专利名称：一种紫穗槐螺酮的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从紫穗槐叶中分离制备紫穗槐螺酮的方法。
背景技术：
紫穗槐螺酮来源于豆科紫穗槐Ufflor/^a fruticosa Z.)的干燥叶。紫穗槐原产美国。广布于中国东北、华北、河南、华东、湖北、四川等省(区)，是黄河和长江流域很好的水土保持植物。紫穗槐叶主要有效成分为黄酮类化合物，以紫穗槐螺酮含量最高。紫穗槐螺酮具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对KB和RPMI-7951细胞的ED5tl分别为(μ g/ ml) 0. 58和0. 61。对TPA诱导的EB病毒早期抗原(EBV-EA)有显著抑制作用，其活性于VA 酸和甘草次酸相当。目前，尚未见高含量紫穗槐螺酮的制备方法报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫穗槐螺酮的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
(1)取紫穗槐叶，经粉碎处理，加入到超临界CO2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，进行萃取，得到萃取物；
(2)萃取物加入乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；
(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集紫穗槐螺酮组分；
(4)将紫穗槐螺酮组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮。所述步骤(1)中的超临界CO2萃取参数条件为萃取温度为35_50°C，萃取压力为 25-32MPa，萃取时间为2_4h，分离釜I温度为30-40°C，压力为8_10MPa，分离釜II温度为 ^-35°C，压力为 5-7MPa，CO2 流量为 3_5ml/g 生药 /min。所述步骤(1)中夹带剂的用量为药材重量的10-20%。所述步骤(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为 5-8:1-3:4-7:1-3。本方法积极效果是
(1)本方法采用超临界(X)2萃取，能耗低，萃取剂(X)2清洁无污染；
(2)本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；
(3)本方法工艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1
取紫穗槐叶，经粉碎处理，称取1kg，加入到超临界(X)2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，用量为药材重量的10%，进行萃取，萃取温度为35°C，萃取压力为25MPa，CO2流量为3ml/g生药/min，萃取时间为2h，分离釜I温度为30°C，压力为8MPa，分离釜II温度为^°C，压力为 5MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 体积比为5: 3:4:2，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为209nm，收集紫穗槐螺酮组分，真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮，含量96. 5%。实施例2:
取紫穗槐叶，经粉碎处理，称取1kg，加入到超临界(X)2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，用量为药材重量的18%，进行萃取，萃取温度为30°C，萃取压力为32MPa，CO2流量为％il/g生药 /min，萃取时间为3. 5h，分离釜I温度为30°C，压力为8MPa，分离釜II温度为^°C，压力为 7MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 体积比为6 1 5 1，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为209nm，收集紫穗槐螺酮组分，真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮，含量97. 4%。实施例3:
取紫穗槐叶，经粉碎处理，称取^g，加入到超临界(X)2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，用量为药材重量的20%，进行萃取，萃取温度为50°C，萃取压力为^MPa，CO2流量为3ml/g生药/min，萃取时间为4h，分离釜I温度为40°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为35°C，压力为 7MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 体积比为8 3 7 3，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为209nm，收集紫穗槐螺酮组分，真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮，含量96. 1。实施例4:
取紫穗槐叶，经粉碎处理，称取^g，加入到超临界(X)2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，用量为药材重量的10%，进行萃取，萃取温度为50°C，萃取压力为32MPa，CO2流量为5ml/g生药/min，萃取时间为2. 5h，分离釜I温度为40°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为30°C，压力为6. 5MPa，得到萃取物，用乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为7 2 7 1，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为209nm，收集紫穗槐螺酮组分，真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮，含量98. 6%。
实施例5:
取紫穗槐叶，经粉碎处理，称取10kg，加入到超临界(X)2萃取器中，用乙醇作为夹带剂， 用量为药材重量的15%，进行萃取，萃取温度为35°C，萃取压力为^MPa，CO2流量为3. 5ml/ g生药/min，萃取时间为3. 5h，分离釜I温度为35°C，压力为9MPa，分离釜II温度为30°C， 压力为7MPa，得到萃取物，用乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比为5 1 7 1，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为209nm，收集紫穗槐螺酮组分，真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮，含量98. 9%。
权利要求
1.一种紫穗槐螺酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取紫穗槐叶，经粉碎处理，加入到超临界CO2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，进行萃取，得到萃取物；(2)萃取物加入乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集紫穗槐螺酮组分；(4)将紫穗槐螺酮组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得紫穗槐螺酮。
2.根据权利要求1所述的一种紫穗槐螺酮的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中的超临界( 萃取参数条件为萃取温度为35-50°C，萃取压力为25-32MPa，萃取时间为2_4h， 分离釜I温度为30-40°C，压力为8-lOMPa，分离釜II温度为，压力为5_7MPa，CO2流量为3-5ml/g生药/min0
3.根据权利要求1所述的一种紫穗槐螺酮的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中夹带剂的用量为药材重量的10-20%。
4.根据权利要求1所述的一种紫穗槐螺酮的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:1-3:4-7:1-3。
全文摘要
本发明涉及一种操作简单、污染少的紫穗槐螺酮的制备方法，工艺步骤为(1)取紫穗槐叶，经粉碎处理，加入到超临界CO2萃取器中，用乙醇作为夹带剂，进行萃取，得到萃取物；(2)萃取物加入乙酸乙酯搅拌使溶解，过滤，滤液浓缩干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的紫穗槐螺酮，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为流动相，收集紫穗槐螺酮组分；(4)将紫穗槐螺酮组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重结晶。本发明制备紫穗槐螺酮，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07D493/20GK102424684SQ20111030372
公开日2012年4月25日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司