专利名称：与表皮生长因子受体特异性地结合的抗体的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及与表皮生长因子受体(印idermal growth factor rec印tor，EGFR)特异性地结合的抗体。
背景技术：
表皮生长因子受体(EGFR)是170kDa的I型跨膜蛋白质，已知EGFR在很多人肿瘤(例如，肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、脑癌、膀胱癌、头癌、颈癌、卵巢癌和前列腺癌)中过表达。其过表达经常伴随EGFR配体(TGF-α (转化生长因子-a (transforming growth factor- α ))和EGF(表皮生长因子(印idermal growth factor)))的产生，并且已证实所述配体与EGFR的结合诱导细胞增殖和肿瘤生长。因此，使用抗EGFR的抗体阻断这种配体与EGFR之间的相互作用可抑制肿瘤生长，这已经通过使用抗EGFR之单克隆抗体的实验证明是有效的。当前用于治疗转移性结肠直肠癌之临床应用的抗体C225(商品名爱必妥 (Erbitux) ；ImClone, U. S)是嵌合抗体，其包含连接至人抗体IgGl恒定区的小鼠抗体可变区(其中包含约30%的小鼠氨基酸序列)。已证明C225抑制肿瘤细胞生长、体外EGFR磷酸化和裸小鼠中的肿瘤形成，并且，当与特定的化疗剂一起使用时，还完全根除小鼠中的人肿瘤异种移植物。然而，在一些( 10% )用其治疗的患者中，该抗体具有诱导免疫反应的问题。因此，存在对改进的抗EGFR之治疗性抗体的需要。用于靶向治疗的治疗剂占美国食品及药物管理局(Food and Drug Administration, FDA)最近所批准的抗癌药物的约50 %。这样的抗体提供靶专一性和有效地动员免疫系统的能力，这些与其较长的生物半衰期相组合已经引起了研究者对其治疗潜力的注意。因此，美国FDA最近批准使用多种抗体用于癌治疗。在很多对疾病的治疗方法中，抗体发挥突出的作用，随着最近允许开发全人抗体之技术的出现，抗体变得更具吸引力。本发明人努力开发新颖的、改进的、具有新互补决定区(complementarity determining region，⑶R)的抗体，并且已发现这样的抗体可通过阻断EGFR介导的信号转导而用于癌治疗。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供与表皮生长因子受体特异性地结合的新抗体。本发明的另一个目的是提供分别编码所述抗体的重链可变区和轻链可变区的 DNA,以及包含所述DNA的表达载体。本发明的另一个目的是提供以所述表达载体转化的细胞系。本发明的另一个目的是提供包含所述抗体的用于治疗癌的药物组合物。根据本发明的一个方面，提供了与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a)包含互补决定区(⑶R)l、2和3的重链可变区，所述互补决定区1、2和3分别具有SEQ ID NO :1、2和3的氨基酸序列；b)包含CDR 1、CDR 2和CDR 3的轻链可变区，所述CDRl、CDR 2和CDR 3分别具有SEQ ID NO :4、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。此外，提供了与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a)包含CDR UCDR 2禾口 CDR 3的重链可变区，所述CDR UCDR 2禾口 CDR 3分别具有SEQ ID NO :1、2和3的氨基酸序列；b)包含⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3的轻链可变区，所述⑶R 1、⑶R 2和CDR3分别具有SEQ ID NO :9、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。根据本发明的另一个方面，提供了编码所述抗体的重链可变区或轻链可变区的DNA,以及包含所述DNA的表达载体。根据本发明的另一个方面，提供了以所述表达载体转化的细胞系。根据本发明的另一个方面，提供了包含所述抗体的用于治疗癌的组合物。
通过对本发明的以下描述与附图相结合，本发明的上述和其他目的与特征会变得显而易见，所述附图分别显示图1 电泳(1%琼脂糖凝胶)的照片，其展示PCR所合成的分别编码本发明的重链可变区(heavy chain variable region, VH)禾口轻链可变区(light chain variableregion, VL)的 DNA ；图2 噬菌体展示载体(pKS4H)的图谱(map)，所述载体包含本发明抗体的重链可变区和轻链可变区；图3 显示使用生物淘选技术(bioparming technique)从抗体文库中选择抗体之过程的示意图；图4:本发明抗体(ER2和ER79)的单链可变片段(single chain variablefragment, scFv)的氨基酸序列；图5 用于表达本发明的人抗体重链的表达载体(ER2-重-pRC13或ER79-重-pRC13)的图谱；图6和7 用于表达本发明的人抗体轻链的表达载体(ER2-轻-pKC12和ER79-轻-pKC12)的图谱；图8 转化体所表达的重链和轻链的SDS-PAGE分析；图9 人抗体(ER2和ER79)、嵌合抗体(C225，爱必妥)和其他抗体(ER414)对表皮生长因子受体的相对亲和力；图10 展示本发明抗体与癌细胞系(A431)中过表达的表皮生长因子受体之结合的流式细胞仪图；图11 本发明抗体对表皮生长因子受体之磷酸化的抑制作用；和图12 表面等离子体共振(surface ρlasmon resonance)的测量结果，其揭示本发明抗体以及嵌合抗体C225(爱必妥)与表皮生长因子的结合位点。
具体实施例方式下文中详细地描述本发明。
5
本发明提供与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a)包含互补决定区(⑶R) 1、2和3的重链可变区，所述互补决定区1、2和3分别具有SEQ ID NO :1、 2和3的氨基酸序列；b)包含⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3的轻链可变区，所述⑶R 1、⑶R 2和 ⑶R 3分别具有SEQ ID NO :4、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。优选地，所述抗体可以是这样的抗体，其包含a)具有SEQ ID NO :7之氨基酸序列的重链可变区；b)具有SEQ ID NO 8之氨基酸序列的轻链可变区；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。此外，本发明提供与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a) 包含CDR UCDR 2禾口 CDR 3的重链可变区，所述CDR1、CDR 2禾口 CDR 3分别具有SEQ ID NO: 1、2和3的氨基酸序列；b)包含⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3的轻链可变区，所述⑶R 1、⑶R 2和 ⑶R 3分别具有SEQ ID NO :9、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。优选地，所述抗体可以是这样的抗体，其包含a)具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列的重链可变区；b)具有SEQ ID NO 10的氨基酸序列的轻链可变区；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。本发明抗体可优选地是人抗体，且特征在于阻断表皮生长因子(EGF)所诱导的信号转导。与表皮生长因子受体特异性地结合的抗体可优选地通过修改的噬菌体展示法 (Smith, Science,228,1315-1317,1985 ； 禾口 Hoogenboom &Chames, Immunol Today,21, 371-378,2000)来选择。在噬菌体展示法中，编码丝状噬菌体(例如，M13、Fd或Fl)之表面蛋白的基因(基因III)与编码目标抗体的基因融合，因此以抗体-噬菌体的形式产生具有暴露于表面之融合抗体的病毒颗粒。随后，可利用抗体的高特异性和亲和力以及噬菌体的高感染性特征，通过生物淘选技术从噬菌体文库中选择目标抗体(Burton & Bark^Adv. Immunol.，57，191-280，1994 ；Winter et al.，Annu.Rev. Immunol.，12，433-455，1994 ；和 Hoogenboom et al.，Immunotechnology，4，1-20，1998)。噬菌体展示载体可以是 pKS4H (见韩国专利 nO. 0635370)或 pCANTAB5E，优选 pKS4H。在本发明中，从噬菌体文库中选择了人抗体ER414，并验证其对表皮生长因子受体的亲和力和中和能力(图9和11)。ER414抗体具有中和能力，但其亲和力比市售的抗体 (C225)低16倍。因此，使用亲和力成熟法(affinity maturation process)选择具有与 C225相似亲和力的改进抗体。即，通过对初始选择的抗体的互补决定区进行氨基酸随机化而生成文库，使用生物淘选技术选择具有成熟亲和力的抗体，最后选择与C225抗体具有相似亲和力的抗体(ER2和ER79)。对于抗体ER2，序列分析的结果是重链可变区的⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3分别具有 SEQ ID NO :1、2和3的氨基酸序列，并且轻链可变区的⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3分别具有SEQ ID NO :4、5和6的氨基酸序列。另一方面，抗体ER79的重链可变区的⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3分别具有SEQ ID NO :1、2和3的氨基酸序列，并且轻链可变区的⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3 分别具有SEQ ID NO :9、5和6的氨基酸序列。本发明抗体的重链恒定区或轻链恒定区可与人抗体的相应区域相同，并且可优选地分别是具有SEQ ID NO :43和44之氨基酸序列的氨基酸。本发明提供编码抗体重链可变区的DNA，所述重链可变区包含分别具有SEQ ID NO :1、2和3之氨基酸序列的⑶R 1、⑶R 2和⑶R 3。优选地，所述DNA可包含具有编码 SEQ ID NO :1之氨基酸序列的SEQ ID NO 11之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ IDNO 2之氨基酸序列的SEQ ID NO 12之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO 3之氨基酸序列的SEQ ID NO 13之核苷酸序列的多核苷酸。本发明提供编码抗体重链可变区的DNA，所述重链可变区具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列。优选地，所述DNA可包含具有编码SEQ ID NO 7之氨基酸序列的SEQ ID NO 14 之核苷酸序列的多核苷酸。此外，本发明提供编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区包含分别具有SEQ ID NO :4、5和6之氨基酸序列的⑶R 1、⑶R 2和⑶R3。优选地，所述DNA可包含具有编码 SEQ ID NO :4之氨基酸序列的SEQ ID NO :15之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ ID NO 5之氨基酸序列的SEQ ID NO 16之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO 6之氨基酸序列的SEQ ID NO :17之核苷酸序列的多核苷酸。本发明提供编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区具有SEQ ID NO :8的氨基酸序列。优选地，所述DNA可包含具有编码SEQ ID NO :8之氨基酸序列的SEQ ID NO 18 之核苷酸序列的多核苷酸。此外，本发明提供编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区包含分别具有SEQ ID NO :9、5和6之氨基酸序列的⑶R 1、⑶R 2和⑶R3。优选地，所述DNA可包含具有编码 SEQ ID NO :9之氨基酸序列的SEQ ID NO :19之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ ID NO 5之氨基酸序列的SEQ ID NO 16之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO 6之氨基酸序列的SEQ ID NO 17之核苷酸序列的多核苷酸。本发明提供编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区具有SEQ ID NO 10的氨基酸序列。优选地，所述DNA可包含具有编码SEQ ID NO 10之氨基酸序列的SEQ ID NO: 20之核酸序列的多核苷酸。本发明提供包含编码抗体重链可变区之DNA的用于表达抗体重链可变区的表达载体，所述抗体与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合。优选地，所述表达载体可以是 “ER2-重-pRC13” 或 “ER79-重-pRC13”，其图谱见图 5。具体地说，所述载体可通过将通过亲和力成熟法选择的抗体的VH片段(1-a: ER2Ab-H 或 1-b :ER79Ab_H)插入合适的载体(例如 pRC13 载体(保藏 No. KCLRF-BP-00054 ； 韩国专利No. 523732))来制备。本发明提供包含编码抗体轻链可变区之DNA的用于表达抗体轻链可变区的表达载体，所述抗体与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合。优选地，所述表达载体可以是 "ER2-轻-pKC12” (其图谱见图6)，或者‘‘ER79-轻-pKC12” (其图谱见图7)。具体地说，所述载体可通过将通过亲和力成熟法选择的抗体的VL片段O-a ER2Ab-L 或 1-b :ER79Ab_L)插入合适的载体(例如 pKC12 载体(保藏 No. KCLRF-BP-00054 ； 韩国专利No. 523732))来制备。本发明提供以用于表达本发明抗体之重链可变区的表达载体和用于表达本发明抗体之轻链可变区的表达载体转化的动物细胞系。用于表达本发明抗体之重链可变区的表达载体可优选地是ER2-重-pRC13或ER79-重-pRC13，而用于表达本发明抗体之轻链可变区的表达载体可优选地是ER2-轻-pKC12或ER79-轻-pKC12。所述动物细胞系可以是 CHO(中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary)) ,HEK 293或NSO细胞系，优选CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系。
可通过将重链可变区和轻链可变区组合在一起来制备根据本发明的抗体。可以测量本发明抗体对抗原的亲和力，例如通过竞争性ELISA(Kim et al., Hybridoma, 20，265-272, 2001)来测量。如图9所示，本发明的ER2抗体的亲和力与C225抗体的亲和力相似，而ER79抗体的亲和力比C225抗体的亲和力低2倍。此外，使用流式细胞仪(FACS)证明所述抗体结合至癌细胞系中过表达的表皮生长因子受体(图10)，并且通过乳腺癌细胞中表皮生长因子受体磷酸化抑制的实验确证所述抗体具有中和能力(图11)。 因此，通过抑制经由表皮生长因子受体的信号转导，本发明的抗体可以用作用于治疗癌的抗体。鉴于该结果，本发明提供用于治疗癌的包含该抗体的组合物(优选药物组合物)。 所述组合物还可包含选自顺钼、吉西他滨、多柔比星、5-FU、伊立替(irrinotecan)和紫杉醇的至少一种。所述组合物含有ER2或ER79抗体或包含所述抗体的转化体作为活性成分，并且还包含一种或更多种与所述活性成分具有相同或相似功能的有效成分。除了活性成分， 本发明的组合物可包含一种或更多种可药用载体，例如盐水、无菌水、林格液(Ringer’ s solution)、缓冲盐水、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油、乙醇、脂质体和包含这些组分中的一种或更多种的混合物。如果有必要的话，还可添加常规的添加剂，例如抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂。可以以不同的形式配制本发明的组合剂，所述形式包括用于注射的水溶液剂、 混悬剂和乳剂，通过与稀释剂、分散剂、表面活性剂、黏合剂和润滑剂混合而制成的丸剂、胶囊剂、颗粒剂或片剂。可以将靶细胞特异性的抗体或其他配体与所述载体之一混合，以向所述革巴细胞递送。还可按Remington’s Pharmaceutical ScienceiMack Publishing Company, Easton PA中表述的方法，根据成分以合适的形式制备所述组合物。可以肠胃外施用(例如，静脉内、皮下、腹膜或局部注射)本发明的药物组合物，且优选静脉内注射。在一些实体癌的情况下，更优选局部施用，其有利于抗体快速和容易地进入。可根据体重、年龄、性别、健康状况、饮食、施用频率、施用方法、排泄和疾病的严重程度来确定所述组合物的有效剂量。可每天或每周施用一次剂量的含有约5 500mg/m2人抗体或转化体的所述组合物。可由治疗恶性肿瘤患者的医生来调整所述有效剂量。本发明的药物组合物可以单独施用或与外科手术、激素治疗、化学治疗和生物调节剂联合施用以治疗恶性肿瘤。仅为举例的目的而给出以下实施例，其并不意在限制本发明的范围。实施例1 :RNA的分离为了选择与表皮生长因子受体特异性地结合的抗体，构建了人抗体文库。使用了人骨髓总RNA、人胸腺总RNA、人脾总RNA和人B细胞RNA的混合物。除了人B细胞RNA之外的所有RNA均购自Clontech (U. S)，并按以下分离人B细胞RNA 通过与50mL的HBSS (Hank，s平衡盐溶液；Sigma，US)混合，将从健康成人中所取的50mL血液稀释。将IOmL的Histopr印(Sigma)放入50mL的管中，并向其中添加20mL经稀释的血液。以3，OOOrpm离心混合物以分离白细胞。将2mL所分离的白细胞与6mL的HBSS 混合，并以 1，OOOrpm 离心。将 100 μ L 的白细胞与 ImL 的 Trizole (Life Technology, U. S) 混合以分离RNA。同时，以蒸馏水稀释所分离的！？嫩，在^Onm测量吸光度以计算其量(1. 8μ g/μ L ；Ultraspec 2000UV-VIS分光光度计，GE, U. S)。详细步骤如下将ImL的trizole添加至100 μ L白细胞，摇勻，在室温下放置5分钟。随后，添加 200 μ L的氯仿，剧烈摇动15秒，放置3分钟。随后，在2 8°C的条件下，以15，OOOrpm离心混合物15分钟，将上清液转移进入新管。添加500 μ L异丙醇，混勻，在室温下放置10分钟。 随后，在2 8°C下以15，OOOrpm离心混合物5分钟以除去上清液。向其中添加lmL75%乙醇，在2 8°C的条件下以15，OOOrpm离心混合物5分钟以除去乙醇，在室温下干燥RNA沉淀5分钟。向其中添加150 μ L蒸馏水以悬浮RNA沉淀，测量悬液在^Onm的吸光度。将剩余物存储于_20°C。实施例2 抗体基因的扩增将1 μ g实施例1中所分离的RNA禾口 1 μ L的pd⑴12_18 (0. 5 μ g/ μ L)与蒸馏水混合以使最终体积为12.5 μ L。使混合物在70°C下反应2分钟，在冰中冷却。随后，向其中添加5 X反应缓冲液、IOmM dNTP混合物、重组的RNA酶(RNase)抑制剂和MMLV逆转录酶 (Clontech, U. S)以使最终体积为20 μ L，随后，在42°C下反应1小时，在95°C下反应5分 .中，以合成 cDNA。使用 LiquiMix QM Premix, Magenta (Neurotics Inc, Korea) >4 μ L eDNA 作为模板、19 μ L蒸馏水和1 μ L引物进行PCR反应，所述引物设计用于分别结合至重链可变区和轻链可变区(κ和λ)。PCR中所使用的引物及其核苷酸序列见表1。〈表1>PCR反应中所使用的引物
权利要求
1.与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a)包含互补决定区(⑶R)l、2和3的重链可变区，所述互补决定区1、2和3分别具有 SEQ ID NO :1、2和3的氨基酸序列；b)包含⑶R1、⑶R 2和⑶R 3的轻链可变区，所述⑶R 1、⑶R2和⑶R 3分别具有SEQ ID NO :4、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。
2.权利要求1的抗体，其包含a)具有SEQID NO 7之氨基酸序列的重链可变区；b)具有SEQID NO 8之氨基酸序列的轻链可变区；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。
3.与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其包含a)包含⑶R1、⑶R 2和⑶R 3的重链可变区，所述⑶R 1、⑶R2和⑶R 3分别具有SEQ ID N0:l、2和3的氨基酸序列；b)包含CDR1、⑶R 2和⑶R 3的轻链可变区，所述⑶R 1、⑶R2和⑶R 3分别具有SEQ ID NO :9、5和6的氨基酸序列；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。
4.权利要求3的抗体，其包含a)具有SEQID NO 7之氨基酸序列的重链可变区；b)具有SEQID NO 10之氨基酸序列的轻链可变区；c)重链恒定区；和d)轻链恒定区。
5.权利要求1 4中任一项的抗体，其中所述抗体是人抗体。
6.权利要求1 4中任一项的抗体，其中所述抗体阻断表皮生长因子(EGF)所诱导的信号转导。
7.编码抗体重链可变区的DNA，所述重链可变区包含分别具有SEQID NO :1、2和3之氨基酸序列的CDR 1、CDR 2和CDR 3。
8.权利要求7的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO :1之氨基酸序列的SEQ ID NO: 11之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ ID NO 2之氨基酸序列的SEQ ID NO 12 之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO :3之氨基酸序列的SEQ ID N0:13之核苷酸序列的多核苷酸。
9.编码抗体重链可变区的DNA，所述重链可变区具有SEQID NO :7的氨基酸序列。
10.权利要求9的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO 7之氨基酸序列的SEQ ID NO 14之核苷酸序列的多核苷酸。
11.编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区包含分别具有SEQID N0:4、5和6之氨基酸序列的CDR 1、CDR 2和CDR 3。
12.权利要求11的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO 4之氨基酸序列的SEQ ID NO :15之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ ID NO 5之氨基酸序列的SEQ IDNO 16之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO 6之氨基酸序列的SEQ ID NO 17之核苷酸序列的多核苷酸。
13.编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区具有SEQID NO :8的氨基酸序列。
14.权利要求13的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO :8之氨基酸序列的SEQID NO 18之核苷酸序列的多核苷酸。
15.编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区包含分别具有SEQID N0:9、5和6之氨基酸序列的CDR 1、CDR 2和CDR 3。
16.权利要求15的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO 9之氨基酸序列的SEQ ID NO :19之核苷酸序列的多核苷酸，具有编码SEQ ID NO 5之氨基酸序列的SEQ IDNO 16之核苷酸序列的多核苷酸，以及具有编码SEQ ID NO 6之氨基酸序列的SEQ ID NO 17之核苷酸序列的多核苷酸。
17.编码抗体轻链可变区的DNA，所述轻链可变区具有SEQID NO 10的氨基酸序列。
18.权利要求17的DNA，其中所述DNA包含具有编码SEQID NO 10之氨基酸序列的SEQ ID NO :20之核苷酸序列的多核苷酸。
19.用于表达与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体重链可变区的表达载体，其包含权利要求7的DNA。
20.权利要求19的表达载体，其中所述载体是ER2-重-pRC13或ER79-重-pRC13，所述ER2-重-pRC13或ER79-重-pRC13的图谱见图5。
21.用于表达与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体轻链可变区的表达载体，其包含权利要求11的DNA。
22.权利要求21的表达载体，其中所述载体是ER2-轻-pKC12，所述ER2-轻-pKC12的图谱见图6。
23.用于表达与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体轻链可变区的表达载体，其包含权利要求15的DNA。
24.权利要求23的表达载体，其中所述载体是ER79-轻-pKC12，所述ER79-轻-pKC12的图谱见图7。
25.以权利要求19的表达载体和权利要求21的表达载体转化的动物细胞系。
26.权利要求25的动物细胞系，其中所述动物细胞系是CH0(中国仓鼠卵巢)、HEK293或NSO细胞系。
27.以权利要求19的表达载体和权利要求23的表达载体转化的动物细胞系。
28.权利要求27的动物细胞系，其中所述动物细胞系是CH0(中国仓鼠卵巢)、HEK293或NSO细胞系。
29.用于治疗癌的组合物，其包含权利要求1或3的抗体。
30.权利要求四的组合物，其还包含选自顺钼、吉西他滨、多柔比星、5-FU、伊立替康和紫杉醇中的至少一种。
全文摘要
提供了与表皮生长因子受体(EGFR)特异性地结合的抗体，其有效地用于治疗EGFR介导的癌。
文档编号C07K16/28GK102574919SQ200980161665
公开日2012年7月11日 申请日期2009年11月2日 优先权日2009年9月29日
发明者张基奂, 徐东赫, 李海元, 柳憬桓, 洪广元, 辛庸源, 辛龙男, 金世镐, 金敏洙 申请人:株式会社绿十字