专利名称：用于治疗氧化应激相关障碍的肽类的利记博彩app
用于治疗氧化应激相关障碍的肽类
技术领域和背景技术
在一些实施方式中，本发明涉及用于治疗氧化应激相关障碍的肽试剂。
自由基是极具反应性的化学物质，它们引起生物系统的显著破坏。自由基与生物分子的不加区别的反应会导致细胞和细胞组分(例如线粒体)的破坏，由此通过使细胞失去它们的结构和/或功能来影响这些生理过程。
在生物系统中，自由基总体上称为活性氧(R0Q。ROS是从内源性来源通过含氧物种的代谢，以及来自外源性来源例如毒素和大气污染物。
ROS对生物分子的攻击被称为“氧化应激”。氧化应激已经暗示是多种退行性疾病中的诱发因素。
帕金森氏病(PD)是由遗传和环境因素引起的一种多因素疾病。虽然患有PD的大多数患者具有散发性疾病，近年来已经鉴别出数个遗传原因。引起PD的遗传形式的日渐增加数量的基因提供了对该疾病的根本性机理进行全新认知的可能性。这些基因包括α-突触核蛋白、parkin、PINKl、dardarin (LRRK2)、以及 DJ-I。
目前的PD发病机理的观念集中在ROS的形成以及导致对黑质致密部造成氧化损害的氧化应激的启动。广泛的事后剖析研究已经提供了支持氧化应激涉及PD发病机理的证据；具体地说，这些包括脑中铁含量的改变、线粒体功能的损害、抗氧化保护系统的改变 (最值得注意的是超氧化物歧化酶[SOD]和还原型谷胱甘肽[GSH])，以及对脂质、蛋白、和 DNA氧化性损害的证据。铁可以诱导氧化应激，并且已经显示黑质内注射诱导了进行性帕金森综合征的模型。
多发性硬化症(MS)是一种中枢神经系统(CNS)的炎性、脱髓鞘疾病，其特征在于神经机能障碍的多种征状。MS及其动物模型，实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)，被认为是起因于自身免疫介导的活化了的免疫系统，例如T淋巴细胞和B淋巴细胞以及巨噬细胞和小胶质细胞。在病理学上，MS被表征为淋巴细胞和巨噬细胞静脉周浸润进入CNS薄壁组织， 导致了称为斑块的脱髓鞘性损伤。这些斑块(它们是MS的标志)与少突胶质细胞死亡、轴突损伤以及神经元缺失相关联。可以将MS视为一种炎性神经退行性疾病的观点得到了证明区域中神经元和轴突损伤远离极性斑块的研究，以及证明正常出现的白质和灰质改变的成像研究的支持。
MS的病因学还未被完全阐明，已经将它归因于遗传和环境原因两者。累积的数据显示在MS的发病机理中氧化应激起主要作用。主要由活化了的小胶质细胞过量产生的导致氧化应激的活性氧(ROS)已经隐含作为MS和EAE中脱髓鞘和轴突损伤的介质。
神经递质谷氨酸酯是MS中氧化应激来源之一，主要是通过活化它的亲离子受体。 少突胶质细胞，CNS的髓鞘生产细胞，对于谷氨酸酯兴奋性毒性也是高度脆弱的(主要是通过AMPA/红藻氨酸盐受体)。ROS引起对主要细胞部件例如脂类、蛋白类以及核酸类的损伤， 导致了细胞死亡。导致对ROS作用脆弱性增加的MS病人的CNS中削弱的细胞抗氧化剂防御系统可以增加CNS损害。
肌萎缩性侧索硬化(ALS)，也称为葛雷克氏症，是一种进行性致命的神经疾病，它影响多达30，000名美国人，其中每年美国新增5，000个病例。该障碍属于称为运动神经元病的一类障碍。当大脑和脊髓中控制随意运动的特定的神经细胞逐渐退化时，就会发生 ALS。家族性肌萎缩性侧索硬化(FALQ是与更常见的散发性变异体的区别仅在于它的家族性背景的ALS的一种形式。
有实质性证据来支持氧化应激造成运动神经元死亡的假说。例如，已经发现的是抗氧化酶的突变，超氧化物歧化酶I(SODl)，在显著少量的病例中引起疾病。
DJ-I是一种小的189个氨基酸的蛋白，它在不同的种类中是普遍地表达的并且是高度保守的。累积的数据显示它涉及多种细胞过程，尤其是在氧化应激中。已知DJ-I具有数种亚型，其中等电点在5. 5至7之间，在正常情况下主要是碱性亚型。当ROS暴露时， 存在DJ-I的更多酸性亚型的累积(通过半胱氨酸残基的氧化来介导)[Bandopadhyay R， et al.，Brain 127 :420-430,2004 ；Canet-AviIes et al. ,Proc Natl Acad Sci USA 101 9103-9108，2004]。
DJ-I分布广泛并且在大脑中高度表达，并且不限于一个单功能系统或解剖学位置。DJ-I表达于不同神经递质表型的神经元中以及所有神经胶质细胞类型，例如星形细胞、 小胶质细胞以及少突胶质细胞中。近来，多种DJ-I突变被发现并且与家族性帕金森氏病相关联(PD) [Bonifati et al. ,2003, Science 299 :256-9,2003] 来自散发性 PD 大脑对比对照物的脑样品死后研究发现在PD大脑中DJ-I的酸性亚型更丰富[Bandopadhyay R， et al. , Brain 127 =420-430, 2004] 0在其他神经退行性疾病中检测出DJ-I免疫反应性， 包括多系统萎缩、阿尔茨海默病、进行性核上麻痹、具有与染色体17相关帕金森综合征的额颞痴呆、以及皮克氏病[Bandopadhyay R, et al. , Brain 127 :420-430,2004 ；Neumann N.et al. ,Acta Neuropathol(Berl) 107 :489-496,2004 ；Rizzu P.et al. ,Ann Neurol 55 113-118,2004]。
W02007/119237对DJ-I水平的分析以及用于诊断氧化应激相关障碍的活性进行了讨论。
美国专利申请号20060153807和美国专利申请号20060171935讨论了例如DJ-I 相关试剂用于治疗神经退行性疾病例如帕金森病的载体介导的基因调节。
W02008/111063讨论了能够上调DJ-I-依赖性VMAT2转录用于治疗神经退行性疾病的肽试剂。发明内容
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种包括如SEQ ID NO :3中列出的序列的不长于25个氨基酸的分离肽，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种包括包含来自如SEQ ID NO 1 中列出氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物的药物组合物，以及药学上可接受的载体，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种包括包含来自如SEQ ID NO 2 中列出氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物的药物组合物，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种治疗对其有需要的受试者体内氧化应激相关障碍的方法，该方法包括将向受试者给予治疗有效量的本发明的药物组合物，由此治疗该氧化应激相关障碍。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种包括来自如SEQ ID NO=I中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
根据本发明一些实施方式的一个方面，提供了一种包括来自如SEQ ID NO :2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括如SEQ ID NO 3中列出的序列。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括如SEQ ID NO 14中列出的序列。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽是如SEQ ID NO 24中列出的。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括来自如SEQ ID NO 1中列出的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括来自如SEQ ID NO 2中列出的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括来自如SEQ ID NO 1中列出的氨基酸序列的不多于15个连续氨基酸。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽包括包含来自如SEQ ID NO 2中列出的氨基酸序列的不多于15个连续氨基酸。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽不长于20个氨基菌！。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO38中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO39中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO10中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO11中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO:1或3中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO40中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO13中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO41中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO42中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，该分离肽包括如SEQIDNO2中列出的序列。
根据本发明的--些实施方式，这些氨基酸中至:少一个是天然存在的氨基酸。
根据本发明的一些实施方式，这些氨基酸中至少一个是合成的氨基酸。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽附连到细胞渗透剂上。
根据本发明的一些实施方式，该附连是共价附连。
根据本发明的一些实施方式，该细胞渗透剂是一种肽试剂。
根据本发明的一些实施方式，该肽细胞渗透剂包括选自由SEQ ID NO :21-23组成的组中的一种氨基酸序列。
根据本发明的一些实施方式，该分离肽是如SEQ ID NO :24-36中列出的。
根据本发明的一些实施方式，该细胞包括神经元细胞。
根据本发明的一些实施方式，这些ROS条件选自由6-羟基多巴胺毒性、过氧化氢毒性、UV辐射以及多巴胺毒性组成的组。
根据本发明的一些实施方式，该氧化应激相关障碍是神经退行性疾病。
根据本发明的一些实施方式，该神经退行性疾病是选自由帕金森病、多发性硬化症、ALS、多系统萎缩、阿尔茨海默病、中风、进行性核上麻痹、具有与染色体17相关帕金森综合征的额颞痴呆以及皮克氏病组成的组。
根据本发明的一些实施方式，该分离的肽用于治疗氧化应激相关障碍。
除非另外定义，在本文中使用的所有技术的和/或科学的术语具有与本发明所属领域中普通技术人员所通常理解的相同的含义。虽然与在本文中所述的那些类似或等效的方法和材料可以用于实践或测试本发明的实施方式，示例性的方法和/或材料说明如下。 在冲突的情形下，本专利申请(包括定义)将具有支配力。此外，这些材料、方法、以及实例仅是说明性的而并非意在进行必要地限制。
在此参考附图仅通过举例对本发明的一些实施方式进行说明。现在特别详细地参考这些附图，应当强调的是所显示的这些细节是通过举例方式并且用于说明性地讨论本发明实施方式的目的。在此方面，用图进行的说明使本领域普通技术人员清楚本发明的实施方式可以如何实践。
在这些附图中
图IA-图IF是柱状图，它们示出了针对氧化损伤和毒性损伤DJ-I相关肽TAT 2a(SEQ ID NO :24)在体外是保护性的。在暴露于氧化应激之后通过暴露于H202进行诱导， 与仅用盐水相比较，发现使用DJ-I相关肽治疗增加了细胞活力(A)，减少了线粒体损害(B) 并且增加了代谢活性(C)。通过定量[3H]胸腺嘧啶核苷结合对细胞增殖进行测量。在暴露于这些肽(D)下，不存在增加的细胞增殖。对抗6-羟基多巴胺和多巴胺毒性的保护作用对应地示于图IE和F中。所提呈的实验是在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上完成的，并且重复至少3次。与用运载体治疗并且暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*p < 0. 05。
图2A-图2B是柱状图，它们示出了针对6-羟基多巴胺毒性DJ-I相关肽在体外是保护性的。在暴露于6-羟基多巴胺之前，与盐水相比较，当用DJ-I相关肽预处理人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y时发现增加了代谢活性，DJ-I相关肽#2的衍生物对抗6-羟基多巴胺毒性的保护作用示于图2A中并且DJ-I相关肽#5的衍生物对抗6-羟基多巴胺毒性的保护作用示于图2B中。突变的肽不能保护对抗6-羟基多巴胺毒性(如图2A-图2B中所示)。 所提呈的实验是在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上完成的，并且重复至少3次。与暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*P < 0. 05。
图3示出了针对6-羟基多巴胺毒性DJ-I相关肽在体外是保护性的。在暴露于6-羟基多巴胺之前，与盐水相比较，当用DJ-I相关肽II (SEQ ID NO :8)预处理人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y时发现增加了活力，与暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*p < 0. 05。
图4A是柱状图，示出了针对血清剥夺(或不含血清，serum deprivation) DJ-I相关肽是保护性的。在血清剥夺期间与盐水相比较，当用DJ-I相关肽(SEQ ID NO :10),11 (SEQID NO 8)以及短ID NO 9)预处理人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y时发现增加了活力，*P < 0. 05。
图4B是柱状图，示出了针对氧化毒性和毒素诱导的毒性对照DJ-I相关肽不是保护性的。在使用或不使用对照肽X和Y(不期望诱导神经保护的序列)进行预处理下将细胞暴露于不断增加剂量的6-羟基多巴胺(0-25UM)或暴露于过氧化氢(H2O2，0-50UM)。所提呈的实验是在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上完成的，并且重复3次。与用运载体治疗并且暴露于相同毒性剂量的对照细胞相比较，未观察到显著差异。
图5A-B是柱状图，示出了在原代培养中通过TAT 2a (SEQ ID NO :24)肽对抗H2A 和6-羟基多巴胺毒性的保护作用。在从出生后野生型C57/bl小鼠的皮质中得到的原代混合的神经元和神经胶质培养物中证明了对抗逐渐增加浓度的过氧化氢和6-羟基多巴胺的类似的保护作用。每个实验重复3次。与用运载体治疗并且暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*P <0.05。
图6是柱状图，示出了在神经元分化的鼠类神经干细胞中针对氧化损伤DJ-I相关肽I (SEQ ID NO 23)和II (SEQ ID NO 8)是保护性的。在暴露于过氧化氢(H2O2)之前，与盐水相比较，当用DJ-I相关肽I或II预处理这些细胞时发现增加了活力，与暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*P < 0. 05。
图7A-图7B是照片，示出了在幼稚型成神经瘤细胞(图7A)和用A53T突变体 α-突触核蛋白稳定转染的细胞中(图7Β) α-突触核蛋白的免疫组织化学染色。Aa-突触核蛋白被Alexa-568连接的二抗染成红色。细胞核被DAPI复染色(蓝色)。该实验一式三份重复3次。
图8是示出了 α-突触核蛋白的图形定量的柱状图，以及在假转染的成神经细胞瘤细胞以及用野生型(WT) α-突触核蛋白或Α53Τ突变型α -突触核蛋白稳定转染的细胞中代表针对α-突触核蛋白蛋白质印迹的照片。该实验一式三份重复3次。
图9是柱状图，示出了在过表达突变型α-突触核蛋白的细胞中肽#2衍生物对抗6-羟基多巴胺毒性的保护作用。当用DJ-I相关肽#2的衍生物进行处理时，在暴露于 6-羟基多巴胺过表达Α53Τ α-突触核蛋白的成神经细胞瘤细胞中证明了显著增加的代谢活性。每个实验重复3次。与用运载体治疗并且暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较， *ρ < 0. 05。
图10是柱状图，示出了在过表达突变型α-突触核蛋白的细胞中通过肽TAT 2a (SEQ ID NO :24)对抗过氧化氢毒性的保护作用。当用DJ-I相关肽TAT 2a (SEQ ID NO 24)进行处理时，在暴露于过氧化氢过表达A53T α -突触核蛋白的成神经细胞瘤细胞中证明了显著增加的活力。与用运载体治疗并且暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*Ρ < 0. 05。
图11是柱状图，示出了针对多巴胺毒性DJ-I相关肽在体内是保护性的。在使用或不使用DJ-I相关肽#2的衍生物进行预处理下，将细胞暴露于逐渐增加剂量的多巴胺 (0-50uM)。所提呈的实验是在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞上完成的，并且重复3次。与用运载体治疗并且暴露于相同多巴胺剂量的对照细胞相比较，*Ρ < 0. 05。
图12Α-图12Β是柱状图，示出了在NSC-34细胞中针对过氧化氢和SIN-I毒性DJ-I 相关肽是保护性的。在暴露于过氧化氢(图12Α)或SIN-I (图12Β)毒性之前，与盐水相比较，当用 DJ-I 相关肽 TAT 2a (SEQ ID NO :24)或 TAT 2b (SEQ ID NO :25)预处理 NSC-IM 细胞时发现增加了活力，与暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*P < 0. 05，**p < 0. 01。
图13是柱状图，示出了在ALS的细胞模型中DJ-I相关肽#2的衍生物是保护性的。 在暴露于SIN-I毒性之前，与盐水相比较，当用DJ-I相关肽#2的衍生物预处理NSC-34细胞时发现增加了代谢活性，突变的肽#2不能保护对抗SIN-I毒性(如所示)。所提呈的实验重复3次。与暴露于相同毒性损伤的对照细胞相比较，*p < 0. 05。
图14是柱状图，示出了在对抗紫外线辐射的细胞模型中DJ-I相关肽是保护性的。在暴露于紫外线辐射之前，与盐水相比较，当用DJ-I相关肽II (SEQ ID N0J)或TAT 2a (SEQ ID NO :24)预处理HaCaT细胞时发现增加了代谢活性。所提呈的实验重复3次。与对照物相比较，*P < 0. 05。
图15A-图15B是柱状图，示出了纹状体内的TAT加肽注射保护对抗体内6_羟基多巴胺半帕金森病的小鼠模型。6-羟基多巴胺损害之前一小时，将溶于盐水的2μ1 100 μ M肽TAT 2a (SEQ ID NO :24)或单独的盐水立体定位地注入右侧纹状体中。与对照相比较，在该肽治疗的小鼠体内在损害之后2周和4周发现了显著减少的苯丙胺诱导的旋转， Y < 0.01(图15A)。此外，响应于苯丙胺注射，较小部分的受损害小鼠旋转(图15B)。该实验重复两次。
图16A-图16B是柱状图，示出了静脉内肽()TAT 2a(SEQ ID NO :24)注射保护对抗体内6羟基多巴胺半帕金森病的小鼠模型。在6-羟基多巴胺损害之前4小时，将50 μ g 肽TAT 2a (SEQ ID NO :24)或单独的盐水静脉内注入。与对照相比较，在IV肽治疗的小鼠体内证明了显著地减少的苯丙胺诱导的旋转， < 0.01(图16A)。响应于苯丙胺注射，较小部分的受损害小鼠旋转(图16B)。
图17是柱状图，示出了皮下注射肽(SEQ ID NO 25)保护对抗MPTP帕金森病的模型。
具体实施方式
许多神经退行性障碍被认为与氧化应激相关联，例如帕金森病和中风。逐渐累积的数据显示DJ-1，一种小的189个氨基酸蛋白，涉及多种细胞过程，尤其是在氧化应激中， 并且提出了它用于治疗神经退行性疾病的用途。
在其一些实施方式中，本文披露内容涉及用于治疗氧化应激相关障碍的DJ-I相关肽。与本披露相联系已经鉴别出DJ-I蛋白上的两个最小核心序列，它们包括治疗活性。 已经制备出多种肽，它们包括一个或多个这样的核心序列，并且已经证明了神经保护特性。
具体地说，已经发现的是在体外细胞系统中包括这两个核心序列中至少一项的 DJ-I相关肽能够保护对抗毒性损伤，包括6-羟基多巴胺、多巴胺以及H2O2 (图IA-图1F、图 2A-图2B、图3、图11、图12A)，以及血清剥夺(图4A)，同时不包括该鉴别的核心序列之一的其他DJ-I相关肽不包括这类神经保护特性(图4B)。这些实验在原代培养物(图5A-图 5B)以及具有相同结果的分化神经干细胞(图6)中重复。
本文披露内容的另一个方面涉及在成神经细胞瘤细胞中过表达突变型 A53T α-突触核蛋白的帕金森障碍的一种体外细胞模型。本披露实施方式的DJ-I相关肽被证明在体外细胞模型中针对6-羟基多巴胺毒性(图9)和H2O2毒性(图10)具有保护性。
本文披露内容的又另一个方面涉及用于ALS和紫外线照射的一种细胞模型，其中本披露实施方式的DJ-I相关肽被证明在这些测定中也具有保护性(图13和图14)。
最后，在帕金森病的体内模型中对本披露实施方式的DJ-I相关肽进行测试。在局部(图15A-图15B)和全身(图16A-图16B)给药两者之后某些DJ-I相关肽显示治疗活性。
总之，根据本文披露内容，已经发现的是从DJ-I衍生的肽(DJ-1相关肽)可以用于治疗氧化应激相关障碍。如在此使用的短语“氧化应激条件”是指这些使活性氧(ROS)的水平升高超过正常水平的条件。如提及的，这可能起因于缺乏抗氧化剂或起因于过多的自由基。示例性的ROS条件包括但不限于6-羟基多巴胺毒性、过氧化氢毒性、紫外线辐射以及多巴胺毒性。
在某些实施方式中，本文披露内容的某些方面，如在此更全面详细说明的，涉及长度不长于20个氨基酸的短DJ-I相关肽。更具体地，根据本披露的一个方面，提供了包括来自如SEQ ID NO 1中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸不长于25个氨基酸的一种分离的DJ-I相关肽，或其肽模拟物，其中在氧化应激条件下该分离肽增加了细胞活力。
KGAEEMETVIPVDVMRRAGI- (SEQ ID NO 1 ；在此也称为 # 肽 2)
根据本文披露内容这个方面的实施方式，该肽包括来自如SEQ ID NO=I中列出的氨基酸序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续氨基酸。
KGAEEMETVIPVDVMRRAGI-(SEQ ID NO :1)
根据本文披露内容这个方面的一个实施方式，该肽包括SEQ ID NO=I的不多于10个连续氨基酸。
根据本文披露内容这个方面的其他实施方式，该肽包括SEQ ID NO=I的不多于15个连续氨基酸。
包含在本文披露内容这个方面的肽中的示例性序列包括SEQ ID NO :1-12,SEQ ID NO 38 或 SEQ ID NO :39。
根据本文披露内容的另一个方面，提供了一种包括来自SEQ ID NO 2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，其中在氧化应激条件下该分离肽使细胞活力增加。
KEGPYDVVVLPGGNLGAQNLS- (SEQ ID NO 2 ；在此也称为肽 #5)。
根据本文披露内容这个方面的实施方式，该肽包括来自如SEQ ID NO :2中列出的氨基酸序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续氨基酸。
根据本文披露内容这个方面的一个实施方式，该肽包括SEQ ID NO 2的不多于10个连续氨基酸。
根据本文披露内容这个方面的其他实施方式，该肽包括SEQ ID NO 2的不多于15个连续氨基酸。
包含在本文披露内容这个方面的肽中的示例性序列包括SEQ ID NO :2,13-20, 40-42。
如在此使用的术语“肽”是指一种天然的或合成的氨基酸的聚合物，包括天然肽 (降解产物，合成方式合成的多肽或重组体多肽)和假肽(典型地，合成方式合成的肽)，以及作为肽类似物的类肽类和半类肽类，它们可以具有例如使这些肽在体内时甚至更稳定或更能够穿透进入细胞内的修饰。
这类修饰包括但不限于N端修饰、C端修饰、多肽键修饰(包括但不限于CH2-NH、 CH2-S、CH2-S = 0、0 = C-NH、CH2-0、CH2-CH2、S = C-NH、CH = CH 或 CF = CH)、主链修饰、 以及残基修饰。用于制备模拟肽化合物的方法是本领域熟知的并且例如在Quantitative Drug Design，C. A. Ramsden Gd.，第 17· 2 章，F. Choplin Pergamon Press (1992)中进行详细说明，通过引用将其结合于本文就像在此完全列出一样。下面提供这个方面进一步的细节。
多肽内的多肽键(-C0-NH-)可以被下面各项取代例如N-甲基化的键 (-N (OK)-CO-)、酯键(-C (R) H-C-O-O-C (R)-N-)、酮亚甲基键(-C0-CH2-)、α -氮杂键(-NH-N(R)-CO-)，其中R是任何烷基，例如甲基，卡巴键(-CH2-NH-)、羟基亚乙基键 (-CH(OH)-CH2-)、硫代酰胺键(-CS-NH-)、烯属双键(-CH = CH-)、反酰胺键(-NH-C0-)、多肽衍生物(_N(R)-CH2-C0-)，其中R是天然存在于碳原子上的“正常的”侧链。
这些修饰可以发生在沿着该多肽链这些键的任何一个上，并且甚至同时在数个个)上。
天然芳香族氨基酸，Trp, Tyr以及Wie，可以取代合成的非天然酸例如苯基甘氨酸、TIC、萘基丙氨酸(Nol)、Phe的环甲基化的衍生物、Phe的卤化的衍生物或邻甲基-Tyr。
除了上述之外，本发明的多肽还可以包括一个或多个修饰的氨基酸或一个或多个非氨基酸单体(例如，脂肪酸、复杂的碳水化合物等)。
如在本文中使用的在说明书中以及在下面的权利要求部分中术语“氨基酸”或 “氨基酸类”被理解为包括20个天然存在的氨基酸；通常体内翻译后修饰的那些氨基酸， 包括例如羟基脯氨酸、磷酸丝氨酸以及磷酸苏氨酸；以及其他非常见氨基酸，包括但不限于 2-氨基己二酸、羟基赖氨酸、异锁链素、正缬氨酸、正亮氨酸以及鸟氨酸。此外，术语“氨基酸”包括D-和L-氨基酸两者(立体异构体)。
下面的表1和表2列出天然存在的氨基酸(表1)和非常规的或修饰的氨基酸(表 2)，它们可以与本发明一起使用。
表 权利要求
1.一种具有包括如SEQ ID NO :3中列出序列的不长于25个氨基酸的分离肽，其中在氧化应激条件下所述分离肽使细胞活力增加。
2.一种治疗对其有需要的受试者体内氧化应激相关障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效量的包括来自如SEQ ID NO :1中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中，在氧化应激条件下，所述分离肽使细胞活力增加，由此治疗所述氧化应激相关障碍。
3.一种治疗对其有需要的受试者体内氧化应激相关障碍的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效量的包括来自如SEQ ID NO :2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中，在氧化应激条件下，所述分离肽使细胞活力增加，由此治疗所述氧化应激相关障碍。
4.一种包括来自如SEQ ID NO :1中列出的氨基酸序列至少2个连续氨基酸的不长于 25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，其中，在氧化应激条件下该分离肽增加了细胞活力用于治疗氧化应激相关障碍。
5.一种包括来自如SEQ ID NO :2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，其中，在氧化应激条件下，所述分离肽使细胞活力增加以用于治疗氧化应激相关障碍。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法或分离肽，其中，所述氧化应激相关障碍是神经退行性疾病。
7.根据权利要求6所述的方法或分离肽，其中，所述神经退行性疾病是选自由帕金森病、多发性硬化症、ALS、多系统萎缩、阿尔茨海默病、中风、进行性核上麻痹、具有与染色体 17相关帕金森综合征的额颞痴呆以及皮克氏病组成的组。
8.一种药物组合物，包括包含来自如SEQ ID NO :1中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽、或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中， 在氧化应激条件下，所述分离的肽使细胞活力增加。
9.一种药物组合物，包括包含来自如SEQ ID NO 2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽、或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中， 在氧化应激条件下，所述分离的肽使细胞活力增加。
10.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含如SEQ ID NO 3中列出的序列。
11.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含如SEQ ID NO 14中列出的序列。
12.根据权利要求1、10所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽是如SEQID NO 24中列出的。
13.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含来自如SEQ ID NO 1中列出的所述氨基酸序列的至少5个连续氨基酸。
14.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含来自如 SEQ ID NO 2中列出的所述氨基酸序列的至少5个连续氨基酸。
15.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含来自如SEQ ID NO :1中列出的所述氨基酸序列的不多于15个连续氨基酸。
16.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含来自如 SEQ ID NO :2中列出的所述氨基酸序列的不多于15个连续氨基酸。
17.根据权利要求2-9中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽不长于20个氨基酸。
18.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含如SEQ ID NO 38中列出的序列。
19.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO 39中列出的序列。
20.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO 10中列出的序列。
21.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO 11中列出的序列。
22.根据权利要求2、4或8中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 3中列出的序列。
23.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO 40中列出的序列。
24.根据权利要求23所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包括如SEQID NO 13中列出的序列。
25.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中所述分离肽包含如SEQ ID NO 41中列出的序列。
26.根据权利要求25所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含如SEQID NO 42中列出的序列。
27.根据权利要求3、5或9所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽包含如SEQ ID NO 2中列出的序列。
28.根据权利要求2-9中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述氨基酸中的至少一个是天然存在的氨基酸。
29.根据权利要求2-9中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述氨基酸中的至少一个是合成的氨基酸。
30.根据权利要求1- 中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽附连至细胞渗透剂。
31.根据权利要求30所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽是共价附连的。
32.根据权利要求30所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述细胞渗透剂是一种肽试剂。
33.根据权利要求32所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述肽细胞渗透剂包含选自 SEQ ID NOs :21-23组成的组中的一种氨基酸序列。
34.根据权利要求33所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述分离肽是如SEQID NOs 24-36中列出的。
35.根据权利要求1-9中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述细胞包含神经元细胞。
36.根据权利要求1-9中任一项所述的方法、肽或药物组合物，其中，所述ROS条件选自由6-羟基多巴胺毒性、过氧化氢毒性、UV辐射以及多巴胺毒性组成的组。
37.一种包含来自如SEQ ID NO :1中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离肽，或其肽模拟物，以及药学上可接受的载体，其中，在氧化应激条件下，所述分离肽使细胞活力增加。
38.一种包含来自如SEQ ID NO :2中列出的氨基酸序列的至少2个连续氨基酸的不长于25个氨基酸的分离的肽，或其肽模拟物，其中，在氧化应激条件下，所述分离肽使细胞活力增加。
全文摘要
披露了分离的DJ-1相关肽以及包括它的药物组合物用于治疗氧化应激相关障碍。
文档编号C07K14/47GK102498127SQ201080041696
公开日2012年6月13日 申请日期2010年9月16日 优先权日2009年9月17日
发明者丹尼尔·奥芬, 埃尔戴德·梅拉梅德, 尼里特·勒夫 申请人:雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司