专利名称：一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法
技术领域：
本发明涉及一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法。
背景技术：
忽地笑(Lycoris aurea)，为石蒜科植物，又名黄花石蒜，主要分布在湖南、湖北、 广西、广东、福建、台湾、四川、云南等地。主要有效成分有加兰他敏、力可拉敏等，临床上为 治疗小儿麻痹后遗症的要药。忽地笑是天然加兰他敏的主要植物源。 加兰他敏(Galanthamine)，异名雪花莲胺碱。分子式C17H21N03，分子量287. 35。颇
溶于热水，易溶于乙醇、丙酮及氯仿，稍溶于苯及乙醚。
石蒜中的加兰他敏早先用于治疗重症肌无力和小儿麻痹后遣症的特效药。近年 来，加兰他敏在抗阿尔茨海默病(简称AD，老年性痴呆症早期症状)方面具有特殊的疗效。 它具有双重作用方式，影响大脑和尼古丁受体以及抑制乙酰胆硷酯酶。该药在改善脑血管 病痴呆患者的认知和非认知能力方面有效，如明显改善病人的情绪状态及生活处理能力， 改善记忆功能有效率为75%，明显优于其它药物。 2002年该药已获准在美国、加拿大上市，先前已在21个国家，含大多数的欧洲主 要市场获得了批准和上市。 以加兰他敏为主的对AD治疗药物市场前景看好，这主要是①患病人群的数量增 多、比例高。AD的发病率在65岁左右的老年人中约占10%，在85岁以上的老年人中约占 20%，我国现有AD患者大约为300 400万，并有逐渐上升的趋势。②该类药物的市场销 售额一直在稳步增长。1995年该类药物世界销售额为50亿美元，到21世纪初销售额达到 70亿美元。③药物市场供给不足。从调查的医生信息反馈来看，8. 16%的医生认为市场供 给严重不足，63.2%的医生认为市场供给不足。④服用治疗药物时间长。该疾病类似于糖 尿病需要长期服用治疗药物，因此其用药市场随着人口老龄化增长而逐渐扩大。⑤加兰他 敏的药效显著而销量快速增长。在治疗老年痴呆药物主要品种中，2008年加兰他敏销量排 列在前10位，并有持续增长的态势。 从忽地笑等石蒜科植物中提取加兰他敏的方法主要采用溶剂提取与pH梯度萃取 的方法。例如 采取溶剂渗滚法提出总碱后，利用生物碱及其盐类的溶解性提出加兰他敏。具体工艺流程如下 称取一定量石蒜粉，加4. 4倍量87%乙醇浸渍24h后，渗漉，收集渗漉液，减压浓 縮至浸膏。将石蒜浸膏加水稀释至d = 1. 2，用饱和碳酸钠调HI = 9-10，继续用水稀释至 d= 1. 14，并用氯仿萃取5次，取氯仿液，蒸馏浓縮，得浓縮液(混合生物碱)。先用5%的 氢氧化钠溶液抽提5次，继用6 %的盐酸抽提6次，合并酸水液，用碳酸钠调PH = 6. 9，乙酸 乙酯萃取5次。合并水液，用碳酸钠调ra至9.3，乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯液，减压 蒸馏得加兰他敏。 洪山海提取总生物碱的时候采取的是热回流法。而阮龙喜则先用5-6倍量的水冷
浸2-3次，冷浸液用酸性白土吸附搅拌2-3h，离心甩干后，生物碱吸附在酸性白土上，以饱
和碳酸钠溶液碱化后，再用2倍量乙醇热回流。经洪山海等研究表明，用乙醇提取比用酸性
白土吸附提取得率高O. 002%，但使用后可节省大量乙醇，并便于分离。 忽地笑在武陵山区分布较多，加兰他敏含量也相对较高，生产价值较高。同时，现
有生产技术存在操作烦琐，因萃取过程中乳化现象严重而损失严重，收率较低，成本较高，
市场竞争力弱。
发明内容
本发明的目的是针对现行的收率较低，成本较高，市场竞争力弱的调制方法进行
改进，建立一条具有工业化可操作性的从忽地笑中提取加兰他敏的方法。本发明的目的
是这样实现的一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于包括以下步骤 a.忽地笑原料预处理 将忽地笑鳞茎切片，晒干，粉碎； b.阳离子交换树脂柱的预处理 用碱和酸处理后得到氢型732阳离子交换树脂装柱；
c.加兰他敏的薄层层析法(TCL法)制备 10*20咖薄层硅胶板，以氯仿-丙酮_甲醇(5 : 2 : 2)为展开剂，加兰他敏的Rf 值约在0. 27左右，紫外灯下检测为蓝紫色荧光斑点；
d.提取 忽地笑粉碎后用甲醇热回流提取，浓縮提取液至浸膏；
e.分离 用2%的醋酸溶解浸膏，取清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂吸附至生物 碱饱和(TCL检测上样终点)，树脂碱化后用丙酮洗脱目标物(TCL检测洗脱终点)，浓縮丙 酮洗脱液，冷却，用无水硫酸钠干燥，得加兰他敏粗品I ;
f.氢溴酸加兰他敏的转化 将粗品I溶液中，通入过量的干燥溴化氢气体，静置，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗 品II ; g.氢溴酸加兰他敏的纯化 将粗品II溶解于适量的60%甲醇水溶液中，进样到25-45 y m的C18键合硅胶制 备色谱柱上，60X甲醇水溶液为流动相，检测器检测波长280nm，收集氢溴酸加兰他敏对应 洗脱液，合并洗脱液，减压浓縮，干燥，得氢溴酸加兰他敏精品。
4
本发明一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于包括以下步骤
a.忽地笑原料预处理 将采挖的新鲜忽地笑去叶、去根，仅留鳞茎，然后将鳞茎切片，晒干，用粉碎机粉碎 过16目筛； b.阳离子交换树脂柱的预处理 将732阳离子交换树脂用去离子水浸泡4-8h使溶胀，用去离子水漂洗几次，用相 当于树脂体积4倍的2NNa0H浸泡5_6h后用去离子水冲洗至中性；用4BV的2NHC1浸泡5_6h 后用去离子水冲洗至呈中性，重复碱浸泡和酸浸泡步骤一次；用2NHC1处理得到氢型732阳 离子交换树脂，而后用去离子水冲洗至PHI. 5 ;
c.加兰他敏的薄层层析法(TCL法)制备 10*20咖薄层硅胶板，以氯仿-丙酮_甲醇(5 : 2 : 2)为展开剂，加兰他敏的Rf 值约在0. 27左右，紫外灯下检测为蓝紫色荧光斑点；
d.提取 忽地笑粉碎后用甲醇(料液比1 : 6-7)于65t:热回流提取2小时，提取3次。
浓縮合并提取液至浸膏；
e.分离 用2%的醋酸溶解浸膏，取清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂吸附至生物 碱饱和(TCL检测上样终点)，树脂碱化后用丙酮洗脱目标物(TCL检测洗脱终点)，浓縮丙 酮洗脱液，冷却，用无水硫酸钠干燥，得加兰他敏粗品I ;
f.氢溴酸加兰他敏的转化 将粗品I溶液中，通入过量的干燥溴化氢气体，静置，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗 品II ; g.氢溴酸加兰他敏的纯化 将粗品II溶解于适量的60%甲醇水溶液中，进样到25-45 y m的C18键合硅胶制 备色谱柱上，60X甲醇水溶液为流动相，检测器检测波长280nm，收集氢溴酸加兰他敏对应 洗脱液，合并洗脱液，减压浓縮，干燥，得氢溴酸加兰他敏精品。 本发明一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法采用甲醇于适宜的温度热回流提取， 提取率高；浓縮至浸膏后用2%醋酸溶解；加兰他敏溶出效果较好，对设备的腐蚀性较弱， 减轻设备的损耗和保障了生产的安全性；与传统萃取分离方法相比，本方法采用新的732 阳离子交换树脂柱吸附分离法，提高了加兰他敏的含量，减少了加兰他敏的损失，操作简 单，方便，可控性好；采用25-45 m的(:18键合硅胶反向中压制备色谱纯化方法，产品纯度能 达到98.0%以上，产品的回收率达到70%以上，且提高了生产效率。 本发明的有益效果是由于采用新的提取工艺，通过简化操作、避开萃取工序、减少 损失、提高产率，降低成本，增强产品的市场竞争能力。
附图为氢溴酸加兰他敏色谱图。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明进一步说明。 本发明是一种从忽地笑中提取加兰他敏的新工艺，它的具体实施实例包含以下几 个相同步骤 原料忽地笑原料预处理 将采挖的新鲜忽地笑去叶、去根，仅留鳞茎，然后将鳞茎切片(厚度2-5mm)，晒干， 用粉碎机粉碎，过16目筛后备用。 忽地笑鳞茎中所含的纤维素、淀粉较多，所以不能粉碎过细，否则由于吸附作用加 强，会使扩散速度受到影响，而且药粉过细，当多糖溶出时，易产生胶冻现象，影响其他成分 的抽出和操作。 阳离子交换树脂柱的预处理 将732阳离子交换树脂用去离子水浸泡4-8h使溶胀，用去离子水漂洗几次，去除 杂质和漂浮物；用相当于树脂体积4倍的2NNa0H浸泡5_6h后用去离子水冲洗至中性，浸泡 过程中轻轻搅拌几次；用4BV的2NHC1浸泡5-6h后用去离子水冲洗至呈中性，浸泡过程中 轻轻搅拌几次；重复碱浸泡和酸浸泡步骤一次；再次用2NHC1处理得到氢型723阳离子交 换树脂，而后用去离子水冲洗至pHl. 5。
加兰他敏的薄层层析法(TCL法) 10*20咖薄层硅胶板，以氯仿-丙酮_甲醇(5 : 2 : 2)为展开剂，加兰他敏的Rf 值约在0. 27左右，紫外灯下检测为蓝紫色荧光斑点。
实施例1 1.提取称取忽地笑干粉70g，用500ml甲醇于65。C在2L的提取罐中热回流提取 2小时，过滤，收集滤液；再加450ml甲醇于65t:在2L的提取罐中热回流提取2小时，过滤， 收集滤液；又加450ml甲醇于65。C在2L的提取罐中热回流提取2小时，过滤，收集滤液；合 并3次收集提取液。在1L的圆底烧瓶中于40°C 6(TC旋转蒸发仪减压浓縮至无甲醇，得 忽地笑浸膏。 2.分离将忽地笑浸膏用150倍体积的2%醋酸水溶液溶解，充分搅拌，去油状泡 沫，用离心机离心，取上清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂柱(723阳离子交换树脂 湿法装柱，形成40*300mm的柱床，再预处理)，TCL检测上样终点，树脂吸附生物碱至饱和 后，先用1000ml去离子水淋洗，再用1BV的2% NaOH碱化树脂床，然后用丙酮洗脱目标物 (TCL检测洗脱终点)，浓縮丙酮洗脱液至1000ml左右，冷却至室温。用无水硫酸钠干燥，过 滤，得加兰他敏粗品I。 3.氢溴酸加兰他敏的转化将粗品I溶液中通入过量的干燥溴化氢气体，立即产 生大量晶体状固体，静置过夜，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗品II。 4.氢溴酸加兰他敏的纯化称取粗品110. 25g溶解于50ml60%甲醇水溶液中，进 样到10mm*150mm的C18制备色谱柱上，60%甲醇水溶液为流动相，检测波长280nm。收集氢 溴酸加兰他敏峰对应洗脱液，合并洗脱液，于200ml圆底烧瓶40°C 6(TC旋转蒸发仪减压 浓縮，干燥。得氢溴酸加兰他敏精品。
实施例2 1.提取称取原料粉末10Kg装入100升多功能提取器中，加入65升甲醇，65t:热回流提取2小时，过滤，收集滤液；再加65升甲醇于65t:在100升多功能提取罐中热回流 提取2小时，过滤，收集滤液；又加65升甲醇于65t:在100升多功能提取罐中热回流提取2 小时，过滤，收集滤液；合并3次提取液。在100升的浓縮罐中于40°C -e(rc减压浓縮至无 甲醇，得忽地笑浸膏。 2.分离称取一定量的忽地笑浸膏，用150倍体积的2%醋酸水溶液溶解，充分搅 拌，去油状泡沫，用离心机离心，取上清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂柱，TCL检 测上样终点，树脂吸附生物碱至饱和后，先用2BV去离子水淋洗，再用1BV的2% NaOH碱化 树脂床，然后用丙酮洗脱目标物(TCL检测洗脱终点)，浓縮丙酮洗脱液至2BV左右，冷却至 室温。用无水硫酸钠干燥，过滤，得加兰他敏粗品I。 3.氢溴酸加兰他敏的转化再将粗品I溶液中通入过量的干燥溴化氢气体，立即 产生大量晶体状固体，静置过夜，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗品II。 4.氢溴酸加兰他敏的纯化C18键合硅胶层析纯化；称取380克25_45 y m的C18键 合硅胶，甲醇湿法装于50*500不锈钢静态轴向压縮柱中，手动液压并固定色谱床，相成约 为50*290的制备色谱床。称取氢溴酸加兰他敏粗品112. 4克溶于60%的甲醇水溶液中进 样，60%的甲醇水溶液为流动相，检测波长280nm。收集氢溴酸加兰他敏峰对应洗脱液，合并 洗脱液，于1000ml圆底烧瓶4(TC -e(TC旋转蒸发仪减压浓縮，干燥。得氢溴酸加兰他敏精品。
实施例3 1.提取称取原料粉末200Kg装入2000升提取罐中，加入1300升甲醇，65t:热回 流提取2小时，提取3次，合并3次提取液。在500升的浓縮罐中于40°C -e(TC减压浓縮至 无甲醇，得忽地笑浸膏。 2.分离称取一定量的忽地笑浸膏，用约150倍体积的2%醋酸水溶液溶解，充分 搅拌，去油状泡沫，用离心机离心，取上清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂柱，TCL 检测上样终点，树脂吸附生物碱至饱和后，先用2BV去离子水淋洗，再用1BV的2% NaOH碱 化树脂床，然后用丙酮洗脱目标物(TCL检测洗脱终点)，浓縮丙酮洗脱液至2BV左右，冷却 至室温。用无水硫酸钠干燥，过滤，得加兰他敏粗品I。 3.氢溴酸加兰他敏的转化再将粗品I溶液中通入过量的干燥溴化氢气体，立即 产生大量晶体状固体，静置过夜，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗品II 。 4.氢溴酸加兰他敏的纯化C18键合硅胶层析纯化；称取1800克25_45 y m的C18 键合硅胶，甲醇湿法装于100*500不锈钢静态轴向压縮柱中，手动液压并固定色谱床，相成 约为100*350的制备色谱床。氢溴酸加兰他敏粗品分多次进行制备色谱纯化，每次约11. 5 克溶于60%的甲醇水溶液中进样，60%的甲醇水溶液为流动相，检测波长280nm。收集氢溴 酸加兰他敏峰对应洗脱液，于2升圆底烧瓶40°C 6(TC旋转蒸发仪减压浓縮，干燥。得氢 溴酸加兰他敏精品。
权利要求
一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于包括以下步骤a.忽地笑原料预处理将忽地笑鳞茎切片，晒干，粉碎；b.阳离子交换树脂柱的预处理用碱和酸处理后得到氢型732阳离子交换树脂装柱；c.加兰他敏的薄层层析法(TCL法)制备10*20mm薄层硅胶板，以氯仿-丙酮-甲醇(5∶2∶2)为展开剂，加兰他敏的Rf值约在0.27左右，紫外灯下检测为蓝紫色荧光斑点；d.提取忽地笑粉碎后用甲醇热回流提取，浓缩提取液至浸膏；e.分离用2％的醋酸溶解浸膏，取清液，上样预处理好的732阳离子交换树脂吸附至生物碱饱和(TCL检测上样终点)，树脂碱化后用丙酮洗脱目标物(TCL检测洗脱终点)，浓缩丙酮洗脱液，冷却，用无水硫酸钠干燥，得加兰他敏粗品I；f.氢溴酸加兰他敏的转化将粗品I溶液中，通入过量的干燥溴化氢气体，静置，过滤，得氢溴酸加兰他敏粗品II；g.氢溴酸加兰他敏的纯化将粗品II溶解于适量的60％甲醇水溶液中，进样到25-45μm的C18键合硅胶制备色谱柱上，60％甲醇水溶液为流动相，检测器检测波长280nm，收集氢溴酸加兰他敏对应洗脱液，合并洗脱液，减压浓缩，干燥，得氢溴酸加兰他敏精品。
2. 按照权利要l所述的一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于所述的步骤a. 忽地笑原料预处理将采挖的新鲜忽地笑去叶、去根，仅留鳞茎，然后将鳞茎切片，晒干，用粉碎机粉碎过16 目筛。
3. 按照权利要l所述的一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于所述的步骤b. 阳离子交换树脂柱的预处理将732阳离子交换树脂用去离子水浸泡4-8h使溶胀，用去离子水漂洗几次，用相当于 树脂体积4倍的2NNa0H浸泡5_6h后用去离子水冲洗至中性；用4BV的2NHC1浸泡5_6h后 用去离子水冲洗至呈中性，重复碱浸泡和酸浸泡步骤一次；用2NHC1处理得到氢型732阳离 子交换树脂，而后用去离子水冲洗至PHI. 5。
4. 按照权利要l所述的一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法，其特征在于所述的步骤 d.提取忽地笑粉碎后用甲醇(料液比1 : 6-7)于65t:热回流提取2小时，提取3次。浓 縮合并提取液至浸膏。
全文摘要
本发明涉及一种从忽地笑中提取加兰他敏的方法。本发明的目的是针对现行的收率较低，成本较高，市场竞争力弱进行改进，建立一条具有工业化可操作性的从忽地笑中提取加兰他敏的方法。包括以下步骤原料预处理；阳离子交换树脂柱的预处理加兰他敏的薄层层析法(TCL法)制备，提取忽地笑粉碎后用甲醇热回流提取，浓缩提取液至浸膏。分离用2％的醋酸溶解浸膏用树脂吸附，氢溴酸加兰他敏的转化通入溴化氢气体得氢溴酸加兰他敏粗品II；氢溴酸加兰他敏的纯化。本发明的有益效果是由于采用新的提取工艺，通过简化操作、避开萃取工序、减少损失、提高产率，降低成本，增强产品的市场竞争能力。
文档编号C07D491/06GK101787028SQ201010028989
公开日2010年7月28日 申请日期2010年1月12日 优先权日2010年1月12日
发明者向极钎, 李红英, 杨永康, 王发松, 龙澜 申请人:恩施清江生物工程有限公司