专利名称：一种从银杏叶提取物中分离纯化ga、gb和白果内酯的方法
技术领域：
本发明涉及一种银杏内酯A、B和白果内酯的方法，具体为一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法。
背景技术：
银杏叶提取物在促进循环系统的血小板活化、抗氧化作用、抗衰老功能、抗老年性痴呆和眼部视网膜病变等方面发挥了重要作用，被视为治疗神经系统疾病和心脑血管疾病的双跨性药物。据不完全统计，至2010年8月，国家食品药品监督管理局已颁发银杏叶提取物药物及复合制剂生产批文140多个，生产厂家有100多家。当今世界市场上银杏叶制品的年销售额达60亿美元以上，已成为植物药的全球冠军品种，银杏叶制剂成为治疗心脑血管疾病的领先品种。银杏叶提取物中二萜内酯有银杏内酯，主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯，简称GA、GB、GC、GM、GJ和BB等。银杏内酯具有专属性的抗血小板活化因子(plateletactivating factor. PAF)活性,是天然的PAF拮抗剂,其中尤以GB的活性最高。GB已引起了国际药学界的广泛关注，有望成为治疗休克、烧伤、过敏性哮喘、中风、移植排斥、血液透析等病症的一类新药，目前在法国、英国等国家已经分别进入II和III期临床。白果内酯(BB)用于治疗神经系统疾病，如肌肉萎缩、肌挛、轻瘫、表层和深部感觉障碍、头痛、头晕、视力、听力、记忆障碍等。文献报道的银杏内酯单体分离纯化方法主要有乙醇提取一乙酸乙酯萃取一柱色谱分离法、乙醇提取一乙酸乙酯萃取一反相色谱分离法、色谱分离一重结晶法、超临界液体萃取法等。
GA、GB和BB分离纯化方法直接相关的授权发明专利或申请专利主要有如下(I)中国专利(ZL00117758. 3) “由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法”，该发明涉及一种由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法，它是以银杏叶或银杏叶浸膏为原料，经加入乙醇、或甲醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有机溶剂浸取，浸取液经过滤、静置分层，得到的有机相进行去杂质处理，再静置分层得到的有机相经浓缩、干燥得到富集银杏内酯A和B的浓缩物，采用制备液相色谱对含有银杏内酯A和B的浓缩物进行分离后处理，得到GA和GB，其特征在于在加入浸取剂的同时加入氯化物盐析剂；去杂质过程是向浸取液的有机层液加入钾盐或钠盐；制备型液相色谱的分离柱的流动相是采用乙酸乙酯和石油醚的混合液，固定相采用硅胶。该方法用制备型色谱分离GA和GB，生产成本高，产量小，不适合规模化大生产等缺点。(2)中国专利(申请号200710050245)“从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法”，该发明涉及从银杏叶中提取分离银杏内酯B的方法，其步骤如下1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯B的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯B。该方法用工艺路线醇提一萃取一树脂纯化一结晶一硅胶柱分离一结晶等步骤，工艺路线复杂，且只分离得到GB。(3)中国专利(申请号201010608847.X) “一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法”，该发明公开了一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯B的方法，该方法以离子液体或者由离子液体水组成的二元混合溶剂为萃取剂，采用分馏萃取法高效地从含有银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C等银杏内酯同系物的混合物中分离银杏内酯B。该方法是以银杏内酯混合物为原料，采用分馏萃取法分离银杏内酯B。(4)中国专利(申请号200410061284.1) “银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法”，该发明公开了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法。将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重结晶，获得较纯的银杏内酯B和白果内酯。(5)中国专利(申请号200610014207. X)“银杏内酯的制备方法”，该发明公开了一种银杏内酯的制备方法，按顺序包括如下步骤(1)取银杏叶粗提物，粉碎，加醋酸乙酯搅拌萃取，滤过，滤液回收醋酸乙酯至尽，干燥，得银杏内酯粗提物；(2)取银杏内酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化铝柱，收集流出液，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，合并流出液和洗脱液，减压浓缩，结晶得银杏内酯晶体混合物；(3)将银杏内酯晶体混合物用少量乙醇洗涤，滤过，再重结晶，即得银杏内酯混合晶体。本发明方法的工艺路线合理，成品获得率高，不会破坏有效成分，可获得高纯度的银杏内酯A和银杏内酯B混合晶体。(6)中国专利(申请号200710106040.4) “一种从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法”，该发明涉及从银杏叶或银杏叶提取物中提取银杏内酯B的制备方法，包括下列步骤一、原料的选择及处理(I)、银杏浸膏(总黄酮24%、总内酯6%，15-25婆美度)；(2)、银杏提取物(粉末总黄酮24%、总内酯6% )，用适量(1-2倍体积)纯净水溶解后，待用；(3)、新 鲜、干燥的银杏绿叶，烘干，温度控制在70°C，去杂、粉碎，过60目筛，用60%乙醇提取2次，每次60-90分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加2倍的水，沉淀24小时，离心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水冲洗，然后用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。二、高速逆流萃取1)将银杏浸膏或浓缩后的提取液导入萃取塔内，从塔底均匀加入乙酸乙酯进行对流溶剂萃取，乙酸乙酯用量一般为药液的1. 5 2. 5倍，循环次数为4 5次，不同塔体，分开收集；2)将萃取后的乙酸乙酯进行回收，得到稠膏，浓缩至20-25婆美度，65-70°C真空干燥、粉碎到90-100目，得到银杏内酯产品；三、柱层析、重结晶1)将得到的银杏内酯，用75-85%乙醇溶解后，通过80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)将流出液再通过型号为HP-20的大孔树脂柱，然后，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为75-85%的乙醇溶液洗脱，当流出液颜色接近无色时，停止洗脱，收集洗脱液，浓缩至20-25婆美度的浸膏；3)将浸膏置于4°C以下环境冷藏，静置后，逐渐有晶体析出，3小时后，收集结晶，抽滤，再用75-85 %乙醇溶解结晶，重结晶，重结晶两次后，将白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏内酯B产品，含量可达95 %以上。(7)中国专利(申请号200710050242.1) “从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法”，该发明将公开一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A、B、C、J及白果内酯单体的方法，其步骤为1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，用乙醇结晶得银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，分段收集洗脱液，依次分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J ;5)回收收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶分别得到白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J单体。(8)中国专利(申请号200810024206.2) “一种银杏内酯B原料及其制备方法”，该发明公开了一种银杏内酯B原料，其特征在于该银杏内酯B原料是通过以下方法制备得到的取银杏叶或银杏叶提取物，在盐酸溶液中浸煮，浸煮液过滤后采用有机溶剂萃取，得到的萃取液浓缩后添加100 200目硅胶混合干燥，采用硅胶柱层析法收集富含银杏内酯B的洗脱液，经结晶得到银杏内酯B原料；其中，银杏内酯B原料中银杏内酯B含量> 90%。(9)中国专利(申请号200910184916.6) “一种银杏内酯A、B单体的分离纯化方法”，该发明以纯度> 95%的银杏总内酯为起始原料，包括结晶分离、纯化和干燥。所述的纯化是用重结晶-超临界C02萃取组合工艺进行纯化，首先对结晶分离得到的单体GA和GB分别用无水乙醇按1: 5 80的料液比重结晶至少三次，得到纯度彡95%单体的GA和GB ;然后用超临界C02萃取方法对纯度> 95%的单体GA和GB分别萃取，萃取压力10 lOOMpa，萃取温度32 150°C。重复萃取一次，可制备纯度彡99. 5%的单体GA和GB。以起始原料中单体量计，收率> 90%。
发明内容
本发明目的是针对现有技术存在的缺陷提供一种银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法。本发明为实现上述目的，采用如下技术方案本发明从一种银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，包括以下步骤I)乙酸乙酯萃取称取银杏叶提取物，加入银杏叶提取物5 - 10倍量的水2(T50°C搅拌，然后加入银杏叶提取物5 — 10倍量的乙酸乙酯萃取3 — 5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，所得乙酸乙酯萃取物进行步骤2)，其中倍量指重量/体积比，下同；2)低碳醇一水混合溶剂浸提称取乙酸乙酯萃取物，加入乙酸乙酯萃取物10 - 20倍量的低碳醇一水混合溶剂2(T50°C进行浸提，过滤，所得不溶物(II)进行步骤3)，所得醇浸提取液(I)进行步骤4);3)硅胶柱层析分离纯 化将不溶物(II)上硅胶柱，用石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB ；4)白果内酯结晶纯化将醇浸提取液(I )浓缩至无醇、冷却、过滤后得到母液，将母液浓缩至干后用3(Γ50%甲醇进行结晶3飞次得白果内酯。还包括步骤5):使用低碳醇一水混合溶剂对银杏内酯A和银杏内酯B分别进行重结晶纯化处理。
步骤2)低碳醇选自甲醇或乙醇。步骤2)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为3(Γ70%。步骤3)石油醚的沸程为6(T90°C。步骤3)石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂中，石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的体积比为2 : 8 —4 : 6。步骤5)低碳醇选自甲醇或乙醇。步骤5)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为3(Γ70%。本发明具有如下有益效果1.本发明所分离纯化银杏内酯Α、银杏内酯B和白果内酯的工艺路线简单，适合工业化生产。2.本发明分离纯化所得银杏内酯Α、银杏内酯B和白果内酯的的纯度大于98%。3.银杏内酯Α、银杏内酯B和白果内酯的转移率大于80%，产品收率高，生产成本低。
具体实施例方式本发明为从银 杏叶提取物(黄酮含量> 24% ;内酯含量> 6%)中分离纯化银杏内酯Α、银杏内酯B和白果内酯，所得银杏内酯Α、银杏内酯B和白果内酯的纯度> 98%。银杏内酯单体分离纯化方法主要有乙酸乙酯萃取、大孔树脂分离法、氧化铝柱色谱柱、聚酰胺柱色谱法、硅胶柱色谱分离法、反相色谱分离法、重结晶法、超临界液体萃取法等方法。本发明人多年对银杏内酯分离纯化的研究积累，发现通过乙酸乙酯萃取、醇浸提、硅胶柱色谱法即可获得高纯度银杏内酯A和银杏内酯B，醇浸提液经结晶和重结晶法可获得白果内酯。本发明的具体的技术方案为以银杏叶提取物为原料通过以下工艺步骤分离纯化GA、GB和白果内酯1)乙酸乙酯萃取；2)低碳醇一水混合溶剂浸提，得醇浸提液(I )和不溶物(11);3)不溶物(II)硅胶柱层析分离得GA和GB ；4)醇浸提液(I )浓缩至无醇、冷却，过滤，母液浓缩至干后用3(Γ50%甲醇进行结晶3飞次可得白果内酯，其具体工艺步骤如下I)乙酸乙酯萃取称取银杏叶提取物，加入5 — 10倍量(重量/体积比)水2(T50°C搅拌，然后加入5 - 10倍量(重量/体积比)乙酸乙酯萃取，萃取3 - 5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，所得乙酸乙酯萃取物进行步骤2)；2)低碳醇一水混合溶剂浸提称取乙酸乙酯萃取物，加入10 - 20倍量低碳醇一水混合溶剂2(T50°C进行浸提，过滤，所得不溶物进行步骤3)，所得醇浸提取液进行步骤4)；3)硅胶柱层析分离纯化将不溶物(II)上硅胶柱，用石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB。4)白果内酯结晶纯化将醇浸提液(I )浓缩至无醇、冷却，过滤，母液浓缩至干后用3(Γ50%甲醇进行结晶3飞次得白果内酯，其中步骤2)低碳醇选自甲醇或乙醇。其中步骤2)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为3(Γ70%。其中步骤3)石油醚的沸程为6(T90°C。其中步骤3)石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂中，石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的体积比为2 : 8 — 4 : 6。在一个实施方案中，还包括步骤5):使用低碳醇一水混合溶剂对银杏内酯A和银杏内酯B分别进行重结晶纯化处理。其中步骤5)低碳醇选自甲醇或乙醇。其中步骤5)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为3(Γ70%。实施例1 :取银杏叶提取物IOOg (GA含量2. 1%，GB含量1. 2%, ΒΒ2. 5%)，加入500mL水50°C搅拌30min，然后加入500mL乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物15. 5g ;加入155mL70%乙醇50°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 4g和醇浸提液150mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用石油醚一乙酸乙酯的混合溶剂8 2进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 8g (纯度98. 2%)，GBl. Og(纯度98. 5%)。醇浸提液150mL6(TC减压浓缩至40mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用30%甲醇反复结晶5次，得白果内酯2. 3g (纯度98. 2%)。实施例2 取银杏叶提取物IOOg (GA含量2. 1%，GB含量1. 2%, BB2. 5%)，加入700mL水30°C搅拌30min，然后加入IOOOmL乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物16. 5g ;加入330mL70%乙醇20°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 6g和醇浸提液310mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用石油醚一乙酸乙酯的混合溶剂3 7进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 7g (纯度98. 1%)，GB0. 98g(纯度98. 3%)。醇浸提液31 0mL60°C减压浓缩至IOOmL,冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用40%甲醇反复结晶4次，得白果内酯2. 2g (纯度98. 4%)。实施例3:取银杏叶提取物IOOg (GA 含量 2. 1%, GB 含量1. 2%, BB2. 5%)，加入 IOOOmL 水 20°C搅拌30min，然后加入IOOOmL乙酸乙酯萃取，萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物16. Og ;加入320mL30%乙醇50°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 8g和醇浸提液300mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用石油醚一乙酸乙酯的混合溶剂4 6进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 75g(纯度98. 0%)，GB1. 05g(纯度98. 1%)。醇浸提液300mL60°C减压浓缩至70mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用40%甲醇反复结晶5次，得白果内酯2. 2g (纯度98. 1%)。实施例4 取银杏叶提取物IOOg (GA含量2. 1%，GB含量1. 2%, BB2. 5%)，加入500mL水50°C搅拌30min，然后加入500mL乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物15. 5g ;加入155mL70%甲醇50°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 4g和醇浸提液150mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用正己烷一乙酸乙酯的混合溶剂8 2进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 83g(纯度98. 4%), GBl. 02g(纯度98. 1%)。醇浸提液150mL60°C减压浓缩至45mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用40%甲醇反复结晶4次，得白果内酯2. 3g (纯度98. 0%)。实施例5 取银杏叶提取物IOOg (GA含量2. 1%，GB含量1. 2%, BB2. 5%)，加入700mL水30°C搅拌30min，然后加入IOOOmL乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物16. 5g ;加入330mL70%甲醇20°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 6g和醇浸提液320mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用环己烷一乙酸乙酯的混合溶剂4 6进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 78g(纯度98. 6%), GBO. 95g(纯度98. 6%)。醇浸提液320mL60°C减压浓缩至85mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用30%甲醇反复结晶4次，得白果内酯2. 2g (纯度98. 4%)。实施例6 取银杏叶提取物IOOg (GA 含量 2. 1%, GB 含量1. 2%, BB2. 5%)，加入 IOOOmL 水 30°C搅拌30min，然后加入IOOOmL乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物16. Og ;加入320mL30%甲醇50°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物4. 8g和醇浸提液300mL ;将不溶物用20mL乙酸乙酯溶解后用5gl00 — 200目硅胶拌样，然后用200g200-300目的硅胶柱色谱分离，用正己烷一乙酸乙酯的混合溶剂4 6进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GAl. 82g(纯度98. 3%), GBO. 95g(纯度98. 4%)。醇浸提液300mL60°C减压浓缩至80mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用50%甲醇反复结晶3次，得白果内酯2.1g (纯度98. 4%)。实施例7
取银杏叶提取物1000g(GA含量 2. 1%，GB 含量1. 2%, BB2. 5%)，加入 60000mL水 30°C搅拌30min，然后加入60000mL乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物156. Og ;加入3000mL50%甲醇30°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物51. 3g和醇浸提液2850mL ;将不溶物用200mL乙酸乙酯溶解后用60gl00 —200目硅胶拌样，然后用3000g200-300目的硅胶柱色谱分离，用正己烷一乙酸乙酯的混合溶剂2 8进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB。GA用50%甲醇进一步结晶得晶体18. 5g (纯度99. 2%), GB用30%乙醇进一步结晶得晶体9. 5g (纯度99. 3%)。醇浸提液2850mL60°C减压浓缩至IOOOmL,冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用50%甲醇反复结晶3次，得白果内酯22. 3g (纯度98. 5%)。实施例8:取银杏叶提取物IOOOg (GA含量2. 1%，GB含量1. 2%, BB2. 5%),加入60000mL水30°C搅拌30min，然后加入60000mL乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，得乙酸乙酯萃取物146. Og ;加入2500mL50%乙醇30°C浸提I小时，过滤，滤饼干燥得不溶物48. 5g和醇浸提液2400mL ;将不溶物用200mL乙酸乙酯溶解后用60gl00 - 200目硅胶拌样，然后用3000g200-300目的硅胶柱色谱分离，用石油醚一乙酸乙酯的混合溶剂2 8进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB。GA用50%乙醇进一步结晶得晶体18. Og (纯度99. 5%)，GB用50%甲醇进一步结晶得晶体9. 8g(纯度99. 4%)。醇浸提液2400mL60°C减压浓缩至800mL，冷却至25°C，过滤，母液70°C减压浓缩至干后，用30%甲醇反复结晶3次，得白果内酯23. 3g (纯度98. 1%)。 如前所述，根据前面所公开的内容，本领域的专业人员可最大限度地应用本发明。应当指出，本发明旨 在提供一种从银杏叶提取物中分离纯化银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的方法。下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
权利要求
1.一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，其特征在于包括以下步骤1)乙酸乙酯萃取称取银杏叶提取物，加入银杏叶提取物5- 10倍量的水2(T50°C搅拌，然后加入银杏叶提取物5 - 10倍量的乙酸乙酯萃取3 - 5次，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩、干燥，所得乙酸乙酯萃取物进行步骤2)，其中倍量指重量/体积比，下同；2)低碳醇一水混合溶剂浸提称取乙酸乙酯萃取物，加入乙酸乙酯萃取物10- 20倍量的低碳醇一水混合溶剂2(T50°C进行浸提，过滤，所得不溶物(II)进行步骤3)，所得醇浸提取液(I)进行步骤4);3)硅胶柱层析分离纯化将不溶物(II)上硅胶柱，用石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂进行洗脱，分段收集洗脱液，回收洗脱液中的溶剂，分别得到GA和GB ；4)白果内酯结晶纯化将醇浸提取液(I)浓缩至无醇、冷却、过滤后得到母液，将母液浓缩至干后用3(Γ50%甲醇进行结晶3飞次得白果内酯。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括步骤5):使用低碳醇一水混合溶剂对银杏内酯 A和银杏内酯B分别进行重结晶纯化处理。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤2)低碳醇选自甲醇或乙醇。
4.根据权利要求f3任一项所述的方法，其中步骤2)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为30 70%。
5.根据权利要求Γ4任一项所述的方法，其中步骤3)石油醚的沸程为6(T90°C。
6.根据权利要求1飞任一项所述的方法，其中步骤3)石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的混合溶剂中，石油醚或正己烷或环己烷与乙酸乙酯的体积比为2 : 8 — 4 : 6。
7.根据权利要求2飞任一项所述的方法，其中步骤5)低碳醇选自甲醇或乙醇。
8.根据权利要求2 7任一项所述的方法，其中步骤5)低碳醇一水混合溶剂中，低碳醇含量为30 70%。
全文摘要
本发明公布了一种从银杏叶提取物中分离纯化GA、GB和白果内酯的方法，包括以下步骤1)乙酸乙酯萃取；2)低碳醇－水混合溶剂浸提，得醇浸提取液和不溶物；3)不溶物硅胶柱层析分离得GA和GB；4)醇浸提取液浓缩至无醇、冷却，过滤，母液浓缩至干后用30~50%甲醇进行结晶3~5次可得白果内酯。本发明所分离纯化银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的工艺路线简单，适合工业化生产。分离纯化所得银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的纯度大于98%。银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的转移率大于80%，产品收率高，生产成本低。
文档编号C07D493/20GK103044442SQ20131000051
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月3日 优先权日2013年1月3日
发明者栾连军, 刘雪松, 谈满良, 荆海英, 吴永江, 陈勇, 王龙虎 申请人:苏州泽达兴邦医药科技有限公司