三苄糖苷的模拟移动床拆分方法
【专利摘要】本发明公开了一种四区模拟移动床拆分光学异构体三苄糖苷的方法。本发明的特征是：采用模拟移动床色谱系统，填料为纤维素-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)，以甲醇为流动相。从三苄糖苷的粗品中拆分出高纯度的α体(α-乙基-3,5,6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷）和β体(β-乙基-3,5,6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)。模拟移动床色谱系统是连续化生产，自动化程度高，生产效率高。
【专利说明】三苄糖苷的模拟移动床拆分方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种光学异构体的拆分技术，特别是三苄糖苷的模拟移动床色谱分离方法。
【背景技术】
[0002]三苄糖苷(Tribenoside，TBS)，即乙基_3，5，6_三苄氧基_D_呋喃葡萄糖苷，由两种光学异构体α体(α-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)和β体(β-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)组成的混合物。它具有抗炎、抗毒素、增强毛细血管韧力、保护创伤组织并促使其愈合的作用及较弱的镇痛作用，与神经鞘氨醇合用可预防性地对抗革兰氏阴性及阳性菌。该药于上世纪50年代发现并合成，于1999年由日本首先开发为治疗痔疮的口服药物，由于其具有极强的脂溶性，易于被小肠吸收，药物利用率较高，故其临床疗效较其它同类药物有很大提高。国内迄今尚未见到对TBS分离纯化的研究报道。通常可以采用传统低压层析的方法制备得到TBS产品，但是工艺技术耗时长，生产量也受到限制，同时纯度不高。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对目前在制备三苄糖苷异构单体的过程中所存在的时间长以及纯度不高的问题，提供一种采用模拟移动床制备高纯度三苄糖苷异构单体的新方法，该方法包括以下步骤:
a.三卞糖苷用甲醇溶解，浓度为O~100g/ml，一般将三苄糖苷配置成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.用模拟移动床拆分三苄糖苷粗品；
c.浓缩、重结晶得到高纯度的两种三苄糖苷异构单体。
[0004]本发明的有益效果是可直接采用合成后的三苄糖苷粗品来制备三苄糖苷异构单体，不需要大量的前处理过程，简单、易控制，工艺技术简化，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，总杂质峰小于0.5%，单一杂质峰不超过0.2%，完全可用于药物的开发。
【具体实施方式】
[0005]1、设备及条件选择
采用模拟移动床色谱系统，该系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、单向阀、控温器和PLC系统控制器及计算机组成。样品溶液和洗脱液分别从样品液入口和洗脱液入口注入系统，三卞糖苷的两个异构体分别从提余液和提取液两个出口中流出，每隔一定的时间样品液和洗脱液入口，提取液和提余液出口沿流动相流动的方向切换至下一支色谱柱。
[0006]2、色谱柱填料及流动相(溶剂)选择
填料纤维素-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆型手性固定相，采用公知的方法(Okamoto Y , Kawashima M , Hatada K J.Chromatogr.1986，363:173~186)制备，填料粒度为f 150um，微粒越小，粒径分布越窄，越有利于分离；但粒径越小系统压力越大，最适宜的粒径范围是2(T40um。流动相(溶剂)为甲醇。
[0007]3、分离步骤
A、样品由进样泵注入色谱系统，进样浓度的增加有利于提高产量，但其浓度受三卞糖苷溶解度的限制，色谱系统由4~24根制备柱组成，分为4个区，色谱柱数目越多分离越好，但系统的复杂度及系统压力越高，最适合的是8~12根，通过模拟移动床色谱系统的控制器，定期控制电磁阀的开闭，使进样口、萃取液出口及残余液出口沿流动相的方向定期变换，使三卞糖苷的两个异构体从提取液和提余液两个出口流出系统；
B、得到的产品溶液，经过浓缩、重结晶，得到纯度在98%以上的合格产品；
C、成品检验 流动相:甲醇 流速:0.8ml/min
泵:江苏汉邦科技分析泵
色谱柱:4.6*250mm填料为自制涂敷型纤维素-三(3,5- 二甲基苯基氨基甲酸酯) 检测器:江苏汉邦科技紫外检测器 检测波长:254nm
下面结合实例进一步说明本发明:
实施方式:
1、纤维素-三(3，5_二甲基苯基氨基甲酸酯)填料的制备
按照文献(Okamoto Y , Kawashima M , Hatada K J.Chromatogr.1986，363:173~186)的方法制备。纤维素与异氢酸苯酯在吡咯溶液中在100°C下反应24小时，反应得到的甲醇不容物即为纤维素-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)。纤维素-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)溶于四氢呋喃，并将氨丙基硅胶加入到溶液中，电磁搅拌，至四氢呋喃挥发完，重复3次，得到纤维素-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷型手性固定相。其中纤维素-三(3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯)与氨丙基硅胶的重量比为1:5;
2、流动相流速的选择
流动相的流速影响了三卞糖苷的分离，同时也影响模拟移动床色谱的生产效率。首先用模拟移动床色谱系统的一支柱子(10*250mm)进行流速选择分析，
模拟移动床的分离 流动相:甲醇 进样浓度:(Tl00g/ml 进样液流速:(T50ml/min 洗脱液流速:(Tl000ml/min 萃取液流速:CTl00ml/min 参与液流速:0~100ml/min 切换时间:3~20min 色谱柱温度:(T50°C
3、成品检验泵:江苏汉邦科技分析泵 检测器:江苏汉邦科技紫外检测器 检测波长:254nm 流动相:甲醇 流速:0.8ml/min
色谱柱:4.6*250mm填料为自制涂敷型纤维素-三(3,5- 二甲基苯基氨基甲酸酯)
以下列出两个分离实例:
分离实例1:
A操作条件 流动相:甲醇 进样浓度:5g/ml 进样液流速:1.5 ml/min 洗脱液流速:3.0 ml/min 萃取液流速:2.5 ml/min 提余液流速:2.0 ml/min 切换时间:6.8min 系统温度:30°C B成品分析
用分析柱分析提取液和提余液组成，提取液的纯度为99.5%，提余液的纯度为99.3%，每公斤固定相每天可生产α体(α-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)和β体(β-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)各22.5kg，流动相消耗为0.112L/kg。回收率为99.5%。·
[0008]分离实例2:
A操作条件 流动相:甲醇
进样浓度:5g/ml 进样液流速:1.0 ml/min 洗脱液流速:2.5 ml/min 萃取液流速:1.7 ml/min 提余液流速:1.8 ml/min 切换时间:7.5min 系统温度:30°C B成品分析
用分析柱分析提取液和提余液组成，提取液的纯度为99.5%，提余液的纯度为99.6%，每公斤固定相每天可生产α体(α-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)和β体(β -乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)各17kg，流动相消耗为0.145L/kg，回收率为 98.1%。
[0009]上述实施实例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权力要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种雷诺嗪对映体的模拟移动床色谱拆分方法，其特征在于:采用模拟移动床色谱(简称SMBC)分离系统，系统中的洗脱泵流量O~1000ml/min，压力O~lOMpa，进样泵流量O~50ml/min,压力O~IOMpa,萃取泵流量O~100ml/min,压力O~IOMpa,工作温度O~50°C，色谱柱填料为纤维素-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)，填料粒度10~30um，流动相为甲醇，该方法的分离步骤如下: A、雷诺嗪外消旋体用甲醇溶解，浓度为O~100g/ml，由进样泵进入色谱系统，色谱系统由4~24根制备柱组成，分成四个区，每区有I~6支柱子，其中一区位于洗脱液入口与提取液出口之间，在此区实现R-雷诺嗪的解吸；二区位于提取液出口与进样口之间，在此区使R-雷诺嗪反复吸附、解吸、浓缩；三区位于进样口与提余液出口之间在此区得到S-雷诺嗪；四区位于提余液出口与洗脱液入口之间，一方面三区的洗脱液进入到该区可循环利用，另一方面将三区与一区隔开防止提余液中的S-雷诺嗪进入到一区； B、得到两个对映体产品，经过浓缩重结晶，得到纯度为98%以上的合格产品。
2.根据权利要求1所述的雷诺嗪的模拟移动床色谱分离方法，其特征在于所说的流动相为甲醇。
3.根据权利要求1所述的雷诺嗪的模拟移动床色谱分离方法，其特征在于进入模拟移动床系统的浓度为O~100g/ml,进样流速为O~50ml/min,洗脱液流速为O~1000ml/min,萃取液流速为O~100ml/min,残留液流速为O~100ml/min。
4.根据权利要求1所述的雷诺嗪的模拟移动床色谱分离方法，其特征在于所述的定期切换电磁阀的时间为:3~20min。
5.根据权利要求1所 述的雷诺嗪的模拟移动床色谱分离方法，其特征在于所述的模拟移动床色谱系统的操作温度为O~50°C。
6.根据权利要求1所述的雷诺嗪的模拟移动床色谱分离方法，其特征在于所述的模拟移动床色谱系统的最适宜的操作温度为25~30°C。
【文档编号】C07H15/18GK103788145SQ201210425229
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年10月31日 优先权日:2012年10月31日
【发明者】张宇, 王亚辉, 居延娟 申请人:江苏汉邦科技有限公司