密码子优化的乙型肝炎病毒核心抗原(hbcag)的利记博彩app

专利名称：密码子优化的乙型肝炎病毒核心抗原(hbcag)的利记博彩app
技术领域：
在本说明书中公开的实施例的方面总体上涉及用于递送并由受试者(例如人)的组织摄取治疗性物质(例如，化学制品、化合物、蛋白和核酸)的装置和方法。优选实施例涉及用于向多种细胞(优选为动物细胞，例如人类细胞)递送遗传物质或核酸(包括但不限于DNA、RNA和修饰的核酸)的装置和方法。
背景技术：
向组织中递送治疗性物质(例如遗传物质)有各种各样有用的方法，包括接种、缺陷基因的替换、DNA免疫、免疫原的导入、反义疗法，以及miRNA、RNAi、适体或siRNA疗法。例如，核酸，比如说DNA，举例来说，可被注射入组织中，在该处核酸可由周围的细胞摄取(即使低效)。以这种方式导入DNA会产生该DNA编码的蛋白。向组织中成功递送核酸以及核酸成功被细胞所摄取是比较困难的，尤其是在需要产生大量的蛋白表达的时候(例如，对于基于DNA的接种的需要)。传统的向组织注射遗传物质通过会导致较差的细胞摄取和低水平的蛋白表达(如果还有的话)。已经开发了多种方法，以改善递送，増加被导入组织中的遗传物质的表达。例如，研究人员已经开发出了电穿孔系统，以提高被注射入肌肉、器官和其他组织(參见比如美国专利第6，610，044号和美国专利第6，132，419号，这些专利的全部内容以引用的方式被明确结合在本说明书中)中的DNA和其他治疗性物质的摄取。电穿孔系统通常包含在注射点的周围和/或通过注射点的组织处导入DNA不久或同时应用电场。电场被用于使得细胞的壁足够可渗透，以使核酸大小的分子进入。电穿孔系统较为昂贵，并且需要相当多的训练才能执行，更不用说病人会发现该过程非常痛苦。电穿孔系统也不是很便于携帯。复杂的控制电路和对可靠外部电源的需要，使得这些系统不适于在外界环境中(例如，战场或发展中国家)或在需要快速DNA接种的情况下(例如，大流行的病毒爆发)应用。血管内的施用方法也已经被开发用于向动物递送治疗试剂(參见例如，美国专利第 6，379，966 ;6，897，068 ;7，015，040 ;7，214，369 ;7，473，419 ;和 7，589，059 号，所有这些专利的全部内容以引用的方式被明确结合到本说明书中)。血管内的施用很难在实际操作中执行；然而，需要熟练的临床医生，并且如果执行不正确的话，该程序可导致血管穿孔、血肿，以及出现内部血块，这会导致栓塞。此外，血管内的施用方法会导致被导入的治疗试剂(例如，核酸和蛋白)的广泛分布，这在试着促进身体对所递送的试剂建立免疫反应时是不希望的。因此，对于能够促进治疗性分子(例如核酸和蛋白)的递送和摄取的装置和方法仍然存在需要。

发明内容
本说明书公开了ー些装置和方法，用于向组织中递送治疗试剂(例如化学制品、化合物、化学治疗剂、蛋白、核酸，例如DNA、RNA、其他天然核酸、修饰的核酸，或DNA或核酸适体)，凭借所述装置和方法，所述试剂可被位于注射位点周围的组织细胞所摄取，所述试剂表达，以产生治疗性或美容性的益处。在其他的实施例中，本说明书中描述的ー种或多种针和/或装置被用于施用细胞群(例如，再生细胞、干细胞、祖细胞或其混合物)，以产生治疗性和/或美容性的益处。在这些实施例中，所述细胞被导入到有需要的受试者的组织(例如，乳房的脂肪组织、心、肾、骨、皮肤、脂肪组织、椎间盘)中，以促进产生治疗性或美容性的益处(例如，促进或完成乳房再造木，改善缺血性区域，修复退化的椎间盘，促进骨修复， 促进伤ロ愈合，或改善皮肤上的皱纹或痘痕)。因此，本发明的各方面涉及被设置为用于递送治疗试剂(例如细胞群，如包括干细胞的细胞群、化学制品、化合物、化学治疗剂、蛋白、核酸，例如DNA、RNA、其他天然核酸、修饰的核酸，或DNA或核酸适体)的针,其中所述针包括闭合或开ロ的端部，以及沿所述针的长度延伸的多个孔。所述针可以是钝形端部或可具有斜面的、削尖的或锋利的端部。所述针可被制成多种规格(例如，至少，等于或大于7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33 或 34 号)。优选地，所述针的规格大于或等于 20 号(例如，大于或等于 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33 或 34 号)，更加优选地，所述针的规格大于或等于23号(例如，23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33或34号)，最优选地，所述针的规格大于或等于25号(例如，25、26、27、28、29、30、31、32、33或34号)。在一些实施例中，所述孔并不位于或靠近于针尖。例如，所述孔可位于距针尖至少 1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm. 11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、2cm、3cm、4cm或更远处。在一些实施例中,所述针在针尖或靠近针尖处并不包括任何的孔。针的长度可根据需要递送的类型进行变化。为了靶向于皮肤或特定组织中的特定细胞上，比如说，优选的靶向深度取决于待被靶向的特定细胞或组织以及特定受试者皮肤的厚度(例如为了靶向于人类皮肤真皮处的朗格罕氏细胞，希望所述递送至少部分包含通常位于人类的从约0. 025mm到约0. 2mm之间深度的表皮组织)。因此，在其中需要递送到朗格罕氏细胞的实施例中，针的长度可位于约0. 025_到约0. 2_之间。在一些实施例中，希望将治疗试剂在角质层正下方且包含表皮和上层真皮处递送至靶向的深度(例如，在这些实施例中，优选的针的长度包括位于约0. 025mm到约2. 5mm之间)。在其他实施例中，治疗试剂被递送至肌肉组织或脂肪组织中(例如，在这些实施例中，优选的针的长度包括位于约0.5cm到约15cm之间是所希望的)。因此，本发明的方面涉及包含一个或多个针的装置及其用途，其中针的长度大于，等于，低于或位于如下之间的任何数字0. 025mm、0. 05mm、0. 075mm、0. 1mm、0. 2mm、0. 3mm、0. 4mm、0. 5mm、0. 6mm、0. 7mm、0. 8mm、0. 9mm、1mm、5mm、10mm、I5mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm、55mm、60mm、65mm、70mm、75mm、80mm、85mm、90mm、95mm、100mm、125mm、150mm、I75mm、200mm、225mm、250mm、275mm、300mm、325mm、350mm、375mm、400mm、425mm、450mm、475mm、500mm、525mm、550mm、575mm、600mm、625mm、650mm、675mm、700mm、725mm、750mm、775mm、800mm、825mm、850mm、875mm、900mm、925mm、950mm、975mm、1cm、L 25cm、L 5cm、2. 0cm、2. 25cm、2. 5cm、2. 75cm、3. 0cm、3. 25cm、3. 5cm、3. 75cm、
4.0cm、4. 25cm、4. 5cm、4.75cm、5. 0cm、5. 25cm、5. 5cm、5. 75cm、6. 0cm、6. 25cm、6. 5cm、
6.75cm、7. 0cm、7. 25cm、7. 5cm、7. 75cm、8. 0cm、8. 25cm、8. 5cm、8. 75cm、9. 0cm、9. 25cm、9.5cm、9.75cm、10.0cm、10.25cm、10. 5cm、10. 75cm、11. 0cm、11. 25cm、11. 5cm、11. 75cm、12. 0cm、12. 25cm、12. 5cm、12. 75cm、13. 0cm、13. 25cm、13. 5cm、13. 75cm、14. 0cm、15. 25cm、14.5cm、14. 75cm 或 15cm。针可包括具有多种大小与形状(例如，椭圆形、圆形、长条形或卵形的形状)的多个孔，可通过机械切割或激光而制成。针可包括，比如说，大于或等于2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14或15个孔，所述孔可沿所述针的长度均匀间隔开，集合于ー个区域(例如，间隔于所述针的第一或第二区，比如说，其中所述两个区由所述针的长度的中点处相对的两个侧部所区分，或所述孔可沿所述针的长度间隔)，或沿所述针的长度不均匀地间隔开。所述针可具有闭合或开ロ的端部，但闭合的端部是优选的，这样的设计可在使用小孔径的孔(例如，在其最宽处的尺寸等于或低于0. 01,0. 02,0. 03,0. 04,0. 05,0. 06,0. 07,0. 08、0. 09、0. 1、0. 15、0. 2、0. 25、0. 3、0. 35、0. 4、0. 45、0. 5、0. 55、0. 6、0. 65、0. 7、0. 75、0. 8、0. 85、
0.9,0. 95,1. Omm)时增加递送的压力。所述针可由外科钢或不锈钢或金属合金所组成(例如,基本上至少由约52%的镍和至少约48%的钛组成)。所述针也可包括适配连接器或针头接ロ，其可包括含内螺纹的套管。所述适配连接器或针头接ロ被设置为将所述针附接到含待导入的试剂的注射器或导管上。在ー些实施例中，所述套管构成了附接器件，可被拧紧到位于注射器的附接部分的外部螺纹上。所述适配连接器或针头接ロ也可包括压上组件、可脱卸组件或鲁尔接ロ连接器(Luer Taperconnection),例如旋锁接ロ(Luer Lok)或滑锁接ロ(Luer Slip)连接器或蝴蝶连接器。上述针可被附接于ー个或多个注射器针筒上(例如，永久地固定或可移除地附接)，所述注射器针头或所述装置可包含待递送的治疗试剂(例如，所述针和附接上的注射器可以是预先装载治疗试剂的，例如一次性使用的核酸、蛋白或细胞群)。所述注射器针筒可以具有各种大小(例如，0.3CC-100CC或更多)。即所述注射器针筒可以大于或等于或位于 0. 1,0. 3,0. 4,0. 5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或IOOcc尺寸之间的任意数字。所述注射器针筒可以用多种材料(例如，金属、塑料、尼龙、聚こ纟布、玻璃)制作而成。上述针可被附接到帮助将治疗性分子或试剂递送到组织中的ー个或多个装置上，包括但不限于基因枪、电穿孔系统和显微针装置。可以对在本说明书中描述的注射针进行修饰，以与现有的技术使用，所述现有技术包括基因枪递送系统(參见例如美国专利第5，036，006号；5，240，855号；和5，702，384号，这些专利公开的全部内容因此以引用的方式被明确结合)，应用电穿孔的递送系统(參见例如美国专利第6，610，044和5，273，525号，这些专利所公开的全部内容因此以引用的方式被明确结合)和显微针递送系统(參见例如美国专利第 6，960，193 号；6，623，457 号；6，334，856 号；5，457，041 号；5，527，288 号；5，697，901号;6，440，096号;6，743，211号；和7，226，439号，这些专利公开的全部内容因此以引用的方式被明确结合)。如上所述，包括在本说明书中描述的针的所述注射器也可包含多种治疗试剂(例如细胞群，如包括干细胞的细胞群、化学制品、化合物、化学治疗剂、蛋白、核酸，例如DNA、RNA、其他天然核酸、修饰的核酸。或DNA或核酸适体)。在一些实施例中，包括一个或多个在本说明书中描述的针的注射器包括编码免疫原(优选为病毒抗原，例如丙型肝炎病毒(HCV)、こ型肝炎病毒(HBV)、人类免疫缺陷性病毒(HIV)、流感病毒、日本脑炎病毒(JEV)、人乳头瘤病毒(HPV)，或寄生虫抗原，例如疟疾抗原，或植物抗原，例如桦树抗原，或细菌抗原，例如葡萄球菌或炭疽抗原，或肿瘤抗原)的DNA。在一些实施例中，包括一个或多个在本说明书中描述的针的注射器包括ー个或多个上述的预装载的DNA(例如，预装载的，与含测量剂量的递送试剂的针偶联的一次性使用的注射器)。
在一些实施例中，在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂包括天然核酸，在其他实施例中，在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的所述治疗试剂包括非天然核酸(例如，包含人造核苷酸或间隔区)。可用作治疗试剂，在如本说明书所描述的注射器或注射装置中递送或包含的天然核酸包括脱氧核糖或核糖磷酸骨架。可用作治疗试剂，在如本说明书所描述的注射器、针或注射装置中递送或包含的人造或合成的多核苷酸包括在体外或在无细胞系统中聚合的任何多核苷酸，包含相同或相似的碱基，但可以包含非天然核糖磷酸骨架的类型的骨架。这些骨架包括PNAs(肽核酸)、硫代磷酸、磷酰ニ胺、吗啉代，以及其他天然核酸的磷酸骨架的变体。可被归入在本说明书中描述的ー个或多个实施例的碱基包括嘌呤和嘧啶，进一歩包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷和天然的类似物。可被归入在本说明书中描述的一个或多个实施例的合成的嘌呤和嘧啶衍生物包括(但不局限干)设置新的反应基团(例如但不局限于胺、醇、硫醇、羧酸和卤代烷)的修饰。在本说明书中使用的术语“碱基”，包括任何已知的DNA和RNA的碱基类似物，包括但不限于4-こ酰胞嘧啶、8-羟基-N6-甲基腺苷、吖丙啶基胞嘧啶、假异胞嘧啶、5_(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羰基甲基氨甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基-氨甲基尿嘧啶、ニ氢尿嘧啶、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、I-甲基腺嘌呤、I-甲基假-尿嘧啶、I-甲基鸟嘌呤、I-甲基肌苷、2，2_ ニ甲基-鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基-胞嘧啶、5-甲胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧-氨基-甲基-2-硫尿嘧啶、P-D-甘露糖Q核苷(@-D-mannosylqueosine)、5'-甲氧羰基甲基尿卩密唳、5-甲氧基尿卩密唳、2-甲硫基-N6-异戍烯基腺嘌呤、尿卩密唳-5-轻こ酸甲基酯、尿卩密唳-5-轻こ酸、oxybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷(queosine)、2_巯基胞嘧啶、5-甲基_2_硫尿嘧啶、2_硫尿嘧啶、4_硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧唆、N-尿嘧啶-5-羟こ酸甲基酷、尿嘧啶-5-羟こ酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-巯基胞嘧啶和2，6-ニ氨基嘌呤。术语多核苷酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)和DNA、RNA和其他天然的和合成的核苷酸的结合物。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂可以包括DNA，其可能的形式有cDNA、体外聚合DNA、质粒DNA、质粒DNA的部分、源自病毒的遗传物质、线性DNA、载体(PI、PAC、BAC、YAC、人工染色体)、表达盒、嵌合序列、重组DNA、染色体DNA、寡核苷酸、反义DNA或这些组的衍生物。RNA可能的形式为寡核苷酸RNA、tRNA (转移RNA)、snRNA (核小RNA)、rRNA (核糖体RNA)、mRNA (信使RNA)、体外聚合RNA、重组体RNA、嵌合序列、反义RNA、siRNA(小型干扰RNA)、核糖酶或这些组的衍生物。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂也可包括反义多核苷酸，一种干扰DNA和/或RNA功能的多核苷酸。反义多核苷酸包括但不局限于吗啉代、2' -O-甲基多核苷酸、DNA、RNA等等。siRNA包括通常包含15到50个碱基对，优选为21到25个碱基对的双链结构，具有与细胞内的表达靶基因或RNA相同或几乎相同的核苷酸序列。干扰可能会导致抑制表达。所述多核苷酸可以是ー种序列，它在细胞中的存在或表达会改变细胞内基因或RNA的表达或功能。另外，DNA和RNA可以是单链、双链、三链或四链的。双链、三链和四链的多核苷酸可以包含RNA和DNA 二者或其他天然的和/或合成的核酸的组合物。这些多核苷酸可被递送到细胞中表达外源性核苷酸序列，抑制、消除、増加或改变内源性核苷酸序列的表达，或者表达与细胞不天然相连的特殊的生理特征。多核苷酸可以被编码以表达整个或部 分的蛋白，或者可以为反义。除内源性遗传物质之外，所述递送的多核苷酸可以停留在细胞质或细胞核内。或者，所述聚合物可以再结合(成为其一部分)内源性遗传物质。例如，在如本说明书中描述的注射器或注射装置中递送或容纳的治疗试剂可以包括能够通过同源或非同源重组，将其本身嵌入染色体DNA中的DNA。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂也可包括RNA抑制剂，所述RNA抑制剂是包含ー种序列的任何的核酸或核酸类似物，所述序列在细胞中的存在或表达会以序列特异性的方式引起特定的细胞RNA，通常是mRNA的降解或抑制其功能或翻译。RNA抑制剂也可抑制基因转录为RNA。RNA的抑制可有效地抑制RNA转录的基因的表达。RNA抑制剂包括但不局限于siRNA、干扰RNA或RNAi、双链RNA、RNA聚合酶III转录的DNA、核糖酶，和反义核酸，其可以为RNA、DNA或人造核酸。siRNA能通常包含15到50个碱基对，优选为21到25个碱基对的双链结构，具有与细胞内的表达靶基因或RNA相同或几乎相同的核苷酸序列。反义多核苷酸能包括但不局限于吗啉代、2' -0-甲基多核苷酸、DNA、RNA等等。RNA聚合酶III转录的DNA可包括启动子，例如U6启动子。这些DNA可在细胞中转录生成起siRNA作用的小型发夹RNA或起反义RNA作用的线性RNA。所述RNA抑制剂可以为在体外聚合，重组体RNA，包含嵌合序列或这些组的衍生物。所述RNA抑制剂可以包括核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、合成的核苷酸，或任何合适的使靶RNA和/或基因被抑制的组合。另外，这些形式的核酸可以是单链、双链、三链或四链的。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂也可包括结合到载体(例如，表达载体)中的核酸。载体为起源于病毒、质粒或高等有机体的细胞、能够与合适大小的另ー种核酸片段整合的多核苷酸分子；载体通常将外源DNA导入到寄主细胞中，并在宿主细胞中进行复制。示例包括质粒、粘粒和酵母人工染色体；载体通常为包含多个来源的DNA序列的重组体分子。载体包括病毒载体例如，腺病毒；DNA ;源自腺病毒相关病毒且比腺病毒小的腺伴随病毒载体(AAV);和逆转录病毒(任何处于逆转录病毒家族、具有RNA作为其核酸、使用逆转录酶将其基因组复制进入寄主细胞的染色体DNA的任何病毒；不例包括VSV G和包括含HIV类型病毒的慢病毒属的部分的逆转录病毒)。在本说明书中使用的术语“载体”指的是可以包括将DNA序列转移进入细胞中进行表达的相关分子的任何DNA分子。示例包括裸DNA、非病毒DNA复合体(例如DNA加聚合物[阳离子或阴离子的]、DNA加转染增强化合物，以及DNA加两性分子团化合物)和病毒颗粒。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂也可包括可提高所述治疗试剂(例如，在本说明书中描述的核酸)摄取的ー种或多种化合物。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂可包括聚合物，例如，由称为单体的更小单元重复结合在ー块形成的分子。术语“聚合物”可包括两个寡聚物，这两个寡聚物为具有两个到约80个单体和具有多于80个单体的聚合物。所述聚合物可以是线形、分支网络状、星形、梳状或梯状的聚合物。所述聚合物可以是同聚物，在其中使用ー种的単体，或者可以是共聚物，在其中使用两种或更多种単体。共聚物的种类包括交替、无归、嵌段和接枝。在如本说明书中描述的注射器、针或注射装置中递送或容纳的治疗试剂也可包括 核酸-聚阳离子复合体。阳离子蛋白样组蛋白和鱼精蛋白或合成的聚合物样聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸、DEAE葡聚糖、聚凝胺和聚こ烯亚胺均是有效的细胞内递送剂。聚阳离子为含净正电荷的聚合物，例如聚-L-氢溴赖氨酸。所述聚阳离子可包括为正电荷、中性电荷或负电荷的单体单元，然而，所述聚合物的净电荷优选为正的。术语“聚阳离子”也可指包括两个或更多个正电荷的非聚合分子。聚阴离子为含净负电荷的聚合物，例如多聚谷氨酸。所述聚阴离子可包括为负电荷、中性电荷或正电荷的单体单元，然而，所述聚合物上的净电荷必须是负的。术语“聚阴离子”也可指包括两个或更多个负电荷的非聚合分子。术语“聚离子”包括聚阳离子、聚阴离子、两性离子聚合物，以及包括等量的阴离子和阳离子的中性聚合物。术语“两性离子”指的是在属于相同分子的一部分的酸性基团和碱性基团之间反应的产物(盐)。盐为离子化合物，当溶解在溶液中时，会电离成阳离子和阴离子。盐增加了溶液的离子强度，因此减少了在核酸和其他阳离子之间的相互作用。因此，一些实施例涉及到包括多个上述针的装置，这些针被安排或被设置为向靶组织递送治疗试剂。本发明的方面涉及到包括多个任意的上述针的针筒的注射装置，例如，每个针的针筒包括多个孔，这些孔沿所述针的长度延伸，或者位于所述针和与之连接的含试剂(例如细胞群，如含干细胞的细胞群、化学制品、化合物、化学治疗剂、蛋白、核酸，例如DNA、RNA、其他天然核酸、修饰的核酸或DNA或核酸适体)的装置的不同的区域内。在ー些实施例中，所述试剂通过所述注射装置的近端，由注射器进行递送，所述试剂通过设置在所述针的针筒末端上的多个孔被递送到靶组织中。在其他实施例中，所述孔的端部可被设置在所述针的针筒的近端上。优选地，在注射装置上设置具有ー个或多个上述结构特点的多个针。在本说明书中描述的实施例也包括插管，所述插管包括按照如上所述配置的多个针。即，在一些实施例中，所述注射装置和/或插管可包括2、3、4、5、6、7、8、9或10根针，由2、3、4、5、6、7、8、9或10根针组成，或基本由2、3、4、5、6、7、8、9或10根针组成。所述针可以是相同大小和长度，或可以具有不同的大小和长度。具有多于ー根针的实施例中的每根针可具有多个孔，可位于如上所述的第一或第二区，或者位于这两个区(例如，沿所述带的长度)。包括2、3、4、5、
6、7、8、9 或 10 根针，由 2、3、4、5、6、7、8、9 或 10 根针组成，或基本由 2、3、4、5、6、7、8、9 或 10根针组成的注射装置和/或插管可被设置为使得至少两根针具有不同数量的孔和/或不同尺寸的孔和/或不同形状的孔和/或不同位置的孔。即，在一些实施例中，一根针或多根针在靠近所述针筒的封闭端的第一区具有孔，一根针或多根针在远离所述针的针筒的封闭端的第二区具有孔。另外，一些实施例可以具有比第二根针或第二多根针更小或基本上更小的第一根针或第一多根针(例如，在其最宽处等于，大于或低于0. 01,0. 02,0. 03,0. 04、0. 05、0. 06、0. 07、0. 08、0. 09、0. 1、0. 15、0. 2、0. 25、0. 3、0. 35、0. 4、0. 45、0. 5、0. 55、0. 6、
0.65.0. 7.0. 75.0. 8.0. 85.0. 9.0. 95、I. O、I. 05、I. 10、I. 15、I. 20、I. 25、I. 30、I. 35、I. 40、
1.45、I. 50、I. 55、I. 60、I. 65、I. 70、I. 75、I. 80、I. 85、I. 90、I. 95.2. 0、2. 05.2. 10.2. 15、
2.20、2. 25、2. 30、2. 35、2. 40、2. 45、2. 50、2. 55、2. 60、2. 65、2. 70、2. 75、2. 80、2. 85、2. 90、 2.95、3. 0、3. 05、3. 10、3. 15、3. 20、3. 25、3. 30、3. 35、3. 40、3. 45、3. 50、3. 55、3. 60、3. 65、
3.70.3. 75.3. 80.3. 85.3. 90.3. 95 或 4. Omm 的尺寸)。更多的实施例涉及到如上所述的包含或包括含如在本说明书中描述的试剂(例如，药用化合物、化学制品、核酸，特别是DNA)的流体的注射装置、插管和针。在一些实施例中，在本说明书中描述的注射装置、插管和针为一次性使用的。即，有些实施例包括在本说明书中描述的与容器(优选为无菌容器，例如灭菌的注射器)连接的ー种或多种针的设计，所述容器包括单次应用或剂量的递送试剂(例如，药用化合物、化学制品、核酸，特别是DNA)。因此，单次的应用或装置可被方便地进行包装并提供给医师或最終用户(例如受试者)，他们可在合适的位置施用所述试剂，在施用后，可以适当地丢掉使用过的包括多根针的注射装置、针或插管。制造和使用上述装置的方法，例如，诱导对所希望的抗原的免疫应答的方法，也同样得以体现。在一些实施例中，所述针装置并未设置为在组织周围和/或通过注射位点导入治疗性物质(例如DNA)之后不久或同时利用电场。例如，所述针装置可不包括与所述装置偶联的电压电源，并被设置为在注射位点处或附近向组织施加电场。一些在本说明书中公开的实施例包括向有需要的受试者递送治疗性物质的方法，其中所述治疗性物质使用在本说明书中公开的任何注射装置进行施用。所述治疗性物质可以是在本说明书中公开的任何物质。在一些实施例中，所述方法包括以预设的速率递送所述治疗性物质。在一些实施例中，所述预设的速率可以至少为0. lmL/s、0. 3mL/s、0. 5mL/s、0. 8mL/s、0. 9mL/s> I. OmL/ s、I. ImL/s> I. 2mL/s> I. 3mL/ s> I. 4mL/ s、I. 5mL/s、2. OmL/s 或
3.OmL/s。在一些实施例中，所述预设的速率可不超过20. 0mL/s> 10. 0mL/s、7mL/s、6mL/s、5mL/S、4mL/S、3mL/S或2mL/s。在一些实施例中，所述方法也可包括在注射完治疗性物质后但在抽回所述ー根或多根针之前，维持插入所述组织中的一根或多根针至少预设的时间。在注射所述治疗性物质后但在抽回所述ー根或多根针之前，所述ー根或多根针可在组织中维持，例如，至少大于或等于ls、2s、3s、4s、5s或更长时间。在一些实施例中，在本说明书中描述的所述针和任何所述装置可被固定到受试者的身体上更长的时间，使得可以长期递送治疗试剂(例如至少递送大于或等于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天)，并且所述的针和装置可被固定到微型泵上，以便在延长的期间内向所述受试者施用少量的治疗性物质(例如细胞群，如包括干细胞的细胞群、化学制品、化合物、化学治疗剂、蛋白、核酸，例如DNA、RNA、其他天然核酸、修饰的核酸、或DNA或核酸适体)。本发明的优选方面涉及到含针的皮下注射针组件，所述针包括适于治疗性物质通过的腔道，以及针的针筒，所述针的针筒在所述针筒的长度上包括多个孔，其中所述针的针筒具有封闭端；皮下注射针组件还包括连接器，所述连接器被设置为将所述针连接到压カ产生元件上。在一些实施例中，上述的皮下注射针组件包括多根所述的针，在一些实施例中，所述皮下注射针组件包括圆形、菱形或卵形排列的所述的针。优选地，所述皮下注射针组件被设计为多根所述的针被设置为位于所述针的针筒上的孔彼此面对，但在一些实施例中，所述皮下注射针组件具有多根所述的针，被设置为位于所述针的针筒上的孔彼此背离。在一些实施例中，所述皮下注射针组件进ー步包括与所述皮下注射针组件连接的压カ产生元件，所述压カ产生元件可以是注射器。上述的皮下注射针组件可具有直径约为10nm-4mm、0. 01mm-4mm>0. lmm-4mm>I. 0mm-4mm>I. 5mm-4mm>2. 0mm-4mm 或 3. 0mm-4mm 的子し。在一些实施例中，上述皮下注射针组件包括与至少三根所述针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述至少三根所述针相距在大约2和约IOmm之间。在其他实施例中，上述皮下注射针组件可包括与至少四根皮下注射针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述皮下注射针组件具有至少四根皮下注射针，相距在约3和约6_之间。一次性使用的皮下递送装置也同样是ー个实施例，这种装置优选包括多根附接于至少ー个注射器上的针，其中所述针包括沿所述针的针筒分布的多个孔以及一个封闭端；所述至少ー个注射器 包括单次剂量的治疗试剂。在一些实施例中，所述皮下递送装置中的所述治疗试剂为核酸。所述治疗试剂可以是编码蛋白的DNA。在一些实施例中，上述皮下递送装置包括与至少三根皮下注射针连接的单个注射器，在一些实施例中，所述至少三根皮下注射针相距位于约2和约IOmm之间。在其他实施例中，上述皮下递送装置包括与至少四根针连接的单个注射器，在一些实施例中，所述至少四根皮下注射针相距位于约3和约6_之间。本发明的方面也涉及制造和使用上述装置的方法。通过ー种方法，在本说明书中描述的有些装置被用于向受试者递送治疗试剂，所述方法的实践方式为提供在本说明书中描述的ー种递送装置，将所述装置的针插入受试者的组织中，然后将所述治疗试剂从注射器中推动，通过所述针进入组织中。在一些实施例中，所述治疗试剂为核酸，所述核酸可以编码抗原，例如病毒抗原，优选为肝炎抗原，如HCV或HBV抗原，使得在本说明书中描述的ー些递送装置可用于在受试者中诱导针对由所述的装置递送的抗原的免疫应答的目的。其他的实施例包括用于向组织中递送治疗性物质的皮下针形装置，所述装置包括与压カ产生元件的连接器；适于治疗性物质通过的腔道；以及针的针筒，其中所述针的针筒包括沿所述针筒的长度延伸的多个孔。在一些实施例中，所述治疗性物质包括核酸、多肽、糖类、类固醇、细胞群、化学制品或免疫原。在一些实施例中，所述治疗试剂诱导免疫系统。所述组织可以是骨骼肌、皮肤组织或脂肪组织，举例来说。优选地，所述压カ产生元件包括注射器，所述压カ产生元件可以向组织中传送0. I千帕或更大、I. 0千帕或更大、10千帕或更大、100千帕或更大、150千帕或更大或200千帕或更大的压力。在一些实施例中，所述沿所述针的针筒的孔直径约为 10nm-4mm、0. 01mm-4mm>0.I. 0mm-4mm>I. 5mm-4mm>
2.或3. 0mm-4mm。所述针的针筒可适于传送电流,所述装置可进ー步包括适于传送电磁场的电极。在一些实施例中，所述治疗试剂进入细胞，在其他实施例中，所述治疗试剂保留在细胞外。在一些实施例中，使用液体介质或气体介质传递压力。在一些实施例中，所述核酸包括源自肝炎病毒，如こ型肝炎抗原(HBV)，例如HBcAg，或丙型肝炎病毒(HCV)抗原，例如NS3/4A，或其组合，如源自感染了鹳或苍鹭的HBV病毒的与NS3/4A连接的HBcAg的序列。在其他实施例中，所述核酸包括源自人猿病毒抗原的序列。优选地，所述核酸包括编码能够生成増殖性T细胞应答的抗原的序列，在一些实施例中，所述核酸包括源自人类免疫缺陷性病毒的序列。其他的实施例包括，用于向组织中递送治疗性物质的含治疗性物质压カ产生元件的皮下注射针系统；与所述压力产生元件偶联的ー排针的针筒；其中在该排列中的至少ー个所述针的针筒包括多个孔，所述孔适于将从所述压カ产生元件传递来的压カ传递进入组织中，増加细胞膜的透过性，并且在该排列中的至少ー个所述针的针筒适于所述治疗性物质的通过。在一些实施例中，所述治疗性物质包括核酸、多肽、糖类、类固醇、细胞群、化学制品或免疫原。在一些实施例中，所述治疗试剂诱导免疫系统。所述组织可以是骨骼肌、皮肤组织或脂肪组织，举例来说。优选地，所述压カ产生元件包括注射器，所述压カ产生元件可以向组织中传送0. I千帕或更大、I. 0千帕或更大、10千帕或更大、100千帕或更大、150千帕或更大或200千帕或更大的压力。在一些实施例中，所述沿所述针的针筒的孔直径约为10nm_4mm、0. 01mm-4mm>0.I. 0mm-4mm> I. 5mm-4mm>2. 0mm-4mm 或 3. 0mm-4mmn 所述针的针筒可适于传送电流，所述装置可进ー步包括适于传送电磁场的电极。在一些实施例中，所述治疗试剂进入细胞，在其他实施例中，所述治疗试剂保留在细胞外。在一些实施例中，使用液体介质或气体介质传递压カ。在一些实施例中，所述核酸包括源自肝炎病毒，如 こ型肝炎抗原(HBV)，例如HBcAg，或丙型肝炎病毒(HCV)抗原，例如NS3/4A，或其组合，如源自感染了鹳或苍鹭的HBV病毒的与NS3/4A连接的HBcAg的序列。在其他实施例中，所述核酸包括源自人猿病毒抗原的序列。优选地，所述核酸包括编码能够生成増殖性T细胞应答的抗原的序列，在一些实施例中，所述核酸包括源自人类免疫缺陷性病毒的序列。更多的实施例，包括具有纵向轴的皮下注射装置，所述装置包括被设置为与增压流体源啮合的连接器；以及针组件，所述针组件包括在与所述装置的纵向轴基本上平行的方向上从所述连接器延伸的套筒，所述套筒包括与所述连接器不固定连接的第一腔道，在与所述装置的纵向轴基本上平行的方向上从所述套筒处延伸的第一针的针筒，所述第一针的针筒包括与所述套筒不固定地连接的第二腔道和与所述第二腔道不固定地连接的至少一个孔，以及在与所述装置的纵向轴基本上平行的方向上从所述套筒处延伸的第二针的针筒，所述第二针的针筒包括与所述套筒不固定地连接的第三腔道和与所述第三腔道不固定地连接的至少ー个孔。在一些实施例中，所述第一针的针筒和所述第二针的针筒在其之间形成了注射腔空间。在其他实施例中，所述注射腔空间被设置为容纳受试者的至少一部分。在一些实施例中，所述第一针的针筒和第二针的针筒每个均包括相同数量的孔。在ー些实施例中，位于所述第一针的针筒上的每个孔均朝向位于所述第二针的针筒上的一个孔。在一些实施例中，所述第一针的针筒和所述第二针的针筒包括设置在相对于所述套筒处的削尖末梢端。在一些实施例中，所述孔一般为曲线形的。在一些实施例中，所述孔一般为多边形的。在一些实施例中，所述孔沿与所述装置的纵向轴基本上平行的线段均匀地设置。在一些实施例中，第三针的针筒在与所述装置的纵向轴基本上平行的方向上从所述套筒处延イ申，所述第三针的针筒包括与所述套筒不固定地连接的第四腔道和与所述第四腔道不固定地连接的至少ー个孔。在一些实施例中，至少ー个孔被设置为向所述注射腔空间施加负压。进ー步的实施例涉及到向受试者递送治疗试剂的注射装置，所述装置具有纵向轴，包括与所述装置的所述纵向轴基本上平行设置的多个注射器，每个注射器包括一根针，所述针沿所述针的长度上设置了多个孔，其中所述孔朝向所述装置的所述纵向轴。在这些实施例中，所述至少ー个注射器包括含基因的治疗试剂。在一些实施例中，每根针包括端部，多根针的所述端部设置在位于基本上与所述装置的所述纵向轴垂直的平面上。其他的实施例包括皮下注射针，所述皮下注射针包括沿所述针的所述针筒设置的多个孔，其中所述针的端部闭合。在一些实施例中，所述的封闭端为钝形的。在一些实施例中，所述组件进一歩包括附接于所述针上的注射器。在一些实施例中，所述的注射器包括治疗试剂，所述治疗试剂可以是核酸，例如编码蛋白的DNA。本发明的进ー步方面涉及到包含多个皮下注射针的注射装置，所述皮下注射针包括沿与ー个或多个注射器连接的所述针的所述针筒设置的多个孔。优选地，所述针的端部闭合。在一些实施例中，所述针的端部为钝形的。在ー些实施例中，所述注射器包括治疗试剂，例如编码蛋白的DNA。在一些实施例中，上述注射装置包括与至少三根皮下注射针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述至少三根皮下注射针相距在大约2和约IOmm之间。在一些实施例中，所述装置包括与至少四根皮下注射针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述至少四根皮下注射针相距在大约3和约6_之间。其它的实施例涉及到包括附接到至少ー个注射器上的多根针的一次性使用的皮下递送装置，其中所述针包括沿所述针的所述针筒设置的多个孔，所述至少ー个注射器包括单次剂量的治疗试剂。在一些实施例中，所述针的端部闭合。在一些实施例中，所述针的端部为钝形 的。在一些实施例中，所述治疗试剂为核酸。在一些实施例中，所述核酸为编码蛋白的DNA。在一些实施例中，所述装置包括与至少三根皮下注射针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述至少三根皮下注射针相距在大约2和约IOmm之间。在一些实施例中，所述装置包括与至少四根针连接的单个注射器。在一些实施例中，所述至少四根皮下注射针相距在大约3和约6mm之间。使用上述装置中的任何ー种或多种的方法也同样具体列出，包括向细胞中递送核酸的方法，所述方法包括提供根据权利要求93-101中任一项所述的注射装置，其中所述装置包括含核酸的注射器；将所述装置的所述针插入受试者的组织中；将所述核酸从所述注射器中，通过所述针推入处于诱导由所述组织中的细胞摄取所述核酸的状态下的组织中。在一些实施例中，所述核酸为编码蛋白的DNA。在一些实施例中，所述DNA编码病毒抗原。在一些实施例中，所述病毒抗原为HCV或HBV抗原。此外,在一些实施例中，使用HBcAg或其片段或编码HBcAg或其片段的核酸作为佐剂。通过ー些方法，所述HBcAg或其片段或编码HBcAg或其片段的核酸为从由SEQ. ID NOs 1_32所组成的组中挑选而出的序列。提高针对ー种抗原的免疫应答的方法也同样为ー个实施例，所述方法可包括在向受试者提供HBcAg或其片段或编码HBcAg或其片段的核酸时混合或其不久之后向所述受试者提供所述抗原或编码所述抗原的核酸。在ー些方法中，所述HBcAg或其片段或编码HBcAg或其片段的核酸为从由SEQ. ID NOs 1-32所组成的组中挑选而出的序列。在ー些方法中，所述DNA编码NS3/4A和/或HBcAg (例如，源自感染了鹳和苍鹭的病毒的HBcAg)。


图IA示出了含两个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个针筒具有5个孔，用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图IB示出了含四个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，所述针筒用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图IC为皮下针装置的一个实施例的图像，示出了在装配前的ー些零件。
图ID为皮下针装置的一个实施例的图像，示出了ー些零件，包括与含螺纹的接ロ连接器相啮合的接ロ。图IE为皮下针装置的一个实施例的图像，示出了位于本申请范围内的一些装配好的零件。图IF为与注射器相连接的位于本申请范围内的皮下针装置的一个实施例的图
像。 图IG为可在本说明书中公布的注射装置上使用的含四个斜边的“quadcar”尖端的图像。图2A示出了含两个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个所述针筒具有三个孔，用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图2B示出了皮下针的ー个实施例，在每个所述针上以相同的间距设有五个孔。图2C示出了含三个针的皮下针的ー个实施例，示出了有些尺寸可根据本申请的教导进行了改进。图2D示出了含四个交错设置的针的皮下针的ー个实施例。图3示出了含两个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个针筒具有10个孔，用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图4示出了向受试者的肌细胞中递送包括DNA的治疗试剂的皮下针装置的ー个实施例的侧视图。图5A示出了含三个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个所述针筒具有3个孔，用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图5B为图5A的皮下针装置的俯视图。图5C示出了含三个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图,姆个针筒具有5个孔，用于在所述针筒之间的区域处递送治疗试剂。图示出了向受试者的组织递送治疗试剂的图5C的皮下针装置的立体图。图6A示出了含两个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个所述针筒以相对于所述装置的纵向轴的角度进行设置。图6B示出了含两个针筒和一个连接器配件的皮下针装置的一个实施例的立体图。图6C为图6B的皮下针装置的俯视图。图7A示出了含六个针筒的皮下针装置的一个实施例的立体图，每个针筒具有多个孔，用于向受试者的组织处递送治疗试剂。图7B为图7A的皮下针装置的俯视图。图8A示出了含四个针筒的皮下针装置的一个实施例的侧视图，每个针筒具有多个孔，用于向受试者的组织处递送治疗试剂。图8B为图8A的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图8C为图8A的皮下针装置的一个实施例的另ー俯视图。图9为含有四个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图10为含有七个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图11为含有十个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。
图12为含有三个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图13为含有三个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图14为含有四个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图15为含有四个针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图16为含有环状针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图17为含有环状针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图18为含有环状针筒的皮下针装置的一个实施例的俯视图。图19为含单个腔的针筒的一个实施例的剖开图。
图20为含两个腔的针筒的一个实施例的剖开图。图21为一幅图，示出了用HIP注射器免疫而导致的HCV NS3特异性的T细胞增殖情况。増殖可通过用抗原孵育的细胞的放射性除以仅用培养基孵育的细胞的放射性而进行測量。图22A-C为用常规的27号针(图22A)、小号的HIP注射器(图22B)和大号的HIP注射器(图22C)在注射位点处组织的组织学评价。图23A-B为小号的HIP注射器(图23A)和大号的HIP注射器(图23B)的图示。图24为在T细胞增殖试验中，将细胞与不同浓度的各种抗原孵育时，每分钟计数的细胞放射性显示放射性胸苷的摄入的图示。图25A-25I示出了包含NS3/4A平台的各种构建体和含NS3蛋白酶切割位点的HBcAg0图26A-B为用于測量使用本发明公开的注射针装置之ー进行注射物质时所需要的力的装置的示例。图27A-F为显示向鸡胸注射染色水(died water)的试验7_9的俯视图和截面图。图28A-F为显示向鸡胸注射染色水的试验25_27的俯视图和截面图。图29A-F为显示向鸡胸注射染色水的试验16-18的俯视图和截面图。图30A-F为显示向鸡胸注射染色水的试验34-36的俯视图和截面图。图31A-F为使用处于本申请范围内的注射针，手动注射染色水的鸡胸的俯视图和截面图。图32A-F为使用单个针，手动注射染色水的鸡胸的俯视图和截面图。图33A-D为与本申请的注射针装置配套使用的弹簧驱动的递送装置的一个实施例的立体图和侧视图。图34A-D为与本申请的注射针装置配套使用的触发装置的一个实施例的立体图和侧视图。图35A-D为本申请的针装置的接ロ设计的ー个示例。
具体实施例方式在本说明书中描述的本发明的方面涉及到向活体组织递送试剂(比如核酸)的装置和方法。有些实施例涉及到用于向靶组织导入试剂(例如核酸，尤其是DNA)的注射装置，其中这些分子被位于靠近注射位点或注射位点附近处的区域中的细胞所摄取。在图IA中示出了本说明书中描述的针的一个实施例。所述针的末梢端可以是钝形、斜面形、锥形、削尖或点状，使得操作者可穿透受试者(例如，人，家养动物，例如猫或狗，或牲ロ，如马、母牛、猪或鸡)的皮肤，以到达位于下面的所希望的靶组织。例如，端部105a，105b可包括常规的医疗点(例如，“手术刀点”)。或者，端部105a，105b可以是钝的。在一些实施例中，所述针的末梢端闭合，使得端部不能够在针筒的腔部和针体的末端之间形成流体连接。在其他实施例中，所述末梢端是打开的，使得端部在针筒和针的末端之间建立流体连接。在优选实施例中，所述针筒包括孔(例如110a，110b)，沿所述针筒的长度设置。每个针筒可包括0到100个孔。在一些实施例中,所述针沿所述针的长度具有I或2个孔(例如，闭合端部的针沿所述针的长度具有至少两个孔)。在其他实施例中，所述针有许多孔，可以准确是，低于，或大于 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个。所述孔可位于靠近针筒的末端处或沿所述针筒长度的任何地方。每个针筒上的孔每个可设置在与纵向轴基本平行的平面上。所述孔也可被设置在沿基本上与所述装置的纵向轴平行且朝向纵向轴的线段处。在其他实施例中，所述孔可被设置在并非基本与所述装置的纵向轴平行的ー个或多个平面上。每个孔可朝向同一个点，例如，位于ー个基本上与所述纵向轴平行的轴上的点，或者每个孔可朝向不同的点或方向。所述孔在尺寸和形状上可有所变化。例如，孔可以是圆形、圆、总体为曲线、正方形、矩形、三角形、总体为多边形、总体上为对称、总体上不对称或不规则形状的。另外，所述孔在每个针筒内的尺寸和形状均可有所变化。例如，在一个实施例中，针筒上的第一孔可以是总体上为曲线的，其直径约1_，所述针筒的第二孔可以是与所述第一孔相同的形状，直径约I. 50mm。在其他实施例中，每个孔可具有大体上相同的形状和相同的大小。所述孔在尺寸和形状上可有所变化。例如，孔可以是圆形、圆、总体为曲线、正方形、矩形、三角形、总体为多边形、总体上为对称、总体上不对称或不规则形状的。另外，所述孔在每个针筒内的尺寸和形状均可有所变化。例如，在一个实施例中，针筒上的第一孔可以是总体上为曲线的，其直径约1_，所述针筒的第二孔可以是与所述第一孔相同的形状，直径约1.50_。在其他实施例中，每个孔可具有大体上相同的形状和相同的大小。图IB示出了位于本申请范围内的皮下针的另一个实施例。含螺纹的接ロ连接器130被设置为与含治疗性物质的注射器(未示出)接合。接ロ插入段140在接ロ插入段140的末梢侧包括多个针。套环160可被设置为与含螺纹的接ロ连接器130接合并固定接ロ插入段140。垫圈170可以根据选择设置在接ロ插入段140上，以保证从注射器到多个针150的密封通道。如上面所讨论的，所述针可根据选择包括多个孔(例如，在图IA中所描述的)。图IC-E为在图IB中示出的皮下针的图像，示出了某些零件的装配。图IF为在图IB中示出的装配好的皮下针的图像，包括不固定地连接在所述针上的注射器。孔的大小、形状和数量可以进行选择，以将注射流体或遗传物质的递送效率最大化，以在所述注射腔空间内产生最佳的压カ从而提高细胞膜透性，或者两者都做到。例如，如在图2A中所示出的，在一个实施例中，为了制造注射装置，用于向靶组织递送包含所希望试剂的流体，可以选择多个(例如，十个)总体上为曲线的孔210a、210b，直径位于从约、0. 01到约4. Omm的范围内。在有些实施例中，孔210a，210b在它们最宽处的宽度大于，小于或等于约 0. 01mm、0. 02mm、0. 03mm、0. 04mm、0. 05mm、0. 06mm、0. 07mm、0. 08mm、0. 09mm、0. 1mm、0. 15mm、0. 2mm、0. 25mm、0. 3mm、0. 35mm、0. 4mm、0. 45mm、0. 5mm、0. 55mm、0. 6mm、0. 65mm、
0.7mm、0.75mm、0. 8mm、0. 85mm、0. 9mm、0. 95mm、I. 0mm、I. 05mm、I. 10mm、I. 15mm、I. 20mm、
1.25mm、I. 30mm、I. 35mm、I. 40mm、I. 45mm、I. 50mm、I. 55mm、I. 60mm、I. 65mm、I. 70mm、I. 75mm、
1.80mm、I. 85mm、 I. 90mm、I. 95mm、2. 0mm、2. 05mm、2. 10mm、2. 15mm、2. 20mm、2. 25mm、2. 30mm、
2.35mm、2. 40mm、2. 45mm、2. 50mm、2. 55mm、2. 60mm、2. 65mm、2. 70mm、2. 75mm、2. 80mm、2. 85mm、
2.90mm、2. 95mm、3. 0mm、3. 05mm、3. 10mm、3. 15mm、3. 20mm、3. 25mm、3. 30mm、3. 35mm、3. 40mm、
3.45mm、3. 50mm、3. 55mm、3. 60mm、3. 65mm、3. 70mm、3. 75mm、3. 80mm、3. 85mm、3. 90mm、3. 95mm，或位于由这些数值的任意两个所限定且包括在内的范围中。在其他实施例中，可以选择多个(例如，十个)总体上为曲线的孔210a、210b，直径位于从约IOnm到约2. Omm范围内。在有些实施例中，孔210a、210b在它们最宽处的宽度大于，等于，或低于约0. 01 iim、0. 02 u m,0.03um、0.04um、0.05um、0.06um、0.07um、0.08um、0.09um、0. Ium、0. 15um、0. 2um、0. 25um、0. 3um、0. 35um、0. 4um、0. 45um、0. 5um、0. 55um、0. 6um、0. 65um、0. 7 u m^O. 75 u m^O. 8 u m^O. 85 u m^O. 9 u m^O. 95 u I. 0 u I. 5 u m^2. 0 u 2. 5 u
3. 0 u m、3. 5 u m、4. 0 u m、4. 5 u m、5. 0 u m、5. 5 u m、6. 0 u m、6. 5 u m、7. 0 u m、7. 5 u m、8. 0 レ m、8. 5 u m^9. 0 u m^9. 5um^l0um^l5um^20um^25um^30um^35um^40um^45um^50um^55um、60um、65um、70um、75um、80um、85um、90um、95um、0. 1mm、0. 2mm、0. 3mm、
0.4mm、0. 5mm、0. 6mm、0. 7mm、0. 8mm、0. 9mm、1mm、I. 05mm、I. 10mm、I. 15mm、I. 20mm、I. 25mm、
1.30mm、I. 35mm、I. 40mm、I. 45mm、I. 50mm、I. 55m、I. 60mm、I. 65mm、I. 70mm、I. 75mm、I. 80mm、
I.85mm、I. 90mm、I. 95mm或2. Omm，或位于由这些数值中的任意两个所限定且包括的范围内。通过调节孔的大小、形状和数量，并且结合压カ传输介质的物理特性，所述注射装置可传递位于约I到约200千帕范围内的局部压力。即，优选地，在本说明书中描述的针可被设置为在大于、小于、等于 1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200千帕或在这些数字之间的任何数字范围内的压カ下递送流体。容纳在注射腔空间204内的组织中増加的局部压カ改变了组织内细胞的细胞膜透性特征，促进了试剂(例如，DNA)进入细胞。所述针的长度可从约0. 5cm到约15cm之间进行变化。在有些实施例中，所述针约为，至少为，至少约为，不超过，不超过约0. 5,0. 75,1. 0,1. 25,1. 5,2. 0,2. 25,2. 5,2. 75、
3.0、3. 25、3. 5、3. 75、4. 0、4. 25、4. 5、4. 75、5. 0、5. 25、5. 5、5. 75、6. 0、6. 25、6. 5、6. 75、7. O、
7.25.7. 5、7. 75.8. 0、8. 25.8. 5、8. 75.9. 0、9. 25.9. 5、9. 75.10. 0.10. 25.10. 5.10. 75.11. O、
II.25、11. 5.11. 75、12. O、12. 25、12. 5.12. 75、13. O、13. 25、13. 5.13. 75、14. O、15. 25、14. 5、14. 75 Wi 15cm。再次提到图1A，所述装置包括近端103，与所述近端相对的末端101，以及从末端101到近端103之间延伸的纵向轴。在一些实施例中，所述装置可包括一个或多个针。在一些实施例中，所述注射加压装置包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个针。所述装置可包括标准连接器100和从连接器100处延伸的针体102。标准连接器100和针体102可被设置在与所述纵向轴基本平行的轴上。在一些实施例中，标准连接器100为接ロ锁或类似的机制，被设置为将所述装置与压カ递送装置(未示出)，比如注射器或泵进行连接。在一些实施例中，皮下注射加压装置含有治疗试剂。所述装置可包括，比如说，配制的用于肌肉内递送的核酸。理想地，在包含本说明书所描述的ー个或多个针的装置中装载编码免疫原的DNA或含DNA的免疫原性组合物(例如，DNA疫苗)。然而，可以通过本说明书所描述的ー个实施例递送多种多样的核酸。即，在本说明书中描述的ー或多个实施例可包括从如下组成的组中挑选出来的一或多种核酸mRNA、tRNA、rRNA、cDNA、miRNA(微RNA)、siRNA、(小型干扰 RNA)、RNAi (干扰 RNA)、piRNA (Piwi-干扰 RNA)、aRNA (反义 RNA)、snRNA (核小 RNA)、snoRNA (小核仁 RNA)、gRNA(导 RNA)、shRNA (小发夹 RNA)、stRNA (小型临时RNA)、ta-siRNA(反作用小型干扰RNA)、cpDNA(叶绿体DNA)、gDNA (基因组DNA)、msDNA (多拷贝单链DNA)、mtDNA (线粒体DNA)、GNA (こニ醇核酸)、LNA (锁核酸)、PNA (肽核酸)、TNA(苏糖核酸)、含吗啉代的核酸、含硫核酸、2-0-甲基核酸，以及含ー种或多种修饰的碱基或间隔区的核酸。
在本说明书描述的装置中容纳或由其递送的核酸的浓度可从约0. lng/ml到约50mg/ml间变化。在ー些方面，在本说明书所描述的装置中容纳或由其递送的核酸浓度(例如，由在本说明书中描述的装置所递送的核酸的合适剂量)位于约10ng/ml到25mg/ml之间。在进ー步的其他方面,核酸浓度位于100ng/ml到10mg/ml之间。在有些方面,在本说明书所描述的装置中容纳或由其递送的核酸浓度(例如，由在本说明书中描述的装置所递送的核酸的合适剂量)大于或等于或低于约100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml、250ng/ml、300ng/ml、350ng/ml、400ng/ml、450ng/ml、500ng/ml、550ng/ml、600ng/ml、650ng/ml、700ng/ml、750ng/ml、800ng/ml、850ng/ml、900ng/ml、950ng/ml、lu g/ml、2u g/ml、3u g/ml>4 u g/ml>5 u g/ml>6 u g/ml>7 u g/ml>8 u g/ml>9 u g/ml>10 u g/ml>11u g/ml>12 u g/ml > 13 u g/ml > 14 u g/ml > 15 u g/ml > 16 u g/ml、17 u g/ml > 18 u g/ml > 19 u g/ml、20 u g/ml、21u g/ml、22 u g/ml>23 u g/ml>24 u g/ml>25 u g/ml>26 u g/ml、27 u g/ml>28 u g/ml、29 u g/ml、30 u g/ml、31u g/ml、32 u g/ml、33 u g/ml、34 u g/ml>35 u g/ml、36 u g/ml、37u g/ml、38 u g/ml、39u g/ml>40 u g/ml、41u g/ml、42 u g/ml>43 u g/ml、44 u g/ml、45 u g/ml、46u g/ml、47 u g/ml、48u g/ml>49 u g/ml>50 u g/ml>55 u g/ml>60 u g/ml、65 u g/ml、70 u g/ml、75 u g/ml、80 ug/ml、85 ug/ml、90 ug/ml、95 u g/ml>100 ug/ml、150u g/ml>200u g/ml、250 u g/ml、300 u g/ml>350u g/ml>400u g/ml、450 u g/ml、500 u g/ml>550 ug/ml、600 u g/ml>650 u g/ml>700 u g/ml>750 u g/ml>800 u g/ml、850 u g/ml、900 u g/ml、950 u g/ml、I. Omg/ml、I. lmg/ml、I.2mg/ml、I. 3mg/ml、I. 4mg/ml、I. 5mg/ml、
1.6mg/ml、I. 7mg/ml、I. 8mg/ml、I. 9mg/ml、2. Omg/ml、2. lmg/ml、2. 2mg/ml、2. 3mg/ml、
2.4mg/ml、2. 5mg/ml、2. 6mg/ml、2. 7mg/ml、2. 8mg/ml、2. 9mg/ml、3. Omg/ml>3. lmg/ml、3.2mg/ml、3.3mg/ml、3.4mg/ml、3. 5mg/ml、3. 6mg/ml、3. 7mg/ml、3. 8mg/ml、3. 9mg/ml、4.Omg/ml>4. lmg/ml>4. 2mg/ml、4.3mg/ml、4. 4mg/ml、4.5mg/ml、4.6mg/ml、4.7mg/ml、4. 8mg/ml、4.9mg/ml、5. 0mg/ml、5. lmg/ml、5. 2mg/ml、5. 3mg/ml、5. 4mg/ml、5.5mg/ml、5.6mg/ml、5. 7mg/ml、5. 8mg/ml、5. 9mg/ml、6. Omg/ml>6. lmg/ml>6. 2mg/ml、6. 3mg/ml、6. 4mg/ml、6. 5mg/ml、6. 6mg/ml、6. 7mg/ml、6. 8mg/ml、6. 9mg/ml、7. 0mg/ml、7. lmg/ml、7.2mg/ml、7. 3mg/ml、7. 4mg/ml、7. 5mg/ml、7. 6mg/ml、7. 7mg/ml、7. 8mg/ml、7. 9mg/ml、
8.0mg/ml、8. lmg/ml、8. 2mg/ml、8. 3mg/ml、8. 4mg/ml、8. 5mg/ml、8. 6mg/ml、8. 7mg/ml、
8.8mg/ml、8. 9mg/ml、9. 0mg/ml、9. lmg/ml、9. 2mg/ml、9. 3mg/ml、9. 4mg/ml、9. 5mg/ml、
9.6mg/ml、9. 7mg/ml、9. 8mg/ml、9. 9mg/ml、10. 0mg/ml、llmg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml、26mg/ml、27mg/ml、28mg/ml、29mg/ml、30mg/ml、3 lmg/ml、32mg/ml、33mg/ml、34mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、4lmg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml，或位于由这些数值的任意两个所限定且包括的范围内。 由在本说明书中描述的注射装置提供的核酸的量可在从约Ing到IOg间变化。在ー些方面，在皮下注射加压装置中容纳或由皮下注射加压装置所提供的核酸的量低于、大于或等于约 lng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng、50ng、60ng、70ng、80ng、90ng、100ng、150ng、200ng、250ng、300ng、350ng、400ng、500ng、600ng、700ng、800ng、900ng、Iu g、2 u g、3 u g、4 u g、5 u g、6 u g、7 u g、8 u g、9 u g、10 u g、11 u g、12 u g、13 u g、14 u g、15 u g、16 u g、17 u g、18u g、19u g、20u g、21 u g、22u g、23u g、24u g、25u g、26u g、27 u g、28u g、29 u g、30u g、31u g、32u g、33u g、34u g、35u g、36u g、37 u g、38u g、39u g、40u g、41ug、42ug、43ug、44ug、45ug、46ug、47ug、48ug、49ug、50ug、55ug、60ug、65 u g、70u g、75u g、80u g、85u g、90u g、95u g、100u g、105u g、110u g、115u g、120u g、125 u g、130 u g、135 u g、140 u g、145 u g、150 u g、155 u g、160 u g、165 ug、170ug、175ug、180 u g、185u g、190u g、195u g、200 u g、205u g、210u g、215u g、220 u g、225u g、230u g、235u g、240 u g、245 u g、250 u g、255 u g、260 u g、265 u g、270 u g、275 u g、280 u g、285 u g、290 u g、295 u g、300 u g、305 u g、310u g、315u g、320u g、325 u g、330 u g、335 u g、340 u g、345 u g、350 u g、355 u g、360 u g、365 u g、370 u g、375 u g、380 u g、385 u g、390 u g、395 u g、400u g、405 u g、410 u g、415 u g、420 u g、425 u g、430 u g、435 u g、440 u g、445 u g、450 u g、455 u g、460 u g、465 u g、470 u g、475 u g、480 u g、485 u g、490 u g、495 u g、500 u g、505 u g、510 u g、515u g、520u g、525 u g、530 u g、535 u g、540 u g、545 u g、550 u g、555 u g、560 u g、565u g、570 u g、575 u g、580 u g、585 u g、590 u g、595 u g、600 u g、605 u g、610 u g、615 u g、620 u g、625 u g、630 u g、635 u g、640 u g、645 u g、650 u g、655 u g、660 u g、665 u g、670 u g、675 u g、680 u g、685 u g、690 u g、695 u g、700 u g、705 u g、710 u g、715 u g、720 u g、725 u g、730 u g、735 u g、740 u g、745 u g、750 u g、755 u g、760 u g、765 u g、770 u g、775 u g、780 u g、785 u g、790 u g、795 u g、800 u g、805 u g、810 u g、815 u g、820 u g、825 u g、830 u g、835 u g、840u g、845 u g、850 u g、855 u g、860 u g、865 u g、870 u g、875 u g、880 u g、885 u g、890 u g、895u g、900 u g、905 u g、910 u g、915 u g、920 u g、925 u g、930 u g、935 u g、940 u g、945 u g、950 u g、955 u g、960 u g、965 u g、970u g、975u g、980 u g、985 u g、990 u g、995 U g、I. Omg、
1.lmg、l. 2mg、l. 3mg、l. 4mg、l. 5mg、l. 6mg、l. 7mg、l. 8mg、l. 9mg、2. 0mg、2. lmg、2. 2mg、
2.3mg、2. 4mg、2. 5mg、2. 6mg、2. 7mg、2. 8mg、2. 9mg、3. 0mg、3. lmg、3. 2mg、3. 3mg、3. 4mg、
3.5mg、3. 6mg、3. 7mg、3. 8mg、3. 9mg、4. 0mg、4. lmg、4. 2mg、4. 3mg、4. 4mg、4. 5mg、4. 6mg、
4.7mg、4. 8mg、4. 9mg、5. 0mg、5. lmg、5. 2mg、5. 3mg、5. 4mg、5. 5mg、5. 6mg、5. 7mg、5. 8mg、5.9mg、6.0mg、6. lmg、6.2mg、6. 3mg、6. 4mg、6. 5mg、6. 6mg、6. 7mg、6. 8mg、6. 9mg、7. Omg、7.lmg、7. 2mg、7. 3mg、7. 4mg、7. 5mg、7. 6mg、7. 7mg、7. 8mg、7. 9mg、8. 0mg、8. lmg、8. 2mg、
8.3mg、8. 4mg、8. 5mg、8. 6mg、8. 7mg、8. 8mg、8. 9mg、9. 0mg、9. lmg、9. 2mg、9.3mg、9. 4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg、10. Omg、Ilmg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、IOOmg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、lg、2g、3g、4g、5g、6g、7g、8g、9g、10g，或位于由这些数值中的任意两个所限定且包括的范围内。在一些实施例中，所述装置可被设置为是一次性可处理的装置，其中所述治疗试剂容纳在所述装置内，不需要其他的连接。针体102可包括从套筒或插管115处延伸的一个或多个针递送针筒或针的针筒120a、120b。套筒115可包括中央腔道或通道。姆个针的针筒120a、120b也可包括与套筒115和标准连接器100不固定地连接的至少ー个腔道。在 图示的实施例中，针体102包括两个针递送针筒120a、120b,姆个针的针筒120包括末梢端105a、105b。针的针筒120a、120b的长度可以变化。在一些实施例中，针的针筒120a、120b每个均为大约相同的长度，在其他实施例中，所述针的针筒为不同的长度。针的针筒120a、120b可处于从约2mm到约IOOmm的范围内。针的针筒120的规格可以在装置到装置之间或也可在位于同一个装置的针筒120到针筒120之间变化。虽然端部105a、105b被示出其斜面的角度朝向所述装置的纵向轴，但斜面也可朝向相反的方向(參见图2A)或不同的方向(參见图4)，使得可以扩展分散组织，并通过位于针的针筒120a、120b之间设置的区域向设置在其间的注射腔空间中递送至少ー些靶组织。在一些实施例中，每个端部可包括多个斜边，例如两个、三个、四个、五个、六个或更多个斜边。这可使得端部沿其轴总体上旋转对称，可以为每个针提供相同的插入。图IG为可在本说明书中公布的注射装置上的ー个或多个针上使用的含四个斜边的“ quadcar”端部的图像。在一些实施例中，在端部的至少ー个斜边与在相同的针上的一个或多个孔总体上朝向相同的方向。在一些实施例中，端部上没有任何斜边与在相同的针上的任何孔总体上朝向相同的方向。在一些实施例中，由在所述装置末端的针的针筒120a、120b之间的空间所形成的开ロ的尺寸足够大到使得针的针筒120a、120b可以包围ー个或多个细胞。针的针筒120a、120b每ー个均可包括沿所述针筒的长度设置的孔110a、110b。在一些实施例中，每个针的针筒120a、120b包括至少ー个孔110a、110b。在其他实施例中，至少有ー个针的针筒120a、120b不包括孔110a、110b。在一些实施例中，孔IlOaUlOb的每ー个的大小与形状可在针筒与针筒间变化。在一些实施例中，所述针的长度可在针筒与针筒间变化。再次參考图2A,所述注射装置包括两个针的针筒220a、220b,姆ー个均包括三个孔210a、210b和削尖的末梢端205a、205b。末梢端205a、205b由一段形成开ロ 203的距离彼此分离开。从末梢端205a、205b在靠近的方向上移动，开ロ 203形成了在针的针筒220a、220b间形成的注射腔空间204。在一些实施例中，由在端部205a、205b之间的位于针的针筒220a、220b间的空间所形成的开ロ 203在尺寸上足够大，使得针的针筒220a、220b可以围绕注射腔空间204中的ー个或多个细胞。
在所述腔空间内的合适的局部压カ下递送试剂对于有效和安全治疗可能是很重要的。例如，施加过多的压カ可对细胞带来不希望的损伤，而施加太少的压力可能不会产生摄取所述试剂所需的足够的透过性。流体动力学原理和相关方程可用于计算注射腔空间204中可接受的压カ范围。例如，针的针筒120a、120b几何特性和所述试剂的流体特性(比如，粘度和密度)，会影响注射腔空间204中的局部压力。在一些实施例中，孔210a、210b的大小与形状，流体和递送的试剂，以及驱动压カ可以由使用者进行选择，以在注射腔空间204中产生所希望的局部压力。达赛韦史巴赫方程，比如说，可被用于根据流体的流速、流体的粘度，以及针筒腔的直径与管长的比值来确定压降情況。除了其他方面以外，当使用不同的载体媒介流体(如磷酸盐缓冲液、甘油、こ醇、去离子水、过滤水、各种油类、乳剂等等)吋，由于每种流体具有各自的粘度特性，该方程在确定合适的孔210a、210b的尺寸是有用的。标准计算流体动力学软件可被用于确定针的针筒和孔的最佳物理參数，以达到所希望的压降。然而，本发明并不局限于使用流体产生压降，还可利用其它类型的压カ传输介质。例如，在一些实施例中，空气或其他气体，例如CO2或N2，可被用于将压カ传送到组织上。图2B示出了具有多个孔的针的另ー个示例。每个针230包括五个孔235，在每个孔之间留有间距240。在一些实施例中，在所述孔之间的间距对于针上的所有孔来说可以是·相同的，也可以是不同的。所述间距可以，例如，约为，至少为，至少约为，不超过，不超过约0. 01mm、0. 05mm、0. lmm、0. 15mm、0. 2mm、0. 25mm、0. 3mm、0. 4mm、0. 5mm、0. 6mm、0. 7mm、0. 8mm、0. 9mm、1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、1cm、2cm 或 3cm。孑し 235 被设置为母个孑し朝向不同的针的第二个孔。这可使得在彼此朝向的孔之间治疗性物质进行相対的流体流动。在一些实施例中，所有的孔被设置为朝向(或背向)位于不同的针的另ー个孔(例如，在图2B中所描述的)。在一些实施例中，至少2、4、6、8、10、16、20、30、40、50或60个所述孔被设置为朝向(或背向)位于不同的针上的另ー个孔。图2C示出了所述针装置的另ー个实施例和可根据本申请进行修改的各种尺寸。接ロ 245包括不固定地偶联在接ロ 245末端的三个针250。每个针250均具有从接ロ 245的末端到针尖257的针的长度255。正如在本申请中所进ー步讨论的，针的长度255可根据向其递送治疗性物质的靶组织而进行变化。位于针尖257和针上距针尖257最远处的孔之间的间隔265也可进行变化。例如，间距265可位于0. Imm和5cm之间，例如约为1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、lcm、2cm、3cm、4cm 或更大。类似地，位于距离针尖 257最近处的孔和距离针尖257最远处的孔之间的间距270也可进行变化。在一些实施例中，间距 257 可位于 0. 5mm 和 IOcm 之间，例如约为 lmm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、lcm、2cm、3cm、4cm, 5cm、6cm、7cm、8cm、9cm 或更大。图2D示出了具有交错设置的针的注射装置的另ー个实施例。接ロ 275包括不固定地偶联在接ロ 245末端的四个针280，285，287，290。针287比针290长出间距295。同时，针280比针285、290长，但短于针287。也可使用各种其他类型的交错布置。在ー些实施例中，所述注射装置包括多个针，其中至少ー个或多个针具有第一长度，一个或多个针具有比所述第一长度更长的第二长度。在一些实施例中，所述注射装置包括多个针，其中每个针具有不同的长度(例如，在图2D中所描述的)。所述针之间长度的差距可以为，比如说，至少 0. lmm>0. 15mm>0. 2mm>0. 25mm>0. 3mm>0. 4mm>0. 5mm>0. 6mm>0. 7mm>0. 8mm>0. 9mm、1mm、2mm、3mm、4mm或5mm。所述针之间长度的差距可以，比如说，不超过5cm、2cm、lcm、5mm、4mm、3mm>2mm 或 Imm0图35A示出了可能被包含在所述针装置内部的接ロ设计的一个实施例。底部接ロ组件3500被设置为接受多个针，每个针具有设置在所述针的一端的针的针筒3510和接ロ接合件3520。底部接ロ组件3500包括接受针的针筒3510和啮合接ロ接合件3520以维持所述针处于所述接ロ内部的孔3530。图35B示出了被插入孔3530内部后的针。孔3530的深度可以变化，以便所述针可以彼此之间交错(例如，在图2D中所描述的)。图35C示出了具有孔接合件3550的顶端接ロ部件3540，孔接合件3550被设置为在顶端接ロ部件3540被安装在底部接ロ组件3500上时与孔3530进行接合。孔接合件3550可以将接ロ接合件3520固定在接口内。图3 示出了具有底部接ロ组件3500和顶端接ロ组件3540的接ロ，底部接ロ组件3500和顶端接ロ组件3540通过，比如说，将这两个零件焊接的方式固定在一块。现在转向图3，示出了包括两个针的针筒320a、320b的注射装置的另ー个实施例。针的针筒320a、320b包括与中央腔道315流体连接的腔道。增压的治疗试剂可通过中央腔 道315被引导进入针的针筒320a、320b中，并且可通过孔310a、310b从针的针筒320a、320b中流出。在该实施例中，针的针筒320a、320b每ー个均包括十个沿所述针筒的末梢长度处均匀分布的曲线孔。孔310a、310b被设置为将增压的试剂引导向装置的纵向轴，从而，位于针的针筒320a上的孔310a朝向针的针筒320b上的孔310b。在一个实施例中，所述孔可被设置在靠近针筒320a、320b的端部处，位于距针筒的近端约I和约3mm之间。图4示出了向细胞450中注射流体治疗试剂430。如上所述，治疗试剂430可运载基因、核酸、蛋白或其他大分子进入细胞450的部分中或进入多个细胞中。在图示的示例中，所述注射装置已经被插入肌肉组织中，因此注射腔空间404围绕了ー个肌细胞450的至少部分处。流体的高压源(未示出)被引导进入所述装置的中央腔道415中并穿过每ー个针的针筒420a、420b的腔道，然后通过孔410a、410b进入注射腔空间404中被排出。在每个孔410a、410b处存在的高压起因于将流体压进位于注射腔空间404中的组织中所施加的压力。所引起的局部压カ的増加改变了膜的透过性，以提高注射成分的摄取。所引起的透过性的变化使得药用的药品、核酸和其他化合物进入细胞的内部。如上所述，针的针筒的数量可根据注射装置所打算的应用、制造所述注射装置所使用的制造エ艺、所希望的局部压カ的量和/或其他因素进行变化。在一些实施例中，针筒的数量可以等于或大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多。例如，在图5A所示的实施例中，三个针的针筒520a、520b、520c纵向延伸，在其中间形成注射腔空间504。在图示的实施例中，每个针的针筒520a、520b、520c包括沿所述针筒的内部朝向侧均匀设置的三个孔510a、510b、510c。图5B为图5A中示出的注射装置的俯视图。针的针筒520a、520b、520c每ー个可设置在连接器或中央腔道外壳500中心的周围。针的针筒可构成三角形，例如，等边三角形。连接器500的直径Dl可以跟位于针的针筒520之间的长度L1 一祥进行变化。在一个实施例中，连接器500的直径D1从约3到约25mm间变化，位于针的针筒之间的长度L1从约I到约8mm，或更大的范围内变化。图5C示出了含三个分开的注射器501a、501b、501c的注射装置的一个实施例的侧视图。注射器可被设置为容纳有相似或不同量的向病人递送的治疗试剂。在一个实施例中，每个注射器被设置为含有I毫升的治疗试剂。每个注射器501a、501b、501c包括从其中纵向延伸的针的针筒520a、520b、520c。每个针的针筒520包括多个朝向所述装置的纵向轴的孔510a、510b、510c。位于每个针的针筒520a、520b、520c上的孔510a、510b、510c的数量可从I到20中变化。在一个实施例中，位于针筒520上的孔510均匀分布，每个孔相距超过0.2mm。每长度的针的针筒520的容量范围可根据孔510之间的距离进行变化。在ー个实施例中，每一毫米长度的针的针筒520相当于75 Ul的治疗试剂。三个注射器501可被排列成在所述装置的纵向轴周围集中的等边三角形的形状，每个针的针筒520与另外两个针的针筒的每ー个距离大约相等。针的针筒520之间的间距 可根据孔510的数量进行变化。在一个实施例中，每个针的针筒520包括十个孔510，所述针被设置为彼此距离约3. 0mm。在另ー个实施例中，每个针的针筒520包括8个孔510，所述针被设置为彼此距离约2. 2mm。在另ー个示例性实施例中，每个针的针筒520包括六个孔，所述针被设置为彼此距离约I. 5mm。而在另一个实施例中，姆个针的针筒520包括约4个孔510,所述针被设置为彼此距离约I. 0mm。图示出了向受试者590递送治疗试剂的图5C的注射装置的立体图。现在转向图6A，示出了多个注射器的注射装置的另ー个实施例。图6A中的注射装置包括两个注射器620a、620b，每个均被设置为相对于所述装置的纵向轴具有ー个角度。支架670将注射器620相对于彼此保持就位，总体上与所述装置的纵向轴对准。图6B示出了含有两个针的针筒620a、620b的注射装置的另ー个实施例的立体图，其中针的针筒620a、620b不固定地连接到罩在外壳或连接器600内部的共同腔道615上。在该实施例中，针的针筒620a、620b彼此基本平行，通过共同的腔道615向针筒所指向的受试者分配治疗试剂。图6C为图6B的连接器600和针的针筒620a，620b的俯视图。针的针筒620a、620b可以彼此相距长度L2，连接器600可具有直径或宽度D2。连接器600的直径D2可以跟位于针的针筒620之间的长度L2 —祥进行变化。在一个实施例中，连接器600的直径D2从约3到约25mm间变化，位于针的针筒之间的长度L2从约I到约6mm间变化。图7A示出了含六个针的针筒720的注射装置的另ー个实施例，针的针筒720从连接器700处基本彼此平行延伸。连接器700罩有共同的腔道715，共同的腔道715可将增压的治疗试剂分配到针的针筒720中。图7B为图7A的注射装置的俯视图。如图7B所示，五个针的针筒720可形成在连接器700的中心周围集中的五角形或五边形。这些五个针的针筒720中的每ー个可由长度L3将左边和右边的针的针筒720分隔开。第六个针的针筒720可被设置在五边形的中心，与另外五个针的针筒相距长度し4。连接器700也可具有最大宽度为D1的直径。在一些实施例中，直径D1可位于约3和约25mm之间。长度L4和L3可彼此相等或不同。在一些实施例中，长度L4位于从约I到约6mm的范围内，长度L3位于从约I到约6mm的范围内。图8A示出了含四个针的针筒820的注射装置的另ー个实施例，针的针筒820不固定地连接到罩于连接器800内部的共同的腔道815上。每个针的针筒820可以包括任意数量的内部朝向孔810，比如说，六或十个。在一些实施例中，针的针筒820可沿所述装置的纵向轴设置，可以不设有孔810或包括远离中心或所述装置的纵向轴的孔810。例如，针的针筒820b可包括含孔的三个区域，每个区域包括朝向从针820a、针820c或针820d中挑选而出的ー个针的孔(例如，六个孔)。针的针筒820可从连接器800处延伸在约3和约IOOmm之间的长度L5。图8B为包括连接器800和针的针筒820的图8A的注射装置的俯视图。三个针的针筒820可被设置为三角形，例如，等边三角形，集中于所述装置的纵向轴周围，与连接器800共享同一个中心。这些针的针筒820可彼此间隔长度L6。该长度L6可在约2和约12mm间变化。例如,L6可以为约3mm或约6mm。连接器800的直径或最大宽度D4的尺寸位于从约3到约20mm的范围内。图SC示出了所述注射装置的另ー个实施例的俯视图。针830构成了正方形(或任意其他四边形，如梯形、等腰梯形、平行四边形、风筝形、菱形或长方形)的点，在针830d和针830b之间具有长度L7。长度L7可在约2和约12mm间变化，例如3mm或6mm。在ー些实施例中，每个针可被设置为具有朝向第一邻近针的孔的第一区。例如，针830b可以包括朝向针830a的孔的第一区。在一些实施例中，每个针可被设置为具有背向第二邻近针的孔的第二区。例如，针830b可以包括朝向针830a的第一区和朝向针830c的孔的第二区。在
一些实施例中，每个针可被设置为具有背向第三邻近针的孔的第三区。例如，针830b可以包括朝向针830a的孔的第一区，朝向针830c的孔的第二区，以及朝向针830d的孔的第三区。在一些实施例中，每个针被设置为具有相同数量的区。在一些实施例中，每个区包括相同数量的孔。针830可以选择性地设置为形成菱形，例如平行四边形或菱形。图9-15示出了注射装置的各种实施例的俯视图。这些注射装置中的每ー个包括多个针的针筒，并且可包括设置在针的针筒上的孔。所述孔可被设置为向受试者递送增压的治疗试剂和/或向受试者施加负压。图9示出了含有四个针的针筒920的注射装置的一个实施例,姆个针的针筒包括至少ー个向内的或中心朝向的孔910，孔910被设置为向注射空间904中递送增压的治疗性物质。图10示出了具有七个针的针筒的注射装置的一个实施例。六个针的针筒1020形成六边形，第七个针的针筒设置在靠近该六边形的中心处。图11示出了含有十个针的针筒1120的注射装置的一个实施例,姆个针的针筒包括至少ー个向内的或中心朝向的孔1110，孔1110被设置为向注射空间1104中递送增压的治疗性物质。图12示出了含有三个针的针筒1220的注射装置的一个实施例，三个针的针筒中的两个包括至少ー个向内的或中心朝向的孔1210，孔1210被设置为向注射空间1204中递送增压的治疗性物质。第三个针的针筒1220并不包括用于向注射空间1204递送增压流体的任何孔。图13示出了含有三个针的针筒1320的注射装置的一个实施例，三个针的针筒中的两个包括至少ー个向内的或中心朝向的孔1310，孔1310被设置为向注射空间1304中递送增压的治疗性物质。第三个针的针筒1320包括至少两个向内或中心朝向的孔1310，孔1310被设置为向注射空间1304施加负压。图14示出了含有四个针的针筒1420的注射装置的一个实施例，四个针的针筒中的两个包括至少ー个向内的或中心朝向的孔1410，孔1410被设置为向注射空间1404中递送增压的治疗性物质。第三和第四个针的针筒1420并不包括用于向注射空间1404递送增压流体的任何孔。图12-14示出了注射装置的实施例，其中增压的治疗试剂沿注射腔空间被不对称地进行递送。这在某些情况下，例如，在仅仅向组织的一部分或某一区域，而非是所有部位递送更加聚集的正压时可能是比较理想的。图15示出了含有四个针的针筒1520的注射装置的一个实施例，四个针的针筒中的两个包括至少一个向内的或中心朝向的孔1510，孔1510被设置为向注射空间1504中递送增压的治疗性物质。第三和第四个针的针筒1520包括用于向注射空间1504施加负压的孔。如上所述，每个针的针筒的形状可能会变化。图16-18示出了包括向内或中心朝向的孔的环形针的针筒的实施例。图16示出了环形的针的针筒1620,包括三个向内或中心朝向的孔1610。三个孔1610中的两个被设置为向注射空间1604递送增压的治疗性物质，第三个孔1610被设置为向注射空间施加负压。孔1610可构成三角形，例如，等边三角形。图17示出了环形的针的针筒1720，包括两个彼此面对的向内或中心朝向的孔1710。两个孔1710中的一个被设置为向注射空间1704递送增压的治疗性物质，另一个孔1710被设置为向注射空间施加负压。图18示出了环形的针的针筒1820，包括两个彼此面对的向内或中心朝向的孔1810。这两个孔1820被设置为向注射空间1804递送增压的治疗性物质。孔 1810可以包括任何合适的形状，例如，长条形或总体上多边形。图13和15-17示出了一些实施例，其中注射装置被设置为通过一个或多个孔向注射腔空间施加负压。负压或反压力可被用于向细胞膜递送最佳量的压力。在这些实施例中，负压由指向一个或多个针的针筒的箭头所表示。负压可通过将某些孔与和其他孔不同的腔道连接而进行施加。在一些实施例中，针的针筒可以包括一个与多个孔或多于一个腔道不固定地连接的腔道。图19示出了包括单个腔道1935和三个孔1910的针的针筒1920，每个孔1910与单个腔道1935不固定地连接。腔道1935被用于传输压力和递送治疗试剂。图20示出了一个实施例，其中针的针筒2020包括第一腔道2035，第一腔道2035与两个孔2010不固定地连接。针的针筒2035也包括与第三孔2012不固定地连接的第二腔道2037。如果使用第一腔道用于递送增压的治疗试剂和第二腔道用于递送另一种流体和/或施加负压(或反之亦然)比较理想时，可以使用本实施例。在本说明书中描述的针的针筒和实施例可以与其他已知的方法和系统联用以提高基因递送，例如在Mathiesen的美国专利第6，610，044号中描述的电穿孔系统，该专利的全部内容因此以引用的方式被结合。因此，本发明的一些实施例利用控制电路生成电流或电磁场以改变细胞透性。在一些实施例中，利用一个或多个针的针筒本身向组织中引导或传送生成的电路或场可能是优选的。事实上，所述针的针筒可以与任意数量的已知可选的微操作方法联用，所述微操作方法可以使用声能、电磁能、机械能和热能或化学增强剂中的一种或多种，例如在Eppstein的美国专利第6，527，716号中所公布的，该专利以其全部内容被包含在本说明书中。在本说明书中公开的实施例并不局限于制造所公开的针筒或孔的任何具体制造工艺。针的针筒可通过使用任何标准的针生产工艺，包括(仅举例来说)压铸、注塑成型、吹塑成型、机器加工、激光加工等等进行制造。类似地，针的材料可从任意数量的已知的针的材料，例如不锈钢、碳钢和各种金属合金中进行选择。针筒上的孔可以作为针筒制造过程的一部分进行制造，或者通过钻孔或激光蚀刻的方式在过后添加上。这些各种制造方法在本领域中都是熟知的。本发明的方面同样总体上涉及到使用如上所述的HIP针跨膜递送药品、核酸或其他生物活性分子和化合物的方法。有效成分(例如DNA、RNA、核酸、蛋白或化合物)可在多种溶液中进行配制，通过在本说明书中描述的针进行递送。在一些实施例中，有效成分(例如DNA、RNA、核酸、蛋白或化合物)可以在载体溶液(如水、缓冲液、盐水、油乳剂、油或甘油)中混合。该液体可继而可通过在本说明书中描述的针。在一些实施例中，有效成分(例如DNA、RNA、核酸、蛋白或化合物)可被固定在载体上(例如纳米颗粒、蛋白、糖或丸)，并与一种或多种上述载体溶液(例如水、缓冲液、盐水、油乳剂、油或甘油)混合，结合载体的试剂通过在本说明书中描述的针进行传送。应该理解的是，存 在多种运载介质和载体，使用本申请未明确提及的运载介质或载体并不会脱离本发明的精神。例如，运载介质可以是阳离子油。被考虑与在本说明书中描述的注射装置一起使用的核酸可以来自于人、非人类的灵长类、小鼠、细菌、病毒、霉菌、原生动物、鸟、爬行动物、鸟类-例如鹳和苍鹭、小鼠、仓鼠、大鼠、兔、豚鼠、土拨鼠、猪、小型猪、山羊、狗、猫、人和非人类的灵长类，例如狒狒、猴和黑猩猩，正如上所述。在某些实施例中，在本说明书中描述的注射装置可被用于递送编码在丙型肝炎病毒(HCV)中发现的蛋白的核酸。HCV基因产物可以为已知感染任何物种的动物(包括但不限于两栖类、爬行动物、鸟类-例如鹳和苍鹭、小鼠、仓鼠、大鼠、兔、豚鼠、土拨鼠、猪、小型猪、山羊、狗、猫、人和非人类的灵长类，例如狒狒、猴和黑猩猩)的病毒。在某些实施例中，在本说明书中描述的注射装置可被用于递送编码在乙型肝炎病毒(HBV)中发现的蛋白的核酸。HBV基因产物可以为已知感染任何物种的动物(包括但不限于两栖类、爬行动物、鸟类一例如鹳和苍鹭、小鼠、仓鼠、大鼠、兔、豚鼠、土拨鼠、猪、小型猪、山羊、狗、猫、人和非人类的灵长类，例如狒狒、猴和黑猩猩)的病毒。在某些实施例中，可以向有效成分中添加佐剂。例如，根据增加或辅助其效果的需要，可以向由在本说明书中描述的装置递送的药物中添加药理学试剂。在另一个示例中，可以在本说明书中描述的装置中使用增加抗原应答的免疫学试剂。例如，美国专利第6，680，059号(其全部内容以引用的方式被结合)，描述了含三唑核苷的疫苗作为疫苗佐剂的用途。然而，佐剂可以指代有能力提高或促进免疫应答或增加或辅助治疗试剂效果的任何物质。在某些实施例中，可在所呈现的装置和方法中使用任何核酸，例如，质粒DNA、线形DNA、反义DNA和RNA。例如，核酸可以是本领域所熟知类型的DNA表达载体。在一些实施例中，本发明被用于DNA或RNA接种的目的。S卩，本发明包括提高向细胞间隙内注射DNA或RNA核酸的跨膜流速的方法。在某些实施例中，所述针可用于向各种有机体的组织高压注射，其中希望递送治疗性物质。例如，所述组织可以是骨骼肌、脂肪组织、内脏器官、骨、结缔组织、神经组织、皮肤组织等等。例如，DNA疫苗可通过向骨骼肌进行肌肉注射或者通过向动物的真皮进行皮内注射而进行递送。在其他实施例中，治疗性物质可通过胃肠外递送的方式递送进入皮下或腹膜内的组织中。根据靶组织和待递送的治疗试剂或试剂，所述针的参数可进行适当修改，以适应对于达到产生足够用于提高试剂递送的压力所必需的希望的物理性质。在一些实施例中，所述注射装置可被设置为按照预设的递送速度进行递送治疗性物质。例如，注射器可以由产生用于推压注射器活塞所希望的行程速度的弹簧驱动的装置进行控制，以产生所希望的递送速度。美国专利第6，019，747号公开了一种这类装置的示例，因此其全部内容以引用的方式进行结合。其他的设置方式为本领域所知，均位于本申请的范围内。递送速度可以，例如，至少为0. lmL/s、0. 3mL/s、0. 5mL/s、0. 8mL/s、0. 9mL/s、I. OmL/s、L lmL/s、L 2mL/s>I. 3mL/s>I. 4mL/s>I. 5mL/s、2. OmL/s、或 3. 0mL/so 递送速度可以，例如，不超过 20. OmL/s、10. 0mL/s、7mL/s、6mL/s、5mL/s、4mL/s、3mL/s、或 2mL/s。正如在下面所进一步讨论的，本申请包括使用所述注射装置的方法。因此，所述方法可以包括以预设的速度，如任何在上面所公开的速度递送治疗性物质。图33A为可用于本申请的针装置上的弹簧驱动的装置的一个示例。弹簧驱动装置3300包括一侧的装载环形柄3310和相对侧的深度调节件3320。深度调节件3320可以旋转接合弹簧驱动装置3300，并且可被设置为在向受试者施用时调节针穿透组织的深度。可以按压触发按钮3330以启动该装置，压缩所述针的活塞，注射治疗性物质。图33B示出了被插入弹簧驱动装置3300中的针装置3340。装载环形柄3310被抽回，以便所述针可沿弹簧驱动装置3300的腔道插入。图33C示出了在弹簧驱动装置3300内部装载的针装置3340。图 33D示出了弹簧驱动装置3300的侧视图，其中弹簧3350沿弹簧驱动装置3320的腔道(沿针装置3340的长度延伸)设置。弹簧3350被设置为在装载环形柄3310被抽回时伸展，在按压触发按钮3330后压缩注射器3340的活塞。图34A为可用于本申请的针装置上的触发装置的一个示例。触发装置3400包括被设置为用于接收注射器的活塞部分的活塞孔3410，以及被设置为接受注射器的针筒部分的针筒孔3420。触发器3430被设置为使得推挤触发器3430可推下注射器的活塞。图34B示出了被插入触发装置3400中的针装置3440。图33C示出了在触发装置3400内部装载的针装置3440。图33D为触发装置3400的侧视图，其中触发器3430与活塞孔3410偶联(例如，由拉杆或齿轮进行偶联)，使得推挤触发器3430可压缩针装置的活塞，注射治疗性物质。本发明的方面也涉及制造一种或多种上述装置的方法。通过一种方法，可提供一种或多种在本说明书中描述的针，所述针固定在含治疗试剂(例如，核酸，如DNA、RNA，蛋白或化合物)的注射器上。所述针和所述注射器的接合件可被制造为使得所述针不能从所述注射器上移除(例如，所述针和注射器被共同模铸)或所述接合件可被制造为所述针与所述注射器是可拆分的。优选地，所述针和注射器的接合件在向注射器装载治疗试剂前就已制造好。所述针和注射器可在加入治疗试剂之前或之后进行灭菌。优选地，所述针和注射器组件在加入治疗试剂前即已灭菌，在灭菌后不久，以无菌方式加入已灭菌的治疗试剂。使用理想的制造工艺生产包括一个或多个在本说明书中描述的灭菌针的一次性使用的装置，所述灭菌针被接合在含单次剂量的一种或多种灭菌的治疗试剂的一个或多个灭菌注射器上。这些一次性使用的装置可被分开灭菌包装，使得使用者仅仅需要撕开包装并将治疗试剂注射入合适的组织中(例如，通过向肌肉注射的方式一次性使用的DNA接种)。本发明的方面也涉及使用一种或多种上述装置的方法。通过一种方式，提供了向细胞内递送化合物的方法，其中容纳在本说明书中描述的装置中的化合物被施用到受试者上。在一些实施例中，在本说明书中描述的装置(如，包括一个或多个在本说明书中描述的针的注射器)中提供了化合物(例如，核酸，如DNA，或蛋白)。该化合物继而通过将针插入受试者组织中，按压活塞以对注射器中的溶液施加压力，从而以所希望的压力将所述化合物压出所述针的孔的方式被递送给所述受试者。组织中增加的压力提高了细胞对化合物的摄取，从而可以进行细胞内的化合物递送。事实上，任何适于以较高注射压力将物质注入的治疗性物质均可被用于与本发明相连接，包括但不限于多肽、糖类、微颗粒、类固醇或低分子量的分子。例如，核酸和蛋白可同时或连续地被导入承受较高注射压力的组织中。有些实施例涉及到从DNA表达蛋白的方法，其中提供了如在本说明书中描述的装置(例如，包括一个或多个在本说明书中描述的针和DNA的注射器)，所述针被插入受试者的组织中(例如，肌肉)，所述DNA通过在压力下(例如，由使用所述活塞并向注射器中的DNA溶液推压的方式施加的压力)排出所述孔的方式被导入组织中，然后所述DNA被肌细胞所摄取。可选地，含DNA的所述装置以促进产生炎性应答的方式(例如，动员的激活与炎性应答有关的细胞)被导入或使用。可选地，所述装置的针的设计(例如，多个孔)或配置方式可产生免疫应答(例如动员或激活与炎性应答有关的细胞)。可选地，对蛋白表达的量和/或与炎性应答有关的细胞的动员进行了测量。可以使用免疫学和/或组织化学方式进行这种测量。
因此，本发明的有些方面涉及到对所希望的抗原诱导免疫应答的方法，由此，提供了如在本说明书中描述的装置(例如，包括一个或多个在本说明书中描述的针和DNA的注射器)，所述针被插入受试者的组织中(例如，肌肉)，所述DNA通过在压力下(例如，由使用所述活塞并向注射器中的DNA溶液推压的方式施加的压力)排出所述孔的方式被导入组织中，然后所述DNA被肌细胞所摄取。随后，由所述DNA编码的蛋白在细胞中得以生成，免疫系统对所述蛋白产生反应。可选地，对由导入的DNA所产生的抗原的免疫应答进行测量(例如，抗体、特异性T细胞的存在情况，或者感染被减少或清除的情况)。通过使用本发明的某些实施例，可以向骨骼肌组织中直接施用基因构建体，便于细胞对所述基因的摄取，用于随后的所编码产品的合成。在本发明的一些方法中，可使用高压注射针向受试者的组织中推进含DNA或RNA分子的液体。液体以足够的速度推进，使得在组织的影响下，所述液体向组织上施加了较高的压力，增加了细胞透性，并导致DNA或RNA分子向该区域处的细胞渗透。在一些实施例中，可使用高压注射针，用于向其他器官的组织递送遗传物质，从而向所述器官的细胞中导入核酸分子。事实上，很容易地认识到，本领域所熟知的其他的基因递送机制也适合用于本发明的实施例中，包括脂质体衍生系统、人造病毒包膜和其他的本领域所知的系统(Rossi, J. J. (1995)Br. Med. Bull. 51 :217-225 ；Boado, R. J.等人(1998) J. Pharm. Sci. 87 :1308-1315 ；Morris, M. C.等人(1997)NucleicAcids Res. 25 :2730-2736,所有这些的全部内容均以引用的方式被包括在本申请中)。另夕卜，也可使用多种佐剂(例如，三唑核苷)，以提高免疫原性和/或细胞透性。例如，仅通过举例而非任何形式的限制，本发明的某些实施例可以与在美国出版物编号2005-0277192和美国出版物编号2005-0124573中描述的构建体联用，这些出版物的全部内容因此以引用的方式被明确结合。这些参考文献描述了编码丙型肝炎病毒(HCV)的非结构性蛋白3/4A(NS3/4A)的核酸的在人体上促进免疫反应的用途。例如，观察到当HCV NS3/4A基因被转染进哺乳动物细胞时，相对于真核表达载体，可观察到明显水平的NS3表达。此外，在用NS3/4A基因免疫的小鼠中发现具有已接触抗原的高水平的NS3特异性抗体和抗原特异性T细胞。最近，相似的构建体在临床试验上已被发现对于感染了 HCV的病人可以产生强力的免疫应答。因此，有些实施例涉及到治疗和预防HCV感染的方法，其中，向感染了 HCV或处于HCV感染风险下的病人提供在本说明书中描述的一种或多种装置(含有已被显示可以在人身上产生强力的免疫应答的一种或多种HCV DNA构建体)。可选地，识别出对需要预防和/或治疗HCV感染的药物的个体，然后使用在本说明书中描述的高压注射针装置，向所述个体提供含已发现可在人体中产生强力的免疫应答的一种或多种HCV构建体(例如，编码NS3/4A的表达构建体)的药物。可选地，对于治疗后或处于治疗阶段中的接种过的个体，要对NS3/4A的免疫应答，病毒效价的降低，或者抗HCV抗体的生成进行检测。然而，本发明并不局限于用于DNA免疫的HCV的抗原。事实上，本发明可在任何时间用于在细胞内表达所希望的任何抗原肽。例如，与特异性疾病状态有关的已知抗原肽的一些非限制性示例包括下列HBV PreSl> PreS2 和表面 env 蛋白、核心和 pol
HIV :gpl20、gp40、gpl60、p24、gag、pol、env、vif > vpr> vpu、tat、rev、nef乳头瘤:E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8、L1、L2HSV :gL、gH、gM、gB、gC、gK、gE、gD、ICP47、ICP36、ICP4如在Charo等人的美国专利第7，074, 770号，名称为“Method of DNAvaccination (DNA接种的方法)”中所教导的，在此该专利以其全部内容以引用的方式被结合。在本说明书中描述的一些实施例也包括和/或施用从如下组成的组中挑选出来的一种或多种核酸mRNA、tRNA、rRNA、cDNA、miRNA(微 RNA)、siRNA、(小型干扰 RNA)、piRNA(Piwi-干扰 RNA)、aRNA(反义 RNA)、snRNA(核小 RNA)、snoRNA(小核仁 RNA)、gRNA(导RNA)、shRNA (小发夹RNA)、stRNA (小型临时RNA)、ta-siRNA (反作用小型干扰RNA)、cpDNA (叶绿体 DNA)、gDNA (基因组 DNA)、msDNA (多拷贝单链 DNA)、mtDNA (线粒体 DNA)、GNA (乙二醇核酸)、LNA (锁核酸)、PNA (肽核酸)、TNA (苏糖核酸)、含吗啉代的核酸、含硫核酸、2-0-甲基核酸，以及含一种或多种修饰的碱基或间隔区的核酸。通过一种方法，例如，在第一次研究中，使用较大的较高注射压力(HIP)注射器，向HCV感染的个体的大腿肌肉中注射含大约0. 25mg/kg体重的ChronVac-C (coNS3/4A DNA)(一种编码优化密码子的HCV NS3/4A的表达质粒)的大约6.0毫升的0.9%NaCl溶液。在第二次研究中，使用较大的HIP注射器，向HBV感染的个体的大腿肌肉中注射含大约0. 25mg/kg体重的coHBcAg(—种编码优化密码子的HBV核心抗原的表达质粒)的大约6. 0毫升的0. 9% NaCl溶液。较大的HIP注射器具有4个呈三角形构型的针，每个针之间相等间距6mm。中心的针被设置在由三个外部的针形成的等边三角形中间。较大的HIP注射器的每个针有10个孔。所有的外部的针均具有向中心开口的孔，位于中心的针具有以90°的角度朝向四个方向开口的孔。在第5天和第10天，从接种后的个体中抽血，分离外周血单核细胞(PBMCs)，对PBMCs进行T细胞增殖性分析。采用标准96小时增殖试验，对PBMCs进行体外增殖性召回应答分析。(参见Lazinda等人，J. Gen. Virol. 82 :1299-1308 (2001)，其全部内容以引用的方式被明确结合在本申请中。)总之，向微量滴定板上接种了大约200，000个细胞/孔，将细胞与培养基单独孵育或与重组体NS3或HBcAg孵育。PBMCs也与作为阳性对照的伴刀豆凝集素A(ConA)进行孵育。72小时后，加入放射性胸苷，16-24小时后收集细胞。检测每分钟细胞的放射量。另外，对NS3/4A和/或HBcAg特异性的抗体的存在情况可通过标准试验(例如，酶联免疫吸附测定)进行确定。可选地，在两周或三周的间隔内加强注射。结果会显示，使用较大的HIP注射器进行免疫的人类表现出对NS3/4A和/或HBcAg明显的免疫反应。下面的实施例被用于说明本发明在DNA免疫领域的各种实施例，这些实施例可用于对其中包括的抗原有免疫反应需要的受试者进行递送。应该理解，下列的实施例并非是根据本发明所准备的广泛或详尽的多种实施例。实施例I使用较大的较高注射压力(HIP)注射器，小型HIP注射器或常规的27号针向重3. 5Kg的新西兰白兔的胚骨前肌注射含0. 9mg的ChronVac-C(coNS3/4A DNA)或coHBcAg的0. 3毫升0. 9% NaCl溶液。兔子可在右侧胫骨前肌、左侧胫骨前肌或这两侧进行注射。 如图23A所描绘的，小型HIP注射器的针长4-5_。小型HIP注射器具有4根针。如在图上所描绘的，三个外部针呈三角形，每根针之间相等间隔约3mm，形成等边三角形。中心的针被设置在由三个外部的针形成的三角形中间。每根针有6个孔。所有的外部的针均具有向中心开口的孔，位于中心的针具有以90°的角度朝向四个方向开口的孔。较大的HIP注射器(图23B)的针长8-9mm。较大的HIP注射器具有4个呈三角形构型的针，每个针相等间距6mm。中心的针被设置在由三个外部的针形成的等边三角形中间。较大的HIP注射器的每个针有10个孔。所有的外部的针均具有向中心开口的孔，位于中心的针具有以90°的角度朝向四个方向开口的孔。注射方案在下面的表I示出表I
兔# 针型注射位点廣粒剂量处死
115HIP-较大右侧 TA coNS3/4A 0.9mg/0.3ml 第 5 天常规针左侧 TA CONS3/4A 0.9mg/0.3ml__
116HIP-较大右侧 TA coNS3/4A 0.9mg/0.3ml 第 5 天常规针左侧 TA coNS3/4A 0.9mg/0.3ml__
117HIP-小型右侧 TA CONS3/4A 0.9 mg/0.3ml 第 5 天
―― — --
118HIP-小型右侧 TA coNS3/4A 0.9mg/0.3 ml 第 5 天
— — --

权利要求
1.ー种皮下注射针组件，包括 针，所述针包括适于治疗性物质通过的腔道，以及针的针筒，所述针的针筒在所述针筒的长度上包括多个孔，其中所述针的针筒具有封闭端；以及 连接器，所述连接器被设置为将所述针与压力产生元件进行连接。
2.ー种根据权利要求I所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述皮下注射针组件包括多个所述的针。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述的皮下注射针组件包括圆形、菱形或卵形排列的所述针。
4.根据权利要求2或3所述的皮下注射针组件，其特征在于，多个所述针被设置为在所 述针的针筒上的孔彼此朝向。
5.根据权利要求2或3所述的皮下注射针组件，其特征在于，多个所述针被设置为在所述针的针筒上的孔彼此背离。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的皮下注射针组件，所述的针组件进一歩包括与所述皮下注射针组件连接的压カ产生元件。
7.根据权利要求6所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述压カ产生元件为注射器。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 10nm-4mnin
9.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 0.01mm-4mmn
10.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 0.
11.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 I. 0mm-4mmo
12.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 I. 5mm-4mm。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 2. 0mm-4mm。
14.根据权利要求1-7中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述孔的直径约为 3. 0mm-4mm。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述装置包括与至少三个所述针连接的单个注射器。
16.根据权利要求15所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述至少三个所述针相距在大约2mm和大约IOmm之间。
17.根据权利要求1-14中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述装置包括与至少四个所述皮下注射针连接的单个注射器。
18.根据权利要求17所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述至少四个所述针相距在大约3和大约6mm之间。
19.ー种一次性使用的皮下递送装置，包括 附接于至少ー个注射器上的多个针，其特征在于，所述针包括沿所述针的针筒上分布的多个孔，以及ー个封闭端；且所述至少ー个注射器包括单次剂量的治疗试剂。
20.根据权利要求19所述的皮下递送装置，其特征在于，所述治疗试剂为核酸。
21.根据权利要求20所述的皮下递送装置，其特征在于，所述核酸为编码蛋白的DNA。
22.根据权利要求19-21中任一项所述的皮下递送装置，其特征在于，所述装置包括与至少三个所述皮下注射针连接的单个注射器。
23.根据权利要求22所述的皮下递送装置，其特征在干，所述至少三个皮下注射针相距在大约2和大约IOmm之间。
24.根据权利要求19-21中任一项所述的皮下递送装置，其特征在于，所述装置包括与至少四个所述针连接的单个注射器。
25.根据权利要求24所述的皮下递送装置，其特征在干，所述至少四个皮下注射针相距在大约3和大约6mm之间。
26.ー种使用根据权利要求7-25中任一项所述的装置向受试者递送治疗试剂的方法，包括 提供根据权利要求7-25中任一项所述的装置； 将所述装置的针插入受试者的组织中；和 将治疗试剂从注射器中，通过所述针移动进入所述组织中。
27.根据权利要求26所述的方法，其特征在于，所述的治疗试剂是核酸。
28.根据权利要求27所述的方法，其特征在于，所述的核酸编码病毒抗原。
29.根据权利要求28所述的方法，其特征在于，所述的病毒抗原为肝炎抗原。
30.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述的肝炎抗原为HCV或HBV抗原。
31.根据权利要求1-25中任一项所述的皮下注射针组件或皮下递送装置在受试者中诱导针对由所述的皮下注射针组件或皮下递送装置递送的抗原的免疫应答的应用。
32.根据权利要求1-18中任一项所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述的针被用于肌肉注射。
33.根据权利要求32所述的皮下注射针组件，其特征在于，所述的针包括斜边。
34.根据权利要求19-15中任一项所述的皮下递送装置，其特征在于，所述的针被用于肌肉注射。
35.根据权利要求34所述的皮下递送装置，其特征在于，所述的针包括斜边。
全文摘要
一种向组织中递送治疗物质的针装置，包括与压力产生元件的连接器，适于治疗性物质通过的腔道，以及针的针筒，其中每个针的针筒包括孔，所述孔适于控制和传递从所述压力产生元件传递来的压力进入组织，引起细胞膜对所述治疗性物质透过性增加。
文档编号C07K14/18GK102770156SQ201080062289
公开日2012年11月7日 申请日期2010年12月14日 优先权日2009年12月16日
发明者L·弗雷林, M·萨尔贝里 申请人:克洛恩泰克制药股份公司