专利名称：大豆皂甙b的制备方法
技术领域：
本发明属于化学工程与技术领域，一种大豆皂甙B的提取和纯化工艺。
背景技术：
大豆皂苷(Soyasaponins)是大豆中含有的一类重要的生物活性成分。皂甙的种类很多但大豆皂甙B的活性较好。近年研究表明，大豆皂苷B具有显著的降血脂和抗动脉粥样硬化等多种重要的生理功能，可开发成保健食品或药品，同时它还是一种重要的发泡剂、 乳化剂、稳定剂和风味改良剂，市场潜力大。目前大豆皂甙制备工艺，将原料脱脂，有机溶剂提取，滤液浓缩后用正丁醇萃取， 正丁醇相减压蒸干后得到粗品。但这种工艺有机溶剂用量多。大孔树脂制备大豆皂甙已被应用，该法回收率高。用此法文献较多，例如:CN1245811A, CN1315323A, CN1327983A, CN1590385A等。大豆皂甙B的纯化工艺多是采取制备色谱，硅胶住，逆流色谱等。这样制得的皂甙B，用的有机试剂较多，污染环境，溶剂消耗量大，难以实现工业化生产。采用结晶法制备皂甙，易于实现工业，如CN200610053603. 3，但该文献用乙醇结晶且得到的是总皂甙， 未将皂甙B分离出来。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种从脱脂大豆胚芽中提取并纯化得到高纯度大豆皂甙B的工艺，该工艺对环境友好，成本低，可实现工业化生产。本发明所采用的技术方案是以脱脂的大豆胚芽为原料制备高含量的大豆皂甙B，其中通过大孔树脂的吸附分离，得到皂甙粗品，在通过结晶将皂甙B分离出来，得到含量>85.0%的大豆皂甙B。具体步骤如下1.以脱脂大豆胚芽为原料，加入60% -90%的乙醇(体积百分比)，固液比为 1 20，加热至沸腾，回流提取2-5个小时，过滤浓缩至原来体积的1/3-1/5;2.将浓缩液加水后通入装有非极性大孔树脂的吸附柱中，在温度为20-30°C范围内，以流速为0. 5-3倍柱体积/小时上样；3.用1-4倍柱体积的水，在温度为20_30°C范围内，以流速为0. 5-3倍柱体积/小时洗去杂质；4.用1-4倍柱体积的5-40%的乙醇(体积百分比)，在温度为20_30°C范围内，以流速为0. 5-3倍柱体积/小时洗去杂质；5.用1-4倍柱体积的50-90%的乙醇(体积百分比)，在温度为20_30°C范围内， 以流速为0. 5-3倍柱体积/小时洗脱产物；6.将得到的洗脱液旋转蒸发，得到大豆皂甙粗品；7.将上述粗品加入水或30%乙醇(体积百分比)做为结晶溶剂，固液比为 1 10-30，在80°C下溶解，按1_7°C /小时的降温速率冷却到0_30°C，离心，干燥得到较纯的大豆皂甙B;8.将第7步得到的产品加入水或30%乙醇(体积百分比)做为结晶溶剂，固液比为1 25-45，在80°C下溶解，按1_7°C /小时的降温速率冷却到0_30°C，离心，干燥得到纯度较高的大豆皂甙B。上述大孔吸附树脂可为非极性或弱极性的大孔吸附树脂，如NKA，DlOl树脂。结晶溶剂可是去离子水或者30%乙醇。本发明的优点是本发明包括大孔树脂吸附，结晶等工艺。比起以前的工艺制备总皂甙该工艺优点是分离纯化大豆皂甙B，所选树脂对皂甙B的选择吸附性较高，所用溶剂对环境友好，所得产品纯度高，色泽为白色，成本低，易于产业化，可创出较好的经济效益。
具体实施例方式实施例1 称取脱脂大豆胚芽(华北制药厂提供)300g,加入6000ml70 %的乙醇溶液。在回流罐内，加热至沸腾回流提取池，趁热过滤，得到提取液。通过减压闪蒸除去提取液中的乙醇， 浓缩至约原来体积的1/3。再向浓缩液加入600ml水作为上样液。层析柱尺寸0^6*700mm。 内装NKA树脂(南开大学提供)约245g (约350ml的树脂)。上样大豆皂甙B原料液浓度为1. 69mg/ml，上样体积为6倍柱体积，上样流速为7ml/min。上样及洗脱温度为25°C。先用2倍柱体积的水洗，流速为8. 8ml/min,除去大豆低聚糖等杂质。再用2倍柱体积的20% 乙醇洗脱，流速为8. 8ml/min,除去异黄酮等杂质。最后用2. 5倍柱体积的80%乙醇洗脱，洗脱流速为5. Sml/min，收集大豆皂甙洗脱液，洗脱体积825ml。真空旋干得大豆皂甙粗品，呈棕黄色。皂甙B含量为20.0%，回收率88.0%。将上述大豆皂甙粗品放入烧杯中，加入水， 固液比1 20，在温度为80°C下使其溶解，以3°C/h的降温速率，降温到20°C，然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到第一步产品。该步得到的产品纯度为阳.0%，回收率64. 0%, 呈浅黄色。最后将上一步的产品，加水，固液比1 35，在温度为80°C下使其溶解，以；TC/ h的降温速率，降温到20°C，然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到产品。产品中大豆皂甙B的含量为85%，总收率为50. 0%，色泽为白色。实施例2 称取脱脂大豆胚芽(华北制药厂提供)300g，加入6000ml60%的乙醇溶液。在回流罐内，加热至沸腾回流提取证，趁热过滤，得到提取液。通过减压闪蒸除去提取液中的乙醇， 浓缩至约原来体积的1/5。再向浓缩液加入600ml水作为上样液。层析柱尺寸0^6*700mm。 内装DlOl树脂(南开大学提供)约200g(约^Ktoil的树脂)。上样大豆皂甙B原料液浓度为2. 43mg/ml，上样体积为4. 5倍柱体积，上样流速为2. 42ml/min。上样及洗脱温度为 20°C。先用4倍柱体积的水洗，流速为14. 5ml/min，除去大豆低聚糖等杂质。再用4倍柱体积的5%乙醇洗脱，流速为14. 5ml/min，除去异黄酮等杂质。最后用4倍柱体积的50%乙醇洗脱，洗脱流速为2. 42ml/min，收集大豆皂甙洗脱液，洗脱体积1160ml。真空旋干得大豆皂甙粗品，呈棕黄色。皂甙B含量为18.6%，回收率90.0%。将上述大豆皂甙粗品放入烧杯中，加入水，固液比1 30，在温度为80°C下使其溶解，以l°C/h的降温速率，降温到30°C， 然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到第一步产品。该步得到的产品纯度为49.0%，回收率60.0%，呈浅黄色。最后将上一步的产品，加水，固液比1 45，在温度为80°C下使其溶解，以1°C /h的降温速率，降温到30°C，然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到产品。产品中大豆皂甙B的含量为78%，总收率为48.4%，色泽为白色。实施例3 称取脱脂大豆胚芽(华北制药厂提供)300g，加入6000ml90 %的乙醇溶液。在回流罐内，加热至沸腾回流提取池，趁热过滤，得到提取液。通过减压闪蒸除去提取液中的乙醇， 浓缩至约原来体积的1/4。再向浓缩液加入IOOml水作为上样液。层析柱尺寸0^6*700mm。 内装NKA树脂(南开大学提供)约M5g (约350ml的树脂)。上样大豆皂甙B原料液浓度为 0. 77mg/ml，上样体积为13倍柱体积，上样流速为17. 5ml/min。上样及洗脱温度为30°C。先用1倍柱体积的水洗，流速为2. 92ml/min,除去大豆低聚糖等杂质。再用1倍柱体积的40% 乙醇洗脱，流速为2.92ml/min，除去异黄酮等杂质。最后用1倍柱体积的90%乙醇洗脱，洗脱流速为17. 5ml/min，收集大豆皂甙洗脱液，洗脱体积350ml。真空旋干得大豆皂甙粗品， 呈棕黄色。皂甙B含量为对.5%，回收率73.0%。将上述大豆皂甙粗品放入烧杯中，加入 30%乙醇，固液比1 10，在温度为80°C下使其溶解，以7°C/h的降温速率，降温到0°C，然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到第一步产品。该步得到的产品纯度为47.5%，回收率 49.0%，呈浅黄色。最后将上一步的产品，加30%乙醇，固液比1 25，在温度为80°C下使其溶解，以7。C /h的降温速率，降温到0°C，然后离心分离母液和结晶，冷冻干燥得到产品。 产品中大豆皂甙B的含量为63%，总收率为32. 0%，色泽为淡黄色。
权利要求
1. 一种大豆皂甙B的制备方法，其特征在于具体步骤如下1).以脱脂大豆胚芽为原料，加入体积百分比为60%-90%的乙醇，固液比为1 20， 加热至沸腾，回流提取2-5个小时，过滤浓缩至原来体积的1/3-1/5 ；2).将浓缩液加水后通入装有NKA或DlOl树脂的吸附柱中，在温度为20-30°C范围内， 以流速为0. 5-3倍柱体积/小时上样；3).用1-4倍柱体积的水，在温度为20-30°C范围内，以流速为0.5-3倍柱体积/小时洗去杂质；4).用1-4倍柱体积体积百分比为5-40%的乙醇，在温度为20-30°C范围内，以流速为 0. 5-3倍柱体积/小时洗去杂质；5).用1-4倍柱体积体积百分比为50-90%的乙醇，在温度为20-30°C范围内，以流速为 0. 5-3倍柱体积/小时洗脱产物；6).将得到的洗脱液旋转蒸发，得到大豆皂甙粗品；7).将上述粗品加入水或体积百分比为30%乙醇做为结晶溶剂，固液比为1 10-30， 在80°C下溶解，按1_7°C /小时的降温速率冷却到0-30°C，离心，干燥得到较纯的大豆皂甙 B ；8).将第7)步得到的产品加入水或体积百分比为30%乙醇做为结晶溶剂，固液比为 1 25-45，在80°C下溶解，按1_7°C /小时的降温速率冷却到0_30°C，离心，干燥得到纯度较高的大豆皂甙B。
全文摘要
本发明公开了一种大豆皂甙B的制备方法，以解决大豆皂甙B的生产成本高，污染环境和工业化问题。本发明的工艺包括以下步骤1.脱脂大豆胚芽中皂甙的提取；2.过滤浓缩；3.过大孔吸附树脂；4.梯度洗脱大孔树脂柱，得到大豆皂甙；5.通过第一次结晶得到大豆皂甙B粗品；6.重结晶得到高纯度大豆皂甙B。本发明是大豆皂甙B可以进行工业化，并且对环境友好。
文档编号C07H15/256GK102516349SQ20111034340
公开日2012年6月27日 申请日期2011年11月3日 优先权日2011年11月3日
发明者袁其朋, 赵丽 申请人:北京化工大学