专利名称：一种短肽的利记博彩app
一种短肽
技术领域：
本发明涉及一种短肽。背景技术：
McPherron等在研究肌肉萎縮时发现了 一种在肌肉生长过程中起重要作 用的负调控因子，研究结果在Nature杂志上发表后，作者将这个因子被命名 为myostatin(肌肉生长抑制素，MSTN)。该发现引起了相关研究人员的极大 兴趣，随后有不少的学者对MSTN作用的分子机制及其与肌肉萎縮有关的疾 病机理进行了深入的研究。在临床医学、运动医学以及农业上，对MSTN的 研究也有不少的进展。根据它的结构特点，己经将MSTN归类为生长分化因 子-8 (growth differentiation factor 8, GDF-8)，属TGF- 0 (转移生长因子-P )超家 族中的一成员，在骨骼肌的生长中起着关键的负调节作用。MSTN是抑制骨 骼肌生长发育的重要细胞因子，属于旁分泌或自分泌因子，由骨骼肌细胞表 达后分泌出胞外，作用于自身肌细胞或周围的骨骼肌细胞，抑制肌细胞的生 长。机体在正常状态下MSTN基因表达保持很低的水平，使肌肉生长处在一 个平衡状态。该基因突变或敲除的动物，肌肉生长失去抑制，骨骼肌肌肉群 明显增加，表现为全身骨骼肌的超常发达，如MSTN基因敲除的小鼠，骨骼 肌肌肉增加了2-3倍，而比利时蓝牛由于MSTN基因发生了突变，导致了其 骨骼肌生长的去抑制，表现为高产肉的优良品种。而在一些肌肉萎縮的生物 体内，该基因的表达水平则显著升高。机体长期处于不运动的状态，也可以 引起MSTN表达的上调，导致肌肉的萎縮。许多长期卧床或营养消耗性疾病 的患者，如爱滋病患者等体内的MSTN水平都存在不同程度的提高。经常处 于体育锻炼状态的人，其体内的MSTN水平要比长期不运动人体内的水平要 低。
MSTN全长376个氨基酸，由骨骼肌细胞表达后，在第267位氨基酸处 被蛋白酶裂解成两个片段，N端部分称propeptide (肌肉生长抑制素前肽，
3简称M前肽)，C端片段为MSTN的活性区域，两个C端分子通过二硫键形 成一个二聚体并与M前肽以非共价的形式结合，C端结合M前肽后不表现 出生物学活性。C片段与M前肽结合后进入到体液中，结合C片段的M前 肽随后被金属蛋白酶在第76位的天门冬氨酸处裂解，此时C端就表现出抑 制肌肉生长的生物学活性。此时若有大量的M前肽存在就会持续抑制C段 的活性。
运动锻炼能减低体内MSTN的表达，减少MSTN对骨骼肌生长的抑制， 继而间接促进肌肉的生长，表现为发达的骨骼肌。有实验证明抑制体内 MSTN的活性，可促进成肌细胞的分裂和繁殖，如给实验动物体内注射M前 肽，使M前肽不断与C段结合，就可以抑制MSTN的活性，但是所用的量 比较大。另有研究者采用抗MSTN的抗体以及针对MSTN的RNAi在体外对 抑制MSTN的作用进行了实验性的研究，认为二者都有抑制MSTN的活性。 但是抗体属于异源蛋白，在体内使用会引起变态反应。在体外培养的细胞实 验中，RNAi通过转染进入细胞，但是在体内就无法通过转染进入细胞，虽 然有一些逆转录病毒载体可以将RNAi带入细胞，但仍存在安全隐患。
发明内容
本发明旨在提供一种可以抑制动物的MSTN活性，促进骨骼肌生长的具 有抵抗"肌肉生长抑制素"(myostatin, MSTN)活性的短肽。 本发明所述的短肽，其氨基酸序列为
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys Ala Val lie Arg Gin Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu 或者为-
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys Ala Ala lie Arg Gin Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Ley Arg Glu 或者为
Pro Leu Thr VaJ Asp Phe Glu Val Phe Gly Trp Asp Trp lie lie200910041420.3 Ala Pro Lys Arg Tyr Arg Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu
这些短肽具有抵抗'肌肉生长抑制素，(myostatin， MSTN)活性。可以用
于培育多肌肉牲畜。
本发明短肽采用现有技术中的公知方法进行，既可以用多肽自动合成仪 进行化学合成，又可以将短肽序列推导成核苷酸序列，然后克隆到表达载体 中进行生物合成。
本发明模拟M前肽与C段结合的模式，合成能与C段结合的短肽，抑 制动物体内的MSTN活性，可以促进牲畜骨骼肌生长，用于培育多肌肉牲畜 时，简单、方便、安全、有效。
具体实施方式
实施例1制备本发明短肽
以树脂作为肽合成的固相基质，按照Merrifield发明的固相化学合成方 法，依照本发明短肽的氨基酸序列从C端开始依次进行。在合成反应柱中进 行反应液的减压抽干、洗树脂等步骤。洗树脂过程依次分别用异丙醇、二氯 甲烷、二甲基甲酰胺、含6-氢吡啶的二甲基甲酰胺脱保护溶液反应，抽干反 应柱。随后对树脂上的合成肽进行裂解，裂解液采用三氟乙酸、苯甲醚、乙 二硫醇在避光条件下进行，最后溶解在冷乙醚中。冷冻干燥后获得粗制肽产 品。肽的粗制品用C18反向柱分离纯化，分离过程的流动相为三氟乙酸以及 乙腈，经过梯度洗脱后获得本发明的肽纯品。
下述实施例中，所述的短肽1的氨基酸序列为
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys
Ala Val lie Arg Gin Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu
短肽2的氨基酸序列为
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys Ala Ala lie Arg Gin Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu短肽3的氨基酸序列为-
Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Val Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr Arg Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu
实施例2短肽促进小白鼠骨骼肌生长的实验
普通雄性昆明种小白鼠20只，体重限定在23g士3g。小鼠分为4组，短 肽1组，短肽2组，短肽3组，另设一组不注射短肽的对照组。每组5只， 每只小鼠腹腔注射短肽lmg/天，隔天注射一次，共注射15次。最后以'后 肢比目鱼肌/小鼠体重，的相对湿重来比较各组短肽对骨骼肌生长的作用。 相对湿重的计算方法为比目鱼肌重量(mg)与小鼠自身体重(g)的比值。
结果，短肽1组的相对湿重为3.2mg/g±0. 6，短肽2组的相对湿重为3.5 mg/g±0.3，短肽3组的相对湿重为3.6mg/g士0.5，对照组的相对湿重为2.4 mg/g±0. 5。
结果显示本发明的短肽组的相对湿重明显高于对照组，说明本发明的短 肽(短肽l、短肽2、短肽3)对小白鼠具有明显的促进骨骼肌生长作用。
实施例3短肽促进猪骨骼肌生长的实验
一个月大幼猪12只，分为4组，每组3只。每条短肽1组，另一组为不 注射短肽的对照组。每只幼猪每次注射短肽10mg，隔天注射一次。30天后 比较各组的三角肌相对湿重。
结果，短肽1组、短肽2组、短肽3组的相对湿重比对照组猪三角肌的 相对湿重分别提高了 30%、 19%、 12%。说明本发明的短肽(短肽1、短肽2、 短肽3 )具有明显的促进猪骨骼肌生长作用。
实施例4短肽促进牛骨骼肌生长的实验
两个月大的小牛8只，分为4组，每组2只。每条短肽1组，另一组为 不注射短肽的对照组。每只小牛每次注射短肽50mg，隔天注射一次。45天 后比较各组三角肌的相对湿重，
6结果，短肽1组、短肽2组、短肽3组的相对湿重比对照组小牛三角肌
的相对湿重分别提高了 25%、 20%、 16%。说明本发明的短肽(短肽l、短肽 2、短肽3)具有明显的促进小牛骨骼肌生长作用。
实施例5短肽促进山羊骨骼肌生长的实验
一个月大的山羊12只，分为4组，每组3只。每条短肽1组，另一组为 不注射短肽的对照组。每只山羊每次注射短肽10mg，隔天注射一次。45天 后比较各组三角肌的相对湿重。
结果，短肽1组、短肽2组、短肽3组的相对湿重比对照组山羊三角肌 的相对湿重分别提高了 28%、 22%、 18%。说明本发明的短肽(短肽l、短肽 2、短肽3)具有明显的促进山羊骨骼肌生长作用。序列表
<1 10>广州罗森生物科技有限公司
<120>—种短肽<160>3<210>1<2">30<212> PRT<213>人工序列
<400>1
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys15 10 15
Ala Val lie Arg Gin Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu20 25 30
<210>2
<211>30
<212> PRT
<213>人工序列<400>2
lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys15 10 15
Ala Ala lie Arg Gin Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu20 25 30
<210>3<2">30<212> PRT<213>人工序列
<400>3
Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Val Phe Gly Trp Asp Trp lie lie15 10 15
Ala Pro Lys Arg Tyr Arg Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu20 25 30
9
权利要求
1、一种短肽，其特征在于其氨基酸序列为Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser LysAla Val Ile Arg Gln Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu。
2、 一种短肽，其特征在于其氨基酸序列为lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys Ala Ala lie Arg Gin Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu 。
3、 一种短肽，其特征在于其氨基酸序列为Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Val Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr Arg Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 。
4、 如权利要求1或2或3所述的短肽，其特征在于具有抵抗'肌肉生长抑制 素'活性。
5、 如权利要求1或2或3所述的短肽在培育多肌肉牲畜中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种短肽。该短肽的氨基酸序列为Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Ala Val Ile Arg Gln Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu。本发明模拟M前肽与C段结合的模式，合成能与C段结合的短肽，抑制动物体内的MSTN活性，可以促进牲畜骨骼肌生长，用于培育多肌肉牲畜时，简单、方便、安全、有效。
文档编号C07K14/435GK101659700SQ200910041420
公开日2010年3月3日 申请日期2009年7月27日 优先权日2009年7月27日
发明者张明杰 申请人:广州罗森生物科技有限公司