专利名称：4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸-465的利记博彩app
4- [4- (2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑-1 -基]
苯甲酸-465本发明涉及4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸 (药剂)及其药学上可接受的盐和所述药剂的特定晶型(1型)。该药剂具有人ll-β-羟 类固醇脱氢酶1型酶(IliiHSDl)抑制活性，因此在包括代谢综合征在内的疾病的治疗中具 有价值，并且可用于温血动物(例如人)的治疗的方法中。本发明还涉及用于制备所述药 剂的方法、用于制备所述药剂的晶型(1型)的方法、含有它们的药物组合物及其在制备在 温血动物(例如人)体内抑制Ili^HSDl的药物中的用途。下式(I)表示所述药剂
们对抗胰岛素的作用(Dallman MF, Strack AM，AkanaSF 等，1993 ；Front Neuroendocrinol 14,303-347)。它们调节参与糖异生的肝酶的表达，并通过从脂肪组织释放甘油(提高脂肪 分解)和从肌肉释放氨基酸(降低蛋白质合成和增加蛋白质降解)来增加底物供应。糖 皮质素在前脂肪细胞分化成能够贮存甘油三酯的成熟脂肪细胞中也十分重要(Bujalska IJ等，1999 ；Endocrinology 140,3188-3196)。这对于“应激”诱导的糖皮质素与向心性肥 胖(central obesity)有关的疾病也极为关键，所述向心性肥胖本身是2型糖尿病、高血 压和心血管疾病的重大风险因素(Bjorntorp P禾口 Rosmond R 2000 ；Int. J. Obesity 24， S80-S85)。现已十分确定的是，糖皮质素活性不只是受皮质醇分泌的控制，而且还在组织水 平上受由11-β羟类固醇脱氢酶11 β HSDl (它可激活可的松)和lli3HSD2(它可钝化皮质 醇)造成的活性皮质醇与无活性可的松的胞内相互转换的控制(Sandeep TC和Walker BR 2001 Trends inEndocrinol & Metab. 12，446-453)。可能对人十分重要的这一机制最初是 在使用甘珀酸(carbenoxolone)( 一种同时抑制11 β HSDl和11 β HSD2的抗溃疡药)治疗 中得到证实(Walker BR 等，1995 J. Clin. Endocrinol. Metab. 80，3155-3159)，该治疗导致 胰岛素敏感性提高，这就表明Ili^HSDl可以通过降低活性糖皮质素的组织水平，来充分调 节胰岛素的作用(Walker BR 等 1995 J. Clin. Endocrinol. Metab. 80，3155-3159)。临床方面，库欣综合征(Cushing’ s syndrome)与皮质醇过量有关，皮质醇过量进而又与葡萄糖耐量异常、向心性肥胖(在脂肪储存中由刺激前脂肪细胞分化所引起)、 血脂异常和高血压有关。库欣综合征显示多种与代谢综合征十分相似的症状。虽然代 谢综合征一般与过量的循环皮质醇水平无关(Jessop DS等，2001 J.Clin. Endocrinol. Metab. 86,4109-4114)，但是预期组织内异常高的11 β HSDl活性可能具有相同的效果。研 究表明，尽管与瘦人对照相比，胖人体内具有相似或较低的血浆皮质醇水平，但是皮下脂肪 中的 11 β HSDl 活性大为提高(Rask E 等，2001 J. Clin. Endocrinol. Metab. 1418-1421)。 另外，比起皮下脂肪，与代谢综合征有关的向心性脂肪表达高得多的Ili^HSDl活性水平 (Bujalska IJ 等，1997 ;Lancet 349,1210—1213)。因此在糖皮质素、11 β HSDl 与代谢综合 征之间似乎存在某种关联。Ili^HSDl敲除小鼠显示糖皮质素诱导的糖异生酶活化在响应禁食时减弱，在响 应应激或肥胖时血浆葡萄糖水平较低(Kotelevtsev Y等，1997 ；Proc. Natl. Acad. Sci USA 94，14924-14929)，这就表明抑制11 β HSDl在降低2型糖尿病的血浆葡萄糖和肝葡萄糖排 出量中的作用。另外，这些小鼠表达抗致动脉粥样硬化脂蛋白谱，具有低甘油三酯水平、 高HDL胆固醇水平和高脱脂载脂蛋白AI水平(Morton NM等，2001 J. Biol. Chem. 276， 41293-41300)。这种表型是由脂肪分解代谢酶和PPARα的肝脏表达升高所引起的。这再 次表明11 β HSDl抑制在治疗代谢综合征的血脂异常中的作用。代谢综合征与11 β HSDl之间的关系中最令人信服的证据来自对过量表达 11 β HSDl 的转基因小鼠的最新研究(Masuzaki H 等 2001 ;Science 294,2166-2170)。当 在脂肪特异性启动子控制下表达时，11 β HSDl转基因小鼠患有高的脂肪皮质酮水平、向 心性肥胖、胰岛素抵抗糖尿病、高脂血症和饮食过量。最重要的是，在这些小鼠的脂肪中， 11 β HSDl活性的高水平类似于肥胖对象中所见的水平。肝11 β HSDl活性和血浆皮质酮水 平正常，但是皮质酮的肝门静脉水平却提高3倍，一般认为这是在肝脏中进行代谢作用所 引起的。总的来说，现已清楚的是，通过仅在脂肪中按类似于胖人的水平过量表达 11 β HSDl，就可以在小鼠中模拟整个代谢综合征。IliiHSDl组织分布相当广泛，并与糖皮质素受体的分布重叠。因此，11 β HSDl 抑制可能在多种生理/病理作用中对抗糖皮质素的作用。11 β HSDl存在于人骨骼肌中， 而且文献中充分证明了糖皮质素对抗胰岛素对蛋白质更新和葡萄糖代谢的合成代谢作用 (ffhorwood CB 等，2001 ;J. Clin. Endocrinol. Metab. 86，2296-2308)。因此，骨骼肌必定是 基于11 β HSDl疗法的重要靶标。糖皮质素还降低胰岛素分泌，这就可能加重糖皮质素诱导的胰岛素抵抗作用。胰 岛表达lli^HSDl，甘珀酸可抑制11-去氢皮质酮对胰岛素释放的作用(Davani B等，2000 ； J. Biol. Chem. 275，34841-34844)。因此在治疗糖尿病时，11 β HSDl抑制剂不仅可在组织水 平上对胰岛素抵抗起作用，而且本身还可增加胰岛素分泌。骨骼发育和骨功能也受糖皮质素作用的调节。11 β HSDl存在于人骨破骨细胞和成 骨细胞中，用甘珀酸对健康志愿者的治疗显示骨再吸收标记减少，而骨形成标记则无变化 (Cooper MS等，2000 ；Bone 27,375-381) 骨中11 β HSDl活性的抑制可以在骨质疏松症的 治疗中作为保护机制起作用。糖皮质素还可涉及眼病，例如青光眼。研究表明，11 β HSDl会影响人的眼内压，因
5此预期抑制11 β HSDl可减轻与青光眼有关的眼内压升高(Rauz S等2001 ；Investigative Opthalmology & Visual Science42，2037-2042)。在IliiHSDl与啮齿动物和人两者的代谢综合征之间似乎存在令人信服的关系。 有证据表明，特异性抑制2型肥胖性糖尿病患者的11 β HSDl的药物可通过降低肝糖异生来 降低血糖，减少向心性肥胖，改善致动脉粥样化脂蛋白表型，降低血压和减轻胰岛素抵抗。 肌肉中的胰岛素作用将得到提高，从胰岛β细胞分泌的胰岛素也会增加。目前有关代谢综合征有两个主要的公认定义。1)成人治疗小组(Adult Treatment Panel) (ATP III 2001 JMA)对代谢综合征的 定义指出，如果患者出现三种或更多种下列症状，即为代谢综合征男性腰围至少40英寸(102cm)，女性35英寸(88cm)；血清甘油三酯水平至少150mg/dl (1. 69mmol/l)；男性HDL 胆固醇水平低于 40mg/dl (1. 04mmol/l)，女性低于 50mg/dl (1. 29mmol/ 1)；血压至少135/80mm Hg ；禾Π / 或血糖(血清葡萄糖)至少110mg/dl (6. lmmol/1)。2)世界卫生组织(WHO)咨询会议推荐不涉及因果关系的下列定义，并建议在适当 时可改进的工作定义患者具有至少一种下列病症葡萄糖耐量异常、葡萄糖耐量减低(IGT)或糖尿病 和/或胰岛素抵抗；伴有两种或更多种下列病症动脉压升高血浆甘油三酯升高向心性肥胖微白蛋白尿症。我们发现，所述药剂或其药学上可接受的盐是有效的11 β HSDl抑制剂，因此在代 谢综合征相关疾病的治疗中具有价值。我们还发现，本发明的化合物具有改进的性质，这可 使之成为用作药品的更好侯选药物。因此，本发明涉及4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑基]苯 甲酸；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的合适的药学上可接受的盐为例如具有足够碱性的本发明化合物 的酸加成盐，例如与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸等无机酸或 有机酸的酸加成盐。另外，具有足够酸性的本发明化合物的合适的药学上可接受的盐为碱 金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)、铵盐或者与提供生理上可接 受阳离子的有机碱的盐(例如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺的
盐 ) ο要了解的是，本发明包括具有11 β HSDl抑制活性的所有这样的溶剂化形式。本发明还涉及所述药剂的化合物的体内可水解酯。体内可水解的酯是在动物体内 分解产生母体羧酸的酯。在本发明的一个实施方案中，提供4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸。在一个备选实施方案中，提供4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰 基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸的药学上可接受的盐。本发明的另一个方面提供用于制备所述药剂或其药学上可接受的盐的方法，所述 方法(其中除非另有说明，否则可变基团如式(1)中定义)包括方法a)或方法b)中的任 一种a)式(2)酯的水解
(2) 其中R1为烷基或芳基；或b)将式(3)化合物中的Z转化成羧基
(3) 其中Z为能够转化成羧酸的官能团；随后，必要或需要时，形成其药学上可接受的盐。上述方法a) 方法b)的合适条件如下。方法a)可例如使用合适的溶剂(例如甲醇等)，根据酯基团(R1)的性质在酸性 条件或碱性条件下进行，但通常可在碱性条件下进行，例如氢氧化钠水溶液。通常该反应在 环境温度下进行，然而一些酯可能需要使用微波或常规加热(例如在介于30_10(TC的温度 下)进行裂解。R1的合适取值的实例包括甲基、乙基、叔丁基、苯基、苄基和对甲氧基苄基， 特别甲基或乙基。
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方法b)的实例是通过采用金属催化的羰基化将芳基卤化物转化成芳基羧酸。这 类方法的实例是本领域已知的，并且通常在合适碱或碱的组合(例如DMAP/DIPEA)的存在 下，在合适的一氧化碳源(例如六羰钼或气态CO)存在时，使用合适的催化剂或催化剂的组 合(例如Herrmann催化剂连同Fu盐)，在合适的溶剂(例如乙醇/ 二噁烷)中进行。通常 该反应使用微波或常规加热在高温(例如在100-180°C的温度之间)下进行。本领域技术 人员应当了解的是，溶剂的选择将取决于所分离的产物的性质，例如醇溶剂容易使酯分离， 该酯随后在反应物进行后处理(work up)时裂解，得到合适的酸。本领域技术人员还应当 了解的是，式(3)化合物可通过用于描述式(2)化合物合成的所有方法得到。还应当理解的是，在本文所述的一些反应中，保护化合物中的任何敏感基团是必 要/需要的。其中保护是必要或需要的实例以及合适的保护方法为本领域技术人员所知。 可以根据标准规程使用常用保护基(有关说明参见T.W.Green，Protective Groups in Organic Synthesis, Johnffiley and Sons，1991)。因此，如果反应物包括例如氨基、羧基或 羟基等基团，则有可能需要在本文所述某些反应中对这些基团予以保护。对于氨基或烷基氨基，合适保护基为例如酰基，如乙酰基等烷酰基，如甲氧羰基、 乙氧羰基或叔丁氧羰基等烷氧羰基，如苄氧羰基等芳基甲氧羰基，或如苯甲酰基等芳酰基。 对于上述保护基的脱保护条件必将随保护基的选择而变化。因此，例如酰基(例如烷酰基 或烷氧羰基或芳酰基)，可以例如通过用合适的碱(例如氢氧化锂或氢氧化钠等碱金属氢 氧化物)水解脱去。或者，如叔丁氧羰基等酰基可以例如通过用合适的酸(例如盐酸、硫酸 或磷酸或三氟乙酸)处理脱去，如苄氧羰基等芳基甲氧羰基可以例如通过在催化剂(例如 披钯碳)存在下氢化或通过用路易斯酸(Lewis acid)(例如三(三氟乙酸)硼)处理脱去。 对于伯氨基合适的备选保护基为例如邻苯二甲酰基，其可以通过用烷基胺(例如羟胺)或 用胼处理脱去。对于羟基的合适保护基为例如酰基，如乙酰基等烷酰基、如苯甲酰基等芳酰基或 苄基等芳基甲基。对于以上保护基的脱保护条件必将随保护基的选择而变化。因此，诸如 烷酰基或芳酰基等酰基可以例如通过用合适的碱(诸如氢氧化锂或氢氧化钠等碱金属氢 氧化物)水解脱去。或者，如苄基等芳基甲基可以例如经催化剂(例如披钯碳)氢化脱去。对于羧基的合适保护基团为例如酯化基团，例如可以通过例如用诸如氢氧化钠等 碱水解脱去的甲基或乙基，或者可以通过例如用三氟乙酸等有机酸类的酸处理脱去的叔丁 基，或者可以经催化剂(例如披钯碳)氢化脱去的苄基。采用化学领域熟知的常规技术，可以在合成的任何方便的阶段除去保护基团。本发明的另一个方面涉及4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡 唑-1-基]苯甲酸的晶型(1型)，其X射线衍射图在2Θ =16.8°附近有至少一个特定的 峰值。2 θ ( θ )值使用CuKa幅射测量。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°和18. 5°附近有至少两个特定 峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18.5°和14. 4°附近有特定峰 值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18.5°、14.4°、13.9°和
819.8°附近有特定峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18. 5°、14.4°、13.9°、 19.8° ,20. 1° ,15. 8° ,22. 6° ,19. 4°和20. 4°附近有特定峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图与如
图1所示的使用CuKa幅射的X射线粉末衍 射图基本相同的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =° 士 0.5° 2Θ处有至少一个特定峰值 的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ = 16.8° 士0. 5° 2 θ处有至少一个特定 峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°和18.5°处有至少两个特定的 峰值的1型晶型，其中所述值可为士 0.5° 2Θ。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18.5°和14. 4°处有特定峰值 的1型晶型，其中所述值可为士 0.5° 2Θ。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18.5°、14.4°、13.9°和 19.8°处有特定峰值的1型晶型，其中所述值可为士0.5° 2Θ。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18. 5°、14.4°、13.9°、 19.8° ,20. 1°、15.8°、22· 6°、19.4°和20. 4°处有特定峰值的1型晶型，其中所述值可 为士0. 5° 2 θ。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°处有至少一个特定峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°和18.5°处有至少两个特定的 峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16. 8°、18. 5°和14. 4°处有特定峰值 的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18.5°、14.4°、13.9°和 19. 8°处有特定峰值的1型晶型。本发明提供其X射线粉末衍射图在2 θ =16.8°、18. 5°、14.4°、13.9°、 19.8° ,20. 1° ,15. 8° ,22. 6° ,19. 4° 和 20. 4° 处有特定峰值的 1 型晶型。本发明提供如图1所示的使用CuKa幅射的X射线粉末衍射图的1型晶型。^A4-「4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡哔-1-基1苯甲酸(1型)的10 个最明显的X射线粉末衍射峰 vs =非常强s =强DSC分析表明，1型在308. 8°C时开始熔化，在310. 5°C时达到峰值。DCS差示热分 析图见图2。在表明本发明涉及1型晶型时，结晶度适宜大于约60%，更适宜大于约80%，优选 大于约90%，更优选大于约95%。结晶度最优选大于约98%。所述1型提供与图1所示X射线粉末衍射图基本相同的X射线粉末衍射图，并且 具有表A中所列的大致10个最主要的峰值(2Θ角值)。应当了解的是，X射线粉末衍射图 的2 θ值从一台机器到另一台机器或从一个样品到另一样品可能略有不同，因此所引用的 数值不得解释为是绝对数值。—般认为，可以获得具有一个或多个测量误差的X射线粉末衍射图，所述测量误 差取决于测量条件(例如所使用的设备或机器)。具体地讲，普遍认为，X射线粉末衍射图 的强度可随测量条件而上下波动。因此，应当了解的是，本发明的1型不限于提供与图1所 示X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图的晶体，并且具有与图1所示的X射线粉末 衍射图基本相同的X射线粉末衍射图的任何晶体都落入本发明的范围内。X射线粉末衍射 领域的技术人员能够判断X射线粉末衍射图的基本相同性。X射线粉末衍射领域的技术人员应当了解，峰值的相对强度可能受例如大小超过 30微米和非单一长径比的晶粒的影响，这可以影响样品的分析。技术人员还要了解的是， 反射位置可能受样品位于衍射仪中的确切高度和衍射仪零校准的影响。样品表面平坦度 也可能有少部分影响。因此，所提供的衍射图数据不得视为绝对值(Jenkins，R和Snyder， R.L. ‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’ John Wiley& Sons 1996 ； Bunn, C. W. (1948)，Chemical Crystallography, ClarendonPress，London ；Klug，H. P. & Alexander, L E. (1974)，X-Ray DiffractionProcedures)。一般来讲，X射线粉末衍射图中衍射角的测量误差约为5%或更低，特别是 士0. 5° 2 θ，当考虑图1的X射线粉末衍射图时以及当读取表A数据时，应当考虑这一测量误差度。另外，应当了解的是，强度可能随实验条件和样品制备(择优取向)而产生波动。所采用技术的细节X射线粉末衍射表 B *从用固定狭缝测量的衍射图推导相对强度分析仪器SiemensD5000将结晶材料样品固定在Siemens单硅晶(single silicon crystal, SSC)晶片 (wafer mount)上，借助显微镜载玻片将样品展开成薄层，以测定X射线粉末衍射图。使样 品以30转/分钟旋转(以改进计数统计值)，用1. 5418埃波长在40kV和40mA下操作细长 铜聚集管(copper long-f inefocus tube)所产生的X射线辐照样品。经校准的X光源通 过设置为V20的自动变化的发散狭缝后，被反射的辐射被引导通过2mm抗散射狭缝和0. 2mm 检测狭缝。按θ-θ模式，在2° -40° 2Θ范围内，每增加0.02° 2Θ (连续扫描模式)便 使样品暴露1秒钟。运行时间为31分41秒。该仪器配备了闪烁计数器作为检测器。通过 用Diffrac+软件运行的DellOptiplex 686 NT 4. 0工作站进行控制和数据获取。X射线粉 末衍射领域的技术人员应当了解，峰值的相对强度可能受例如可以影响样品的分析大小超 过30微米和非单一长宽比的晶粒的影响。技术人员还要了解的是，反射位置可能受样品位 于衍射仪中的确切高度和衍射仪零校准的影响。样品表面平坦度也有少部分影响。因此， 所提供的衍射图数据不得视为绝对值。示差扫描量热法分析仪器:TAInstruments Q1000 DSC通常将不超过5mg的材料装入配备有盖的40 μ 1铝锅中，在25°C _325°C的温度范 围内，以每分钟10°c的恒定加热速度加热。使用用氮气的吹扫气体，流速为100ml/分钟。如上文所述，药剂具有IliiHSDl抑制活性。可以应用下列测定评价这些性质。泖丨定可采用竞争性均相时间分辨荧光测定法(HTRF) (CisBioInternational, R&D， Administration and Europe Office, In VitroTechnologies—HTRF ⑧ /Bioassays BP 84175,30204 Bagnols/CezeCedex, France。皮质醇批量 HTRF 试剂盒目录号 62C0RPEC)， 通过11 β HSDl氧化还原酶活性测定可的松向成活性类固醇皮质醇的转化。对本文所述化合物的评价采用杆状病毒表达的N端带6-His标签的全长人 IliiHSDl酶Π)进行。使用螯合铜柱，使该酶从去污剂增溶的细胞裂解物中纯化出来。 11 β HSDl的抑制剂降低可的松向皮质醇转化，上述测定中信号的增强证实了这一点。将待测化合物溶于二甲亚砜(DMSO)至10mM，在含有1 % DMSO的测定缓冲液中进一步稀释成最终测定浓度的10倍。然后将稀释后的化合物加到黑色384孔板(Matrix， Hudson NH, USA)中。在总体积20μ 1的溶液中进行测定，该溶液由可的松(Sigma，Poole, Dorset, UK, 160nM)、葡萄糖-6-磷酸(Roche Diagnostics, ImM)、NADPH(Sigma, Poole, Dorset, 100 μ M)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(RocheDiagnostics，12. 5μ g/ml)、EDTA(Sigma, Poole, Dorset, UK, ImM)、测定缓冲液(K2HP04/KH2P04，IOOmM) (pH 7. 5)、重组 11 β HSDl [使用合适 的稀释液以得到可行的测定窗(assay window)—合适的稀释液的实例可以是酶母液的 1 1000稀释液]加试验化合物组成。将测定板在37°C下温育25分钟，之后加入10 μ 1 0. 5mM甘草亭酸(glycerrhetinicacid)加上缀合皮质醇(conjugated Cortisol) (XL665或 D2)终止反应。然后加入10μ1抗皮质醇穴状化合物(anti-cortisol Cryptate)，将板密 封后，在室温下温育6小时。使用Envision读板仪测定在665nm和620nm下的荧光，并计 算出665nm 620nm比率。然后，用这些数据计算每种化合物的IC5tl值(Origin 7. 5，Microcal软件， Northampton MA, USA)和/或在30 μ M化合物下的％抑制。*1 The Journal of Biological Chemistry，第 26 卷，第 25 期，第 16653-16658 页得到下列结果实施例IIC50 0. 008 μ Μ。本发明化合物的口服生物利用度可如下测定PK研究中生物利用度的测定以 25% HPBCD/索楞逊缓冲液(sorrensons buffer) (pH 5.5)中的制剂，按 2mg/ kg(2ml/kg)静脉内和按5mg/kg(5ml/kg) 口服给予所述化合物。采集给药前、两种途径给药 后0. 25,0. 5、1、2、3、4、5、6、8和24小时的血样(200 μ 1)，经离心制备血浆。血浆样品如下 进行分析。通过标准PK方法应用合适的PK软件(WinNon-Lin)，计算PK参数(清除率、分 布容积、生物利用度、吸收分数等)。血浆样品的生物分析法所述指南用于在研究DMPK中所采用的所有PK种类的设计化合物在单剂化合物或 盒式给药后进行血浆样品的手工制备。描述了通过开放型存取(open access) (LC-MS/MS) 或人手方式(LC-MS)的分析法。MM1.材料2.通用提取方法3.使用通用板式设计的示例性样品清单4.开放型存取批量提交和系统检查(Open Access BatchSubmission and System Check)5.批量流通(Batch Pass)的接受标准1.材料溶剂甲醇、乙腈和DMSO水纯化级或HPLC级Iml浅的96孔板或微量离心管2ml深孔96孔板加盖
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空白(对照)血浆2.通用提取方法用DMSO使化合物溶解至lmg/ml，如有盐的话，将盐的因素考虑在内。可以采用 DMSO母液制备所有校准样品与质控(QC)样品2. i单一化合物分析2. i. a校准样品和QC样品的制备1.如下制备标准溶液 2.将50 μ 1空白血浆转移到Iml 96孔板(浅孔)的孔中.3.将5μ 1各标准溶液转移到该板其它孔中。4.将50 μ 1空白血浆加到这些孔的各孔中。5.为了产生QC 样品，将 3 份 5μ 1 等分量的 100ng/ml、1000ng/ml 和 10，000ng/ml 标准溶液加到板中(各浓度3个QC样品)。6.向这些样品每个中加入50 μ 1空白血浆。7.将50 μ 1各PK样品转移到Iml 96孔板中。8.将5 μ 1甲醇(_化合物)加到每个PK样品中。9.通过涡旋混合确保所有剂量的制剂充分混勻。10.将预期浓度的静脉(IV)制剂和口服(PO)制剂在甲醇中稀释至10 μ g/ml。(例 如，制备预期浓度为2mg/ml的制剂可按1 200稀释得到10 μ g/ml溶液)。11.将6χ50μ 1等分量的血浆加到板中。将5 μ 1稀释的IV制剂加到3个孔中， PO制剂如此重复，并保留3个孔。12.通过将100 μ 1含有计划相关内标(按1 μ g/ml)的乙腈加到所有校准、QC、PK和制剂样品中，使蛋白质沉淀。13.使板涡旋混合后，在4，OOOg下离心10分钟。14.将100 μ 1上清液转移到2ml 96孔板各孔中(参见下列板图)。注意不可搅
动沉淀。15.将约1.5ml 50 50甲醇水加到最后的孔中。16.对于triple quad系统上的分析将400 μ 1水(HPLC级)加到各样品中。轻
轻混合。17.将ΙΟΟμΙ 100，000ng/ml各标准溶液的母液加到2ml板中后，加入900μ 1水。 将内标样品加到另一孔中(参见板图)。它们用于调节化合物(板图表示为调整溶液)。18.对于平台系统(platform system)上的分析将100 μ 1水(HPLC级)加到各
样品中。轻轻混合。19.用制备成5，000ng/ml的化合物溶液(将100 μ 1 50，000ng/ml标准溶液加到 900 μ 1水中)，用手工调整所有化合物。2. 盒式剂量分析2. iia校准和QC样品的制备注意对于盒式给药法，稀释lmg/ml母液所需要的甲醇量可根据化合物存在的量 进行调节。1.将100 μ 1各lmg/ml所需母液加到小瓶中。2.加入所需体积的甲醇得到Iml总体积。3.进行有关单一化合物分析的所有其它步骤(上述步骤2-16)。2. iii万一 PK样品超过定量测定上限(ULOQ)1.如上所述制备另一校准曲线和QC样品(步骤1-6)。2.转移< 50 μ 1 (例如25 μ 1)的超过ULOQ的PK样品。3.将足够的对照血浆加到这些样品中，得到50μ 1的最终血浆体积。记录所做稀释。4.转移50 μ 1所有剩余的PK样品。5.制备所有的制剂样品，并如上所述提取所有样品(步骤8-16)。注意可以检查用来绘制校准曲线的浓度上限，然而，必须留意避免HPLC柱或MS 设备饱和。正是这个原因才建议稀释PK样品。2. iv灵敏度低的情况(高定量测定下限(高LLOQ))注意当大多数血浆浓度位于定量测定下限之下或者其中LLOQ大于lOng/ml时， 被视为高LL0Q。当遇到这些情况的任一种时，可采用下列方法。本发明进一步的方面提供药物组合物，所述药物组合物包含如上文定义的药剂或 其药学上可接受的盐以及药学可接受的稀释剂或载体。本发明的组合物可以为适于口服用途的形式(例如作为片剂、锭剂、硬质或软质 胶囊剂、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)；适于局部使用 的形式(例如作为乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、或者水性或油性溶液剂或混悬剂)；适于经吸入 法给药的形式(例如作为微细粉剂或液体气雾剂)；适于经吹入法给药的形式(例如作为 微细粉剂)；或适于胃肠外给药的形式(例如作为用于静脉内、皮下、肌内或肌内给药的无菌水性或油性溶液剂，或者作为用于直肠给药的栓剂)。一般而言，优选适于口服形式的组 合物。可以通过常规方法，采用本领域众所周知的常规药用赋形剂，获得本发明的组合 物。因此，计划用于口服使用的组合物可以含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和 /或防腐剂。用于片剂剂型的合适的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂例如乳糖、碳 酸钠、磷酸钙或碳酸钙；成粒剂和崩解剂例如玉米淀粉或藻酸(algenic acid)；粘合剂例 如淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基 苯甲酸丙酯和抗氧化剂例如抗坏血酸。片剂剂型可以不包衣或包衣，以调节片剂在胃肠道 中的崩解和随后活性成分的吸收，或者以改进片剂的稳定性和/或外观，在这两种情况下， 采用常规包衣材料和本领域熟知的方法进行。口服用途的组合物可以是硬质胶囊剂的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂 (例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或者可以是软质胶囊剂的形式，其中活性成分与水 或油(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。水性混悬剂一般含有微细粉形式的活性成分以及例如一种或多种以下的成分 悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、 西黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或湿润剂，例如卵磷脂或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例 如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基十六 醇)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油 酸酯)，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基十六醇)，或环氧乙烷 与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨醇单油酸酯)，或环氧乙烷 与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水性 混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、抗氧 化剂(例如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂和/或甜味剂(例如蔗糖、糖精或阿司帕坦)。油性混悬剂可以通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或 椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中制备。油性混悬剂还可含有增稠剂，例如蜂蜡、固体 石蜡或鲸蜡醇。还可加入甜味剂(例如上述甜味剂)和矫味剂以提供适口的口服制剂。这 些组合物还可以加入抗氧化剂(例如抗坏血酸)以便保存。适于通过加入水制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂一般含有活性成分以及 分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂以上面已 提及的那些为例。还可存在其它赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。本发明的药物组合物还可以为水包油乳剂的形式。油相可为植物油(例如橄榄油 或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或任何这些油的混合物。合适的乳化剂可为例如天 然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆磷脂)、卵磷脂、 由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯(例如失水山梨醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷 的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。乳剂还可含有甜味剂、矫味剂和防腐 剂。糖浆剂和酏剂可用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖)配制，还 可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
15
药物组合物还可为无菌注射用水性混悬剂或油性混悬剂的形式，可按照已知方法 用一种或多种上面提及的合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制。无菌注射用制剂还可为无 菌注射用溶液剂或混悬剂以及胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂，例如1，3_ 丁二醇的溶 液。通过吸入法给药的组合物可以为常规压缩气雾剂的形式，使得活性成分分散为含 有微细固体的气雾剂或液滴。可以使用常用的气雾剂抛射剂(例如可挥发的氟化烃或烃 类)，气雾剂装置适宜设计成使活性成分定量分散。有关制剂的更多资料，读者可参阅Comprehensive MedicinalChemistry，第5卷， 第 25 章，第 2节(Corwin Hansch ；Chairman ofEditorial Board),Pergamon Press 1990。与一种或多种赋形剂混合制备单一剂型的活性成分的用量，必将随待治疗宿主和 具体给药途径而变化。例如，人用口服制剂一般含有例如0. 5mg-2g活性成分和与之相混合 的合适常用量的赋形剂，所述赋形剂的用量可由占总组合物重量的约5%至约98%不等。 单位剂型一般含有约Img至约500mg的活性成分。有关给药途径和剂量方案的更多资料， 读者可参阅Comprehensive Medicinal Chemistry，第5卷，第25章，第3节(编委员主席 Corwin Hansch), Pergamon Press 1990。我们发现该药剂或其药学上可接受的盐是有效的11 β HSDl抑制剂，因此在代谢 综合征相关疾病的治疗中具有价值。要了解的是，当本文使用术语“代谢综合征”时，这是指如1)和/或2)中定义的 代谢综合征或者这种综合征的任何其它公认定义。本领域使用的“代谢综合征”的同义词 包括Reaven综合征、胰岛素抵抗综合征和X综合征。要了解的是，当本文使用术语“代谢综 合征”时，它还是指Reaven综合征、胰岛素抵抗综合征和X综合征。本发明的一个进一步的方面提供如上文定义的药剂或其药学上可接受的盐，其用 于预防性或治疗性治疗温血动物(例如人)的方法。因此，按照本发明的这个方面，提供用作药物的该药剂或其药学上可接受的盐。按照本发明的另一个特征，提供该药剂或其药学上可接受的盐在制备用于在温血 动物(例如人)体内产生11 β HSDl抑制作用的药物中的用途。按照本发明的另一个特征，提供该药剂或其药学上可接受的盐，以制备用于在温 血动物(例如人)体内产生11 β HSDl抑制作用的药物。当提及11 β HSDl抑制作用的产生或产生11 β HSDl抑制作用时，这适当地是指代 谢综合征的治疗。或者，当提及11 β HSDl抑制作用的产生时，这是指糖尿病、肥胖症、高脂 血症、高血糖症、高胰岛素血症或高血压的治疗、特别2型糖尿病和肥胖症的治疗。或者，当 提及Ili^HSDl抑制作用的产生时，这是指青光眼、骨质疏松症、结核病、痴呆、认知障碍或 抑郁症的治疗。或者，当提及Ili^HSDl抑制作用的产生时，这是指认知障碍的治疗，例如通过改 善言语流畅、言语记忆或逻辑记忆等来改善个体的认知能力，或者用于轻度认知障碍的 治疗。参见例如W003/086410及其中所包括的参考资料以及Proceedings of National Academy ofSciences(PNAS)，2001，98(8)，4717-4721。或者，当提及Ili^HSDl抑制作用的产生时，这是指动脉粥样硬化的治疗、延 迟动脉粥样硬化的发生和/或降低动脉粥样硬化的风险一参见例如J. ExperimentalMedicine,2005，202(4)，517-527。或者，当提及11 β HSDl抑制作用的产生时，这是指阿尔茨海默病和/或神经变性 疾病的治疗。按照本发明这个方面的进一步特征，提供用于在需要这种治疗的温血动物(例如 人)体内产生11 β HSDl抑制作用的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的式(1)化合 物或其药学上可接受的盐。除治疗药物的用途外，该药剂或其药学上的盐还可在体外和体内测试体系的开发 和标准化中用作药理学工具，用于评价11 β HSDl抑制剂对实验室动物(例如猫、狗、兔、猴、 大鼠和小鼠)的作用，作为寻找新型治疗药物的组成部分。本文所述IliiHSDl的抑制可以用作单一疗法施用，或者除本发明的主题化合物 以外，还可以包括一种或多种其它物质和/或治疗。这种联合治疗可以通过同时、序贯或分 开给予治疗的各个组分来实现。同时治疗可以按单一片剂或按分开的片剂进行。例如，可 与11 β HSDl抑制剂、特别是本发明的11 β HSDl抑制剂共同给药的药物可包括下列主要的 治疗药类别1)胰岛素和胰岛素类似物；2)胰岛素促分泌素，包括磺酰脲(例如格列本脲(glibenclamide)、格列 吡嗪(glipizide))、膳食血糖调节剂(例如瑞格列奈(I^paglinide)、那格列奈 (nateglinide))、胰高血糖素样肽1激动剂(GLP1激动剂)(例如艾塞那肽(exenatide)、利 拉糖肽(Iiraglutide))和二肽基肽酶IV抑制剂(DPP-IV抑制剂)；3)胰岛素增敏剂，包括PPAR γ激动剂(例如吡格列酮(pioglitazone)和罗格列 酮(rosiglitazone))；4)抑制肝葡萄糖排出量的药物(例如二甲双胍(metformin))；5)设计用来减少从肠中吸收葡萄糖的药物(例如阿卡波糖(acarbose))；6)设计用来治疗长期高血糖症的并发症的药物，例如醛糖还原酶抑制剂；7)其它抗糖尿病药包括磷酸酪氨酸磷酸酶抑制剂、葡萄糖-6-磷酸酶抑制剂、胰 高血糖素受体拮抗剂、葡糖激酶激活剂、糖原磷酸化酶抑制剂、果糖-1，6-二磷酸酶抑制 剂、谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰氨基转移酶抑制剂。8)抗肥胖症药物(例如西布曲明(sibutramine)和奥利司他(orlistat))；9)抗血脂异常药物，例如HMG-辅酶A还原酶抑制剂(他汀类(statins)， 例如普伐他汀(pravastatin)) ；PPAR α激动剂(贝特类(f ibrates)，例如吉非贝齐 (gemfibrozil))；胆汁酸螯合剂(消胆胺(cholestyramine))；胆固醇吸收抑制剂(植物甾 烷醇、合成抑制剂)；回肠胆汁酸吸收抑制剂(IBATi)；胆固醇酯转移蛋白抑制剂及烟酸和 类似物(烟酸(niacin)和缓释剂型)；10)抗高血压药，例如β阻滞药(例如阿替洛尔(atenolol)、恩特来(inderal))； ACE抑制剂(例如赖诺普利(Iisinopril))；钙拮抗剂(例如硝苯地平(nifedipine))；血 管紧张素受体拮抗剂(例如坎地沙坦(candesartan)) ； α拮抗剂和利尿药(例如呋塞米 (furosemide)、节噻嗪(benzthiazide))；11)止血调节剂(例如抗血栓药)、血纤蛋白溶解激活剂和抗血小板药；凝血 酶拮抗剂；Xa因子抑制剂；VIIa因子抑制剂；抗血小板药(例如阿司匹林、氯吡格雷(clopidogrel))；抗凝血药(肝素和低分子量类似物、水蛭素)和华法林(warfarin)；12)抗炎药，例如非甾族抗炎药(例如阿司匹林)和甾族抗炎药(例如可的松)； 和13)防止葡萄糖被肾再吸收的药物(SGLT抑制剂)。本发明还涉及有关上述药剂的药物组合物、组合、医疗用途和该药剂(1型)的治 疗方法。
实施例现在，通过下面的实施例对本发明进行说明，除非另有说明，否则(i)温度以摄氏度(V )表示；在室温或环境温度下，即在18-25°C的温度范围内 并在惰性气体(例如氩气)气氛中进行操作；(ii)溶剂蒸发在高达60 °C的浴温下用旋转蒸发器减压(600_4000Pa ； 4. 5-30mmHg)进行；(iii)色谱法是指硅胶快速色谱法；(iv) 一般而言，反应进程用TLC跟踪，反应时间仅用于说明；(ν)所给出的收率仅用于说明目的，不一定是通过繁复的工艺开发而可获得的收 率；如需要更多原料则可重复制备；(vi)当给出的NMR数据(1H)为主要特征质子的δ值形式时，以相对于四甲基加 硅烷(TMS)的百万分之几(ppm)给出，除非另有说明，否则就用全氘二甲亚砜(DMS0-d6)作 溶剂在300MHz或400MHz (除非另有说明)下进行测定；峰多重性(peak multiplicity)如 下所示s，单峰；d，双峰；dd，双双重峰；dt，双三重峰；dm，双多重峰；t，三重峰，m，多重峰； br,宽峰；(vii)化学符号具有其通常的含义；采用SI单位和符号；(viii)溶剂比以体积体积(ν/ν)项给出；(ix)质谱(MS)操作中采用70电子伏特的电子能，化学电离(Cl)模式，使用直接 暴露探头；其中所述电离通过电子碰撞(EI)、快速原子轰击(FAB)或电喷雾(ESP)实现；给 出了 m/z值；一般说来，仅报告指示母体质量的离子；
(x)下文或在上述方法部分使用下列缩写词
实施例14-「4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡哔基1苯甲酸
18
Et2O
DMF
DCM
THF
DMSO
EtOAc
MTBE
DSC
乙醚
二甲基甲酰胺 二氯甲烷 四氢呋喃 二甲亚砜 乙酸乙酯 甲基叔丁基醚 示差扫描量热法 将2M氢氧化钠水溶液(51. ImL, 103. 32mmol)加入含4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰 基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸甲酯(中间体1) (4. 5g, 10. 33mmol)的甲醇(IOOmL) 中。将混合物在70°C下搅拌1小时，然后冷却至环境温度，减压浓缩后，用水(IOOmL)稀 释。用2M HCl调节反应混合物至pH 3。反应混合物用EtOAc (500mL)萃取后，依次用水 (2xl00mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤后蒸发，得到浅黄色固 体。固体用EtOAc (20mL)洗涤，经过滤收集后，真空干燥，得到4_[4_ (2-金刚烷基氨基甲酰 基)-5_叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸(3. 89g，89% )，为奶油色结晶固体。1H NMR (400. 13MHz, DMS0_d6) δ 1. 19 (9Η, s)，1. 49 (2H, d)，1. 70-1. 96(10H, m)， 2. 09 (2H, d)，3. 98-4. 01 (1H，m)，7. 49-7. 53 (2H, m)，7. 61 (1H, s)，8. 06-8. 09 (2H, m)， 8. 20 (1H, d)，13. 30 (1H, s)m/z (ESI+) (M+H) + = 422熔点308. 8°C (开始)实施例1还可如下制备在20°C下，将氢氧化钠水溶液(2M) (2. 5当量)在5分钟内分批加入含4_[4_(2_金 刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸甲酯(中间体1) (1.0当量)的甲醇 (10体积)搅拌悬浮液(放热20-27°C )中。将所得悬浮液加热至70°C (套管温度)，(间 歇式回流约60-65°C )达1小时(由LCMS确定完成)。使橙色反应混合物冷却至20°C (溶 液保持轻微混浊)，经硅藻土过滤除去少量的固体。然后将滤液倒入法兰瓶(flangeflask) 中，加入水(25体积)。然后，混合物用2M HCl (约800-850ml)调节至pH 3 (变得非常稠)。 然后将水溶液过滤，浅黄色固体用水洗涤，吸干过夜，用乙腈以及最后用1 1乙腈/乙醚 洗涤后，在50°C下真空干燥72小时(周末)，得到4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)_5_叔 丁基-吡唑-1-基]苯甲酸(80% )，为固体。 ι ΠΖ女 9 ./I- 0吐1=^田赌田而&±卜1 ^
19 将含氯化氢4M的二噁烷(100mL，399. 60mmol)加入含4_胼基苯甲酸(15. 2g， 99. 90mmol)的Me0H(200mL)中。将所得悬浮液在90°C下搅拌5小时。在冷却至20°C后， 经过滤收集沉淀，用Et2O(IOOmL)洗涤后，真空干燥，得到氯化2-(4-(甲氧羰基)苯基)胼 (16. 50g，82% )，为奶油色结晶固体。m/z (ESI-) (M-H) - = 165 ；HPLC tE = 1. 12 分钟。1H NMR (400. 13MHz，DMS0-d6) δ 3. 81 (3H，s)，6. 99—7. 02 (2H，m)，7. 86—7. 90 (2H，m)， 8. 98 (1H, s)，10. 47 (3H, s)中间体2还可如下制备在氮气氛下，将氯化氢的甲醇溶液(4M) (4当量，新鲜制备)加入4-胼基苯甲酸(1 当量)的甲醇(12. 6体积)悬浮液中。将混合物在回流下搅拌3小时，然后冷却至低于15°C。经过滤收集固体，用 MTBE(6. 5体积)洗涤后风干，得到产物，为固体。TLC DCM MeOH, 9 1，产物 RfO. 87熔点233. 8-234. 6°C中间体3 =N- (2-金刚烷基)-4，4- 二甲基_3_氧代-戊酰胺 将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂的THF(22.84ml，22.84mmol)溶液的IM溶液加 入THF (25ml)中，在氮气气氛下冷却至_78°C。在5分钟时间内滴加3，3-二甲基-2-丁酮 (2. 287g,22. 84mmol)的THF(25ml)溶液。将所得溶液在氮气氛、_78°C下搅拌15分钟。在 5分钟时间内加入2-异氰酸基金刚烷(通过R. Reck和C. Jochims Chem. Ber. 115(1982)， 第864页的方法由2-金刚烷基胺盐酸盐制备)(3. 68g，20. 76mmol)的THF(20mL)溶液。将 所得溶液在_78°C下搅拌1小时，然后使之加热至20°C达1个多小时。将反应混合物倒入 饱和NH4Cl (150mL)中，用EtOAc (2xl00mL)萃取，有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经 MgSO4干燥，过滤后蒸发，得到黄色油状物。粗产物用快速硅胶色谱法纯化，洗脱梯度0-50% EtOAc/异己烷。将纯的部分蒸干，得到N-(2-金刚烷基)_4，4- 二甲基-3-氧代-戊酰胺 (4. 64g，81% )，为白色固体。1H NMR (400. 13MHz, DMS0_d6) δ 1. 08-1. 09 (9Η, m)，1. 50 (2H, d)，1. 66-1. 89(10H, m)，1. 95-2. 00 (2H, m)，3. 53 (1. 4H, s)，3. 80-3. 94 (1H, m)，5. 30 (0. 3H, s)，7. 77-7. 87 (1H, m)， 14. 43(0. 3H, s) (2 1酮式和烯醇式的混合物) m/z (ESI+) (M+H) + = 278中间体3还可如下制备将氢氧化钠水溶液(3M) (5体积)加入2-金刚烷基胺盐酸盐(1当量)与水(5体 积)的搅拌悬浮液中。将DCM(5体积)加入所得稠的悬浮液中，分离各相。水溶液用DCM(4x5 体积)萃取，使合并的有机物浓缩，得到游离胺，为白色固体。在氮气氛下，将新戊酰基乙酸乙酯(1当量)加入游离胺的二甲苯(6. 5体积)悬 浮液中，将混合物在回流下搅拌6. 5小时。间歇冷却至室温后浓缩至干。残余物依次用甲 苯(3x1体积)和己烷(3x1体积)清洗。将所得固体在己烷中于50°C浸渍5分钟，然后冷 却至室温。将白色固体过滤，用己烷(2体积)洗涤后风干。TLC 己烷EtOAc，1 1，产物 Rf 0.66熔点124. 5-125. 1°C中间体4 (2) -N- (2-金刚烷基)-2- ( 二甲基氨基亚甲基)-4,4- 二甲基_3_氧 代_戊酰胺在氮气氛下，将N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醇(3.02mL，22. 71mmol)加入 N-(2-金刚烷基)-4，4-二甲基-3-氧代-戊酰胺(中间体3) (5. 25g，18. 93mmol)与1，4_ 二 氧杂环己烷(50mL)的搅拌悬浮液中。将所得混合物在100°C下搅拌2小时。将反应混合 物蒸干，将所得浅奶油色固体真空干燥，得到(2)-N-(2-金刚烷基)-2-( 二甲基氨基亚甲 基)-4，4- 二甲基-3-氧代-戊酰胺(5. 83g，93% )01H NMR (400. 13MHz, DMS0_d6) δ 1. 13 (9H, s)，1. 47 (2H, d)，1. 69-1. 83(10H, m)， 2. 03 (2H, d)，2. 92 (6H, s)，3. 90 (1H, d)，7. 24 (1H, s)，7. 94 (1H, d) m/z (ESI+) (M+H) + = 333中间体#4还可如下制备在氮气氛下，将N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醇(1.2当量)加入N-(2-金刚烷 基)-4，4- 二甲基-3-氧代-戊酰胺(中间体3) (1当量)的1，4- 二氧杂环己烷(9. 6体 积)溶液中。将混合物加热回流5小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂后，浅黄色固体直 接用于下一阶段。TLC 己烧EtOAc, 1 1，产物 Rf 0. 94 (杂质Rf 0. 06+0. 66)熔点143. 6-147. 6°C中间体1 :4-「4-(2_金刚烷某M某甲酰某)-5_,叔丁某-吡P半-卜某]苯甲酸甲酯 将4-胼基苯甲酸甲酯盐酸盐(中间体2) (3. 04g，15. OOmmol) —次性加入含 ⑵-N- (2-金刚烷基)-2- ( 二甲基氨基亚甲基)-4，4- 二甲基-3-氧代-戊酰胺(中间体4) (4. 99g, 15mmol)的乙醇(IOOmL)中。加入5滴乙酸后，将所得溶液在80°C下搅拌2小时。 反应混合物经浓缩后，用EtOAc (500mL)稀释，依次用水(200mL)和饱和盐水(200mL)洗涤。 有机层经MgSO4干燥，过滤后蒸发，得到粗产物。粗产物用快速硅胶色谱法纯化，洗脱梯度0-50% EtOAc/异己烷。将纯的部分蒸 干，得到4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸甲酯(4. 66g， 71.3%)，为黄色固体。1H NMR (400. 13MHz, DMS0_d6) δ 1. 19 (9Η, s)，1. 50 (2H, d)，1. 69-1. 95(10H, m)， 2. 09 (2H, d)，3. 91 (3H, s)，3. 99 (1H, d)，7. 53-7. 56 (2H, m)，7. 62 (1H, s)，8. 09-8. 12 (2H, m)， 8. 20 (1H, d) m/z (ESI+) (M+H) + = 436中间体#1还可如下制备在氮气氛下，依次将氯化2-(4-(甲氧羰基)苯基)胼(中间体2) (1当量)和乙酸 (0. 023当量)加入(2Z) -N- (2-金刚烷基)-2- ( 二甲基氨基-亚甲基)_4，4- 二甲基-3-氧 代_戊酰胺(中间体4) (1当量)的甲醇(200体积)溶液中。将混合物在回流下搅拌1. 5小 时，冷却，浓缩至低于3. 5体积，所得悬浮液用乙酸乙酯(96体积)稀释。悬浮液用水(34.4 体积)洗涤得到的溶液用盐水(34. 4体积)洗涤，干燥(MgSO4)后浓缩至干。将粗产物在 MTBE(9体积)中制成浆状物并搅拌15分钟。将浅黄色固体过滤，用MTBE(11.4体积)洗涤 后，在60°C下真空干燥。TLC DCM MeOH, 9 1，产物 RfO. 86 (痕量杂质 RfO. 68)熔点193. 6-194. 5"C。
2权利要求
一种化合物及其药学上可接受的盐，所述化合物是4 [4 (2 金刚烷基氨基甲酰基) 5 叔丁基 吡唑 1 基]苯甲酸。
2.权利要求1的4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸的 晶型。
3.权利要求2的结晶化合物，所述结晶化合物的使用CuKa幅射测量获得的X射线粉末 衍射图在下列2 θ值处具有峰值16.8°和18. 5°。
4.权利要求2的化合物的晶型，所述晶型的使用CuKa幅射测量获得的X射线粉末衍射 图在下列2 θ值处具有峰值16. 8° ,18. 5°和14. 4°。
5.权利要求2的化合物的晶型，所述晶型的使用CuKa幅射测量获得的X射线粉末衍射 图在下列2 θ值处具有峰值16. 8° ,18. 5° ,14. 4° ,13. 9°和19. 8。
6.权利要求2的结晶化合物，所述结晶化合物的使用CuKa幅射获得的X射线衍射图与 图1所显示的基本相同。
7.一种4-[4-(2_金刚烷基氨基甲酰基)-5_叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸的晶型，所 述晶型的熔点约为308. 8°C (开始)。
8.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-7中任一项的化合物以及药学可 接受的稀释剂或载体。
9.用于温血动物例如人的预防性或治疗性治疗方法中的权利要求1-7中任一项的化 合物。
10.用作药物的权利要求1-7中任一项的化合物。
11.权利要求1-7中任一项的化合物在制备用于在温血动物例如人体内产生11β HSDl 抑制作用的药物中的用途。
12. 一种通过给予需要治疗的哺乳动物有效量的权利要求1-7中任一项的化合物来产 生11 β HSDl抑制作用的方法。
13.权利要求12的方法，其中所述11β HSDl抑制作用是治疗2型糖尿病。
14. 一种用于制备权利要求1的化合物的方法，所述方法包括方法a)或b)的任一种a)式(2)酯的水解(2)其中R1为烷基或芳基；或b)将式(3)化合物中的Z转化成羧基 其中ζ为能够转化成羧酸的官能团； 随后，必要或需要时，形成其药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明描述了4-[4-(2-金刚烷基氨基甲酰基)-5-叔丁基-吡唑-1-基]苯甲酸及其药学上可接受的盐和药剂的特定晶型(1型)；以及它们在抑制11βHSD1中的用途、用于制备它们和包含它们的药物组合物的方法。
文档编号C07D231/14GK101909621SQ200880124592
公开日2010年12月8日 申请日期2008年11月5日 优先权日2007年11月6日
发明者A·斯托克, J·S·斯科特, M·帕克, P·R·O·怀塔摩尔 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司