专利名称：一种罗丹明b衍生物的合成方法
—种罗丹明B衍生物的合成方法
技术领域：
本发明涉及有机合成领域，具体涉及一种罗丹明B衍生物的合成方法。
背景技术：
罗丹明B是一种人工合成的荧光染料，在细胞染色、荧光探针等领域都有着广泛的应用价值。因此，对罗丹明B进行化学改性，以合成具有各种活性基团的罗丹明B衍生物
具有重要意义。胱氨是带有二硫键和两个氨基的较长链的链状化合物。将胱氨与罗丹明B进行缩合，以合成带有二硫键和一个活泼氨基的罗丹明B衍生物具有重要的意义。因为氨基与二 硫键均为反应活性基团，这为罗丹明B的进一步应用提供了平台。罗丹明B和一些短链类氨基化合物，如乙二胺、水合肼等反应时，较容易得到存在独立氨基的罗丹明B衍生物。但对于胱氨这种含有多个反应活性基团的物质，在剧烈的反应条件下，这些活性基团很难被保留，不易得到目标产物。目前常用的制备酰胺化合物的方法包括直接用DCC/DMAP催化缩合，或者用EDC/NHS活化羧基后再进行酰氨化等。但对于胱氨而言，这些反应条件常会使另外一个氨基由于位阻较小，而和另一分子的罗丹明B的羧基或者酰胺键发生一些副反应，造成胱氨的两个氨基都参与反应或者是二硫键断裂。这使得罗丹明B的进一步应用成为泡影。目前，已有人将7-二乙氨基-3-香豆素酸和胱氨的一个氨基成功地连接起来，并利用另外一个独立的氨基和卟啉进行反应，得到了一个利用荧光共振能量转移原理来检测体内巯基化合物的荧光探针。但将胱氨与罗丹明B缩合，以合成具有一个独立活泼氨基的罗丹明B衍生物，目前还没有报道。
发明内容本发明旨在提供一种将胱氨与罗丹明B缩合，以合成存在独立的活泼氨基的罗丹明类酰氨化合物的方法，从而为罗丹明B的进一步应用提供平台。根据本发明，罗丹明B衍生物的合成方法包括以下步骤氨基保护在胱氨二盐酸盐的甲醇溶液中，加入摩尔过量的三乙胺，冰浴下，缓慢滴加与胱氨二盐酸盐等摩尔量的二碳酸二叔丁酯的甲醇溶液，滴加完毕后，使反应液在室温下反应3-5小时，分离纯化后，得到单边保护的胱氨；缩合将罗丹明B、N，N-二环己基碳二亚胺、催化量的二甲氨基吡啶溶于二氯甲烷，先室温下反应O. 5-1小时，再加入摩尔过量的单边保护的胱氨，回流反应6-14小时，分离纯化，得到缩合产物；脱保护冰浴温度至室温条件下，将缩合产物溶于二氯甲烷，添加三氟乙酸，反应1-2. 5小时，分离纯化，得到下式的罗丹明B衍生物。
权利要求
1.一种罗丹明B衍生物的合成方法，包括以下步骤 氨基保护在胱氨二盐酸盐的甲醇溶液中，加入摩尔过量的三乙胺，冰浴下，缓慢滴加与胱氨二盐酸盐等摩尔量的二碳酸二叔丁酯的甲醇溶液，滴加完毕后，使反应液在室温下反应3-5小时，分离纯化后，得到单边保护的胱氨； 缩合将罗丹明B、N，N-二环己基碳二亚胺、催化量的二甲氨基吡啶溶于二氯甲烷，先室温下反应O. 5-1小时，再加入摩尔过量的单边保护的胱氨，回流反应6-14小时，分离纯化，得到缩合产物； 脱保护冰浴温度至室温条件下，将缩合产物溶于二氯甲烷，添加三氟乙酸，反应1-2. 5小时，分离纯化，得到下式的罗丹明B衍生物
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，氨基保护步骤中，三乙胺的量为胱氨二盐酸盐摩尔量的3倍。
3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，缩合步骤中，单边保护的胱氨的量为罗丹明B摩尔量的1-1. 3倍，N, N- 二环己基碳二亚胺的量为罗丹明B摩尔量的1.1倍，并且二甲氨基吡啶的量为罗丹明B摩尔量的O. 1-0. 2倍。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，分离纯化的操作包括萃取、洗涤、柱层析，以及它们的组合。
5.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，氨基保护步骤中的分离纯化操作为去除溶剂，以PH为4. 2的KH2PO4溶液溶解，然后用乙醚萃取以除去一些副产物，再以IM的NaOH溶液调节pH至不再出现沉淀，之后用乙酸乙酯萃取并收集有机层，去除溶剂，得到呈淡黄色油状的单边保护的胱氨。
6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，缩合步骤中的分离纯化操作为去除溶剂，用硅胶柱层析纯化，得到呈白色至浅红色粉末状的缩合产物。
7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，脱保护步骤中的分离纯化操作为去除溶剂后，用二氯甲烷溶解固体物质，然后用O. 2M的NaOH溶液萃取以除去残留的三氟乙酸，再用水洗涤，收集有机相，除去溶剂后得到粗产品，之后进一步用硅胶柱层析纯化，得到呈白色粉末状的产品。
全文摘要
本发明公开一种罗丹明B衍生物的合成方法。通过对胱氨一端的氨基进行Boc保护，进而使用DCC/DMAP使单边保护的胱氨与罗丹明B的羧基酰胺化缩合，最后脱去Boc保护，得到存在独立活泼氨基的罗丹明B衍生物，为罗丹明B的进一步应用奠定了基础。本发明的合成方法产率较高，操作方便，纯化过程简单，易于实现大量生产。
文档编号C07D491/107GK103012419SQ20121055846
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月20日 优先权日2012年12月20日
发明者蔡林涛, 杨月婷, 龚萍 申请人:中国科学院深圳先进技术研究院