专利名称：一种鹅耳枥楝素c的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及ー种从干燥楝树根皮中分离制备鹅耳枥楝素C的方法。
背景技术：
鹅耳枥棟素C来源于棟科(Meliaceae)棟树Melia azedarach Linn.根皮。楝树根皮主要有效成分为柠檬苦素类化合物，以鹅耳枥楝素C生物活性最高。鹅耳枥楝素C具有细胞毒活性，体外对P388呈细胞毒活性，IC50为3. Syg/ml。同时浓度50ppm时对甜菜夜蛾等呈拒食活性。目前，尚未见高含量鹅耳枥楝素C的制备方法相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种鹅耳枥楝素C的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
(1)提取取干燥楝树根皮，经粉碎处理，加8-15倍90-99%こ醇水溶液在30-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-60min，过滤，得到提取液；
(2)色谱柱层析以氧化铝或硅胶为填料，石油醚-こ酸こ酯梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；
(3)高速逆流色谱法分离采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，其两相溶剂系统为石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集鹅耳枥楝素C组分；
(4)重结晶将鹅耳枥楝素C组分进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C。所述步骤(I)中超声频率为45-65KHZ。所述步骤(2)中石油醚-こ酸こ酯体积比为6:1-2: I。所述步骤(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶剂系统的体积比为
5-7:5-7:4-7:4-6。所述步骤(4)中石油醚-丙酮体积比为5: I。 本方法的积极效果是
(1)本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；
(2)采用连续逆流超声提取技术，溶剂消耗少，耗时短，得率高，且不会破坏有效成分的生物活性；
(3)柱层析过程中用石油醚、こ酸こ酷、丙酮等，可替代通常所用的氯仿、甲醇等，安全无毒，环保；(4)采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短；
(4)エ艺步骤操作较简单，易操作，能进行大規模生产，所得产品纯度高。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式 实施例I:
取干燥楝树根皮，经粉碎处理，称取1kg，加8倍90%こ醇溶液在45 °C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，浓缩得到浸膏(密度为I. 18)，用こ酸こ酯溶解干法拌样后进行常压色谱柱层析，层析柱以氧化铝为填料，粒度为100目，石油醚-こ酸こ酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，以体积比7:7:6:4石油醚-こ酸こ 酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为217nm，收集鹅耳枥楝素C组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用体积比为5:1石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C，含量98. 7%。实施例2
取干燥楝树根皮，经粉碎处理，称取1kg，加12倍90%こ醇溶液在30°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，浓缩得到浸膏(密度为I. 18)，用こ酸こ酯溶解干法拌样后进行常压色谱柱层析，层析柱以硅胶为填料，粒度为100目，石油醚-こ酸こ酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，以体积比5:6:7:6石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为217nm，收集鹅耳枥楝素C组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用体积比为5:1石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C，含量99. 4%。实施例3:
取干燥楝树根皮，经粉碎处理，称取2kg，加10倍99%こ醇溶液在35°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为65KHz，过滤，得到提取液，浓缩得到浸膏(密度为I. 18)，用こ酸こ酯溶解干法拌样后进行常压色谱柱层析，层析柱以硅胶为填料，粒度为200目，石油醚-こ酸こ酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，以体积比7:5:4:4石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为217nm，收集鹅耳枥楝素C组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用体积比为5:1石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C，含量98. 5%。实施例4:
取干燥楝树根皮，经粉碎处理，称取5kg，加8倍90%こ醇溶液在40°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为45KHz，过滤，得到提取液，浓缩得到浸膏(密度为I. 18)，用こ酸こ酯溶解干法拌样后进行常压色谱柱层析，层析柱以氧化铝为填料，粒度为100目，石油醚-こ酸こ酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，以体积比5:5:6:6石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为217nm，收集鹅耳枥楝素C组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用体积比为5:1石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C，含量98. 4%。 实施例5:
取干燥楝树根皮，经粉碎处理，称取10kg，加15倍90%こ醇溶液在45 °C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，浓缩得到浸膏(密度为
I.18)，用こ酸こ酯溶解干法拌样后进行常压色谱柱层析，层析柱以硅胶为填料，粒度为200目，石油醚-こ酸こ酯6:1、4:1、2:1梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，以体积比5:7:6:4石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动 相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为217nm，收集鹅耳枥楝素C组分，进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用体积比为5:1石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C，含量98. 9%。
权利要求
1.一种鹅耳枥楝素C的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)提取取干燥楝树根皮，经粉碎处理，加8-15倍90-99%乙醇水溶液在30-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-60min，过滤，得到提取液； (2)色谱柱层析以氧化铝或硅胶为填料，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物； (3)高速逆流色谱法分离采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集鹅耳枥楝素C组分； (4)重结晶将鹅耳枥楝素C组分进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用石油醚-丙酮重结晶，过滤、洗涤干燥即得鹅耳枥楝素C。
2.根据权利要求I所述的一种鹅耳枥楝素C的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超声频率为45-65KHz。
3.根据权利要求I所述的一种鹅耳枥楝素C的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中石油醚-乙酸乙酯体积比为6:1-2: I。
4.根据权利要求I所述的一种鹅耳枥楝素C的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:5-7:4-7:4-6。
5.根据权利要求I所述的一种鹅耳枥楝素C的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中石油醚-丙酮体积比为5:1。
全文摘要
本发明涉及一种操作简单、污染少的鹅耳枥楝素C的制备方法，工艺步骤为(1)提取取干燥楝树根皮，经粉碎处理，用醇类溶液进行连续逆流超声提取，过滤得到提取液；(2)色谱柱层析以氧化铝或硅胶为填料，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集目标洗脱液，浓缩干燥得粗提物；(3)高速逆流色谱法分离采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的鹅耳枥楝素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为流动相，收集鹅耳枥楝素C组分；(4)重结晶将鹅耳枥楝素C组分进行真空浓缩，放置析晶，滤出结晶，用石油醚-丙酮重结晶。本发明制备鹅耳枥楝素C，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07D493/22GK102827183SQ201210350509
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司