专利名称：一种生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种提取青蒿素的工艺，尤其是涉及一种生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺。
背景技术：
青蒿素是我国在世界上首先研制成功的一种抗疟新药，它是从我国民间治疗疟疾的草药黄花蒿中分离出来的有效单体。它的研究始于上世纪60年代中期，是数百名科学家经过坚持不懈的深入研究而取得的成果。它是由我国科学家自主研究开发并在国际上注册的为数不多的一类新药之一，被世界卫生组织评价为治疗恶性疟疾惟一真正有效的药物。主要用于间日疟、恶性疟的症状控制，以及耐氯喹虫株的治疗，也可用以治疗凶险型恶性疟，如脑型疟、黄疸型疟疾等；亦可用以治疗系统性红斑狼疮与盘状红斑狼疮。目前，我国的青蒿素产业已经具有一定规模，从原料种植到产品生产都取得了长足的发展。现有制备青蒿素的方法包括有机溶剂提取法、超临界CO2萃取法、微波萃取法等，但有机溶剂提取法提取率不高，超临界CO2萃取法生产成本太高，微波萃取处理量小，成本闻。中国发明专利申请201010508561.4公开了一种生物复合酶法提取青蒿素的工艺，大大提高了青蒿素的提取率，但也存在着酶处理时间长，结晶步骤多，生产周期长等不足。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种提取率高，设备简单，生产成本低的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺。本发明解决其技术问题采用的技术方案是:
一种生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，采用的生物酶是一种复合酶，能破坏蜡油成分，破坏细胞壁的纤维素、果胶等，使青蒿素提取率大大提高，通过柱层析除去其它杂质，得到纯度较高的青蒿素，再通过适宜溶剂结晶，得到高纯度的青蒿素。具体包括以下步骤:
(O原料复合酶处理:在青蒿草干叶叶面喷洒相当于青蒿草干叶重量0.1% - 0.3%的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵 12 — 24h ；
(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干或烘干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，按每千克原料青蒿草干叶加提取有机溶剂A > 5.0升(优选5.4 6.5升)的比例加入有机溶剂A，浸泡2-4h，再开始渗漉，收集渗漉液；
进一步，渗漉时，优选加压10kPa_60kPa (表压)；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得渗漉液直接通过装有硅胶的层析柱，硅胶的重量为青蒿草干叶原料重量的1/5 - 1/2，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用有机溶剂B洗脱硅胶柱，薄层层析(TLC)监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品，回收洗脱液；青蒿素粗品用有机溶剂A洗涤至少2次，每次洗涤按每千克青蒿素粗品加1.0 — 2.5升有机溶剂A的比例加入有机溶剂A，然后抽滤，滤渣放入烘箱中在55-75°C下干燥4-8h，得经洗涤干燥的青蒿素粗品，滤液投入渗漉装置中作为下一批生产步骤(2)中的提取溶剂，按每千克经洗涤干燥的青蒿素粗品(滤渣)加有机溶剂C 90 — 110升(优选95 - 105升)的比例加入有机溶剂C，溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的5% - 8%，回收有机溶剂C ;浓缩后的滤液静置，0_30°C结晶4_12h,过滤,得到青高素。步骤(I)中，所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶20%-30%、半纤维素酶10%-15%、果胶酶20%-30%、脂肪酶25%_35%、淀粉酶1%_1.5%、蛋白酶1%-1.5%、β 一葡聚糖酶1%_1.5%、木聚糖酶1%-1.5%，各种酶的重量百分比之和为100%。所述有机溶剂A优选石油醚、6#溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油或正已烷等。所述有机溶剂B优选石油醚、6#溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油或正已烷，所述石油醚、6#溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油、正已烷中含有4.0wt%-5.5wt%的乙酸乙酷；
所述有机溶剂C为体积浓度> 85%的乙醇。本发明采用植物提取复合酶，可以降低酶处理温度，并大大缩短处理时间，提高生产效率；采用渗漉提取，可以大大提高青蒿素的提取率，与中国发明专利申请201010508561.4相比较，青蒿素的提取率可以提高3 — 5%;通过柱层析后处理得到的青蒿素纯度可达> 99%，可减少结晶步骤，简化生产工艺。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。实施例1
本实施例包括以下步骤:
(O原料复合酶处理:取青蒿草干叶500kg (青蒿素质量含量0.42%)在青蒿草干叶叶面喷洒IOOOg的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵24h ；
所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶25%、半纤维素酶15%、果胶酶20%、脂肪酶35%、淀粉酶1%、蛋白酶1%、β 一葡聚糖酶1.5%、木聚糖酶1.5%。(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，再加2700L石油醚，浸泡2h，再加压25KPa (表压)渗漉，收集渗漉液；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得的渗漉液直接通过装有120kg硅胶的层析柱，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用含有4.5wt%乙酸乙酯的石油醚洗脱硅胶柱，薄层层析(TLC)监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品2.21kg，回收洗脱液；青蒿素粗品用石油醚洗涤2次，每次洗涤所用石油醚的量为3L，然后抽滤，滤渣放入烘箱中在70°C下干燥5h，得到经洗 涤干燥的青蒿素粗品2.16 kg，滤液投入渗漉装置中作为下一批步骤(2)中的提取溶剂，将经洗涤干燥的青蒿素粗品用225L体积浓度为95%的乙醇溶解后，过滤，滤液浓缩至17.5L并回收乙醇；浓缩液转入结晶罐中15°C结晶4h，放罐抽滤，得到含量为99.5wt%的青蒿素2.0lkg0青蒿素得率95.7%。实施例2
本实施例包括以下步骤:
(I)原料复合酶处理:取青蒿草干叶500kg (青蒿素质量含量0.72%)，在青蒿草干叶叶面喷洒800g的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵18h ；
所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶20%、半纤维素酶15%、果胶酶25%、脂肪酶35%、淀粉酶1%、蛋白酶1.5%、β 一葡聚糖酶1%、木聚糖酶1.5%。(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，再加2800L6#溶剂油，浸泡3h，再加压40KPa (表压)渗漉，收集渗漉液；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得的渗漉液直接通过装有150kg硅胶的层析柱，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用含有5.0wt%乙酸乙酯的6#溶剂油洗脱硅胶柱，薄层层析(TLC)监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品3.75 kg,回收洗脱液；青蒿素粗品用6#溶剂油洗漆2次,每次洗漆所用6#溶剂油的量为5L,然后抽滤,滤洛放入烘箱中在60°C下干燥6h，得到经洗涤干燥的青蒿素粗品3.63kg，滤液投入渗漉装置中作为下一批步骤(2)中的提取溶剂，将经洗涤干燥的青蒿素粗品用375L体积浓度为92%的乙醇溶解后，过滤，滤液浓缩至25L并回收乙醇；浓缩液转入结晶罐中20°C结晶6h，放罐抽滤得到含量为99.3wt%的青蒿素3.48kg。青蒿素得率96.7%。实施例3
本实施例包括以下步骤:
(I)原料复合酶处理:取青蒿草干叶500kg (青蒿素质量含量0.95%)，在青蒿草干叶叶面喷洒800g的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵24h ；
所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶30%、半纤维素酶10%、果胶酶25%、脂肪酶30%、淀粉酶1%、蛋白酶1.5%、β 一葡聚糖酶1.5%、木聚糖酶1%。(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，再加3200L正已烷，浸泡4h，再加压50KPa (表压)渗漉，收集渗漉液；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得的渗漉液直接通过装有180kg硅胶的层析柱，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用含有5.5wt%乙酸乙酯的正已烷洗脱硅胶柱，薄层层析(TLC)监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品4.85 kg,回收洗脱液；青蒿素粗品用正已烷洗涤2次，每次洗涤所用正已烷的量为10L，然后抽滤，滤渣放入烘箱中在75°C下干燥4h，得到经洗涤干燥的青蒿素粗品4.78kg，滤液投入渗漉装置中作为下一批步骤(2)中的提取溶剂，将经洗涤干燥的青蒿素粗品用500L体积浓度为90%的乙醇溶解后，过滤，滤液浓缩至30L并回收乙醇；浓缩液转入结晶罐中25°C结晶8h，放罐抽滤得到含量为99.3wt%的青蒿素4.60kg。青蒿素得率96.8%。实施例4本实施例包括以下步骤:
(O原料复合酶处理:取青蒿草干叶500kg (青蒿素质量含量0.55%)在青蒿草干叶叶面喷洒900g的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵16h ；
所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶25%、半纤维素酶15%、果胶酶30%、脂肪酶25%、淀粉酶1.5%、蛋白酶1.5%、β 一葡聚糖酶1%、木聚糖酶1%。(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，再加3000L 120#溶剂油，浸泡2h，再加压35KPa (表压)渗漉，收集渗漉液；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得的渗漉液直接通过装有200kg硅胶的层析柱，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用含有4.0wt%乙酸乙酯的120#溶剂油洗脱硅胶柱，薄层层析监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品3.17 kg,回收洗脱液；青蒿素粗品用120#溶剂油洗漆2次,每次洗漆所用120#溶剂油的量为6L,然后抽滤,滤渣放入烘箱中在60°C下干燥7h，得到经洗涤干燥的青蒿素粗品3.05kg，滤液投入渗漉装置中作为下一批步骤(2)中的提取溶剂，将经洗涤干燥的青蒿素粗品用300L体积浓度为89%的乙醇溶解后，过滤，滤液浓缩至1 8.75L并回收乙醇；浓缩液转入结晶罐中30°C结晶8h，放罐抽滤，得到含量为99.lwt%的青蒿素2.60kg。青蒿素得率94.5%。实施例5
本实施例包括以下步骤:
(I)原料复合酶处理:取青蒿草干叶500kg (青蒿素质量含量0.58%)，在青蒿草干叶叶面喷洒1200g的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵12h ；
所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶25%、半纤维素酶15%、果胶酶25%、脂肪酶30%、淀粉酶1.5%、蛋白酶1%、β 一葡聚糖酶1%、木聚糖酶1.5%。(2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，再加2900L 200#溶剂油，浸泡2h，再加压60KPa (表压)渗漉，收集渗漉液；
(3)层析柱层析:将步骤(2)所得渗漉液直接通过装有160kg硅胶的层析柱，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用含有4.4wt%乙酸乙酯的200#溶剂油洗脱硅胶柱，薄层层析监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液；
(4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品3.10kg，回收洗脱液；青蒿素粗品用200#溶剂油洗涤2次，每次洗涤所用200#溶剂油的量为7L，然后抽滤，滤渣放入烘箱中在55°C下干燥8h，得到经洗涤干燥的青蒿素粗品2.97kg，滤液投入渗漉装置中作为下一批生产步骤(2)中的提取溶剂，将经洗涤干燥的青蒿素粗品用300L体积浓度为93%的乙醇溶解后，过滤，滤液浓缩至20L并回收乙醇；浓缩液转入结晶罐中30°C结晶6h，放罐抽滤，得到含量为99.2wt%的青蒿素2.71kg。青蒿素得率93.4%。
权利要求
1.一种生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，包括以下步骤: (O原料复合酶处理:在青蒿草干叶叶面喷洒相当于青蒿草干叶重量0.1% - 0.3%的植物提取复合酶，再将青蒿叶堆积在温度40±2°C的暗室内，堆头上面覆盖一层塑料膜，发酵 12 — 24h ； (2)有机溶剂提取:将经步骤(I)发酵的青蒿叶片晾干或烘干，将青蒿干叶投入渗漉装置中，按每千克原料青蒿草干叶加提取有机溶剂A > 5.0升的比例加入有机溶剂A，浸泡2-4h,再开始渗漉,收集渗漉液； (3)层析柱层析:将步骤(2)所得渗漉液直接通过装有硅胶的层析柱，硅胶的重量为青蒿草干叶原料重量的1/5 - 1/2，过柱流出液回收用作步骤(2)中提取溶剂，再用有机溶剂B洗脱硅胶柱，薄层层析监测，直到层析柱无青蒿素流出，收集洗脱液； (4)结晶:将步骤(3)收集得到的洗脱液浓缩干，得到青蒿素粗品；青蒿素粗品用有机溶剂A洗涤至少2次，每次洗涤按每千克青蒿素粗品加1.0 — 2.5升有机溶剂A的比例加入有机溶剂A，然后抽滤，滤渣放入烘箱中在55-75°C下干燥4-8h，得经洗涤干燥的青蒿素粗品，按每千克经洗涤干燥的青蒿素粗品加有机溶剂C 90 — 110升的比例加入有机溶剂C，溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的5% - 8% ;浓缩后的滤液静置，0-30°C结晶4-12h，过滤，得到青蒿素。
2.根据权利要求1所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，步骤(I)中，所述植物提取复合酶由以下重量百分比的酶组成:纤维素酶20%-30%、半纤维素酶10%-15%、果胶酶20%-30%、脂肪酶25%-35%、淀粉酶1%_1.5%、蛋白酶1%_1.5%、β 一葡聚糖酶1%-1.5%、木聚糖酶1%-1.5%，各种酶的重量百分比之和为100%。
3.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，所述有机溶剂A为石油醚、6# 溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油或正已烷。
4.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，所述有机溶剂B为石油醚、6#溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油或正已烷，所述石油醚、6#溶剂油、120#溶剂油、200#溶剂油、正已烷中含有4.0wt%-5.5wt%的乙酸乙酯。
5.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，所述有机溶剂C为体积浓度> 85%的乙醇。
6.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，步骤(2)中，将青蒿干叶投入渗漉装置中，按每千克原料青蒿草干叶加提取有机溶剂A 5.4-6.5升的比例加入有机溶剂A。
7.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，步骤(2)中，渗漉时，加压表压为10kPa_60kPa。
8.根据权利要求1或2所述的生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，其特征在于，步骤(4)中，按每千克经洗涤干燥的青蒿素粗品加有机溶剂C 95 — 105升的比例加入有机溶剂C溶解洗涤干燥的青蒿素粗品。
全文摘要
一种生物酶-渗漉法提取青蒿素的工艺，包括以下步骤(1)原料复合酶处理；(2)有机溶剂提取；(3)层析柱层析；(4)结晶。本发明采用植物提取复合酶，可以降低酶处理温度，并大大缩短处理时间，提高生产效率；采用渗漉提取，可以大大提高青蒿素的提取率，与中国发明专利申请201010508561.4相比较，青蒿素的提取率可以提高3－5％；通过柱层析后处理得到的青蒿素纯度可达≥99%，可减少结晶步骤，简化生产工艺。
文档编号C07D493/20GK103073561SQ20131004887
公开日2013年5月1日 申请日期2013年2月7日 优先权日2013年2月7日
发明者肖文中, 胡亮亮 申请人:湖南威嘉生物科技有限公司