专利名称：具有抗肿瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物及其合成方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是一种具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物及其合 成方法。
背景技术：
2-甲氧基雌二醇Q-ME)作为激素类化合物是雌二醇在体内的代谢终产物。近几 年发现其具有非常广谱的抗肿瘤活性，可用来治疗多发性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、甲状 腺癌等疾病，具有广谱抗肿瘤作用，并且一些已经产生抗药性的癌细胞对2-ME非常敏感。 2-ME作用机制上与传统抗肿瘤药物不同，其抗肿瘤作用机制主要是抑制细胞增值；诱导 肿瘤细胞和内皮细胞调亡；抗血管生成作用；促进细胞周期停滞；增强肿瘤细胞对辐射的 敏感性等等。但是2-ME存在水溶性差，生物利用度低等缺陷，限制了它的广泛应用。以2-ME类似物为底物的雌留衍生物是针对生物利用低的缺陷制备的，是既保持 或增强抗肿瘤活性又增加其水溶性的新的抗肿瘤化合物。目前关于2-ME衍生物的抗肿瘤 研究已有很多，据Abby Ho等人报道，2-ME 17位羟基与甘氨酸羧基成酯后的化合物保留了 2-ME抗肿瘤活性。基于该研究报道和雌二醇的构效关系可知若在母核A环及B环进行结 构修饰，将会使其抗肿瘤活性降低，所以在母核C环及D环上的修饰就成为了改善2-ME活 性及水溶性的主要研究方向，其中D环上的修饰相对而言更具有吸引力。文献报道，17位羟 基被F取代后，其化合物抗肿瘤活性消失，而当被亚甲基取代后，其化合物保持与2-ME相当 的抗肿瘤活性(Abby Ho等，2006)，因此通过2-ME类似物17位上进行结构修饰，更有希望 得到既保持或增强抗肿瘤活性又增加其水溶性的新的抗肿瘤化合物，从而提高其生物利用 度。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种具有抗肿瘤活 性的雌留氨基酸酯化合物及其合成方法，可有效解决具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合 物的制备问题。本发明解决的技术方案是，该化合物是由氨基酸或小分子肽类和留体母核、化合 物中间体制成，所说的雌留氨基酸酯化合物的分子结构通式为
权利要求
1. 一种具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物是由氨基酸或 小分子肽类和留体母核、化合物中间体制成，所说的雌留氨基酸酯化合物的分子结构通式 为
2.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征在 于，该雌留氨基酸酯化合物的制备方法是(1)、在_5°C -15°C，将氨基酸或小分子肽类溶解于质量浓度为8 % -10 %的氢氧化钠 水溶液或者碳酸氢钠饱和溶液中，每Iml的质量浓度为8% -10%的氢氧化钠水溶液溶解 2. 5mmol的氨基酸或小分子肽类或者每Iml碳酸氢钠饱和溶液中溶解0. 2mmol氨基酸或小 分子肽类，得溶解液，边搅拌边用氨基酸或小分子肽类摩尔数的1-1. 5倍量的氯甲酸苄酯 以1滴/3-10秒的速度滴加到溶解液中进行反应，若将氨基酸或小分子肽类溶解于质量浓 度为8% -10%的氢氧化钠水溶液中时，在溶解液中需滴加氢氧化钠水溶液保持PH = 8 9，滴完，置于10°C -30°C下，搅拌反应至用茚三酮为显色剂显色至无紫色，或做薄层检测， 薄层检测的目的在于，测定溶液是否反应完全，只有反应完全后，才可进行下一步的操作， 以下同，测得完全反应后，再每次用反应溶液体积0. 5-1. 3倍量的乙醚洗涤3次，弃去乙醚， 得水相，水相用质量浓度为30% -40%的浓盐酸调PH为1-3，出现乳白色固体，对出现乳白 色固体后的液体每次用与乙醚同量的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用每次与乙醚 同量的蒸馏水洗涤2次、饱和食盐水洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥6-M小时，抽滤，滤液 减压浓缩，用体积比为1 2-5的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过层析柱纯 化或过柱色谱纯化，得纯化的化合物；O)、在10-30°C，将摩尔比为1-1.2 1的纯化的化合物和甾体母核的混合物溶解于 反应溶剂中，每IOOml反应溶剂中溶解2mm0l-5mm0l留体母核，边搅拌边先后加入缩合剂1， 3- 二环己基碳二亚胺和催化剂4- 二甲氨基吡啶，留体母核和1，3_ 二环己基碳二亚胺的摩 尔比为1 1-1.5 ;4-二甲氨基吡啶和1，3_ 二环己基碳二亚胺的摩尔比为1 30-100，搅 拌反应IOmin后，补加上述缩合剂1，3-二环己基碳二亚胺量的0. 4-0. 8倍量的另备的缩合 剂1，3_二环己基碳二亚胺，以使留体母核完全反应，搅拌10-20小时，做薄层检测，过滤，滤 液减压浓缩，用体积比为1 2-5的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化，或用乙酸乙酯溶解，过滤，弃去固体，滤液减压浓缩，用甲醇或乙醇重结晶纯化，纯化 后即得化合物中间体，其分子结构通式为
3.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧羰基-β -丙氨酸的制备在_5°C，将IOmmol的β -丙氨酸溶解于4. Oml质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液中， 得溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/4秒的速度滴加到溶解液中进行反应， 并滴加质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液保持PH为8，滴完，置于10°C下，搅拌反应15小 时，用茚三酮为显色剂显色无紫色，再用5ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水相用 质量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸馏水洗涤2次、5ml的饱和食盐水 洗涤1次，再用无水硫酸镁干燥10小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体积比为 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过层析柱纯化，得白色固体N-苄氧碳 基-β-丙氨酸；O)、2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-苄氧羰基)-β -丙 氨酸酯的制备在10°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-β -丙氨酸和3. Ommol的2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，边搅拌边先后加入3. Ommol缩合 剂1，3- 二环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应IOmin后，补 加1.5mm0l缩合剂1，3-二环己基碳二亚胺，以使2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三 烯-17 β -醇完全反应，搅拌10小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，用 体积比为1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化，得化合物中 间体2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)_ β -丙氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17- β -丙氨酸酯的制备在60°C，将1. 64g2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧 羰基)-β -丙氨酸酯溶于无水甲醇中，溶解后，加入0. 82g的10%钯碳催化剂，加氢至压力 为50I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰白色固体，用体积比为1 2 的甲醇和乙酸乙酯配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化，得2-甲氧基-3，17 β - 二羟 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- β -丙氨酸酯。
4.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧羰基-L-苯丙氨酸的制备在-3°C，将IOmmol的L-苯丙氨酸溶解于4. Oml质量浓度为9%的氢氧化钠水溶液中， 得溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/5秒的速度滴加到溶解液中进行反应， 并滴加质量浓度为9%的氢氧化钠水溶液保持PH为8，滴完，置于15°C下，搅拌反应15小 时，做薄层检测，测得溶液完全反应后，再用5ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水 相用质量浓度为35%的浓盐酸调PH至2，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用 5ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸馏水洗涤2次、5ml的饱和食 盐水洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥15小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体 积比为1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过柱色谱纯化，得N-苄氧碳 基-L-苯丙氨酸；(2)、16α -乙基-2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧 羰基)-L-苯再氨酸酯的制备在15°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-L-苯丙氨酸和3. Ommol的16 α-乙基-2-甲 氧基-3-苄氧基1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，边搅拌边先后加入 3. Ommol缩合剂1，3_ 二环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应 IOmin后，补加1. 8mmol缩合剂1，3- 二环己基碳二亚胺，以使16 α -乙基-2-甲氧基-3-苄 氧基1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反应，搅拌15小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓 缩，得淡黄色油状物，用体积比为1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱 色谱纯化，得化合物中间体16 α -乙基-2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌 三烯-17- (N-苄氧羰基)-L-苯丙氨酸酯；(3)、16α -乙基-2-甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-L-苯丙氨酸酯 的制备在60°C，将1.97g 16 α-乙基-2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基_1，3，5 (10)-雌三 烯-17-(N-苄氧羰基)-L-苯丙氨酸酯溶于无水乙醇中，溶解后，加入0. 95g的10%钯碳(Pd/C)催化剂，加氢至压力为55I^i，反应4. 5小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰 白色固体，用体积比为1 5的乙酸乙酯石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化， 得16 α-乙基-2-甲氧基-3，17 3-二羟基-1，3，5(10)-雌三烯-17-1^-苯丙氨酸酯。
5.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧羰基-L-亮氨酸的制备在2°C，将IOmmol的L-亮氨酸溶解于4. Oml质量浓度为8%的氢氧化钠水溶液中，得 溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/6秒的速度滴加到溶解液中进行反应，并 滴加质量浓度为8%的氢氧化钠水溶液保持PH为9，滴完，置于20°C下，搅拌反应15小时， 用茚三酮为显色剂显色无紫色，再用5ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水相用质 量浓度为37%的浓盐酸调PH至1，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用5ml/次 的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸馏水洗涤2次、5ml的饱和食盐水洗 涤1次，再以无水硫酸镁干燥18小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体积比为 1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过柱色谱纯化，得N-苄氧羰基-L-亮 氨酸；(2)、16α - (N，N- 二甲基)氨甲基_2_甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌 三烯-17-(N-苄氧羰基)-L-亮氨酸酯的制备在20°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-L-亮氨酸和3. Ommol的16 α - (N, N- 二甲基)氨 甲基-2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml氯仿中，边搅拌边先后 加入3. Ommol缩合剂1，3- 二环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反 应IOmin后，补加2. Immol缩合剂1，3- 二环己基碳二亚胺，以使16 α - (N，N- 二甲基)氨甲 基-2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反应，搅拌10小时，做薄层检 测，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，再用乙酸乙酯溶解，过滤，弃去固体，滤液减压浓 缩，得淡黄色固体，用无水乙醇重结晶，得化合物中间体16 α _(Ν，Ν-二甲基)氨甲基-2-甲 氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-L-亮氨酸酯；(3)、16α-(N，N-二甲基)氨甲基-2-甲氧基-3，17 β - 二羟基 _1，3，5 (10)-雌三 烯-17-L-亮氨酸酯的制备在20°C，将1.5(^16 0-(队^二甲基)氨甲基-2-甲氧基-3-苄氧基-17 β-羟基-1， 3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-L-亮氨酸酯溶于无水乙醇中，溶解后，加入0. 75g的 10%钯碳催化剂，加氢至压力为6(^si，反应6小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰 白色固体，用无水甲醇重结晶，得16α_(Ν，N-二甲基)氨甲基-2-甲氧基_3，17β_ 二羟 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-L-亮氨酸酯。
6.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，具特征 在于，具体步骤如下(1)、Ν，Ν ‘_ 二苄氧羰基-L-赖氨酸的制备在6°C，将IOmmol的L-赖氨酸溶解于4. Oml质量浓度为10 %的氢氧化钠水溶液中， 得溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/7秒的速度滴加到溶解液中进行反应， 并滴加质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液保持PH为8，滴完，置于23°C下，搅拌反应15小 时，用茚三酮为显色剂显色无紫色，再用5ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水相用质量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸馏水洗涤2次、5ml的饱和食盐水 洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥20小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体积比为 1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过柱色谱纯化，得N，N ‘-二苄氧羰 基-L-赖氨酸；(2),2-甲氧基-3-苄氧基-17β-羟基-1，3，5(10)_雌三烯-17-(N，N‘-二苄氧羰 基)-L-赖氨酸酯的制备在23°C，将1.6mmol的N，N ‘_ 二苄氧羰基-L-赖氨酸和1. 5mmol的2-甲氧基-3-苄 氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于35ml氯仿中，边搅拌边先后加入1. 5mmol缩合剂 1,3- 二环己基碳二亚胺和0. 045mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应IOmin后，补加 1. 05mmol缩合剂1，3- 二环己基碳二亚胺，以使2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯 17 β -醇完全反应，搅拌15小时，做薄层检测，基本反应完全，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄 色油状物，用体积比为1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化， 得化合物中间体2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N，N ‘- 二苯 氧羰基)-L-赖氨酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-L-赖氨酸酯的制备在 25°C，将 1.03g 2-甲氧基 3-苄氧基-17 β 羟基 _1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N，Ν‘-二 苄氧碳基)-L-赖氨酸酯溶于无水乙酸乙酯中，溶解后，加入0. 5g的10%钯碳催化剂，加氢 至压力为40I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰色固体物，用乙醇为流 动相过柱色谱纯化，得2-甲氧基-3，17 β - 二羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-L-赖氨酸酯。
7.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧碳基D-缬氨酸的制备0°C下，将IOmmolD-缬氨酸溶于50ml此温度下的碳酸氢钠饱和溶液中，得溶解液，边 搅拌边用Ilmmol的氯甲酸苄酯以1滴/10秒的速度滴加到溶解液中进行反应，滴完，置于 30°C下，搅拌反应15小时，做薄层检测，测得溶液完全反应后，再用50ml/次的乙醚洗涤3 次，弃去乙醚，得水相，水相用质量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出现 乳白色固体后的液体用50ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用50ml/次的蒸馏 水洗涤2次、50ml的饱和食盐水洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥7小时，抽滤，滤液减压浓 缩，得淡黄色油状物，以体积比为1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过 层析柱纯化，得N-苄氧羰基-D-缬氨酸；(2)、2_甲氧基-3-苄氧基-17β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-缬 氨酸酯的制备在30°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-D-缬氨酸和3. Ommol的2-甲氧基-3-苄氧 基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，边搅拌边先后加入3. Ommol缩合 剂1，3-二环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4-二甲氨基吡啶，搅拌反应IOmin后，补加 1. 5mmol的缩合剂1，3-二环己基碳二亚胺，以使2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三 烯-17 β -醇完全反应，搅拌10小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，用 体积比为1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化，得化合物中间体2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-缬氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-缬氨酸酯的制备在30°C，将1. 53g 2-甲氧基-3-苄氧基-17 β-羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-苄 氧碳基)-D_缬氨酸酯溶于无水乙醇中，溶解后，加入0. 78g的10%钯碳催化剂，加氢至压 力为45I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰白色固体，用无水甲醇重结 晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-缬氨酸酯。
8.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧碳基-D-丙氨酸的制备在10°C，将IOmmol的D-丙氨酸溶解于4. Oml质量浓度为8%的氢氧化钠水溶液中，得 溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/9秒的速度滴加到溶解液中进行反应，并 滴加质量浓度为8%的氢氧化钠水溶液保持PH为8，滴完，置于下，搅拌反应15小时， 做薄层检测，测得溶液完全反应后，再用5ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水相用 质量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用5ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用5ml/次的蒸馏水洗涤2次、5ml的饱和食盐水 洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥12小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体积比为 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过层析柱纯化，得N-苄氧羰基-D-丙 氨酸；(2)、2_乙氧基-3-苄氧基-17β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-丙 氨酸酯的制备在27°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-D-丙氨酸和3. Ommol的2-乙氧基-3-苄氧基-1， 3，5 (10)-雌三烯-17 β醇溶于75ml 二氯甲烷中，边搅拌边先后加入3. Ommol缩合剂1，3-二 环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应IOmin后，补加1. 8mmol 的缩合剂1，3- 二环己基碳二亚胺，以使2-乙氧基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β 醇完全反应，搅拌18小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，用体积比为 1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶液为流动相过柱色谱纯化，得化合物中间体2-乙 氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-丙氨酸酯；(3)、2_乙氧基-3，17β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-丙氨酸酯的制备在60°C，将1. 466g 2-乙氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17- (N-苄 氧羰基)-D-丙氨酸酯溶于无水甲醇中，溶解后，加入0. 72g的10 %钯碳催化剂，加氢至压 力为50I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰白色固体，用无水甲醇重结 晶，得2-乙氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-丙氨酸酯。
9.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特征 在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧碳基-D-亮氨酸的制备在-5°C，将25mmol的D-亮氨酸溶解于IOml质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液中，得 溶解液，边搅拌边用35mmol氯甲酸苄酯以1滴/4秒的速度滴加到溶解液中进行反应，并滴 加质量浓度为10%的氢氧化钠水溶液保持PH为8，滴完，置于10°C下，搅拌反应15小时，用茚三酮为显色剂显色无紫色，再用16ml/次的乙醚洗涤3次，弃去乙醚，得水相，水相用质 量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出现乳白色固体后的液体用16ml/ 次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用16ml/次的蒸馏水洗涤2次、16ml/次的饱和 食盐水洗涤1次，再用无水硫酸镁干燥10小时，抽滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，以体 积比为1 3的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过层析柱纯化，得N-苄氧碳 基-D-亮氨酸；(2)、2_甲氧基-3-苄氧基-17β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-亮 氨酸酯的制备在20°C，将3. 2mmolN-苄氧碳基-D-亮氨酸和3. Ommol的2-甲氧基3-苄氧基_1，3， 5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶于75ml 二氯甲烷中，边搅拌边先后加入3. Ommol缩合剂1，3- 二 环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应IOmin后，补加2. Immol缩 合剂1，3_ 二环己基碳二亚胺，以使2-甲氧基-3-苄氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17β-醇 完全反应，搅拌10小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物，再用乙酸乙酯 溶解，过滤，弃去固体，滤液减压浓缩，得淡黄色固体，用无水乙醇重结晶，得化合物中间体 1. 2g 2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基)-D-亮氨 酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-亮氨酸酯的制备在20°C，将1. 2g 2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧 羰基)-D-亮氨酸酯溶于无水乙醇中，溶解后，加入0. 6g的10 %钯碳催化剂，加氢气至压力 为60I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得到灰白色固体，以无水甲醇重结 晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-D-亮氨酸酯。
10.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的雌留氨基酸酯化合物的合成方法，其特 征在于，具体步骤如下(1)、N-苄氧羰基-β-丙氨酰-L-组氨酸的制备在8°C，将IOmmol的N-β -丙氨酰-L-组氨酸(L-肌肽)溶解于4. Oml质量浓度为 10%的氢氧化钠水溶液中，得溶解液，边搅拌边用Hmmol的氯甲酸苄酯以1滴/8秒的速度 滴加到溶解液中进行反应，并滴加质量浓度为10%的氢氧化钠(NaOH)水溶液保持PH为8， 滴完，置于25°C下，搅拌反应12小时，用茚三酮为显色剂显色无紫色，再用7ml/次乙醚洗涤 3次，弃去乙醚，得水相，水相用质量浓度为30%的浓盐酸调PH至3，出现乳白色固体，对出 现乳白色固体后的液体用7ml/次的乙酸乙酯萃取3次，合并，合并液依次用7ml/次的蒸馏 水洗涤2次、7ml的饱和食盐水洗涤1次，再以无水硫酸镁干燥22小时，抽滤，滤液减压浓 缩，得淡黄色油状物，以体积比为1 4的乙酸乙酯和石油醚配制的混合溶剂为流动相，过 层析柱纯化，得无水透明油状物N-苄氧羰基-β -丙氨酰-L-组氨酸；(2)、2_甲氧基-3-苄氧基-17β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17- (N-苄氧羰基-β -丙 氨酰)-L-组氨酸酯的制备在25°C，将3. 2mmol的N-苄氧羰基-β -丙氨酰-L-组氨酸和3. Ommol的2-甲氧 基-3-苄氧基-1，3，5 (10)-雌三烯-17 β -醇溶解于75ml无水乙腈中，边搅拌边先后加入 3. Ommol缩合剂1，3_ 二环己基碳二亚胺和0. 09mmol催化剂4- 二甲氨基吡啶，搅拌反应 IOmin后，补加1.5mm0l缩合剂1，3-二环己基碳二亚胺，以使2-甲氧基_3_苄氧基_1，3，·5 (10)-雌三烯-17 β -醇完全反应，搅拌17小时，做薄层检测，过滤，滤液减压浓缩，得到淡 黄色油状物，再用乙酸乙酯溶解，过滤，弃去固体，滤液减压浓缩，得到淡黄色固体，用甲醇 重结晶，得化合物中间体2-甲氧基-3-苄氧基-17 β -羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-苄 氧羰基-β -丙氨酰)-L-组氨酸酯；(3)、2_甲氧基-3，17 β - 二羟基-1,3,5 (10)-雌三烯-17-Ν- β -丙氨酰-L-组氨酸酯 的制备在60°C，将1. 50g 2-甲氧基-3-苄氧基-17 β-羟基-1，3，5 (10)-雌三烯-17-(N-苄 氧羰基)-β -丙氨酰-L-组氨酸酯溶于无水甲醇中，溶解后，加入0. 75g的10 %钯碳催化 剂，加氢至压力为60I^i，反应4小时，薄层检测后，过滤，滤液减压浓缩，得灰白色固体， 以乙酸乙酯重结晶，得2-甲氧基-3，17 β - 二羟基-1，3，5(10)-雌三烯-17_Ν_β -丙氨 酰-L-组氨酸酯。
全文摘要
本发明涉及具有抗肿瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物及其合成方法，有效解决具有抗肿瘤活性的雌甾氨基酸酯化合物的制备问题，将氨基酸或小分子肽类溶于氢氧化钠水溶液或碳酸氢钠饱和溶液中，用氯甲酸苄酯滴加，反应至用茚三酮显色至无紫色或做薄层检测，用乙醚洗涤，弃乙醚，水相用盐酸调PH，出现乳白色固体，用乙酸乙酯萃取，合并液用蒸馏水、饱和食盐水洗涤，以无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩，纯化，再和甾体母核混合溶解于反应溶剂中，加缩合剂和催化剂，补加另备的缩合剂，做薄层检测，过滤，浓缩，纯化，溶于溶解溶剂中，加钯碳催化，加氢反应，薄层检测后，过滤，浓缩，纯化，本发明的抗肿瘤活性具有较好的水溶性，对肿瘤细胞的抑制作用优于2-甲氧基雌二醇。
文档编号C07K5/12GK102079771SQ20101058237
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月10日 优先权日2010年12月10日
发明者张崇威, 张振中, 张红岭, 施秀芳, 马岩 申请人:郑州大学