专利名称：含rgd的拟肽和其用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的新颖环状拟肽和其用途，例如用于癌症诊断和治疗中。缩写AcOH，乙酸；Alloc，烯丙氧基羰基；Bpheide，细菌脱镁叶绿酸；BTA(细菌脱镁叶绿酸牛磺酸酰胺)，31-氧代-15-甲氧基羰基甲基-红细菌绿素131- -磺乙基)酰胺；BTC，双(三氯甲基)碳酸酯；Dab，二氨基丁酸；Dap，二氨基丙酸；DCM，二氯甲烷；Dde， 1-G，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基；DIC，二异丙基碳二亚胺；DIEA，二异丙基乙胺；DMBA，二甲基巴比妥酸；DMF, N, N-二甲基甲酰胺；DMS0，二甲亚砜；D0TA，1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸；DTPA，二亚乙基三胺五乙酸；Et2O，乙醚；FITC，异硫氰酸荧光素；Fmoc，芴甲氧羰基；GABA, γ-氨基丁酸；HATU，0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3， 3-四甲基-脲六氟磷酸盐；HOAt，1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HOBt，N-羟基苯并三唑；Lys， 赖氨酸；MeOH，甲醇；Nal，萘基丙氨酸；Orn，鸟氨酸；I^bf，2，2，4，6，7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基；PyBOP，苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-磷六氟磷酸盐；RP-HPLC，反相高效液相色谱；RT，室温；TFA，三氟乙酸；TFE，三氟乙醇；TIS，三异丙基硅烷。
背景技术：
例如纤维粘连蛋白(fibronectin)(Pierschbacher 和 Ruoslahti，1984)和玻璃粘连蛋白(vitronectin)等胞外基质(ECM)组分的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp ； RGD)基序可与整合素结合(Ruoslahti 和 Pierschbacher，1987 ；D' Souza SE 等人，1991 ； Joshi等人，1993 ；Koivunen等人，1994)。由整合素介导的粘附引起调控细胞存活、增殖和迁移的胞内信号传导事件。已知约25种整合素，且其中至少有8种结合作为其配体中主要识别序列的RGD基序。用于筛检含RGD肽的噬菌体展示方法(Pasqualini和Ruoslahti，1996)所获得的数据已经显示所述肽与肿瘤血管内皮层的选择性结合(Ruoslahti，1996 ；Pasqualini等人，1997)。因为据报道整合素的表达在活化内皮细胞(EC)上很高，但在休眠内皮细胞上比较有限，所以已经提出小型合成含R⑶肽作为抑制血管内皮和肿瘤细胞生长的拮抗剂。RGD 肽还延迟信号传输，影响细胞迁移并诱导肿瘤细胞衰退或细胞凋亡(Su等人，2002)。RGD 类似物用于肿瘤成像(Haubner等人，2001)中、抗血管生成方法(Kawaguchi等人，2001 ； Pasqualini等人，2000)中以及放射性核素(van Hagen等人，2000)和化疗药物(Arap等人，1998 ；Zitzmann等人，2002)的肿瘤靶向中。整合素也在癌细胞上表达，且在癌细胞的侵入、转移、增殖和凋亡中起重要作用。 肿瘤细胞转移侵入优选器官可能代表着细胞归巢现象(cell-homing phenomena)，其取决于肿瘤细胞与器官特异性内皮标志物之间的粘附相互作用(Ruoslahti和RajOtte，2000)。 通过与内皮或肿瘤细胞的整合素结合，RGD肽能通过抑制转移过程必需的肿瘤细胞-ECM和肿瘤细胞-EC连接来调节体内细胞交通。一些研究已经表明了含RGD的化合物可干扰体外
7(Goligorsky 等人，1998 ；Romanov 和 Goligorsky 1999)和体内(Saiki 等人，1989 ；Hardan 等人，199 肿瘤细胞转移过程。对个别整合素具有特异性的肽受到非常多的关注且在医学上可能很重要。α νβ 3 整合素是显示与肿瘤血管生成有关的第一种整合素。特异性地阻断ανβ3整合素的RGD 肽有希望成为肿瘤和视网膜血管生成的抑制剂、骨质疏松的抑制剂和肿瘤血管系统的靶向药物(Assa-Munt等人，2001)。抗癌药多柔比星(doxorubicin)或促凋亡肽与ανβ3整合素结合RGD肽的偶合会产生在针对小鼠异种移植肿瘤测试时活性大于且毒性小于未经修饰的药物的化合物(Ruoslahti，2000 ；Arap等人，1998 ；Arap等人，2002 ；Ellerby等人， 1999)。因此，已经在设计和制造整合素结合肽和拟肽方面进行了大量工作(Haubner等人， 1996 ；Locardi 等人，1999 ；Lark 等人，1999 ；Raboisson 等人，2006 ；Belvisi 等人，2005 ； Dijkgraaf 等人，2006 ；Banfi 等人，2007 ；US 5，849，692)。US 6, 576, 239,EP 0927045 和 WO 98/010795 公开了一种包含含氨基酸序列 RGD 或 NGR的肿瘤归巢肽的结合物，所述肽与治疗或诊断部分连接，前提是所述部分不是噬菌体粒子。治疗部分可以是细胞毒性剂或癌症化疗剂，如多柔比星。结合物在体内给药时选择性地归巢于血管生成性血管系统。肿瘤归巢肽可以是长度长达20或30个氨基酸或50-100 个氨基酸的线性或环状肽。一种优选的肽是环状九肽⑶CRGDCFC或H-CyS*-ASp-CyS*-Arg-Gly-Asp-Cy s*-Phe_Cys*-NH2。WO 2008/023378公开了一种含RGD肽或RGD拟肽与选自卟啉、叶绿素或细菌叶绿
素的光敏剂的结合物。
发明内容
在一方面，本发明涉及含RGD的环状拟肽，其具有通式I :
权利要求
1.一种含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的环状拟肽，其具有通式I
2.一种具有通式I的权利要求1的含RGD的环状拟肽。
3.一种具有通式II的权利要求1的含RGD的环状拟肽。
4.根据权利要求2所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-或-NH-R-，且R是衍生自直链C2-C6烷烃、C2-C6烯烃或C2-C6炔烃、优选衍生自C2-C4烷烃、C2-C4烯烃或C2-C4炔烃、更优选衍生自乙烷的亚烃基。
5.根据权利要求2所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-R-且R是衍生自经2个 C1-C2烷基取代的C6-C14单环或多环芳香族烃的亚烃基，优选1，3_ 二甲基苯-1，3- 二基。
6.根据权利要求2所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-R-且R与其连接的氮原子一起形成5或6元饱和或不饱和杂环，优选哌啶-1，4- 二基。
7.根据权利要求2所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-0-R-，且R是衍生自直链C2-C6 烷烃、C2-C6烯烃或C2-C6炔烃、优选衍生自C2-C4烷烃、C2-C4烯烃或C2-C4炔烃、更优选衍生自乙烷的亚烃基。
8.根据权利要求2所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-S-或-S-R-，且R是衍生自直链C2-C6烷烃、C2-C6烯烃或C2-C6炔烃、优选衍生自C2-C4烷烃、C2-C4烯烃或C2-C4炔烃、更优选衍生自乙烷的亚烃基。
9.根据权利要求2或4至8中任一权利要求所述的含RGD的环状拟肽，其中A1是选自赖氨酸(Lys)、二氨基丙酸(Dap)、二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸(Orn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸 (Asp)或氨基己二酸的氨基酸的残基。
10.根据权利要求3所述的含RGD的环状拟肽，其中A1是选自赖氨酸(Lys)、二氨基丙酸(Dap)、二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸(Orn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)或氨基己二酸的氨基酸的残基；A2是选自苯丙氨酸(Wie)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、缬氨酸(Val)、甘氨酸(Gly) 或Asp的氨基酸的残基；且A3是选自在C端经酰胺化的Dap、Dab、0rn或Lys残基的氨基酸残基。
11.根据权利要求9所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-且A1是Dap。
12.根据权利要求9所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基,且 A1 是 Dap、Dab、Orn 或 Lys0
13.根据权利要求9所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-NH-R-，R是衍生自丙烷、正丁烷或正己烷的亚烃基，且A1是Orn。
14.根据权利要求9所述的含RGD的环状拟肽，其中X是-0-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基,且Aj Dap或Lys0
15.根据权利要求10所述的含RGD的环状拟肽，其中A1是Lys，A2是Wie、Val、D-Phe、 Gly或Asp，且A3是在C端经酰胺化的Dap。
16.根据权利要求10所述的含RGD的环状拟肽，其中A1是Lys，A2是Wie，且A3是在C 端经酰胺化的Dab、Orn或Lys。
17.一种根据权利要求1至16中任一权利要求所述的含RGD的环状拟肽和选自荧光探针、光敏剂、螯合剂或细胞毒性剂的有效载荷部分的结合物，所述有效载荷部分与所述拟肽中的氨基酸残基A1连接，前提是当A1具有侧链氨基时，所述有效载荷部分任选地通过间隔子与A1的α-或侧链氨基连接，且当A1是二羧酸氨基酸残基时，所述有效载荷部分任选地通过间隔子与A1的α -或侧链羧基连接。
18.根据权利要求17所述的结合物，其中所述含RGD的环状拟肽是权利要求1中的通式I的化合物。
19.根据权利要求17所述的结合物，其中所述含RGD的环状拟肽是权利要求1中的通式II的化合物。
20.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的结合物，其中所述间隔子选自天然或非天然氨基酸部分、具有不超过8个氨基酸的小肽部分、二胺残基、C1-C25亚烃基或可溶性聚合物。
21.根据权利要求20所述的结合物，其中所述氨基酸选自甘氨酸(Gly)、β-丙氨酸(β-Ala)、苯丙氨酸(Phe)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、1-萘基丙氨酸(I-Nal)、D-I-萘基丙氨酸(D-I-Nal)、Y-氨基丁酸(GABA)或3_(氨基甲基)苯甲酸；所述二胺残基是-HN- (CH2) 2-NH-或-HN- (CH2) 4_NH_ ；所述C1-C25亚烃基是C1-Cltl亚烷基或亚苯基，其经2 个末端官能团例如0H、C00H、S03H、C0SH或NH2取代，从而形成醚、酯、酰胺、硫代酰胺或磺酰胺基团；且所述可溶性聚合物选自直链或支链聚乙二醇(PEG)或其共聚物、聚丙交酯(PLA) 或其共聚物、具有合适官能团的基于PLA、聚乙交酯(PGA)、聚己内酯(PCL)的聚酯或其共聚物、或基于聚甲基丙烯酰胺的聚酰胺或其共聚物，所述聚合物具有合适官能团。
22.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的结合物，其中所述有效载荷是荧光探针。
23.根据权利要求22所述的结合物，其中所述荧光探针选自细菌脱镁叶绿酸牛磺酸酰胺(BPheide taurine amide，BTA)、异硫氰酸芴酯(fluorenyl isothiocyanate，FITC)、丹磺酰(dansyl)、罗丹明(rhodamine)、曙红(eosin)或赤藓红(erythrosine)。
24.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的BTA，X 是-NH-且A1是Dap (结合物2)。
25.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的BTA，X 是-NH-R-，且(i)R是衍生自乙烷的亚烃基，且A1是通过其α -或侧链氨基与所述BTA连接的Dap、 Dab、Orn或Lys (分别是结合物1、3、4、5和6)；(ii)R是衍生自丙烷、正丁烷或正己烷的亚烃基，且、是0111(分别是结合物24、25和 26)；或(iii)R是1，3- 二甲基苯-1，3- 二基或哌啶-1，4- 二基，且A1是Orn (分别是结合物15 和 23)。
26.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的丹磺酰，X 是-NH-R-，且(i)R是衍生自乙烷的亚烃基，且A1是Dap、0rn或Lys (分别是结合物19、18和16)；或(ii)R是衍生自正丁烷的亚烃基，且A1是Orn (结合物21)。
27.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的BTA，X 是-0-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基，且A1是Dap或Lys (分别是结合物7和8)。
28.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是通过间隔子与A1连接的BTA， X是-NH-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基，A1是Dap，且所述间隔子是Gly、β -Ala、GABA, Phe, D-PheU-Nal, D_l_Nal或3_ (氨基甲基)苯甲酸部分，或1，2_乙二胺或1，4-二氨基丁烷的残基(分别是结合物9、10、11、27、28、29、30、31、32和33)。
29.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是通过间隔子与A1连接的 FITC，X是-NH-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基，且(DA1是Dap，且所述间隔子是β-Ala部分(结合物12)；或(U)A1是1^8，且所述间隔子是β-Ala或GABA部分(分别是结合物13和14)。
30.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是通过间隔子与A1连接的丹磺酰，X 是-NH-R-，且(i) R是衍生自乙烷的亚烃基，A1是Dap或Lys，且所述间隔子是Gly部分(分别是结合物20和17)；或(ii)R是衍生自正丁烷的亚烃基，~是0111，且所述间隔子是β-Ala部分(结合物22)。
31.根据权利要求19所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的BTA，A1是 Lys,且(i)A2是Phe, Val、D-Phe, Gly或Asp,且A3是在C端经酰胺化的Dap (分别是结合物 41、42、43、44 和 45)；或(Ii)A2是Phe，且A3是在C端经酰胺化的Dab、Orn或Lys (分别是结合物46、47和48)。
32.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的结合物，其中所述有效载荷是光敏剂。
33.根据权利要求32所述的结合物，其中所述光敏剂选自卟啉、叶绿素或细菌叶绿素， 优选叶绿素衍生物或细菌叶绿素衍生物，更优选细菌叶绿素衍生物。
34.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的细菌叶绿素衍生物Pd-BTA，X是-NH-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基，且A1是Dap (结合物34)。
35.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的结合物，其中所述有效载荷是螯合剂。
36.根据权利要求35所述的结合物，其中所述螯合剂是DTPA或DOTA。
37.根据权利要求18所述的结合物，其中所述有效载荷是与A1直接连接的DTPA或 DOTA，X是-NH-R-，R是衍生自乙烷的亚烃基，且A1是Dap (分别是结合物35和36)。
38.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的结合物，其中所述有效载荷是细胞毒性剂。
39.根据权利要求38所述的结合物，其中所述细胞毒性剂是蒽环类化疗剂，选自多柔比星(doxorubicin)、道诺霄素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星 (idarubicin)和米托蒽醌(mitoxantrone)，优选多柔比星；有丝分裂抑制剂，优选紫杉醇 (paclitaxel)；拓扑异构酶I抑制剂，优选喜树碱(camptothecin)；或拓扑异构酶II抑制齐U，优选椭圆玫瑰树碱(ellipticine)。
40.一种医药组合物，其包含如权利要求17至39中任一权利要求所定义的结合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载剂。
41.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述有效载荷是荧光探针。
42.根据权利要求41所述的医药组合物，其包含选自结合物1-33和41-48的结合物。
43.根据权利要求41或42所述的医药组合物，其用于诊断目的。
44.根据权利要求43所述的医药组合物，其用于器官和组织显像，或用于肿瘤诊断。
45.根据权利要求44所述的医药组合物，其用于利用动态荧光成像、放射诊断技术或分子磁共振成像(MRI)的肿瘤诊断。
46.根据权利要求45所述的医药组合物，其中所述放射诊断技术是正电子发射成像 (PET)或单光子发射成像(SPET)。
47.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述有效载荷是光敏剂。
48.根据权利要求47所述的医药组合物，其包含选自结合物34和37-40的结合物。
49.根据权利要求47或48所述的医药组合物，其用于光动力疗法(PDT)。
50.根据权利要求49所述的医药组合物，其用于肿瘤或非肿瘤组织的PDT。
51.根据权利要求50所述的医药组合物，其中所述肿瘤是选自黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、脑癌或头颈癌的原发性肿瘤或转移。
52.根据权利要求50所述的医药组合物，其用于治疗老年性黄斑变性，或用于通过限制对脂肪组织的血管供应来治疗肥胖症。
53.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述有效载荷是螯合剂。
54.根据权利要求53所述的医药组合物，其包含结合物35或36。
55.根据权利要求53或M所述的医药组合物，其用于放射成像或放射疗法中。
56.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述有效载荷是细胞毒性剂。
57.根据权利要求56所述的医药组合物，其用于靶向型化疗中。
58.如权利要求17至39中任一权利要求所定义的结合物或其药学上可接受的盐在用于制备用于诊断目的、光动力疗法(PDT)、放射成像或放射疗法或靶向型化疗的医药组合物中的用途。
59.根据权利要求17至39中任一权利要求所述的结合物或其药学上可接受的盐，其用于诊断目的、光动力疗法(PDT)、放射成像或放射疗法或靶向型化疗。
全文摘要
本发明提供含RGD的环状拟肽；所述拟肽与选自荧光探针、光敏剂、螯合剂或细胞毒性剂的有效载荷部分的结合物；和包含这些结合物的医药组合物。本发明的结合物可用于各种疾病、病症和病状的诊断目的和治疗。更具体地说，包含荧光探针的结合物可用于诊断目的，例如器官和组织显像和肿瘤诊断；包含光敏剂的结合物可用于肿瘤和非肿瘤组织的光动力疗法；包含螯合剂的结合物可用于放射成像或放射疗法；且包含细胞毒性剂的结合物可用于靶向型化疗。
文档编号C07K5/10GK102264756SQ200980152371
公开日2011年11月30日 申请日期2009年10月22日 优先权日2008年10月23日
发明者D·埃伦, N·科迪诺瓦, T·叶切兹克尔, Y·萨利特拉 申请人:斯特巴生物技术股份有限公司