专利名称：从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法
技术领域：
本发明属于天然产物化学领域，涉及天然产物提取、分离和纯化，特别涉及一种从大青叶中提取高纯度总生物碱的工艺方法。
背景技术：
大青叶是我国的传统中药，为十字花科植物菘蓝(Isats inidigotica Fort)的干燥叶，主要分布于河北、江苏、浙江、福建、河南、广西等地，其味苦性寒，具有清热解毒、凉血利咽之功效。所含化学成分有靛蓝、靛玉红、色氨酮、3 -羟苯基喹唑酮、有机酸类等。药理研究表明，其具有抗菌、抗病毒、抗痈、增强免疫功能等作用，临床上广泛用于治疗各种病毒性流行感冒、流行性乙型脑炎、流行性腮腺炎、病毒性肝炎、咽炎、水痘等感染性疾病。长期的药理研究证明大青叶活性成分以靛蓝、靛玉红和4C3)H喹唑酮等生物碱类化合物为主。中国药典2005年版一部也以靛玉红的含量作为大青叶药材及其制剂的质量控制指标。在100多种中成药中，大青叶是其中的重要组成部分，但至今仍没有一种以大青叶有效部位为主要成分的单方制剂。为此，我们采用了现代先进提取、分离技术对大青叶进行提取、分离，得到其有效部位，为将其加工成中药五类新药(原国家中药二类新药)奠定了基础。我们以传统经验及现代科学研究为依托，以大青叶总生物碱提取物为有效部位开发成大青叶单方制剂。关于大青叶中靛蓝、靛玉红的提取制备工艺研究很少，专利申请也比较少，主要采用的是先选择适当的有机溶剂进行提取，再采用大孔树脂柱层析或氧化铝柱层析或者二者相结合的方法进行精制纯化。如申请号为20091(^64451. 5的专利，采用的工艺为2. 3%盐酸溶液浸湿原料，60-80%甲醇回流提取，活性炭脱色，浓氨水调PH9-10，析出结晶，再和氧化铝拌样，装入短粗柱，二氯甲烷和乙酸乙酯混合液梯度洗脱，回收试剂，放置重结晶。这种方法种所用溶剂的毒性较大，制得的提取物残留的有机溶剂对人体健康无益。层析使用大量的氧化铝使用周期短，不易重复使用，工艺成本较高，难以实现工业化。
发明内容
本发明的目的在于避免现有技术的不足提供一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，从而使之用作医药品的原料或开发成为一种新药。本发明公开了一种从大青叶中提取靛蓝、靛玉红的方法。该方法将大青叶以含氢氧化钠的乙醇热回流，将浓缩、离心、膜分离后的提取液经大孔吸附树脂吸附及解吸附，可获得较高纯度的靛蓝、靛玉红提取物。为实现上述目的，本发明采取的技术方案为一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤
1)将大青叶干燥、粉碎、过筛，用含氢氧化钠的乙醇溶液加热回流提取2-3次，合并提取液，过滤，滤液备用；
2)将滤液回收乙醇，浓缩，用盐酸溶液调pH至中性，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调pH 至3-5，离心，上清液备用；3)将上述上清液在膜分离设备中进行微滤；
4)吸附以及解吸附将上述经过微滤的原液上树脂塔柱进行吸附，然后用水洗脱除去水溶性杂质，弃去水洗脱液，继以含水乙醇洗脱，收集该洗脱液；
5 )将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色产品。所述的从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，所述的步骤1)过筛目数为40-120 目；所述的含氢氧化钠的乙醇溶液为含0. 05-0. 2 mol/L氢氧化钠的60wt%-90wt%乙醇。所述的步骤4)树脂塔柱径和柱高比为1:8-1:15 ；树脂塔柱的加入量是将步骤3) 经过微滤的原液按树脂对黄酮静态饱和吸附量的100%-150%加入；在吸附以及解吸附树脂柱过程中，乙醇解吸附液的流速为0.6-3 BV/h。所述的步骤3)经过微滤的样品原液，直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色， 弃去水洗液，再用20-70%乙醇洗脱，弃去该洗脱液，继以70-90%乙醇洗脱，收集该洗脱液。本发明与现有技术相比有以下优点
本发明从大青叶到该大青叶总生物碱产品的总浸膏得率约为1% ；经高效液相色谱法 (HPLC)测定，该大青叶提取物中靛蓝含量为2%-5%，靛玉红含量20-40%。而纯化前大青叶中靛蓝、靛玉红含量小于0. 1%。本发明与已有方法技术相比产品中靛蓝和靛玉红的含量大为提高，生产成本低廉，工艺路线简单，适合工业化生产应用，可进一步促进大青叶提取物作为药物、保健品等多功能产品的产业化开发。本方法的优点在于产品中生产成本低廉，工艺路线简单，所用提取溶剂的毒性较小，提取周期短，适合工业化生产应用。基于上述优点，本发明可进一步促进大青叶提取物作为药物、保健品等多功能产品的产业化开发。
具体实施例方式以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1 一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤1)将大青叶干燥、粉碎、过40-120目筛，用含0.05-0. 2 mol/L氢氧化钠的60wt%_90wt%
乙醇加热回流提取2-3次，合并提取液，过滤，滤液备用；
2)将滤液回收乙醇，浓缩，用盐酸溶液调pH至7，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调pH至3-5，离心，上清液备用；
3)将上述上清液在膜分离设备中进行微滤；
4)吸附以及解吸附将上述经过微滤的原液上树脂塔柱进行吸附，树脂塔柱径和柱高比为1:8-1:15 ；树脂塔柱的加入量是将步骤3)经过微滤的原液按树脂对黄酮静态饱和吸附量的100%-150%加入；在吸附以及解吸附树脂柱过程中，乙醇解吸附液的流速为0. 6-3 BV/h。然后用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用20-70%乙醇洗脱，弃去该洗脱液，继以 70-90%乙醇洗脱，收集该洗脱液；
5)将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色产品。该红色产品经高效液相色谱法(HPLC)测定，该大青叶提取物为靛蓝、靛玉红混合物，大青叶提取物中靛蓝、靛玉红含量为 5%-35%。实施例2 —种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤
取大青叶粉碎，过80目筛子，精密称取100g，加入含0. lmol/L氢氧化钠的70%乙醇溶液1000ml，加热回流提取2次，每次2. 0小时，合并提取液，过滤，滤液备用。将上述滤液回收乙醇，浓缩，用氢氧化钠溶液调pH至7，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调至PH 5，离心，上清液备用。将上述上清液在常温下于卷式膜设备中进行微滤，膜材为聚偏氟乙烯膜，孔径为 0. 45 ？ m。将上述经过微滤的原液过DlOl大孔树脂，向吸附饱和的树脂柱中加入3倍柱床体积的水，以2BV/h的流速进行水洗，用水洗至接近无色，弃去水洗脱液，弃去水洗液。再用 40%乙醇洗脱，以2BV/h的流速弃去该洗脱液，洗脱3BV后，弃去该洗脱液。继续以80%乙醇洗脱，以3BV/h的流速进行洗脱，洗脱3BV后，收集该洗脱液。将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色靛红浸膏，从大青叶到最终产品的总浸膏得率为1%。以HPLC法测得靛蓝含量为4. 3%，靛玉红含量为28. 7%。
实施例3 —种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤 取大青叶粉碎，过100目筛子，精密称取100 g,加入含0. lmol/L氢氧化钠的80 %乙醇溶液1000 ml,加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，过滤，滤液备用。将上述滤液回收乙醇，浓缩，用氢氧化钠溶液调pH至7，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调PH至5，离心，上清液备用。将上述上清液在常温下于卷式膜设备中进行微滤，膜材为聚偏氟乙烯膜，孔径为 0. 45 ？ m。将上述经过微滤的原液过DlOl大孔树脂，向吸附饱和的树脂柱中加入3倍柱床体积的水，以2BV/h的流速进行水洗，用水洗至接近无色，弃去水洗脱液，弃去水洗液。再用 30%乙醇洗脱，以2BV/h的流速弃去该洗脱液，洗脱3BV后，弃去该洗脱液。继续以85%乙醇洗脱，以3BV/h的流速进行洗脱，洗脱3BV后，收集该洗脱液。将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色靛红浸膏。从大青叶到最终产品的总浸膏得率为1%，以HPLC法测得靛蓝含量为3. 8%，靛玉红含量为25. 2%。
实施例4 一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤 取大青叶粉碎，过80目筛子，精密称取100g，加入含0. lmol/L氢氧化钠的90%乙醇溶液1000ml，加热回流提取3次，每次1. 2小时，合并提取液，过滤，滤液备用。将上述滤液回收乙醇，浓缩，用氢氧化钠溶液调pH7，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调PH至5，离心，上清液备用。将上述上清液在常温下于卷式膜设备中进行微滤，膜材为聚偏氟乙烯膜，孔径为 0. 45 ？ m。将上述经过微滤的原液过DlOl大孔树脂，向吸附饱和的树脂柱中加入3倍柱床体积的水，以2BV/h的流速进行水洗，用水洗至接近无色，弃去水洗脱液，弃去水洗液。再用 35%乙醇洗脱，以2BV/h的流速弃去该洗脱液，洗脱3BV后，弃去该洗脱液。继续以90%乙醇洗脱，以3BV/h的流速进行洗脱，洗脱3BV后，收集该洗脱液。将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色靛红浸膏，从大青叶到最终产品的总浸膏得率为1%，以HPLC法测得靛蓝含量为2. 7%，靛玉红含量为30. 7%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其特征在于包括以下步骤1)将大青叶干燥、粉碎、过筛，用含氢氧化钠的乙醇溶液加热回流提取2-3次，合并提取液，过滤，滤液备用；2)将滤液回收乙醇，浓缩，用盐酸溶液调pH至中性，离心，沉淀用盐酸溶液溶解并调pH 至3-5，离心，上清液备用；3)将上述上清液在膜分离设备中进行微滤；4)吸附以及解吸附将上述经过微滤的原液上树脂塔柱进行吸附，然后用水洗，脱除去水溶性杂质，弃去水洗脱液，继以含水乙醇洗脱，收集该洗脱液；5 )将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色产品。
2.如权利要求1所述的从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其特征在于所述的步骤1)过筛目数为40-120目；所述的含氢氧化钠的乙醇溶液为含0.05-0. 2 mol/L氢氧化钠的 60wt%-90wt% 乙醇。
3.如权利要求1所述的从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其特征在于所述的步骤 4)树脂塔柱径和柱高比为1:8-1:15 ；树脂塔柱的加入量是将步骤3)经过微滤的原液按树脂对黄酮静态饱和吸附量的100%-150%加入；在吸附以及解吸附树脂柱过程中，乙醇解吸附液的流速为0. 6-3 BV/h。
4.如权利要求1所述的从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其特征在于步骤3)经过微滤的样品原液，直接过大孔吸附树脂，先用水洗至接近无色，弃去水洗液，再用20-70%乙醇洗脱，弃去该洗脱液，继以70-90%乙醇洗脱，收集该洗脱液。
全文摘要
本发明属于天然产物化学领域，涉及天然产物提取、分离和纯化，特别涉及一种从大青叶中提取高纯度总生物碱的工艺方法。一种从大青叶中制备靛蓝、靛玉红的方法，其主要特点在于包括以下步骤，将大青叶干燥、粉碎、过筛，用含氢氧化钠的乙醇溶液加热回流提取；将滤液回收乙醇，浓缩，用盐酸溶液调pH至中性，离心，沉淀用盐酸溶液溶解离心，上清液备用；将上述上清液在膜分离设备中进行微滤；将上述经过微滤的原液上树脂塔柱进行吸附，然后用水洗脱除去水溶性杂质，弃去水洗脱液，继以含水乙醇洗脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得暗红色产品。本方法的优点在于产品中生产成本低廉，工艺路线简单，所用提取溶剂的毒性较小，提取周期短，适合工业化生产应用。基于上述优点，本发明可进一步促进大青叶提取物作为药物、保健品等多功能产品的产业化开发。
文档编号C07D209/36GK102174009SQ201110064430
公开日2011年9月7日 申请日期2011年3月9日 优先权日2011年3月9日
发明者周翔, 李雪虎, 梁剑平, 王署阳, 陆锡宏, 陶蕾 申请人:中国科学院近代物理研究所