艺只有有机溶剂提取和超临界C02萃取。有机溶剂提取法因其对设备要求低、操作简单、成本低廉，是目前最常用的一种方法。
[0004]但是，植物细胞由细胞壁及原生质体组成，细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质、木质素等物质构成的致密结构。在提取过程中，位于细胞原生质体中的雷公藤红素向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力，导致提取时间延长，提取效率降低。
【发明内容】
[0005]本发明为克服现有方法中提取雷公藤红素收率较低问题，发明一种新的、改进的提取雷公藤红素的方法。
[0006]本发明提供了一种提取雷公藤红素的方法，其中，该方法包括将含有雷公藤红素的植物原料干燥，粉碎，经酶解后有机溶剂对其进行超声提取，提取液浓缩后萃取、柱层析分离，重结晶。具体步骤包括:
(l)原料干燥、粉碎、过20-60目筛，按料液比1:5~20 (kg/L)加入去离子水，调整pH在6、范围内，加入酶酶解，酶量为原料质量的0.1- 10%，酶解温度25-60°C，酶解时间0.5^2h。所述酶为纤维素酶、果胶酶中的一种或两者的混合物；
(2)反应液过滤，收集滤渣，按料液比1:5~15(kg/L)加入甲醇或乙醇，在20-45°C内超声波提取1(T45 min，过滤，重复提取2~3次，合并提取液，减压浓缩至无馏分蒸出；
(3)将浓缩的提取物以2飞倍体积水悬浮后，加入等体积乙酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并萃取液，减压浓缩；
(4)萃取液浓缩后得到的产物以硅藻土或硅胶拌样并干燥，将得到的产物置于硅胶柱分离。其中，用于拌样的硅藻土或硅胶的用量为萃取液浓缩后所得产物重量的5~10%，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，梯度洗脱，洗脱过程中采用薄层色谱法进行监控；
(5)收集含雷公藤红素的洗脱液，浓缩至干后进行重结晶并干燥，所得即为雷公藤红素。
[0007]本发明的优势为:利用酶对原料的细胞壁成分进行有效的分解破坏，从而降低提取过程中的传质阻力，加快雷公藤红素溶出细胞速率，缩短提取时间，提高提取效率；同时在原工艺条件上仅增加了一个操作单元，反应条件温和易获得，对反应设备的要求较低，操作简单。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1为雷公藤红素的结构式。
[0009]图2为雷公藤红素的提取流程图。
【具体实施方式】
[0010]此处所描述的具体实施方法仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0011]实施例1
称取Ikg南蛇藤属植物苦皮藤的干燥根皮，粉碎至40目，IOL去离子水和20g的3%的纤维素酶和果胶酶复合剂，在恒温40°C和pH值6.0的状态下酶解2h，过滤，向滤渣中加入甲醇IOL进行超声波提取，提取时间30min，过滤，重复提取2次，合并滤液，减压浓缩，将浓缩后的提取物用4倍体积的水悬浮后加入等体积的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液并减压浓缩，浓缩后的产物以其质量5%的娃藻土拌样并干燥,上200-300目的硅胶柱，梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，洗脱梯度为1:0 (2V)，5:1 (2V)，1:1 (IOV) (V为柱体积)，收集含雷公藤红素的洗脱液，减压浓缩并干燥，得红色粉末状提取物，将该提取物以热乙醇溶解成饱和 溶液后,缓慢加入水,有红色晶体析出，干燥后干燥后得7.37g纯度为98.1%的雷公藤红素，收率为90.3%。
[0012]实施例2
称取Ikg雷公藤的根,粉碎至60目，15L去离子水和250g的3%的纤维素酶和果胶酶复合剂，在恒温40°C和pH值6.0的状态下酶解2h，过滤，向滤渣中加入乙醇15L进行超声波提取，提取时间lh，过滤，重复提取2次，合并滤液，减压浓缩，将浓缩后的提取物用4倍体积的水悬浮后加入等体积的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液并减压浓缩，浓缩后的产物以其质量5%的硅胶拌样并干燥，上200-300目的硅胶柱，梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，洗脱梯度为1:0 (2V)，5:1 (2V)，1:1 (IOV) (V为柱体积)，收集含雷公藤红素的洗脱液，减压浓缩并干燥，得红色粉末状提取物，将该提取物以热乙醇溶解成饱和溶液后，缓慢加入冷水，有红色晶体析出，干燥后得6.19g纯度为98.3%的雷公藤红素，收率为90.2%。
【权利要求】
1.一种雷公藤红素的提取工艺，其特征是以含雷公藤红素的植物根皮或根茎原料干燥、粉碎过筛，加入适量去离子水并调整PH后加酶进行酶解，过滤后向滤渣中加入甲醇或乙醇超声提取3~4次，提取液浓缩后加水悬浮并以乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后以硅胶柱色谱分离纯化，收集洗脱液，浓缩干燥得到粉末状粗晶体，以甲醇-水或乙醇-水混合溶剂重结晶。
2.如权利要求1所述的方法，其中所用酶为纤维素酶、果胶酶中的单一或者混合物，加入量为原料质量的0.f 10%，温度为25~6℃，酶解时间0.5~2 h。
3.如权利要求1所述的方法，采用有机溶剂甲醇或乙醇超声提取，提取时间l0~45min，重复2~3次。
4.如权利要求1所述的方法，采用柱层析分离纯化，其中洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，再以甲醇-水或乙醇-水混合溶剂重结晶洗脱液，最终所得雷公藤红素纯度达98%，提取收率闻于90%。
【文档编号】C07J63/00GK103880912SQ201410116127
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年3月27日 优先权日:2014年3月27日
【发明者】张梅, 彭学东, 赵金召, 邱洁 申请人:江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司