专利名称：一种从山茶花花卉中提取多酚的方法
技术领域：
本发明属于分子生物学技术领域，具体的说，涉及一种从山茶花花卉中提取多酚的方法。
背景技术：
植物中的多酚类是具多个酚基的化合物，常包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。目前研究较多的天然多酚类是从食用茶叶中得到的属黄烷醇类的茶多酚，许多研究表明其为一种天然抗氧化剂，具有能清除自由基、阻止脂质过氧化、提高机体免疫力和延缓衰老等生物作用；另报道其还具有抗辐射和抑制癌细胞增殖的作用。为此，茶多酚被开发应用于食品保鲜防腐，延长食品保质期，保护食品中营养成分，并且无毒副作用，食用安全。之外，也有从芒果、龙眼、甘蔗、苹果、石榴等水果中获取多酚类。山茶花(Camellia japonica)也是富含多酹类的一种植物,在老四川地区广泛种植,用于城市景观绿化供人们观赏，也是获取多酚类的一种天然资源。尽管许多研究表明从山茶花的叶片中成功提取获得了多酚类，但是，其花中的多酚类提取研究至今未见有报道，而且每年山茶花的花卉因凋落而未被利用和白白浪费掉了。现有技术的缺点:目前尚未有从山茶花花卉中提取多酚的研究，山茶花作为观赏性植物，资源充足，却没有有效得到利用，造成了资源的浪费。
发明内容
为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种能快速有效的从山茶花卉中提取多酚的方法。本发明目的是这样实现 的:一种从山茶花花卉中提取多酚的方法，其关键在于包括以下步骤:( I)山茶花粉末制备:摘取花开正艳的山茶花，洗净，放冰箱冻存，然后用冻干机冻干，研磨后过18目筛，最后封口袋装好-20°C保存；(2)浸提液的制备:称取山茶花粉末，加入体积浓度为60%的乙醇，山茶花粉末重量与乙醇水溶液体积的比为1:35，放在80°C水浴中浸提20min后，过滤；滤液于35°C，
0.09KPa条件下减压蒸懼除去乙醇,然后用蒸懼水稀释到浓度2 3mg.ml/1,再过0.45um的滤膜，最后得到浸提液；(3)树脂吸附:a:将乙醇浸泡树脂3 4h，然后放掉，用同样的方法反复浸泡清洗树脂，直到在出口洗涤液中加入3倍量的水不显浑浊为止，然后用清水充分淋洗至无明显乙醇气味为止，然后将树脂装入树脂柱中；b:将准备好的浸提液按I 1.5ml.HIirT1的流速加到树脂柱上端，上样完毕后，用体积浓度为5%的乙醇洗脱杂质及未结合的多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脱体积3BV ；再用体积浓度为80%的乙醇洗脱多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脱体积3 4BV，收集洗脱液，然后将收集到的多酚洗脱液减压蒸馏后，冷冻干燥，最后得到暗红色的具有金属光泽的多酚粉末。
上述步骤(3)中所述树脂为DM301大孔树脂。
上述步骤(2)浸提液的制备中最佳参数的选取:
I)不同溶剂对多酚浸出率的影响
称取1.0OOg山茶花，分别加入蒸馏水，体积浓度为50%甲醇，体积浓度为50%乙醇三种提取剂各25mL，70°C温浴20min，过滤，滤液定容至50mL，取ImL测定多酚浸出率，每组做三个重复，结果如图2所示。由图2可见，不同溶剂提取的多酚含量差别较大，依次为50%乙醇 > 蒸馏水> 50%甲醇，所以下一步采用乙醇作为浸提溶剂。
2)乙醇浓度对多酚浸出率的影响
称取1.0OOg山茶花，分别加入40%、50%、60%、70%、80%、90%六种体积浓度的乙醇各25mL, 70°C温浴20min，过滤，滤液定容至50mL，取ImL测定多酚浸出率，结果如图3所示。由图3可见，乙醇浓度由40%增加到60%时，浸出率逐步增大，60%时浸出率达到最大，再增加乙醇浓度，浸出率则逐渐下降。所以选择60%的乙醇作为浸提溶液。
3)浸提次数对茶多酚浸出率的影响
称取1.0OOg山茶花，按体积浓度为60%乙醇25mL，70°C 20min的条件浸提一次、两次、三次，过滤，收集滤液定容至IOOmL,每组做三个重复，每组的浸出率如图4所示。由图4见，浸提一次后山茶花中的多酚已大部分被浸提出来，而浸提二次和三次对多酚的浸出率贡献不大，所以从资源利用率考虑，实验选择浸提一次。
4)料液比对多酚浸提率的影响
分别称取1.0OOg山茶花，加入不同体积的体积浓度为60%的乙醇，70°C浸提20min后过滤,滤液定容至50mL，取ImL测定多酚浸出率，每组做三个重复，结果如图5所示。从图5可见，随着浸提溶剂用量的增加，多酚的浸出率不断增大，当料液比为1:30时浸出率达到最大，再增加浸提剂用量时，多酚的浸出率变化不大，所以选择1:30为最佳的料液比。
5)温度对多酚浸提的影响
称取1.0OOg山茶花，加入体积浓度为60%乙醇30mL，分别置于50°C、60°C、70°C、80°C >90°C、100°C下，浸提20min，过滤，滤液定容至50mL，取ImL测定多酚的浸出率，每组做三个重复，结果如图6所示:从50°C升高到80°C时，浸出率逐渐增大，80°C达到最大，再升高温度浸出率反而降低，可能是高温使多酚氧化加快。所以选择80°C为浸提的最佳温度。
6)时间对多酚浸提的影响`
称取1.0OOg山茶花，加入体积浓度为60%乙醇30mL，置于80°C下保温不同时间，做三个重复，观察时间对多酚浸出率的影响，结果见图7。由图7可知，随着时间的增加浸出率不断升高，保温30min时，多酚浸出率达到最大，再延长提取时间浸出率反而降低，这可能是因为多酚在高温状态下持续越久，氧化就越多，所以选择30min为最佳浸提时间。
7)正交试验结果
综合上述因素，实验选取乙醇浓度、温度、时间、料液比作为考察因素见表1，并进行多酚的提取实验，测定多酚浸出率，结果见表2。
表I考察因素与水平对比表
权利要求
1.一种从山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)山茶花粉末制备:摘取花开正艳的山茶花，洗净，放冰箱冻存，然后用冻干机冻干，研磨后过18目筛，最后封口袋装好-20°c保存； (2)浸提液的制备: 称取山茶花粉末，加入体积浓度为60%的乙醇，山茶花粉末重量与乙醇水溶液体积的比为1:35，放在80°C水浴中浸提20min后，过滤；滤液于35°C，0.09KPa条件下减压蒸馏除去乙醇，然后用蒸馏水稀释到浓度2 3mg.mL—1，再过0.45um的滤膜，最后得到浸提液； (3)树脂吸附: a:将乙醇浸泡树脂3 4h，然后放掉，用同样的方法反复浸泡清洗树脂，直到在出口洗涤液中加入3倍量的水不显浑浊为止，然后用清水充分淋洗至无明显乙醇气味为止，然后将树脂装入树脂柱中； b:将准备好的浸提液按I 1.5ml.HiirT1的流速加到树脂柱上端，上样完毕后，用体积浓度为5%的乙醇洗脱杂质及未结合的多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脱体积3BV ;再用体积浓度为80%的乙醇洗脱多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脱体积3 4BV，收集洗脱液，然后将收集到的多酚洗脱液减压蒸馏后，冷冻干燥，最后得到暗红色的具有金属光泽的多酚粉末。
2.根据权利要求1所述一种从山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于:所述步骤(3)中所述树脂为DM301大孔树 脂。
全文摘要
本发明公开了一种从山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于包括以下步骤(1)山茶花粉末制备；(2)浸提液的制备；(3)树脂吸附。本发明公开了本发明一种从山茶花花卉中提取多酚的方法，具有制备方法简单、操作方便和成本低廉等特点，能充分的利用山茶花花卉的资源提纯度高的取多酚，合理的利用资源，符合了变废为宝的研发目标。
文档编号C07G99/00GK103145770SQ20131008928
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月20日 优先权日2013年3月20日
发明者罗通 申请人:宜宾学院, 重庆师范大学