专利名称：一种提取分离玄参波利苷a的方法
技术领域：
本发明属于天然植物有效成分提取分离领域，涉及一种玄参波利苷A的方法，特别涉及一种利用动态逆流提取、大孔树脂吸附和高速逆流色谱纯化技术相结合的方法提取分离玄参波利苷A的方法。
背景技术：
玄参波利苷A (Scropolioside A)是一种环烯醚職苷类化合物,主要从玄参科植物凯氏玄参或斯科波利玄参中分离得到。药理研究表明，玄参波利苷A具有抗肝毒活性，在口服6mg/kg时，对大鼠硫乙酰胺肝中毒的生化指标保护率分别为G0T25. 74%、GPT45. 29%、ACP44. 32%、ALP79. 82% 和 GIDH73. 63%。玄参波利苷 A 分子式为 C35H44O28,分子量为 752. 72，结构式为
II I NOCHt H I
C=C-COO OAc HOCHi 0
.,夕HO4-T
OCH5李宗友报道了凯氏玄参中环烯醚萜苷类成分的分离方法，采用90%乙醇室温渗滤提取，提取液水浴上减压浓缩，粗提取物经液液分配柱层析等方法得到环烯醚萜苷单体成分。该方法操作繁琐、所得产品含量较低、提率低。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中存在的问题，提供一种玄参波利苷A的制备方法，应用高速逆流色谱分离纯化玄参波利苷Α，操作简单、样品损失少、产品纯度高。为达到上述目的，本发明采用下列技术方案
(1)提取以凯氏玄参为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中，以65-80%的食用乙醇溶液为提取溶剂，提取2-3次，合并提取液；
(2)柱层析将上述提取液旋转浓缩，浓缩液加水分散，过滤，滤液上大孔树脂，先用水洗脱，再用4-6BV55%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；
(3)高速逆流色谱分离将步骤(2)所得乙醇洗脱液浓缩、干燥，干燥物采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到玄参波利苷A。所述步骤(I)中液体动态连续逆流装置为多个提取装置串联或并联或串并联合用，每次提取乙醇溶液用量为原料质量的3-5倍(v/w)。
所述步骤(3 )中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(15-17) (12-14) :(20-25) : (3_7)，溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在I. 5-4. Oml/min,主机转速控制在800-950r/min。本发明的有益效果是
1、采用液体动态连续逆流提取技术，通过循环的提取液不断地将有效成分提取出来，缩短了提取周期和溶剂的用量；
2、将大孔树脂和高速逆流色谱技术结合，分离制备玄参波利苷A，工艺简单、质量稳定、产品纯度高。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :
将凯氏玄参地上部分低温干燥、粉碎，取5kg，平均置于3个串联的提取装置中，加入20L70%的乙醇溶液，在50°C的提取温度下，提取2次，每次2. 5h，合并提取液，过滤后得到提 取液，旋转浓缩，加水分散，过滤，滤液通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用5BV的55%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到玄参波利苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为16:13:25:7配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至820r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2. 5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到玄参波利苷A，含量96. 4%。实施例2:
将凯氏玄参地上部分低温干燥、粉碎，取5kg，平均置于3个串联的提取装置中，加入18L75%的乙醇溶液，在50°C的提取温度下，提取3次，每次I. 5h，合并提取液，过滤后得到提取液，旋转浓缩，加水分散，过滤，滤液通过XDA-I型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用4BV的55%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到玄参波利苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为17:13:22:3配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至950r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在1.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到玄参波利苷A，含量95. 9%。实施例3:
将凯氏玄参地上部分低温干燥、粉碎，取5kg，平均置于4个串联的提取装置中，加入20L65%的乙醇溶液，在50°C的提取温度下，提取3次，每次2h，合并提取液，过滤后得到提取液，旋转浓缩，加水分散，过滤，滤液通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用5BV的55%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到玄参波利苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为17:14:23:6配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至900r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在3. Oml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到玄参波利苷A，含量98. 2%。 实施例4:
将凯氏玄参地上部分低温干燥、粉碎，取5kg，平均置于4个串联的提取装置中，加入15L80%的乙醇 溶液，在50°C的提取温度下，提取3次，每次I. 5h，合并提取液，过滤后得到提取液，旋转浓缩，加水分散，过滤，滤液通过HPD400型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用6BV的55%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到玄参波利苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为15:12:20:4配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至850r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在4. Oml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到玄参波利苷A，含量96. 7%。
权利要求
1.一种提取分离玄参波利苷A的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)提取以凯氏玄参为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中，以65-80%的食用乙醇溶液为提取溶剂，提取2-3次，合并提取液； (2)柱层析将上述提取液旋转浓缩，浓缩液加水分散，过滤，滤液上大孔树脂，先用水洗脱，再用4-6BV55%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液； (3)高速逆流色谱分离将步骤(2)所得乙醇洗脱液浓缩、干燥，干燥物采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到玄参波利苷A。
2.根据权利要求I所述的提取分离玄参波利苷A的方法，其特征在于所述步骤(I)中液体动态连续逆流装置为多个提取装置串联或并联或串并联合用，每次提取乙醇溶液用量为原料质量的3-5倍(v/w)。
3.根据权利要求I所述的提取分离玄参波利苷A的方法，其特征在于所述步骤(3)中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为(15-17)(12-14) :(20-25): (3-7)，溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在I. 5-4. Oml/min，主机转速控制在800_950r/min。
全文摘要
本发明涉及一种提取分离玄参波利苷A的方法，将凯氏玄参粉碎，进行多罐式动态逆流提取，提取液过滤、旋转浓缩，浓缩液加水分散，上大孔树脂，先用水洗脱，再用乙醇溶液洗脱，浓缩乙醇洗脱液，最后经半制备型高速逆流色谱仪分离纯化得到玄参波利苷A。本方法工艺流程简单，提取效率高，十分利于工业化生产，且制备过程中，污染少，成本低，制备的参波利苷A纯度达到98%以上。
文档编号C07H1/08GK102863491SQ20121036004
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司