从多黏菌素b的混合组分中分离纯化多黏菌素b1的方法
【专利摘要】本发明提供一种从多黏菌素B的混合组分中分离纯化多黏菌素B1的方法，包括如下步骤：(a)将大孔型吸附树脂的层析介质装成层析柱；(b)将多黏菌素B溶液上样，用含有机溶剂的酸性溶液作为洗脱液，把多黏菌素B的各组分依次洗脱下来，获得多黏菌素B1洗脱液。本发明方法操作简单，所用分离介质化学性质稳定，重复使用率高，易于工业放大，得到的多黏菌素B1的峰纯度可达98％以上。
【专利说明】从多黏菌素B的混合组分中分离纯化多黏菌素BI的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及从多黏菌素B的混合组分中分离纯化单组份多黏菌素BI的方法。
【背景技术】
[0002]多黏菌素B (polymyxin B,其结构通式见下式I)是由多黏芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)产生的一种由多种氨基酸和脂肪酸组成的碱性环多肽类抗生素。多黏菌素B的药用形式为多黏菌素B的硫酸盐及其与其他药物的复方制剂，临床上主要作为抗感染类药物使用，治疗由绿脓杆菌等革兰氏阴性菌引起的皮肤创面、泌尿系统以及眼、耳、气管等部位感染，也可用于败血症、腹膜炎等。多黏菌素B是结构相似的多组分混合物，现已发现的组分共有七种，分别是B1、Bl-1、B2、B3、B4、B5和B6 (结构通式见式1)，各组分的X(第3位)，Y (第6位)的氨基酸残基相同，分别是DAB和D-苯丙氨酸；R(脂肪酸链)和Z (第7位)的差异见表1。
[0003]式1:多黏菌素B结构通式
[0004]
【权利要求】
1.从多黏菌素B的混合组分中分离纯化多黏菌素BI的方法，包括如下步骤: (a)将大孔型吸附树脂的层析介质装成层析柱； (b)将多黏菌素B溶液上样，用含有机溶剂的酸性水溶液作为洗脱液，把多黏菌素B的各组分依次洗脱下来，获得多黏菌素BI的洗脱液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(a)中所述的大孔型吸附树脂的层析介质为以聚苯乙烯/二乙烯苯或聚丙烯酸酯为骨架的小颗粒反相层析介质。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述小颗粒反相层析介质的粒径小于或等于 120 μ m。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(a)还包括在上样前先用洗脱液将层析柱平衡。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(b)中使用的有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮，优选乙腈。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(b)中使用的有机溶剂的浓度为1-50% (V/V)，优选 5-15% (V/V) ο
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(b)中使用的酸性水溶液的pH为1.0-5.0，优选 ρΗ2.0-3.0。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于调节步骤(b)中使用的含有有机溶剂的酸性水溶液的PH所用的酸为H2S04、HCUH3PO4、三氟乙酸、醋酸或甲酸，优选醋酸或甲酸，更优选甲酸。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤(b)的洗脱过程中，采用色谱分析法对各组分浓度进行测定。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述色谱分析法为欧洲药典7.0所规定的液相分析法。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(b)中获得的多黏菌素BI洗脱液用色谱分析法进行测定，收集多黏菌素BI峰纯度大于98%的部分。
【文档编号】C07K1/22GK103923190SQ201310012123
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月14日 优先权日:2013年1月14日
【发明者】侯静品, 赵文杰, 赵波, 那可, 魏晓东, 杨筱静, 徐加兵, 许炜, 刘永双, 马川川 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院