专利名称：一种从银杏叶中提取银杏内酯的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种银杏内酯的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法。
背景技术：
银杏叶长3 12cm，宽5 15cm，叶基楔形叶柄长2 8cm。该品多皱折，完整呈扇形，上缘呈现不规则的波状弯曲，有的中间凹入，深者叶长达4/5厘米。具有二叉状平行叶脉，细而密，光滑无毛，极其易从纵向撕裂。银杏叶是一种具有很高药用价值的植物，银杏树是中国古老的树种之一，它是神奇的医疗之树，2亿5千多年前侏罗纪恐龙掌控地球时，银杏是最繁盛的植物之一。地球生命历经千亿年的变动，尤其是第四世纪冰川覆盖之后，只有银杏仍保持它最原始的面貌，在生物演化学史上被称为“活化石”。其叶、果实、种子都有比较高的药用价值，其药理作用不断被认识，临床应用范围逐步扩大。银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，其拮抗作用活性与化学结构密切相关。当内酯结构中R3为羟基或羟基数目增多时，对PAF的拮抗活性减弱，而当R2为羟基且R3为H时，则活性显著增强，其中以银杏内酯B对PAF产生的操拮抗作用最强，迄今对银杏内酯B的药理作用研究也最为集中。目前国内提取银杏内酯大多是运用溶剂萃取，其萃取时间长，提取率相对低，而运用微波逆流提取可以大大缩短提取时间，提高提取率，在运用大孔树脂吸附技术可以有效的分离银杏叶中银杏内酯，使其含量达到50%以上。
发明内容
本发明的目的在 于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用微波逆流提取大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其步骤如下(I)将干银杏叶粉碎后，加入乙醇混合，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。微波功率在600 800W，萃取时间为80min IOOmin ;萃取温度为60 80°C，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液；(2)将经步骤(I)处理的银杏叶提取液过滤，得银杏过滤液并减压浓缩得银杏内酷初提物；(3)将所获初提物用纯水搅拌均匀，离心分离，静置，抽滤，得银杏内酯粗提物；(4)将所得银杏内酯粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(6)将银杏内酯各阶段洗脱液上200 300目聚酰胺柱层析，并以乙醇、乙醚以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(7)将所收集的银杏内酯洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，得粉状固体，并粉碎过筛，得银杏内酯，其含量在50%以上。所述的步骤(I)中，干银杏叶粉碎后过60 80目筛在进行微波逆流提取。所述的步骤(I)中，加入乙醇的体积为银杏叶粉碎体积的10 12倍。所述的步骤(I)中，加入乙醇的浓度为70% 90%。在所述的步骤(3)中，加入纯水的量按体积计算为初取物的8 10倍。所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的D101、DA201、724、HP-20型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。所述的步骤(5)中所述的洗脱液为10 90%的乙醇进行洗脱。所述的步骤(6)中所 采取的乙醇与乙醚的体积为I 5 I。所述的步骤(7)中粉碎过筛的目数为80目。本发明采用微波逆流提取，具有加热均匀、过程易于控制，无需干燥等预处理，简化了工艺，减少了投资，大大提高了萃取效率；选用大孔树脂吸附技术和柱层析分离纯化银杏内酯，对银杏内酯的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大，提取方便快捷，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量50%以上的银杏内酯终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
具体实施例方式实施案例1:一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其步骤如下(I)将200g干银杏叶粉碎后，加入浓度为70%的乙醇溶液混合，料液比为1: 10，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。微波功率在600W，萃取时间为80min ;萃取温度为60°C，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液；(2)将经步骤(I)处理的银杏叶提取液过滤，得银杏过滤液并减压浓缩，回收乙醇，得银杏内酯初提物；(3)将所获初提物加入8倍的纯水搅拌均匀，离心分离，静置，抽滤，得银杏内酯粗提物；(4)将所得银杏内酯粗提物用DlOl型大孔吸附树脂进行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(6)将银杏内酯各阶段洗脱液上200 300目聚酰胺柱层析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(7)将所收集的银杏内酯洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，得粉状固体，并粉碎过80目筛，得银杏内酯，其含量在51.3%。实施案例2 :—种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化跟杏叶中银杏内酯的方法，其步骤如下(I)将200g干银杏叶粉碎后，加入浓度为80%的乙醇溶液混合，料液比为1: 11，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。微波功率在700W，萃取时间为90min ;萃取温度为70°C，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液；(2)将经步骤(I)处理的银杏叶提取液过滤，得银杏过滤液并减压浓缩，回收乙醇，得银杏内酯初提物；(3)将所获初提物加入9倍的纯水搅拌均匀，离心分离，静置，抽滤，得银杏内酯粗提物；(4)将所得银杏内酯粗提物用DA201型大孔吸附树脂进行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(6)将银杏内酯各阶段洗脱液上200 300目聚酰胺柱层析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液； (7)将所收集的银杏内酯洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，得粉状固体，并粉碎过80目筛，得银杏内酯，其含量在52.2%。实施案例3 :—种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其步骤如下(I)将200g干银杏叶粉碎后，加入浓度为90%的乙醇溶液混合，料液比为1: 12，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。微波功率在800W，萃取时间为IOOmin ;萃取温度为80°C，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液；(2)将经步骤(I)处理的银杏叶提取液过滤，得银杏过滤液并减压浓缩，回收乙醇，得银杏内酯初提物；(3)将所获初提物加入10倍的纯水搅拌均匀，离心分离，静置，抽滤，得银杏内酯粗提物；(4)将所得银杏内酯粗提物用724型大孔吸附树脂进行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树酯进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(6)将银杏内酯各阶段洗脱液上200 300目聚酰胺柱层析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液；(7)将所收集的银杏内酯洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，得粉状固体，并粉碎过80目筛，得银杏内酯，其含量在53.5%。
权利要求
1.一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其步骤如下 (1)将干银杏叶粉碎后，加入乙醇混合，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。微波功率在600 800W，萃取时间为80min IOOmin ；萃取温度为60 80°C，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液； (2)将经步骤(I)处理的银杏叶提取液过滤，得银杏过滤液并减压浓缩得银杏内酯初提物； (3)将所获初提物用纯水搅拌均匀，离心分离，静置，抽滤，得银杏内酯粗提物； (4)将所得银杏内酯粗提物用大孔吸附树脂进行吸附； (5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液； (6)将银杏内酯各阶段洗脱液上200 300目聚酰胺柱层析，并以乙醇、乙醚以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集银杏内酯各阶段洗脱液； (7)将所收集的银杏内酯洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，得粉状固体，并粉碎过筛，得银杏内酯，其含量在50 %以上。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的D101、DA201、724、HP-20型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱液为10 90%的乙醇进行洗脱。
所述的步骤(7)中粉碎过筛的目数为80目。
2.根据权利要求1所述的利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其特质是所述的步骤(I)中，银杏叶粉碎后过60 80目筛。
3.根据权利要求2所述的利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其特征是所述的步骤(I)中，加入乙醇的体积为银杏叶粉碎体积的10 12倍。
4.根据权利要求3所述的利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其特征是；所述的步骤(I)中，加入乙醇的浓度为70% 90%。
5.根据权利要求4所述的利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其特征是在所述的步骤(3)中，加入纯水的量按体积计算为初取物的8 10倍。
6.根据权利要求5所述的利用微波逆流提取-大孔树脂吸附技术富集纯化银杏叶中银杏内酯的方法，其特征是所述的步骤(6)中，所采用乙醇、乙醚的体积比为I 5 I。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，采用微波逆流提取技术，无需干燥等预处理，具有加热均匀、过程易于控制，简化了工艺，减少了投资，大大提高了萃取效率；利用大孔树脂吸附技术分离纯化银杏内酯，对银杏内酯的吸附选择性良好，吸附快、解析也快，吸附容量较大，提取方便快捷，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，得到含量50％以上的银杏内酯终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
文档编号C07D493/22GK103044441SQ20121059560
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者祁佩时, 焦龙, 姚德坤, 万莉, 张亚红, 姚德利 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司