专利名称：一种甘酪二肽的精制方法
技术领域：
本发明属于化工技术领域，具体涉及-一种甘酪二肽的精制方法。
背景技术：
甘酪二肽中文名是甘氨酰-L-酪氮酸，目前制备甘氨酰-L-酪氨酸的方法，较 多采用以L-酪氨酸酯和N-保护的甘氨酸为起始原料进行缩合成肽反应，只是釆 用的缩合剂与脱保护基的方法不同而己。根据检索的文献，生产上比较可行的， 大致可概括为以下三条路线路线一参考文献资料Paul， R.etal.， Journal Organic Chemistry Vol27: 2094 99(1962)，以N， N'-碳酰二咪唑为縮合剂将节氧羰基|「 氨酸和酪氨酸乙酯，缩合成肽，然后水解掉保护基即得甘氨酰-L-酪氨酸。路线 二参考文献资料S.Rajappa， K et al.， Tetrahedron Vol23: 4805 9(1967)，采用 O- (N-苄氧羰基甘氨酰)新戊酰异羟肟酸为活性酯低温F加入酪氨酸乙酯，先 缩合成肽，然后水解掉保护基即得H氛酰-L-酪氨酸。路线三参考专利 EP311057(1988)，以二环己基碳酰亚胺为缩合剂，将N-羟基琥珀酰亚胺和苄氧 羰基甘氨酸制成活性酯，然后与酪氨酸乙酯缩合成肽，继而水解掉保护基即得 甘氨酰-L-酪氨酸。
本发明中甘酪二肽粗品参考以上路线制备。
用以上合成方法制备的甘酪二肽相关杂质较多且单一杂质大于0.5%，很难
直接用于药品注射液的配制，l天l此发明---种简单易行的精制甘酪二肽的方法是
有意义的，且能创造好的经济价值。
发明内容
本发明研究人员经过大量实验研究发现，采用WA-30树脂柱精制甘酪二肽， 过柱时间控制在2小时，得到甘酪二肽含量大于99%，且单一杂质不大于0.5%，此精制工艺不仅收率较高，成本较低，ra且精制过程易于控制，易于丁业化生产。
本发明的目的在于提供一种甘酪二肽的精制方法。
本发明是通过以下技术方案实现的 制备工艺
一、 甘酪二肽粗品生产工艺
300L的反应釜中加入浓氨水，水，碳酸氢铵，在内温35t:左右搅拌，至碳 酸氢铵完全溶解；加入N-氯乙酰-L-酪氨酸和水，然后反应液升温至4(TC左右， 在该温度卜搅拌反应62小时；停止反应，在65i:下，减压蒸去氨水至千，加入 水，再次减压除去水，剩余固休中加入水溶解，室温搅拌慢慢析出大量固体， 加入乙醇，搅拌，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，65。C减压干燥12小时，得甘酪—:肽
二、 甘酪二肽粗品精制工艺
预先装好WA-30树脂柱，并用去离子水洗至中性待用；廿酪二肽粗品溶于 15倍量纯净水，加热至65土5"C搅扑溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制 在1-3小时，取样分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于 99.0%，用5倍量纯净水淋洗，馏出液在75土5。C下，减压蒸去水至干，加入5 倍量水，溶解，室温搅拌慢慢析出大量固体，加入10倍量乙醇搅拌，抽滤，滤 饼用乙醇洗涤，65土5。C减压干燥12土2小时，得甘酪二肽精制品，甘酪二肽纯度 大丁'99%，单一杂质不大丁0.5%。
本发明甘酪二肽粗品的精制工艺中树脂柱还可以用D301树脂柱，D201树 脂柱，D345树脂柱。
本发明甘酪二肽粗品的精制「艺中的倍量均为质量比。
具体实施例方式
实施例1
预先装好WA-30树脂柱，并用去离子水洗至中性待用；甘酪二肽粗品14kg 溶于210L纯净水，加热至65t:搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制 在2小时，取样分析，HPLC面积归 一化法计算馏分中主峰面积含量大于99.0%, 用70L纯净水淋洗，馏出液在75'C下，减压蒸去水至干，加入70L水，溶解， 室温搅拌慢慢析出大量固体，加入140L乙醇搅拌，抽滤，滤饼ffl乙醇洗涤，65°C 减压干燥12小时，得甘酪二肽精制品，甘酪二肽纯度为99.8%。 实施例2
预先装好WA-30树脂柱，并用去离子水洗至中性待用；甘酪二肽粗品l()kg 溶于150L纯净水，加热至6(TC搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制 在1小时，取样分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于99.0%， 用50L纯净水淋洗，馏出液在7()'C下，减压蒸去水至干，加入50L水，溶解， 室温搅拌慢慢析出大量固体，加入UX)L乙醇搅拌，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，6()°C 减压干燥10小时，得甘酪二肽精制品，甘酪—肽纯度为99.1%。 实施例3
预先装好D301树脂柱，并用去离子水洗辛巾性待用；廿酪二肽粗品6kg溶 于90L纯净水，加热至70。C搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制在 1.5小时，取样分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于99.0M， 用30L纯净水淋洗，馏出液在80"C下，减压蒸去水至干，加入30L水，溶解， 室温搅拌慢慢析出大量固体，加入60L乙醇搅拌，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，65土5T〕 减压干燥12土2小时，得甘酪二肽精制品，甘酪二肽纯度为99.3%。 实施例4预先装好D201树脂柱，并用去离于水洗至中性待用；甘酪二肽粗品3kg溶 于45L纯净水，加热至65"C搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制在 1小时，取样分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于99.0。/0， 用15L纯净水淋洗，馏出液在75"C下，减压蒸去水至干，加入15L水，溶解， 室温搅拌慢慢析出大量固体，加入3()L乙醇搅拌，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，65"C〕 减压干燥14小时，得甘酪二肽精制品，tl一酪二肽纯度为99.2%。 实施例5
预先装好D345树脂柱，并用去离子水洗至中性待用；甘酪二肽粗品lkg溶 于15L纯净水，加热至6(TC搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制在 2.5小时，取杼分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于99.0%， 用5L纯净水淋洗，馏出液在80"C下，减压蒸去水至干，加入5L水，溶解，龟 温搅拌慢慢析出大量固体，加入l()L乙醇搅拌，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，6CTC 减压干燥12小时，得甘酪二肽精制品，甘酪二肽纯度为99.5%。
权利要求
1. 一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于用该精制方法所精制的甘酪二肽纯度大于99％，单一杂质不大于0.5％。
2. 如权利要求1所述的一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于精制工艺为如卜 歩骤预先装好WA-30树脂柱，并用去离子水洗至中性待用；甘酪二肽粗品溶于 15倍量纯净水，加热至65土5i:搅拌溶解，冷却，然后过树脂柱，过柱时间控制 在1-3小时，取样分析，HPLC面积归一化法计算馏分中主峰面积含量大于 99.0%,用5倍量纯净水淋洗，馏出液在75土5"C下，减压蒸去水至干，加入5 倍量水，溶解，室温搅拌慢慢析出大量固体，加入10倍量乙醇搅拌，抽滤，滤 饼用乙醇洗涤，65士5。C减压千燥12±2小时，得甘酪二肽精制品，甘酪二肽纯皮 大于99%。
3. 如权利要求2所述的-柱还可以用D301树脂柱
4. 如权利要求2所述的-量均为质量比。
5. 如权利要求2所述的-时间控制在1-3小时。
6. 如权利要求5所述的-时间控制在2小时。一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于精制工艺中树脂 ，D201树脂柱，D345树脂柱。一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于精制工艺中的倍 一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于精制工艺中过柱 一种甘酪二肽的精制方法，其特征在于精制工艺中过柱
全文摘要
本发明公开了一种甘酪二肽的精制方法，本发明研究人员经过大量实验研究发现，采用WA-30树脂柱精制甘酪二肽，过柱时间控制在2小时，得到甘酪二肽纯度大于99％，且单一杂质不大于0.5％；此精制工艺不仅收率较高，成本较低，而且精制过程易于控制，易于工业化生产。
文档编号C07K1/20GK101429227SQ20081023903
公开日2009年5月13日 申请日期2008年12月5日 优先权日2008年12月5日
发明者张典鹏, 漆新国, 阚迎昕, 颜文革 申请人:北京博时安泰科技发展有限公司