专利名称：一种牛蒡子苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及天然药物的制备方法，具体的说是涉及牛蒡子苷(又名牛蒡子苷，英 文名Arctiin)的制备方法。
背景技术：
牛蒡(Arctium lappa L.)系菊科牛蒡属植物，为传统药用植物，其果实(牛蒡 子)、叶和根入药，牛蒡根在日本和欧洲兼作蔬菜。牛蒡子是一味常用的药食两用中药，有 辛凉解表、疏风散热和清热解毒的功效，用于风热感冒、咳嗽多痰和麻疹等症，古代的中医 药文献和历版《中国药典》均有记载，作为方剂成分用于治疗风热性感冒、咽喉肿痛、斑疹 不透、痈肿疮毒等病症。牛蒡子苷是牛蒡子中的一种主要活性物质，其含量在牛蒡子中达 8. 4%左右，中国药典(2005年版)牛蒡子项下规定牛蒡子苷的含量应达到药材质量的5% 以上。药理研究表明，牛蒡子苷具有显著的抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等生理活性，已引起人们 的广泛重视。由于牛蒡子苷的含量比牛蒡子中的另一种活性成分牛蒡子苷元的含量高很 多，人们也利用化学水解和生物转化的方法将牛蒡子苷转化成所需的活性物质。因此，牛蒡 子苷除了本身的药物利用价值外，也是一种重要的药物原料，
牛蒡子苷溶于水、乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯等多种溶剂。传统的制备方法 是将其用有机溶剂提取而后进行多步的萃取和柱层析等过程，最后才得到纯化的牛蒡子 苷。专利ZL 200610046797. 4报道了一种通过聚酰胺柱从牛蒡子提取物液中分离纯化牛 蒡子苷及其苷元的方法，这种方法首先利用有机溶剂如石油醚脱脂，而后用高浓度的乙 醇(50-95% )提取，提取液再经过过滤、减压浓缩除去有机溶剂后过聚酰胺树脂柱吸附和 解析。尽管经过前述的多步提取分离过程，但最后得到的提取物中牛蒡子苷及苷元才为 40-95% ο Xiao Wang 等(Journal of Chromatography A 2005，1063，247)报道了一种利用 逆流色谱纯化牛蒡子苷的方法，其所用的溶剂体系是乙酸乙酯_正丁醇_乙醇_水组成，体 积比为5 0.5 1 5。尽管这种溶剂可以制备出较纯的牛蒡子苷，但对于连续的重复制 备，这种溶剂却不容易被回收利用，增加了经济成本。
发明内容
本发明的目的是针对现有牛蒡子苷分离制备过程中分离流程长、分离自动化程度 不高、所用溶剂系统不易回收利用等缺陷，而提供一种提取分离简单、可连续化操化、溶剂 便于回收利用的制备高纯度牛蒡子苷的方法。本发明的牛蒡子苷的制备方法，包括以下步骤(1)将牛蒡子粉碎后，放入水或质量浓度0-40%的乙醇或质量浓度0-40%的异丙 醇的水溶液中浸提或回流提取或超声提取，水溶液的重量为牛蒡子重量的5-20倍；(2)将所得的提取液直接进入吸附柱进行吸附和富集，而后依次用水、质量浓度 0-30 %的甲醇或乙醇和质量浓度50 % -100 %的有机溶剂进行洗脱并收集洗脱液，减压浓缩得到牛蒡子苷的流分；(3)将所得到的牛蒡子苷流分用单一有机溶剂_盐的水溶液形成的两相体系进行 逆流色谱分离，得到含盐的牛蒡子苷流分；(4)将含盐的牛蒡子苷流分直接用大孔吸附树脂或离子交换树脂吸附除去盐，得 到牛蒡子苷。上述步骤(2)中所述的有机溶剂是乙醇、异丙醇、水饱和的乙酸乙酯或水饱和的
正丁醇。步骤(2)中所述的吸附柱是大孔吸附树脂、具有大孔吸附特征的离子交换树脂或 活性炭；大孔吸附树脂优选HP-20、HP100等大孔吸附树脂。具有大孔吸附特征的离子交换 树脂可以是CT151树脂。步骤(3)中所述的单一有机溶剂-盐的水溶液形成的两相体系是乙酸乙酯-质量 浓度1-15%氯化钠水溶液或正丁醇-质量浓度0. 5-5%氯化钠水溶液体系。本发明的有益效果在于(1)本发明制备过程中得到的牛蒡子提取液可不经浓缩而直接进行吸附柱吸附而 不影响回收率，节省了能耗，同时便于自动化生产；(2)当吸附有牛蒡子苷的色谱柱用水饱和的乙酸乙酯或水饱和的正丁醇进行洗脱 时，可良好地实现柱色谱和逆流色谱的连用，便于自动化生产；(3)采用单一有机溶剂_盐的水溶液两相体系进行逆流色谱分离，不仅可实现高 纯度的逆流色谱制备，而且便于溶剂的回收和循环利用，这些溶剂本身都是绿色的环境友 好的溶剂体系，不会对生产环境产生不利的影响；(4)本发明制备过程可以在线连续进行，提高单位时间的生产效率，同时也降低能 耗；也可以重复进行，提高逆流色谱的利用率。
图1是HPLC分析实例1中大孔吸附树脂吸附后的各洗脱液的组分，(图中，峰1为 牛蒡子苷)。其中图(A)为水提取物；图(B)为水洗脱液；图(C)为质量浓度30%乙醇洗脱 液；图(D)为质量浓度60%乙醇洗脱液；图(E)为质量浓度95%乙醇洗脱液。图2是纯化的牛蒡子苷的液相色谱分析，其中图(A)为乙酸乙酯-8%氯化钠盐水 溶液体系；图(B)为正丁醇-1%氯化钠盐水溶液体系。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。实施例1将50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加10倍量的水回流提取2h两次，合并滤液。将所得的提取液直接进入HP-20大孔吸附树脂吸附柱进行吸附和富集，而后依 次用水、质量浓度分别为30%、60%、95%乙醇四个梯度进行洗脱，洗脱液用高效液相色谱 (HPLC)进行分析。HPLC 检测柱型号Zorbax SB-C18, 250mmX 4. 6mm I.D.，5μπι 和预柱型 号IOmmX4. 6mm I.D.，5μπι。分析条件为流动相为㈧甲醇，⑶质量分数为0.5%的醋 酸。梯度洗脱在0-25分钟内，流动相(A)的体积分数从30%到90%;流动相(B)的体积分数从70%到10%。流速0.8毫升/分钟；紫外光吸收波长280nm;柱温30°C。结果表明 (如图1)当用水和30%的乙醇洗脱时，牛蒡子苷不能洗出，直到用60%乙醇洗脱时才被洗 出，而当用95%乙醇洗脱时，洗出液仅含有极少量的牛蒡子苷。收集含牛蒡子苷的60 %乙 醇洗脱液，浓缩后作为进一步逆流色谱分离的样品。将所得到的含牛蒡子苷的60%乙醇洗脱液用乙酸乙酯氯化钠的水溶液的两 相体系为溶剂体系进行逆流色谱分离，以乙酸乙酯为上相，8%氯化钠的水溶液为下相。开启(第一维)逆流色谱(900转/分钟，柱体积270mL)，进样，待牛蒡子苷洗脱峰 开始出现时切换至(第二维)大孔吸附树脂柱中进行样品吸附和在线的脱盐，出峰结束时 先用水冲洗两个柱体积，并用质量浓度95%乙醇溶液进行解析。收集质量浓度95%乙醇洗 脱液，浓缩后得到牛蒡子苷(如图2A)，该牛蒡子苷的纯度为97. 9%。实施例2 将50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加15倍量的水回流提取2h两次，合并滤液。将所得的提取液直接进入HP-20大孔吸附树脂吸附柱进行吸附和富集，而后依次 用水、质量浓度分别为30%、60%、95%甲醇四个梯度进行洗脱，洗脱液用HPLC进行分析。 HPLC 检测柱型号Zorbax SB-C18, 250mmX 4. 6mm I. D.，5 μ m 和预柱型号IOmmX 4. 6mm I.D.，5μπι。分析条件为流动相为(A)甲醇，(B)质量分数为0.5%的醋酸。梯度洗脱在 0-25分钟内，流动相(A)的体积分数从30 %到90 % ；流动相(B)的体积分数从70 %到10 %。 流速0. 8毫升/分钟；紫外光吸收波长280nm ；柱温30°C。收集含牛蒡子苷的60%甲醇 洗脱液，浓缩后作为进一步逆流色谱分离的样品。将所得到的含牛蒡子苷的60%甲醇洗脱液用正丁醇-1%氯化钠的水溶液的两相 体系为溶剂体系进行逆流色谱分离，以正丁醇为上相，氯化钠的水溶液为下相。开启(第一维)逆流色谱(1000转/分钟，柱体积270mL)，进样，待牛蒡子苷洗脱 峰开始出现时切换至(第二维)大孔吸附树脂柱中进行样品吸附和在线的脱盐，出峰结束 时先用水冲洗两个柱体积，并用质量浓度95%乙醇溶液进行解析。收集质量浓度95%乙醇 洗脱液，浓缩后得到牛蒡子苷(如图2B)，该牛蒡子苷的纯度为99. 0%。实施例3将50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加10倍量的水回流提取2h两次，合并滤液。将所得的提取液直接进入HP-20大孔吸附树脂吸附柱进行吸附和富集，先用水和 30%乙醇洗脱，再用水饱和的乙酸乙酯洗脱液，切换六通阀，将水饱和的乙酸乙酯洗脱液切 换至逆流色谱中的样品环。将所得到的含牛蒡子苷的60%乙醇洗脱液用乙酸乙酯氯化钠的水溶液的两 相体系为溶剂体系进行逆流色谱分离，以乙酸乙酯为上相，6 %氯化钠的水溶液为下相。开启逆流色谱(900转/分钟，柱体积270mL)，进样，待牛蒡子苷洗脱峰开始出现 时切换至大孔吸附树脂柱中进行样品吸附和在线的脱盐，出峰结束时先用水冲洗两个柱体 积，并用质量浓度95%乙醇溶液进行解析。收集质量浓度95%乙醇洗脱液，浓缩后得到牛 蒡子苷，其纯度为98%。
权利要求
一种牛蒡子苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将牛蒡子粉碎后，放入水或质量浓度0-40％的乙醇或质量浓度0-40％的异丙醇的水溶液中浸提或回流提取或超声提取，水溶液的重量为牛蒡子重量的5-20倍；(2)将所得的提取液直接进入吸附柱进行吸附和富集，而后依次用水、质量浓度0-30％的甲醇或乙醇和质量浓度50％-100％的有机溶剂进行洗脱并收集洗脱液，减压浓缩得到牛蒡子苷的流分；(3)将所得到的牛蒡子苷流分用单一有机溶剂-盐的水溶液形成的两相体系进行逆流色谱分离，得到含盐的牛蒡子苷流分；(4)将含盐的牛蒡子苷流分直接用大孔吸附树脂或离子交换树脂吸附除去盐，得到牛蒡子苷。
2.根据权利要求1所述的牛蒡子苷的制备方法，其特征在于步骤(2)所述的有机溶剂 是乙醇、异丙醇、水饱和的乙酸乙酯或水饱和的正丁醇。
3.根据权利要求1所述的牛蒡子苷的制备方法，其特征在于步骤(2)所述的吸附柱是 大孔吸附树脂、具有大孔吸附特征的离子交换树脂或活性炭。
4.根据权利要求1所述的牛蒡子苷的制备方法，其特征在于步骤(3)所述的单一有 机溶剂_盐的水溶液形成的两相体系是乙酸乙酯_质量浓度1-15%氯化钠水溶液或正丁 醇_质量浓度0. 5-5%氯化钠水溶液体系。
全文摘要
本发明公开的牛蒡子苷的制备方法，其步骤如下将牛蒡子粉碎用水或醇溶液提取；提取液直接进入吸附柱进行吸附和富集，而后依次用水和醇溶液进行洗脱，减压浓缩得到牛蒡子苷的流分；将牛蒡子苷流分用单一有机溶剂-盐的水溶液形成的两相体系进行逆流色谱分离，得到含盐的牛蒡子苷流分，然后用大孔吸附树脂或离子交换树脂吸附除去盐，即可。本发明方法工艺简单、可连续化操化、便于自动化；溶剂便于回收和循环利用，适应于工厂化的规模化生产。
文档编号C07H15/26GK101863937SQ20101020098
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月11日 优先权日2010年6月11日
发明者吴世华, 郭梦喆 申请人:浙江大学