专利名称：一种从爵床中提取山荷叶素的方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，涉及一种从爵床中提取山荷叶素的方法。
背景技术：
爵床为爵床科植物爵床Tfo1SteBWaria procumbens (Linn. ) Nees的干燥全草。别名小青草、六角英、赤眼老母草、节节寒等。收载于中国药典(1977年版，一部)，在东汉前已载入《神农本草经》。具有清热解毒，利尿消肿的功效，用于治疗感冒发热、咳嗽、喉痛、疟疾、 肾盂肾炎、乳糜尿、肝硬化腹水、疳积等症，分布在我国西南部和南部各省及台湾等地，资源十分丰富。爵床的化学成分主要是木脂素及其苷类。山荷叶素(diphyllin)是近期所发现的具有抗肿瘤活性的新结构的天然产物，分子式=C21H16O7,分子量380. 353，属于1_芳基萘木脂素类，主要从爵床中分离得到。它具有抗癌、抗菌和抗病毒等广泛的生物活性。Diphyllin具有较好的抗肿瘤活性，对于人鼻咽癌细胞(KB)的ED5(1<3ymol/mL。研究发现Diphyllin类化合物能够作用于细胞分裂周期的 S期，Gl期，使细胞分裂停留在Gl期，对于S期有很强的抑制作用。实验证明，用于HCT116 细胞时，在M小时内，能够使S期的细胞的比率从70%下降到41%，而使Gl期细胞所占比重由21%增加到42%，对MCF-7细胞也有类似的结果。Diphyllin类化合物具有广泛的生理活性，已引起许多药学家、化学家的广泛关注。现有技术中，张永利采用80%乙醇回流提取，所得浸膏依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取部分再分别利用硅胶柱色谱、VLC色谱、Diaion HP_20、MC1 Gel CHP-20, Sephadex LH-20、RPC-18等柱层析及制备薄层层析分离纯化单体化合物，该方法仅限于实验室少量制备和化学成分分离鉴定。中国专利(申请号201010535341.0)公开了一种乙醇热回流、乙酸乙酯-水混合溶剂多级逆流萃取、大孔树脂柱层析、丙酮结晶的方法制备山荷叶素，该方法萃取率低、产品纯度不稳定。
发明内容
本发明的目的是提供一种从爵床中提取山荷叶素的方法，该方法得到的山荷叶素纯度大于98%，对促进山荷叶素的应用具有重要的意义。为实现本发明的目的，本发明所采用的技术方案是
一种从爵床中提取山荷叶素的方法，其特征在于，该方法采用以下步骤
(1)以爵床为原料经超微粉碎后，用60%-75%丙酮渗漉提取，渗漉液浓缩得浓缩液；
(2)浓缩液用等体积量的二氯甲烷萃取3-4次，合并二氯甲烷相并浓缩成浸膏；
(3)将上述浸膏用中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液；
(4)将洗脱液5:2部分用高效液相色谱法进行分离纯化，流速为10-50ml/min，以甲醇-水为流动相，即得到山荷叶素。为使细胞中的有效组分充分提取出来，步骤1中山荷叶经超微粉碎至粒径10 μ m以下。步骤3中氧化铝中低压柱的柱压为4_7bar，柱内径为20-100mm，层析柱径高比为 1:5-15。本发明的优势在于本发明采用超微粉碎，再渗漉提取，操作简单，提取率高；采用二氯甲烷-丙酮混合溶剂洗脱，危害小，污染低；使用中低压柱进行层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。
具体实施例方式下面将通过以下实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的保护范围。实施例1:
取IOkg经超微粉碎粒径10 μ m以下的爵床用65%丙酮渗漉提取，渗漉液减压回收试剂得浓缩液，用等体积量的二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷萃取相，浓缩得浸膏，将浸膏用少量中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，其中中低压的柱压为7bar，中低压柱内径为20mm，层析柱径高比为1 5，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)进行梯度洗脱， 收集各个部分洗脱液，将洗脱液的5:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为20ml/min， 以甲醇-水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到白色针晶，经结构检测确认，该白色针晶为纯度98. 5%的山荷叶素。实施例2:
取IOkg经超微粉碎粒径10 μ m以下的爵床用70%丙酮渗漉提取，渗漉液减压回收试剂得浓缩液，用等体积量的二氯甲烷萃取4次，合并二氯甲烷萃取相，浓缩得浸膏，将浸膏用少量中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，其中中低压的柱压为6bar，中低压柱内径为25mm，层析柱径高比为1 7，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)进行梯度洗脱， 收集各个部分洗脱液，将洗脱液的5:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为lOml/min， 以甲醇-水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到白色针晶，经结构检测确认，该白色针晶为纯度98. 8%的山荷叶素。实施例3:
取IOkg经超微粉碎粒径10 μ m以下的爵床用65%丙酮渗漉提取，渗漉液减压回收试剂得浓缩液，用等体积量的二氯甲烷萃取4次，合并二氯甲烷萃取相，浓缩得浸膏，将浸膏用少量中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，其中中低压的柱压为4bar，中低压柱内径为100mm，层析柱径高比为1:15，用二氯甲烷-丙酮(15:1 —5:2)进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液，将洗脱液的5:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为40ml/ min，以甲醇-水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到白色针晶，经结构检测确认，该白色针晶为纯度98. 4%的山荷叶素。实施例4:
取IOkg经超微粉碎粒径10 μ m以下的爵床用60%丙酮渗漉提取，渗漉液减压回收试剂得浓缩液，用等体积量的二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷萃取相，浓缩得浸膏，将浸膏用少量中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，其中中低压的柱压为^ar,中低压柱内径为36mm，层析柱径高比为1 12，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)进行梯度洗脱， 收集各个部分洗脱液，将洗脱液的5:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为50ml/min，以甲醇-水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到白色针晶，经结构检测确认，该白色针晶为纯度98. 6%的山荷叶素。
权利要求
1.一种从爵床中提取山荷叶素的方法，其特征在于，该方法采用以下步骤(1)以爵床为原料经超微粉碎后，用60%-75%丙酮渗漉提取，渗漉液浓缩得浓缩液；(2)浓缩液用等体积量的二氯甲烷萃取3-4次，合并二氯甲烷相并浓缩成浸膏；(3)将上述浸膏用中性氧化铝拌样，上样至300-400目的氧化铝中低压柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液；(4)将洗脱液5:2部分用高效液相色谱法进行分离纯化，流速为10-50ml/min，以甲醇-水为流动相，即得到山荷叶素。
2.按照权利要求1所述的一种从爵床中提取山荷叶素的方法，其特征在于步骤1山荷叶经超微粉碎至粒径10 μ m以下。
3.按照权利要求1所述的一种从爵床中提取山荷叶素的方法，其特征在于步骤3中氧化铝中低压柱的柱压为4-7bar，柱内径为20_100mm，层析柱径高比为1:5-15。
全文摘要
一种从爵床中提取山荷叶素的方法，具体步骤为将爵床经超微粉碎后用丙酮渗漉提取，渗漉液浓缩后用二氯甲烷萃取3-4次，二氯甲烷相上样至氧化铝为300-400目的氧化铝柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶剂洗脱，洗脱液浓缩过滤后采用高效液相制备色谱进一步分离，即可获得纯度大于98%的山荷叶素。该方法操作流程简单，所获得的化合物纯度高，工业化生产容易实现。
文档编号C07D407/04GK102311429SQ20111018745
公开日2012年1月11日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司