专利名称：在中性及碱性条件下萃取转移血清蛋白的方法
技术领域：
本发明属于生物工程中反胶束萃取技术领域，特别涉及萃取转移血清蛋白的方法。
背景技术：
反胶束是表面活性剂在非极性溶剂中形成的ー种分子有序组合体，具有光学透明性和热力学稳定性。由于反胶束具有特殊的水核结构，可用来分离、转移、富集和纯化蛋白质。反胶束对蛋白质的液-液萃取包括前萃取(即将血清蛋白萃取至反胶束中)和后萃取(即将血清蛋白从反胶束中再次转移至水相)两步。目前，在反胶束萃取血清蛋白技术中用到的表面活性剂一般为1，4-ニ(2-こ基己基)丁ニ酸酯磺酸钠(AOT)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。反胶束对血清蛋白的前萃取可在中性及碱性条件下进行，但是后萃取过程 只能在酸性条件下进行；且表面活性剂用量大(Α0Τ: O. 16 M，即70 g/L; CTAB: >0.04 M，即14.5 g/L)。此外，AOT浓度高时易于使水相乳化，CTAB在萃取过程中容易与血清蛋白形成白色不溶的复合物；待萃取的血清蛋白含量不得高于6 g/L，否则萃取率会急剧降低。本发明将ー种新型表面活性剤-双子型表面活性剂用于血清蛋白的萃取转移，可在中性及碱性条件下将蛋白质高效的由反胶束中转移至水相，且表面活性剂用量少(不小于3 g/L即可)，待萃取血清蛋白含量可高至40 g/L。当表面活性剂浓度达到90 g/L时未导致水相乳化，亦没有与血清蛋白形成不溶复合物。
发明内容
本发明的目的是提供ー种萃取效率高、萃取条件极其温和、操作简单、表面活性剂用量少的在中性或碱性条件下萃取转移血清蛋白的方法。本发明包括将血清蛋白配制成待萃取血清蛋白溶液后以反胶束进行前萃取，取得有机相后再用缓冲液进行后萃取，离心取得血清蛋白水溶液，再通过真空冷冻干燥得到血清蛋白干粉；其特征在于所述反胶束由双子型表面活性剤、正构烷烃、短链醇和水组成，所述反胶束中双子型表面活性剂的浓度为3 g/L 90 g/L;所述缓冲液中含有浓度为O. I
2M的无机盐；所述双子型表面活性剂结构式为
权利要求
1.在中性及碱性条件下萃取转移血清蛋白的方法，包括将血清蛋白配制成待萃取血清蛋白溶液后以反胶束进行前萃取，取得有机相后再用缓冲液进行后萃取，离心取得血清蛋白水溶液，再通过真空冷冻干燥得到血清蛋白干粉；其特征在于所述反胶束由双子型表面活性剤、正构烷烃、短链醇和水组成，所述反胶束中双子型表面活性剂的浓度为3 g/L 90g/L ;所述缓冲液中含有浓度为O. I 2 M的无机盐；所述双子型表面活性剂结构式为
2.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述双子型表面活性剂的m=12，s为8 12的整数。
3.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述无机盐为氯化钠、溴化钠、氯化钾或氯化钙。
4.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述反胶束中正构烷烃和短链醇的体积比为12 5 : I。
5.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述反胶束中水与双子型表面活性剂的摩尔比为5 20 : I。
6.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述正构烷烃为正戊烷、正己烷、异辛烷或正辛烧中的任意ー种。
7.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述短链醇为正戊醇、正己醇、异辛醇或正辛醇中的任意ー种。
8.根据权利要求I所述方法，其特征在于以PH值为7 10的缓冲液溶解血清蛋白，配制成待萃取血清蛋白溶液。
9.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述后萃取所用的缓冲液的PH值为7 10。
全文摘要
在中性及碱性条件下萃取转移血清蛋白的方法，属于生物工程中反胶束萃取技术领域。包括以下步骤配制血清蛋白溶液；前萃取；后萃取；真空冷冻干燥得到血清蛋白产品。本发明在后萃取阶段，即将血清蛋白从反胶束再次转移至水相的过程中，在中性及碱性条件下均可使血清蛋白高效地富集在水相中，效率与酸性条件下相近。本方法操作简单，表面活性剂用量少，实验条件极其温和，血清蛋白的天然结构不受影响。
文档编号C07K14/435GK102718854SQ20121022443
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月2日 优先权日2012年7月2日
发明者肖静, 蔡娟, 郭霞 申请人:扬州大学