专利名称：一种水飞蓟素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种水飞蓟素的制备方法，尤其是涉及一种高纯度水飞蓟素的制备方法。
背景技术：
水飞蓟素为黄酮木酯素化合物的混合物，包括水飞蓟宾(silybin)、脱氢水飞蓟宾(dehydrosi-silybin)、聚水飞蓟宾(silybinomer)、异水飞蓟宾(isosilybin)、水飞蓟亭(silychristin)、水飞蓟宁(silydianin)等化合物,其中水飞蓟宾是其主要活性成分。水飞蓟素是易溶于丙酮、甲醇、乙醇，难溶于氯仿，不溶于水的药物，水飞蓟素在肝病治疗领域
被广为应用，另外还具有抗肿瘤、治疗糖尿病等作用。随着制剂技术的发展，水飞蓟素在医药领域将有更加广阔的应用前景。水飞蓟素还是保健品和化妆品的重要原料。中国专利公开号CN1463970A，
公开日2003年12月31日，公开了一种水飞蓟素的制备方法，以粉碎的水飞蓟籽为原料，采用超临界二氧化碳萃取法提取水飞蓟籽油，以有机溶剂提取水飞蓟素，提取液在超临界二氧化碳环境下，分离获得高纯度水飞蓟素，该方法简化了分离过程，缩短了提取时间，不足之处是该方法采用超临界二氧化碳萃取技术，操作复杂,制备成本高,难以形成工业化规模生产。
发明内容
本发明的目的在于解决现有的水飞蓟素制备方法操作复杂、制备成本高、难以形成工业化规模生产的不足，提供了一种操作简单、制备成本低、易工业化规模生产、产品纯度高的水飞蓟素的制备方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是
一种水飞蓟素的制备方法，所述的制备方法包括下列步骤
O原料除油水飞蓟药材压榨除油，出油量控制在28 33%，压榨完毕后得水飞蓟药材潘饼；
2)提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的4飞倍，提取温度65 75°C，提取时间f 2h，提取次数2次或3次；
3)浓缩将水飞蓟素提取液真空浓缩至比重O.94、. 96g/ml得浓缩液，真空浓缩的真空度为-O. 08 -O. 09Mpa，温度为 5(T80°C ；
4)粗制浓缩液中加入浓缩液体积If22倍的纯化水进行分散，分散时间f I. 5h，温度5(T85°C，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为400(T6000rpm，离心时间20 30min ；
5)吸附将水飞蓟素粗品沉淀用94、6%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的2 4倍，溶解温度45飞5°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为400(T6000rpm，离心时间2(T30min，上清液过中性氧化铝柱吸附；6)洗脱采用94、6%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为4飞倍保留体积，乙醇溶液流速为O. 8^4. 5ml/min,乙醇溶液温度为 25 50。。；
7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液真空浓缩至酒精度<5°得浓缩液，然后浓缩液真空干燥得水飞蓟素成品，所述真空浓缩的真空度为-O. 08、. _09Mpa，温度为5(T80°C，所述真空干燥的真空度为-O. 08^-0. 09Mpa，温度为5(T80°C，干燥时间为I 3h。本发明将水飞蓟药材压榨除油，出 油率控制在28-33%，防止出油率太高导致水飞蓟药材中水飞蓟素跟随油一起流失，用来提取水飞蓟素的药材原料水飞蓟素含量低，不利于后续提取；采用乙酸乙酯提取，提取效率高，成本低；将水飞蓟素提取液先浓缩回收乙酸乙酯，降低了制备成本，然后浓缩液中加入纯化水使水飞蓟素分散均匀，大量水溶性杂质充分溶解在纯化水里，然后离心得水飞蓟素粗品沉淀；水飞蓟素粗品沉淀用乙醇溶解溶解，然后离心得上清液，上清液通过中性氧化铝柱层析，然后用乙醇溶液洗脱，收集水飞蓟素洗脱液，然后水飞蓟素洗脱液经过真空浓缩和真空干燥得高纯度水飞蓟素成品。作为优选，步骤2)提取采用微沸回流提取，提取温度7(T75°C，提取时间f I. 5h，提取次数为2次。采用较高温度微沸回流提取，提取时间短，提取次数可以减少，提取效率闻。作为优选，步骤2)提取采用静态浸溃提取，提取温度65°C 70°C，提取时间I. 5 2h，提取次数为3次。采用较低温静态浸溃提取，提取过程中能耗降低，可以节省制备成本。作为优选，步骤4)中分散过程采用机械搅拌辅助，搅拌转速4(Tl00rpm，搅拌时间8 15min。采用机械搅拌辅助，使水飞蓟素充分分散，防止抱团聚合，杂质去除率高，后续制备的产品的纯度高。作为优选，步骤5)中中性氧化铝的粒径为2(Γ200目，上样量与中性氧化铝质量比为1:2 8，柱的高径比为3 8:1，层析过程中柱温控制在2(T40°C。中性氧化铝粒径控制在20^200目，比表面积大，吸附能力强，上样量与中性氧化铝的量控制在1:2 8，柱子高径比控制在3 8:1，吸附效果好，水飞蓟素吸附率高，产品收率高。本发明的有益效果是1)操作条件温和，操作简单，易于工业化规模生产；2)提取溶剂回收循环利用，利用率高，制备成本低；3)制备方法可靠性好，产品质量稳定，杂质含量低，水飞蓟素纯度高。
具体实施例方式下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。实施例I :
一种水飞蓟素的制备方法，所述的制备方法包括下列步骤
O原料除油水飞蓟药材采用榨油机压榨除油得水飞蓟药材渣饼，出油量控制在28%(榨油机的生产商浙江磐峰机械制造有限公司；型号6YL-78 ;转速69-208rpm ;功率5. 5千瓦)；
2)提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中静态浸溃提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的6倍，提取温度65°C，提取时间I. 5h，提取次数为3次；
3)浓缩将水飞蓟素提取液在真空度为-O.09Mpa，温度为50°C的条件下浓缩至比重O. 94g/ml得浓缩液；
4)粗制浓缩液中加入浓缩液体积18倍的纯化水，使浓缩液中水飞蓟素均匀分散，分散时间1.5h,温度为50°C,分散过程中采用机械搅拌辅助,搅拌转速为IOOrpm,搅拌时间8min，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为6000rpm，离心时间20min ；
5)吸附将水飞蓟素粗品沉淀用96%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的2倍，溶解温度45°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为6000rpm，离心时间20min，上清液过中性氧化铝柱吸附，中性氧化铝的粒径为20目，上样量与中性氧化铝质量比为1:2，柱的高径比为3:1，吸附过程中柱温控制在20°C ；
6)洗脱采用94%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为4倍保留体积，乙醇溶液流速为O. 8ml/min,乙醇溶液温度为20°C ；
7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液在真空度为-O.09Mpa，温度为50°C条件下浓缩至酒精度5° (酒精度采用酒精计于20°C测量)，然后在真空度为_0.09Mpa，温度为50°C的条件下干燥3h得水飞蓟素成品，按照欧洲药典7. O版规定的水飞蓟素含量的HPLC测定方法检测水飞蓟素成品含量，流动相A为磷酸甲醇水=0.5:35:65 (v/v/v);流动相B为磷酸甲醇水=0. 5:50:50 (v/v/v)，检测波长为288nm，柱温2(T30°C，色谱柱为125mmX4mm，以十八烷基键合硅胶(5 μ m)为填充剂，流速为O. 8ml/min，水飞蓟素成品的收率和纯度见表I。实施例2
一种水飞蓟素的制备方法，所述的制备方法包括下列步骤
1)水飞蓟药材采用榨油机压榨除油得水飞蓟药材渣饼，出油量控制在33%(榨油机的生产商浙江磐峰机械制造有限公司；型号6YL-78，转速69-208rpm ;功率5. 5千瓦)；
2)提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中微沸回流提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的4倍，提取温度75°C，提取时间lh，提取次数为2次；
3)浓缩将水飞蓟素提取液在真空度为-O.OSMpa,温度为80°C条件下浓缩至比重O. 96g/ml得浓缩液；
4)粗制浓缩液中加入浓缩液体积22倍的纯化水，使浓缩液中水飞蓟素均匀分散，分散时间lh，温度为85°C，分散过程中前期采用机械搅拌辅助，搅拌转速为40rpm，搅拌时间15min，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为4000rpm，离心时间30min ；
5)吸附将水飞蓟素粗品沉淀用94%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的4倍，溶解温度55°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为4000rpm，离心时间30min，上清液过中性氧化铝柱吸附，中性氧化铝的粒径为200目，上样量与中性氧化铝质量比为1:8，柱的高径比为8:1，层析过程中柱温控制在30°C ；
6)洗脱采用96%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为6倍保留体积，乙醇溶液流速为4. 5ml/min,乙醇溶液温度为40°C ；
7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液在真空度为-O.08Mpa，温度为80°C条件下浓缩至酒精度4° (酒精度采用酒精计于20°C测量)，然后在真空度-O. 08Mpa，温度为80°C条件下干燥Ih得水飞蓟素成品，按照欧洲药典7. O版规定的水飞蓟素含量的HPLC测定方法检测水飞蓟素成品含量，流动相A为磷酸甲醇水=0. 5:35:65 (v/v/v);流动相B为磷酸甲醇水=0. 5:50:50 (v/v/v)，检测波长为288nm，柱温20 3(TC，色谱柱为125_X4mm，以十八烷基键合硅胶(5 μ m)为填充剂，流速为O. 8ml/min，水飞蓟素成品的收率和纯度见表I。实施例3:
一种水飞蓟素的制备方法，所述的制备方法包括下列步骤
1)水飞蓟药材采用榨油机压榨除油得水飞蓟药材渣饼，出油量控制在30%(榨油机的生产商浙江磐峰机械制造有限公司，型号6YL-78，转速69-208rpm。功率5. 5千瓦)；
2)提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中采用静态浸溃提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的5倍，提取温度70°C，提取时间2h，提取次数为3次；
3)浓缩将水飞蓟素提取液在真空度为-O.085Mpa，温度为65°C条件下浓缩至比重O. 95g/ml得浓缩液；
4)粗制浓缩液中加入浓缩液体积20倍的纯化水，使浓缩液中水飞蓟素均匀分散，分散时间1.25h，温度为65°C，分散过程中前期的采用机械搅拌辅助，搅拌转速为70rpm，搅拌时间lOmin，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为5000rpm，离心时间25min ；
5)吸附将水飞蓟素粗品沉淀用95%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的3倍，溶解温度50°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为5000rpm，离心时间25min，上清液过中性氧化铝柱吸附，中性氧化铝的粒径为100目，上样量与中性氧化铝质量比为1:5，柱的高径比为5:1，层析过程中柱温控制在30°C ；
6)洗脱采用95%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为5倍保留体积，乙醇溶液流速为3ml/min，乙醇溶液温度为25°C ；
7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液在真空度为-O.085Mpa，温度为65°C条件下浓缩至酒精度3° (酒精度采用酒精计于20°C测量)，然后在真空度为-O. 085Mpa，温度为65°C条件下干燥2h得水飞蓟素成品，按照欧洲药典7. O版规定的水飞蓟素含量的HPLC测定方法检测水飞蓟素成品含量，流动相A为磷酸甲醇水=0.5:35:65 (v/v/v);流动相B为磷酸甲醇:水=0.5:50:50 (v/v/v)，检测波长为288nm，柱温2(T30°C，色谱柱为125mmX 4mm,以十八烷基键合硅胶(5 μ m)为填充剂，流速为O. 8ml/min，水飞蓟素成品的收率和纯度见表
Io实施例4:
一种水飞蓟素的制备方法，所述的制备方法包括下列步骤
1)水飞蓟药材采用榨油机压榨除油得水飞蓟药材渣饼，出油量控制在30%(榨油机的生产商浙江磐峰机械制造有限公司，型号6YL-78，转速69-208rpm。功率5. 5千瓦)；
2)提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中微沸回流提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的5倍，提取温度70°C，提取时间I. 5h，提取次数为2次；
3)浓缩将水飞蓟素提取液在真空度为-O.085Mpa，温度为65°C条件下浓缩至比重O. 95g/ml得浓缩液；
4)粗制浓缩液中加入浓缩液体积20倍的纯化水，使浓缩液中水飞蓟素均匀分散，分散时间I. 25h，温度为65°C，分散过程中前期的采用机械搅拌辅助，搅拌转速为70rpm，搅拌时间lOmin，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为5000rpm，离心时间25min ；
5)吸附将水飞蓟素粗品沉淀用95%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的3倍，溶解温度50°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为5000rpm，离心时间25min，上清液过中性氧化铝柱吸附，中性氧化铝的粒径为100目，上样量与中性氧化铝质量比为1:5，柱的高径比为5:1，层析过程中柱温控制在25°C ；
6)洗脱采用95%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为5倍保留体积，乙醇溶液流速为3ml/min，乙醇溶液温度为30°C ；
7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液在真空度为-O.085Mpa，温度为65°C条件下浓缩至酒精度3° (酒精度采用酒精计于20°C测量)，然后在真空度为-O. 085Mpa，温度为65°C条件下干燥2h得水飞蓟素成品，按照欧洲药典7. O版规定的水飞蓟素含量的HPLC测定方法检测水飞蓟素成品含量，流动相A为磷酸甲醇水=0.5:35:65 (v/v/v);流动相B为磷酸
甲醇:水=0. 5:50:50 (v/v/v)，检测波长为288nm，柱温2(T30°C，色谱柱为125mmX 4mm,以十八烷基键合硅胶(5 μ m)为填充剂，流速为O. 8ml/min，水飞蓟素成品的收率和纯度见表
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实靈例
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权利要求
1.一种水飞蓟素的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括下列步骤 原料除油水飞蓟药材压榨除油得水飞蓟药材渣饼，出油量控制在28 33% ； 提取水飞蓟药材渣饼置于乙酸乙酯溶剂中提取得水飞蓟素提取液，乙酸乙酯的体积为水飞蓟药材渣饼质量的4飞倍，提取温度65 75°C，提取时间f 2h，提取次数2次或3次； 浓缩将水飞蓟素提取液真空浓缩至比重O. 94、. 96g/ml得浓缩液，真空浓缩的真空度为-O. 08 -O. 09Mpa，温度为50 80°C ； 粗制浓缩液中加入浓缩液体积If 22倍的纯化水进行分散，分散时间fl.5h，温度5(T85°C，分散结束后离心分离得水飞蓟素粗品沉淀，离心转速为400(T6000rpm，离心时间20 30min ； 吸附将水飞蓟素粗品沉淀用94、6%乙醇溶液溶解，乙醇溶液用量为水飞蓟素粗品沉淀质量的2 4倍，溶解温度45飞5°C，溶解完毕后离心去杂得上清液，离心转速为400(T6000rpm，离心时间2(T30min，上清液过中性氧化铝柱吸附； 洗脱采用94、6%的乙醇溶液洗脱吸附在中性氧化铝柱上的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液，乙醇溶液用量为4飞倍保留体积，乙醇溶液流速为O. 8^4. 5ml/min,乙醇溶液温度为25 50。。； 浓缩干燥水飞蓟素洗脱液真空浓缩至酒精度< 5°得浓缩液，然后浓缩液真空干燥得水飞蓟素成品，所述真空浓缩的真空度为-O. 08'0. 09Mpa，温度为5(T80°C，所述真空干燥的真空度为-O. 08 -O. 09Mpa，温度为5(T80°C，干燥时间为I 3h。
2.根据权利要求I所述的一种水飞蓟素的制备方法，其特征在于，步骤2)提取采用微沸回流提取，提取温度7(T75°C，提取时间f I. 5h，提取次数为2次。
3.根据权利要求I所述的一种水飞蓟素的制备方法，其特征在于，步骤2)提取采用静态浸溃提取，提取温度65°C 70°C，提取时间I. 5 2h，提取次数为3次。
4.根据权利要求I或2或3所述的一种水飞蓟素的制备方法，其特征在于，步骤4)中分散过程采用机械搅拌辅助，搅拌转速为4(Tl00rpm,搅拌时间为8 15min，。
5.根据权利要求I或2或3所述的一种水飞蓟素的制备方法，其特征在于，步骤5)中中性氧化铝的粒径为2(Γ200目，上样量与中性氧化铝质量比为1:2 8，柱的高径比为3 8:1，层析过程中柱温控制在2(T40°C。
全文摘要
本发明涉及一种水飞蓟素的制备方法，尤其是涉及一种高纯度水飞蓟素的制备方法，该制备方法包括1)原料除油；2)提取以乙酸乙酯作为提取溶剂，采用微沸回流提取或静态浸渍提取得水飞蓟素提取液；3)浓缩；4)粗制制得水飞蓟素粗品沉淀；5)吸附水飞蓟素粗品沉淀采用乙醇溶液再溶解，离心得上清液，上清液过中性氧化铝柱吸附；6)洗脱采用乙醇溶液洗脱吸附的水飞蓟素得水飞蓟素洗脱液；7)浓缩干燥水飞蓟素洗脱液真空浓缩回收乙醇后真空干燥得水飞蓟素成品。该方法具有操作简单、制备成本低、易工业化规模生产、产品纯度高的优点。
文档编号C07D407/04GK102816155SQ20121026151
公开日2012年12月12日 申请日期2012年7月27日 优先权日2012年7月27日
发明者程国才, 汪俊, 谢继才, 徐定芳, 孙振蛟 申请人:宁波立华植物提取技术有限公司