专利名称：肿瘤坏死因子-α抑制肽及其应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及生物活性肽及其制备方法。本发明还涉及肿瘤坏死因子-a (TNF-a) 抑制肽及其制备方法。本发明还涉及包含所述肽分子的药物组合物及其在治疗肿瘤坏死因子-a (TNF-a)介导的炎性病症例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、克罗恩氏(Crohn's) 病和败血病等中的应用。
背景技术：
细胞因子是一类由活化的免疫细胞即B细胞、T细胞、单核细胞和巨噬细胞产生的信号传导蛋白。细胞因子包括白介素(IL-1至IL-23)、干扰素(α、β和Y)以及TNF-a 和 β 的家族(Janeway CA 等，1999，《免疫学》第四版(Immunobiology,4th Ed.)New York, Garland，1999 ;RoittI 等，2002，《免疫学》第五版(Immunology 5th ed.) London, Mosby, 2002)。已经提出了 IL-I和TNF-α在疾病例如败血病和自身免疫病症例如RA、皮肤病、炎症性肠病中作为炎性应答的关键介导物的重要作用(Locksley RM等，2001，Cell 104(4) 487-501 ；Feldmann M 等，1996，Ann. Rev. Immunol. 14 :397-440 ；Buchan G 等，1988，Clin. Exp.Immunol. 73 :449-455 ；Canto E 等，2006, Clin.Immunol. 119(2) 156-165 ；Fantuzzi F 等，2008，Expert Opi. Ther. Targets 12 (9) : 1085-96)。细胞因子调控研究进一步表明，TNF-α是造成炎性病理的最重要的细胞因子(Feldmann等，1999，Ann. Rheum. Dis. 58 (Supp 1 1)127-131)。TNF-α最初是作为引起小鼠肿瘤出血性坏死的分子而被发现(Carswel 1等， 1975，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 72 :3666)。第二条路线研究据认为造成恶病质状态的被称为“恶液质素”的血清蛋白，导致最终发现恶液质素等同于TNF- α (Beutler等，1989， Annu. Rev. Immunol. 7 :625)。现在，已确定TNF-α是涉及多种临床病症的活性广泛的炎性介导物。TNF-a是由几种细胞类型、特别是活化的巨噬细胞产生的分子量为17kD的蛋白。 TNF-a最初被合成为排列成稳定的三聚体的跨膜蛋白。它然后被金属蛋白酶——TNF-a 转化酶(TACE)切割，形成同三聚体的可溶性TNF(sTNF)，与其遍在表达的关联受体(TNFRI， p55和TNFRII，p7Q接合。TNF受体的遍在表达以及细胞特异性效应子解释了 TNF-α介导的细胞应答的广泛多样性，其中某些细胞应答是有害和危及生命的。这些受体当从单核细胞上脱落时，通过肃清和作为天然抑制剂，降低了 TNF-a水平。TNF-a诱导广泛的各种细胞应答，其中许多导致有害的结果。例如，TNF-a诱导恶病质，恶病质是由失去脂肪和全身蛋白质贫化所引起的病症，伴有厌食引起的食物摄入不足。恶病质常见于癌症患者，并且也已在患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的患者中观察到。此外，在动物中注射高剂量TNF-α产生了败血性休克的大部分症状。TNF-a也已显示出在自身免疫疾病例如多发性硬化症和类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣关节炎、过敏症、免疫复合物病和移植物抗宿主疾病以及移植排斥中发挥作用。甚至在疟疾和肺纤维化中也牵涉TNF-a的参与。因此，在疾病状况中定向阻断TNF-a生产是相当重要和有治疗益处的。
TNF相关病症的治疗中和TNF-α的副作用的方法集中于使用抗TNF抗体和可溶性TNF-R。在动物模型中，使用特异性针对TNF-α的抗体治疗与TNF-α相关的炎性病症，已显示出治疗效能(Williams 等，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 89 :9784-88 ；Baker 等，1994， Eur. J. Immunol. 24 :2040 ；Suitters 等，1994，J. Exp. Med. 179 :849)。已经构建了嵌合形式的抗TNF抗体用于人类临床试验(Lorenz等，1996，J. Immunol. 156 :1646 ；Walker 等，1996，J. Infect. Dis. 174 :63 ；Tak 等，1996，Arthritis Rheumat. 39 :1077)。此夕卜， 可溶性TNF-受体融合蛋白已作为TNF拮抗剂引入人类患者(P印pel等，1991，J.Exp. Med. 174 1483 ；WiIliams 等，1995, Immunol. 84 433 ；Baumgartner 等，1996, Arthritis Rheumat. 39(Supp1.)S74)。美国专利6265535涉及从TNF-受体超家族成员的结合环设计的环状肽和肽类似物，其干扰TNF-α与TNF-受体之间的结合相互作用，表现出体外和体内抑制活性，用于拮抗TNF的不需要的体内生物活性。该发明优选环化的肽，因为环和转角在蛋白质-蛋白质相互作用中发挥功能上重要的作用。在具体实施方案中，从TNF-R p55的三个结合环设计了环状肽，其与TNF-α结合并抑制TNF-α与其细胞受体的结合。最优选的实施方案具有至少7个氨基酸，并且没有提出更小的线性肽能够用作TNF- α抑制剂。美国专利6344443涉及通过给药有效量的抑制肽来抑制TNF- α与TNF受体的结合以及TNF-α功能的方法。该专利涉及与TNF受体结合并干扰TNF-α结合和活化细胞 TNF-α受体的能力的肽。具体来说，该发明涉及使用具有7和12个氨基酸残基的肽来抑制 TNF-α与TNF受体的结合和TNF的功能。‘443文献旨在筛选能够与TNF受体结合的小肽。 已经鉴定到的最小分子是7个氨基酸长的序列。没有提出更小的肽能够用作TNF-α抑制剂。美国专利6143866涉及源自尿液的TNF抑制肽。该专利还涉及具有抗TNF-α活性的纯化形式的TNF抑制剂。该专利还涉及具有作为表现出抗TNF活性的药物制品价值的纯化形式的TNF抑制剂。它还涉及以其纯化形式获得的30kDa蛋白和40kDa蛋白。这些蛋白所公开的氨基酸序列不少于15个氨基酸长，因此没有提出更小的肽能够用作TNF-α抑制剂。美国专利6048543涉及使用至少一个选自甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸的氨基酸或其生理可接受的盐来制备药物或营养制剂，用于在肿瘤坏死因子(TNF)水平升高到超过介导生理稳态和局部炎症的水平的患者中降低所述肿瘤坏死因子(TNF)水平。该专利公开了可以通过抑制或降低巨噬细胞类型细胞的TNF生产、或巨噬细胞类型细胞的TNF释放、或TNF 被TNF受体的结合，来实现TNF水平的降低。该专利涉及仅使用甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸制备用于降低TNF水平的药物或营养制剂。专利没有公开氨基酸组合或含有氨基酸组合的肽的任何应用。美国专利6107273涉及TNF-α拮抗化合物，其包含与选自人类TNF-α的分子表面的至少一个人类TNF-α分子表面基本上相似的分子表面。该发明的化合物具有附着于两端的连接部分和间隔部分。该发明的化合物公开了具有25个氨基酸以及连接部分和间隔部分的TNF- α抑制肽。‘273专利的TNF- α拮抗化合物与TNF ρ55受体和/或TNF ρ75 受体结合，并抑制TNF-α介导的细胞毒性。‘273专利没有提出不具有间隔部分的更小肽。
本领域中目前可用的治疗方法被设计成通过使用可溶性TNF受体或单克隆抗TNF 抗体来中和 TNF-α (Piguet 等，1992，Immunology 77 :510-514 ;Elliot 等，1993，Arthritis Rheum. 36 :1681-90)。它们与循环中的TNF-α结合，从而限制了后者对细胞表面上的TNF-R 的可接近性以及随后对炎性途径的活化。阻断TNF-α水平的可用疗法是(1)英利昔单抗(Remicade)小鼠人类嵌合的抗人类TNF-α单克隆抗体，(2)阿达木单抗完全人类抗 TNF-α单克隆抗体；(3)依那西普，可溶性P7MTNF-RII与人类IgG的Fc部分融合的二聚体融合蛋白。尽管这些分子在各种自体免疫病症中已显示效能，但它们苦于某些限制，即生物利用度和稳定性差、诱导严重免疫反应和高成本。提供阻断TNF-α活性的可替代手段是适当的。已经利用抗TNF抗体或TNF受体的序列来合成生物活性肽片段(Weisong Q等， 2006，Mol. Immunol. 43 :660-66 ；Zhang J 等，2003，Biochem. Biophy. Res. Comm. 7 :1181-87 ； Aoki等，2006，J.Clin· Invest. 116(6) :1525-34)；但是它们大并相对不溶。这突出了对可能采取小分子形式的改进的TNF-α抑制化合物的需要。在一个这样的研究中，Takasaki等，1997 (Nat Biotechnol. 1997，Nov ；15(12) 1266-70)研究了从TNF-RI的三个结合环设计的肽类似物。这些肽基于形成结合环的氨基酸序列来产生。已发现，一个肽序列，即TNF-RI的结构域3的环1上的环状WP9(序列为 WSENL) (107-114位残基)具有最明显的TNF- α阻断活性。WP9的序列WSENL被Takasaki 等用作模板，设计了环状肽模拟物WP9Q、WP9ELY、WP9Y和WP9QY。肽模拟物WP9QY显示出治疗价值，并在小鼠中降低了实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)和类风湿性关节炎(RA)的严重性。然而，其在生理缓冲液中相对不良的溶解性是其用作潜在的人类治疗剂的限制因素 (Takasaki 等，1997，Nat. Biotechnol. Nov. 15(12) :1266-70)。尽管肽的环化和芳构化增强了稳定性和生物利用度，但Takasaki等，1997注意到对增强溶解性或增强活性效果只有很少或没有。Takasaki陈述了 WP9QY是迄今为止开发的最小的肽模拟物，并且它可以用作下一代非肽类抑制剂的先导化合物。因此，该参考文献建议本技术领域的专业人员基于当时已知的最小肽尝试非肽类TNF抑制剂。这些观察着重说明了需要开发改进的下一代TNF- α抑制剂，其目的在于设计具有在生理缓冲液中具有可溶性、更好的稳定性和生物利用度并具有最小的副作用和降低的成本的肽。发明概述根据本发明，提供了具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水性氨基酸、疏水性氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。根据本发明的另一方面，提供了具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水性氨基酸、疏水性氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。本发明还涉及使用本发明的生物活性肽治疗TNF-α相关疾病状况。本发明还涉及包含本发明的生物活性肽的药物组合物。
附图简述
图1显示了利用生物测定法测定的肽的抗TNF- α活性。X轴上的数字1_10 表示序列ID-I到10的肽。Y轴表示每次运行两个平行样的三次独立实验的TNF-α介导细胞毒性的抑制百分率的平均值士SE。在X轴上，“+ve”表示阳性对照，即已知的TNF-α抑制月太，即环状 WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)。图2显示了序列ID-2和序列ID-6的线性肽、序列ID_9和序列ID-10的环状肽以及阳性对照即环状WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)肽抑制TNF-α诱导的细胞毒性的比较。结果表示成每次运行三个平行样的三次独立实验的TNF-α介导细胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。图3显示了序列ID-6的肽与依那西普(Et)对TNF- α介导的细胞毒性的抑制的比较。结果表示成每次运行三个平行样的两次独立实验的TNF-α介导细胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。图4显示了通过流式细胞术进行的肽与TNF-α的结合的定量。图如中显示了在序列ID-2和序列ID-6的肽存在下与细胞受体结合的TNF-α的荧光活化细胞分拣(FACS) 分析。Y-轴表示三次独立实验的TNF-RI表达阳性细胞的百分率的平均值士SE。在柱状图 (图4a)或流式细胞术直方图(图4b)中X轴上的数字1-5意义如下1 =用抗小鼠IgG FITC作为第二抗体染色的U937细胞，2 =用小鼠抗人类TNF-受体抗体和抗小鼠IgG FITC染色的U937细胞，3 =用重组TNF- α处理并用小鼠抗人类TNF-受体抗体和抗小鼠IgG FITC染色的 U937细胞，4 =用重组TNF- α与序列ID-2的复合物处理并用小鼠抗人类TNF-受体抗体和抗小鼠IgG FITC染色的U937细胞，5 =用重组TNF- α与肽序列ID-6的复合物处理并用小鼠抗人类TNF-受体抗体和抗小鼠IgG FITC染色的U937细胞。图5显示了序列ID-6的肽与U937细胞上的TNF-Rl的结合图5中显示了具有序列ID-6的肽与U937细胞上表达的TNF-Rl的结合的荧光活化细胞分拣(FACS)分析。Y-轴表示两次独立实验的TNF-RI表达阳性细胞的百分比的平均值士SE。在柱状图或流式细胞术直方图(图5)中X轴上的数字表示下列样品1 未处理的U937细胞，2 :U937 细胞 +TNF- α，3 :U937细胞+序列ID-6的肽。图6显示了来自介质(CFA)血清、对照(PBS)血清和胶原蛋白免疫的小鼠血清的抗胶原蛋白IgG水平的估算。图7显示了在胶原蛋白诱导的关节炎的鼠类模型中，使用具有序列ID-6的肽的不同剂量和方案进行治疗之前(Pre Tx)和治疗之后(Post Tx)右踝中爪厚度值的平均值。每个组包含4-5只动物。Y轴上的值表示相应组中爪厚度的平均值士SE。动物组用X轴上的字母表示，即A 用1. 25mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治疗的关节炎小鼠，
B 用2. 5mg/kg具有序列ID_6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治疗的关节炎小鼠，C 用5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治疗的关节炎小鼠，D 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周一剂共四周的方案治疗的关节炎小鼠，E 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以第一周一剂然后在三周后第二剂的方案治疗的关节炎小鼠，F 使用作为对照的PBS治疗的关节炎小鼠，G 对照动物，即健康的雄性C57BL/6小鼠。计算了治疗之前和之后的ρ值。#表示ρ值<0.01，*表示ρ <0.05。图8(a)显示了用序列ID-6的肽、序列ID_2的肽和依那西普(Et)治疗之前(Pre Tx)和治疗之后(Post Tx)左和右踝中爪厚度值的平均值士SE。PBS治疗的动物被当作未治疗动物，对照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。计算了治疗之前和之后的ρ值。^"表示ρ值
<0. 01, * 表示 P < 0. 05。图8(b)显示了在用序列ID-6的肽、序列ID-2的肽和依那西普(Et)治疗的动物中治疗后抗胶原蛋白IgGl/IgGh的比率比较。PBS治疗的动物被当作未治疗动物，对照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。计算了治疗之前和之后的ρ值。”表示ρ值<0.01，*表示ρ
<0. 05。图9(a)显示了用序列ID-6的肽和依那西普(Et)治疗之前(Pre Tx)和治疗之后 (Post Tx)右踝和右关节中爪厚度值的平均值。PBS治疗的动物被当作未治疗动物。每个组包括3只动物。图9(b)显示了在佐剂诱导的关节炎的大鼠模型中用序列ID-6的肽和依那西普 (Et)治疗之前(Pre Tx)和治疗之后(Post Tx)的比较性临床分值。PBS治疗的动物被当作未治疗动物。每个组包括3只动物。计算了治疗之前和之后的ρ值。#表示ρ值<0.01， * 表示 ρ < 0. 05。图10显示了在用序列ID-6、依那西普或作为阴性对照的PBS治疗之前和之后关节炎大鼠中爪和关节肿胀的代表性照片。发明详述本发明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。本发明还涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。本发明还涉及用作TNF-α抑制剂的生物活性肽。本发明的生物活性肽可以通过不同机制起作用，所述机制例如但不限于下述a)本发明的肽能够结合TNF- α以形成复合物，导致阻止TNF- α与TNF-Rl受体的？口口。b)本发明的肽能够直接结合TNF-Rl受体并能阻止TNF- α与TNF-Rl受体的结合。本发明还涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸。本发明还涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸，并且其中Xp X2 和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸，并且其中Xp X2 和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸，并且其中Xp X2 和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\γ、\各自独立地是0-2个氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸，并且其中Xp X2 和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中X1J2各自独立地是0-2个选自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，并且其中Xp X2和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3
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或其可药用盐和衍生物，其中X1J2各自独立地是0-2个选自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的氨基酸是单个氨基酸残基；并且氨基酸可以选自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，并且其中Xp X2和\当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中Χ:、)(2和)(3各自独立地是选自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的单个氨基酸残基。本发明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中Xp )(2和)(3各自独立地是选自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的单个氨基酸残基。本发明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的0_2个氨基酸；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2个氨基酸；并且是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；并且其中\γ、\和1、当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的0_2个氨基酸；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2个氨基酸；并且是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；并且其中\γ、\和1、当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明还涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的0_2个氨基酸；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2个氨基酸；并且是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；并且其中\、\和当加在一起时不少于2个氨基酸；以及可药用载体。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的0_2个氨基酸；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2个氨基酸；并且是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；并且其中\γ、\和1、当加在一起时不少于2个氨基酸。本发明还涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本发明还涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3
或其可药用盐和衍生物，其中&是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本发明还涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gln ；以及可药用载体。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本发明还涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本发明还涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本发明还涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果\是Ser,那么\是Asn或Gln ；以及可药用载体。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本发明还涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Gln，那么X2是Asn或Tyr。本发明还涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1--X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。本发明还涉及药物组合物，其包含具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gln、Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gln、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果\是Gln，那么\是Asn或Tyr ；以及可药用载体。本发明还涉及治疗TNF-α相关疾病状况的方法，所述方法包含给药具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可药用盐和衍生物，其中\是选自Trp、Ser, Gln的氨基酸残基；X2是选自 Ser, Gln、Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自Gln、Leu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。当在本文中使用时，术语“肽”是指由天然存在的氨基酸亚基通过肽键相连所形成的聚合物。术语氨基酸也可以是指具有与天然存在的肽相似的部分(portions)但是也具有非天然存在的部分(portions)的组成部分(moieties)。因此，肽可以具有改变的氨基酸或连键。术语生物活性肽是指当给药于哺乳动物时显示出任何种类/量的药理学或生物学效应的肽。上面使用的术语“氨基酸/氨基酸残基”可以是遗传编码的L-氨基酸、天然存在的非遗传编码的氨基酸、合成的L-氨基酸或所有上述的D-对映异构体或其可药用盐/衍生物。本文使用的20种遗传编码的L-氨基酸和常见的非编码氨基酸的氨基酸表示法是常规的，并如下所示表-权利要求
1.具有下式的TNF-α抑制肽 X1 __X2 __X3或其可药用盐和衍生物，其中各自独立地是0-2个氨基酸A3是单个氨基酸残基； 其中氨基酸选自亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸，并且其中和\当加在一起时不少于2个氨基酸。
2.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中亲水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸样氨基酸选自遗传编码的氨基酸和非遗传编码的氨基酸。
3.权利要求2的TNF-α抑制肽，其中氨基酸是遗传编码的氨基酸。
4.权利要求3的TNF-α抑制肽，其中氨基酸选自Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、 Gly、His、lie、Leu、Lys> Met> Phe> Pro、Ser> Thr> Trp> Tyr 禾口 Val。
5.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中各自独立地是选自Trp、Ser、Gln、Asn、Tyr 和Leu的1-2个氨基酸；X3是单个氨基酸残基并选自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr和Leu。
6.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是选自Trp、Ser,Gln的1-2个氨基酸；X2是选自kr、Gin、Asn和Tyr的1_2个氨基酸；并且是选自Gin、Leu和Tyr的氨基酸残基。
7.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中&是选自Trp、Ser,Gln的氨基酸残基；X2是选自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自GlruLeu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。
8.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是选自Trp、Ser,Gln的氨基酸残基；X2是选自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自GlruLeu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果&是％r，那么\是Asn或Gin。
9.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中\是选自Trp、Ser,Gln的氨基酸残基；X2是选自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸残基；并且\是选自GlruLeu和Tyr的氨基酸残基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。
10.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中X^A和)(3各自独立地是选自Trp、kr、Glru Asn、Tyr和Leu的单个氨基酸残基。
11.权利要求1m TNF- α抑制肽，其选自SEQ ID No :1_38。
12.权利要求1的TNF-α抑制肽，其中肽是线性肽或环状肽。
13.一种用于制备权利要求1的TNF-α抑制肽的方法，其中所述肽通过固相合成来制备。
14.一种药物组合物，其包含权利要求1或权利要求11的TNF-α抑制肽和可药用载体。
15.一种治疗TNF-α相关疾病状况的方法，其包含给药权利要求1或权利要求11的 TNF-α抑制肽。
16.权利要求1或权利要求11的TNF-α抑制肽，其中所述肽能经局部、经肠胃外、经粘膜、经口、经颊、经直肠、吸入、鼻内、经直肠、经阴道或经舌下途径给药。
全文摘要
本发明涉及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制肽及其制备方法。本发明还涉及包含本发明的TNF-α抑制肽的药物组合物及其在TNF-α介导的炎性疾病治疗中的应用。
文档编号C07K5/06GK102282163SQ200980154542
公开日2011年12月14日 申请日期2009年11月5日 优先权日2008年11月20日
发明者拉杰什·贾殷, 拉胡尔·贾殷, 施维塔·杜比, 维伦达·库马尔·维纳雅克, 维贾伊·戈埃尔, 苏哈南德·普拉萨德 申请人:万能药生物有限公司