专利名称：一种生产紫杉醇的工艺方法
技术领域：
本发明涉及一种生产紫杉醇的工艺方法，具体的说是一种适用于工业上大批量生 产紫杉醇的工艺方法。
背景技术：
紫杉醇作为治疗晚期恶性癌症的新途径，单独使用或与其它药物联合使用，可以 对卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、睾丸胚胎癌、食管癌、肺癌、胃癌、喉癌等多种晚期癌症有一定 的疗效，效率为12% -30%。因此我们需要实现紫杉醇工业化的大批量生产以满足临床治 疗的要求。目前，关于紫杉醇的提取纯化方法有很多，但大多方法，单一使用效果不好，纯度 不高。用单一的溶剂浸提方法，提取时间太长，提取物容易转化。虽不少方法在实验室中效 果不错，但如何在大规模工业化生产中，在满足高生产效率和低生产成本的同时，保证高纯 度还是亟待解决的问题。传统方法把红豆杉枝叶或者树皮经过高温干燥后再提取，这样大 大降低了回收率，造成资 源浪费和成本升高。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述背景技术的不足之处，提供一种生产紫杉醇的工 艺方法，该方法能够适用于工业上大批量生产紫杉醇，其简单方便，回收率高，成本低，成品 含量高，使用本方法制备的紫杉醇含量> 99. 6%。本发明提供的一种生产紫杉醇的工艺方法，依次包括以下步骤(1)选取红豆杉新鲜树叶或树皮；(2)对未经干燥的新鲜树叶或树皮进行有机溶剂低温超声萃取，获取浸提液使 用V(乙酸乙酯)V(丙酮)=1 1的溶剂在20-30°C低温超声条件下进行浸提；(3)用活性炭处理浸提液脱除色素在浸提液中加8%粉末活性炭220，密塞，振摇 15分钟后放置70°C恒温水浴锅中脱色，过滤，除去滤渣，收集滤液；(4)用硅胶_氧化铝层析柱分离纯化步骤(3)中产生的滤液，洗脱速度控制在 l-3ml/分钟，收集洗脱液；(5)抽滤洗脱液，真空减压干燥得紫杉醇半成品；(6)将紫杉醇半成品经TLC (薄层色谱法)检测，紫杉醇的Rf值为0.58-0. 62，按 此分段，合并组分相同的流分，浓缩；(7)HPLC(高效液相色谱法)进一步分离浓缩液，并测定其含量，得紫杉醇含量 彡99. 6%成品。在上述技术方案中，步骤⑷中所述的硅胶-氧化铝层析柱为用碱性氧化铝，流动 相为含水0. 03%，甲醇1. 5%，即IOOml流动相中，含水0. 03ml，含甲醇1. 5ml，其他为氧化
O在上述技术方案中，步骤(5)中真空减压干燥的条件为温度70°C，真空度93. 3-98. 6KPa。在上述技术方案中，步骤(6)中的TLC检测方式为使用V(氯仿)V(甲醇)= 12 1的展开剂，V(茴香醛)V(硫酸)V(乙醇)=1:3: 50的显色剂，放置干燥 箱内烘干，在紫外检测器下观察。在上述技术方案中，步骤(7)中的HPLC分离测定方式为采用 250mmX4. 60mmX5iim 色谱柱 Pheno menex C18，流动相为 V (甲醇)V(水)=65 35， 进样量10 u L，流量为0. 8ml/分钟，检测波长为227nm，柱温25°C，采用外标峰面积法进行定
量分析。本发明方法与现有技术相比具有如下优点1.直接使用红豆杉新鲜枝叶或者树皮，不经过干燥处理，能节约成本同时防止紫 杉烷类化合物的损失。2.萃取中使用超声技术，大大缩短初级萃取的时间，仅需要0.5-1小时。而一般方 法所需时间长达24-48小时。3.在低温条件下进行浸提，避免了紫杉醇在高温下转化为其它物质而回收率降 低。4.用活性炭处理浸提液脱除其中的色素，为后续分离工作减轻负担。5.用硅胶_氧化铝层析柱进行分离纯化，氧化铝硅胶能够使糖基化的紫杉醇转 化为紫杉醇，从而增加紫杉醇的总量回收率大大提高，通过用氧化铝除杂，使紫杉醇得到了 较好的富集，去除了大量叶绿素和其他脂溶性成分，减少了 HPLC中杂质峰对紫杉醇峰的干 扰，同时减少了对色谱柱的污染。6.用真空减压干燥紫杉醇，速度快，时间短，回收率高，避免紫杉醇在高温下干燥 而转化为其它物质，同时还可以节约成本。说明书附1是本发明一种生产紫杉醇的工业方法的步骤流程图。
具体实施例方式下面结合附图
和实施例对本发明方法作进一步的描述。本实施例提供的一种生产紫杉醇的工艺方法，依次包括以下步骤(1)直接用红豆杉新鲜枝叶或者树皮，不经过干燥处理，用V(乙酸乙酯)V(丙 酮)=1 1在20-30°C低温超声条件下，浸提0.5-1小时。试验证明此条件下提取量最 高，效果为最好，同时，能大大缩短初级萃取的时间，节约成本，避免了紫杉醇在高温下转化 为其它物质而造成回收率降低。由于直接使用新鲜枝叶或者树皮，其中会富含较多的叶绿
o(2)用活性炭处理浸提液脱除色素在浸提液中加8%粉末活性炭220，密塞，振摇 15分钟后放置恒温水浴锅中脱色，温度70°C，时间30分钟，过滤，除去滤渣，收集滤液。采 用上述方法可有效去除步骤(1)中因使用新鲜枝叶或者树皮产生的较多叶绿素。脱色后的 溶液采用定性滤纸过滤，以蒸馏水作为空白对照，用分光光度计在波长420nm下测定脱色 后的溶液透光率，透光率可达92.8%，脱色效果较好。(3)用硅胶_氧化铝层析柱分离纯化步骤(2)中产生的滤液用碱性氧化铝，流动相中含水0. 03%,甲醇1.5%即IOOml流动相中，含水0. 03，含甲醇1.5，其他为氧化铝，反 应时间在30分钟左右，其洗脱速度控制在l_3ml/分钟之间时效果最好，紫杉醇的回收率可 达到170%，收集洗脱液。通过用氧化铝除杂，使紫杉醇得到了较好的富集，去除了大量叶绿 素和其他脂溶性成分，减少了 HPLC中杂质峰对紫杉醇峰的干扰，同时减少了对色谱柱的污
^fe ο(4)抽滤洗脱液，真空减压干燥，获得紫杉醇半成品，条件为温度70°C，真空度 93. 3-98. 6KPa (700-740mmHg)烘数小时。(5)将紫杉醇半成品经TLC检测，分段合并浓缩将抽滤真空减压干燥得到的紫 杉醇半成品，4°C低温离心后弃上清，沉淀溶解在甲醇中进行薄层板点样检测，使用V(氯 仿)V (甲醇)=12 1的展开剂，V (茴香醛)V (硫酸)V (乙醇)=1 3 50的 显色剂，放置干燥箱内烘干，10分钟后在紫外检测器下观察，紫杉醇的Rf值为0. 58-0. 62， 按此分段，合并组分相同的流分，浓缩。(6)HPLC进一步分离浓缩液，并测定其含量，得紫杉醇含量彡 99. 6%成品其条件 为采用250mmX 4. 60mmX5 μ m色谱柱Phenomenex C18，流动相为V(甲醇)V(水)= 65 35，进样量10 μ L，流量为0. 8ml/分钟，检测波长为227nm，柱温25°C，采用外标峰面积 法进行定量分析。
权利要求
一种生产紫杉醇的工艺方法，该方法依次包括以下步骤(1)选取红豆杉新鲜树叶或树皮；(2)对未经干燥的新鲜树叶或树皮进行有机溶剂低温超声萃取，获取浸提液使用V(乙酸乙酯)∶V(丙酮)＝1∶1的溶剂在20-30℃低温超声条件下进行浸提；(3)用活性炭处理浸提液脱除色素在浸提液中加8％粉末活性炭220，密塞，振摇15分钟后放置70℃恒温水浴锅中脱色，过滤，除去滤渣，收集滤液；(4)用硅胶-氧化铝层析柱分离纯化步骤(3)中产生的滤液，洗脱速度控制在1-3ml/分钟，收集洗脱液；(5)抽滤洗脱液，真空减压干燥得紫杉醇半成品；(6)将紫杉醇半成品经TLC检测，紫杉醇的Rf值为0.58-0.62，按此分段，合并组分相同的流分，浓缩；(7)HPLC进一步分离浓缩液，并测定其含量，得紫杉醇含量≥99.6％成品。
2.根据权利要求1所述一种生产紫杉醇的工艺方法，其特征是步骤(4)中所述的硅 胶-氧化铝层析柱为用碱性氧化铝，流动相为含水0. 03%,甲醇1. 5%，即IOOml流动相中， 含水0. 03ml，含甲醇1.5ml，其他为氧化铝。
3.根据权利要求1所述一种生产紫杉醇的工艺方法，其特征是步骤(5)中真空减压 干燥的条件为温度70°C，真空度93. 3-98. 6KPa。
4.根据权利要求1所述一种生产紫杉醇的工艺方法，其特征是步骤(6)中的TLC检 测方式为使用V(氯仿)V(甲醇)=12 1的展开剂，V(茴香醛)V(硫酸)V(乙 醇)=1 3 50的显色剂，放置干燥箱内烘干，在紫外检测器下观察。
5.根据权利要求1所述一种生产紫杉醇的工艺方法，其特征是步骤(7)中的HPLC 分离测定方式为采用250mmX4. 60mmX5ym色谱柱Pheno menex C18，流动相为V(甲 醇)V(水)=65 35，进样量10yL，流量为0.8ml/分钟，检测波长为227nm，柱温25°C， 采用外标峰面积法进行定量分析。
全文摘要
一种生产紫杉醇的工艺方法，该方法包括以下步骤选取红豆杉新鲜树叶或树皮；对未经干燥的新鲜树叶或树皮进行有机溶剂低温超声萃取，获取浸提液；用活性炭处理浸提液脱除色素，过滤，除去滤渣，收集滤液；用硅胶-氧化铝层析柱分离纯化上述滤液，收集洗脱液；抽滤洗脱液，真空减压干燥得紫杉醇半成品；将紫杉醇半成品经TLC检测，合并组分相同的流分，浓缩；HPLC进一步分离浓缩液，并测定其含量，得紫杉醇含量≥99.6％成品。该方法能够适用于工业上大批量生产紫杉醇，其简单方便，回收率高，成本低，成品含量高，使用本方法制备的紫杉醇含量≥99.6％。
文档编号C07D305/14GK101830870SQ20101010380
公开日2010年9月15日 申请日期2010年1月26日 优先权日2010年1月26日
发明者徐薇, 成传锋, 沈素红, 袁金玉, 陶兵林 申请人:武汉茂发科技有限公司