专利名称：3-氨基-4-吲哚-n-甲基马来酰亚胺化合物、其制备及应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及氨基取代的吲哚马来酰亚胺类化合物领域，具体说是涉及一种具有预防和 治疗肿瘤和糖尿病并发症等疾病的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物及其制备方法 和用途。
背景技术：
近年来，随着人们生活水平的提高，工业现代化进程加速，化学品在食品、化妆品和 材料等领域广泛使用，以及环境污染的加剧，胃癌、肺癌、白血病和乳腺癌等恶性肿瘤的 发病率呈逐年上升趋势。目前，临床中使用的抗肿瘤药物如环磷酰胺(Cyclophosphamide), 顺铂(Cisplatin)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、去氧氟尿苷(Doxifluridine)、叶酸类抗肿瘤 药如甲胺喋呤(methotrexate)等都存在毒性和缺乏广普抗肿瘤作用等缺点。
近年来，随着肿瘤生物学及相关学科的迅速发展，人们认识到细胞癌变的本质是细胞 信号转导通路的失调导致的细胞无限增殖，随之而来的是抗肿瘤药物的研发和焦点正从传 统细胞毒药转移到针对肿瘤细胞内异常信号系统靶点的特异性新一代抗肿瘤药物。如作用 于表皮生长因子酪氨酸激酶(tyrosine kinase)的药物伊马替尼(Imatinib)、吉非替尼
(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)和苏拉替尼(Sorafenib)等。作用于丝氨酸/苏氨酸的 蛋白激酶C (protein kinase C,PKC)是另一类蛋白激酶家族，是一类Ca 2+ 、磷脂依赖性 的蛋白激酶，在跨膜信号传递过程中起着很重要的作用。现已发现PKC有12个亚型
Newton，A.C.,所o/.Oz謡.1995,270,28495.，正常情况下，PKC处于失活状态，当受到 外界刺激时，PKC被激活。 一系列证据表明，癌症以及糖尿病诱发的微循环病变等疾病的 发生都与PKC的异常表达有关。
以微生物Streptomyces sp.代谢物中星型孢菌素(Staurosporine)为先导化合物进行结 构修饰得到的吲哚马来酰亚胺类化合物是一类新型的蛋白激酶C抑制剂。生物活性研究表 明，该类化合物能抑制PKC活性，具有抗肿瘤等多种生物活性。如化合物Enzastaurin目 前正处于治疗B细胞白血病和非霍奇金病淋巴瘤等的III期临床研究。Jirousek,M.R.; Giling,J.R.;Gonzalea，C.M.; et.al.， / Med C&w.' 1996, 39， 2664; Robertson, M丄; Kahl,B.S.;Vose,J.M.; et.al.， / C7/". 0"co/. 2007, 25, 1741; Tanaka， M.;Sagawa,S.; Hoshi，J.; et. al.，历owg. Med O em. Z战.2006， 16， 5781
近年来，文献报道了一些3-氨基取代的吲哚马来酰亚胺类化合物具有抑制H202诱发的 坏死细胞死亡和抑制GSK-3的活性Tanaka,M.;Sagawa,S.;Hoshi,J.; et. al.历ow^, Md C7 ew,2004, 14， 5171; Tanaka，M.; Sagawa，s.; Hoshi，J.; et. al.A/ed C&w.2006， 16, 5781，但文献报道的这些3-氨基取代的吲哚马来酰亚胺类化合物尚未见其抗肿瘤活性的 报道。 发明内容-
本发明的目的是提供一种3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物、其制备及应用，该 化合物是一类蛋白激酶C抑制剂，可用于制备预防或治疗肿瘤、糖尿病及其并发症等疾病 的药物。
本发明的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其结构通式如下
<formula>formula see original document page 4</formula>
其中，R,和R2为氢、乙基、丙基、异丙基、丁基、苄基、环状的吗啉、四氢吡咯或 哌啶基团，且Ri和R2优选基团均为正丁基。
3-氨基-4-B引哚-N-甲基马来酰亚胺化合物为淡黄色至红色固体。
所述3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物优选为3-二丁胺基-4-(177-吲哚-3)-N-甲
基马来酰亚胺，其系统名称为3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮，
为淡红色结晶，分子式为C21H27N302 ，熔点为197 199°C ，结构式为 CH3
<formula>formula see original document page 4</formula>
本发明的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的制备方法，包括下列步骤 3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、三乙胺存在下，与取代 胺在80 95'C反应1 48小时后，向反应液中加水，用乙酸乙酯提取，有机层用无水硫酸 钠干燥，然后减压蒸去乙酸乙酯，制得3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其中， 3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺与N,N-二甲基甲酰胺的重量体积比为1克:1 50毫升，3-溴-4』引哚-]^-甲基马来酰亚胺与三乙胺的重量体积比为1克:0.1 10毫升，3-溴-4-吲哚-N-甲基 马来酰亚胺与取代胺的摩尔比为1:1 10。
所述的3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺是3-溴-4-(l/Z-吲哚-3)-N-甲基马来酰亚胺，它是 以马来酰亚胺为起始原料，经溴代生成3,4-二溴马来酰亚胺，在硫酸二甲酯作用下进行甲 基化合成3,4-二溴-N-甲基马来酰亚胺，而后在溴乙烷和镁作用下与吲哚反应生成吲哚溴化 镁，与3，4-二溴-N-甲基马来酰亚胺发生取代反应生成3-溴-4-(l/f-吲哚-3)-N-甲基马来酰亚 胺，具体制备方法见文献张海泉,贾红圣,赵圣印.合成化学,2008，16(1):105-106。
所述取代胺是正丙胺、异丙胺、正丁胺、二乙胺、二丁胺、吗啉、哌啶或四氢吡咯。
本发明的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的应用，是制备预防和治疗肿瘤、 糖尿病及其并发症中的药物中的应用。
吲哚马来酰亚胺类化合物具有较强的抗肿瘤作用，但实验中发现该类化合物水溶性较 差。因此，考虑到氨基的引入可以增强吲哚马来酰亚胺类化合物与蛋白激酶C的相互作用， 同时也增加化合物的水溶性，以期增强抗肿瘤活性，合成了本发明所述的3-氨基-4-吲哚马 来酰亚胺类化合物，并研究了在体外对Hela和SMMC 7721细胞的抗肿瘤活性。 本发明的有益效果
本发明所述的化合物在体外对Hela和SMMC7721细胞等具有较强的肿瘤作用，对上 述肿瘤的预防和治疗具有重要作用。
本发明制备方法简单，而且该化合物具有较好的抗肿瘤活性。
图1为3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的化学结构通式。
图2是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的核磁共振氢谱 图3是实施例中3-(17/-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-17/-吡咯-2,5-二酮的质谱图4是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(异丙胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮的核磁共振氢谱图5是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(异丙胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮的质谱图6是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(吗啉基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的核磁共振氢谱图7是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(吗啉基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的质谱图8是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(1-吡咯垸萄-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的核磁共振氢谱
图9是实施例中3-(1//-吲哚-3)-4-(1-吡咯烷基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮的质谱图。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术 人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限
定的范围。
(一)3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的制备
实施例1 3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮
<formula>formula see original document page 6</formula>
0.5 g (1.64mmol) 3-溴-4-(l/f-tl引哚-3)-N-甲基马来酰亚胺、0.36 g (2.8mmoD 二正丁 胺、5 mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF) 、 0.2 g(1.98mmo1)三乙胺，依次加入烧瓶中，于卯~95 °C 下反应10小时，冷却至室温，加入20mL水，用乙酸乙酯(20mLx3)提取，合并有机相， 水洗，无水Na2S04干燥，旋干溶剂后，正己垸和乙酸乙酯(1:1)的混合溶剂重结晶，得 深红色固体0.45g，收率78%。
3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮的性质，如下
本品为淡红色结晶，mp:197~199°C;
IR(KBr):3429， 1699， 1650,1552,1386,745 cm";红外IR光谱中3429 cm"附近为吲哚上 N-H伸縮振动吸收峰，1699和1650 cm"为马来酰亚胺C=0伸縮振动吸收峰，1386 cm" 为甲基C-H面外弯曲振动吸收峰；
'HNMR (400 MHz, CD3COCD3，5 ppm):0.72(m，6H)，1.03(m，4H)， 1.46(m，4H), 3.01(s,3H)， 3.50(m,4H)，7.04(m，lH),7.12(m,lH),7.31(s,lH)，7.42 (m,2H)，10.55(s,lH);化学位移在S在0.72 的多重峰显示为6个氢，为甲基产生的氢信号，化学位移在1.03的多重峰显示为4个氢， 为亚甲基的氢信号，化学位移在1.46的多重峰显示为4个氢，为亚甲基的氢信号，3.01的 单峰显示为3H，为N上甲基的氢信号，化学位移在3.50的多重峰显示4个氢，为与N相 连的亚甲基CH2的氢信号，化学位移在7.04、 7.12、 7.31和7.42的峰总共为5个氢，为吲 哚环上氢信号，化学位移在10.55的单峰为1个氢，为吲哚环N上氢信号。 MS(ESI)m/e [M+H]+354.3, [M+Na]+376.4;元素分析得到C:71.15%,N:12.19%,H:7.738%; C2iH27N302的计算值分别为C:71.36%: N:11.88%,H:7.699%。
0.5g (1.64mmol) 3-溴-4-(l/Z-n引哚-3)-N-甲基马来酰亚胺、0.17 g (2.8 mmol)异丙胺、 5mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)、 0.2 g (1.98 mmol)三乙胺，依次加入带搅拌的烧瓶中， 85'C下反应10小时，冷却至室温，加入20mL水，用乙酸乙酯(20mLx3)提取，合并有 机相，水洗，无水Na2S04干燥，旋干溶剂后，正己垸和乙酸乙酯(1:1)的混合溶剂重结 晶，得深红色固体0.31g,收率67%。
3-(17/-吲哚-3)-4-(异丙胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的性质，如下
本品为淡红色结晶，mp: 203~206'C;
IR(KBr): 3448, 3319,1700， 1647,1615,1549,1385,745 cm";红夕卜IR光谱中3448 cm"附 近为吲哚上N-H伸縮振动吸收峰，1700和1647 cm"为马来酰亚胺C=0伸缩振动吸收峰， 1385 cm—1为甲基C-H面外伸縮振动吸收峰。
NMR (400 MHz, CDC13，3 ppm): 0.99(d，6H), 3.07(s，3H), 3.72(m,lH), 5.04(m，lH)， 7.13(m,lH)， 7.19 (m,2H), 7.39(d,lH), 7.48(d，lH)，8.34 (s，lH);化学位移在S在0.99的二重峰 显示为6个氢，为甲基产生的氢信号，化学位移在3.07的单峰显示为3H，为N上甲基的 氢信号，化学位移在3.72的多重峰显示1个氢，为与N相连的次甲基CH的氢信号，化学 位移在5.04显示为1个氢，为N上氢信号，化学位移在7.13、 7.19、 7.39、和7.48的峰总 共为5个氢，为吲哚环上氢信号，化学位移在8.34的单峰为1H，为吲哚环N上氢信号。 MS(ESI)m/e [M+H]+284.2， [M+Na]+306.1;
元素分析得到C:67.50%, N:14.51%， H:6.083%,C16H17N3O2的计算值分别为C:67.83%， N: 14.83%, H:6.048%。
实施例2 3-(1//-吲哚-3)-4-(异丙胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮
H3
实施例3 3-(1仏吲哚-3)-4-(1-吗啉基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮CH: 山、
0.5 g (1.64mmol) 3-溴-4-(7/7-li引哚-3)-N-甲基马来酰亚胺、0.20 g (2.8mmo1)吗啉、 5mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)、 0.2 g (1.98mmo1)三乙胺，依次加入带搅拌的烧瓶中， 85。C下反应10小时，冷却至室温，加入20mL水，用乙酸乙酯(20mLx3)提取，合并有 机相，水洗，无水Na2S04干燥，旋干溶剂后，正己烷和乙酸乙酯(1:1)的混合溶剂重结 晶，得深红色固体0.44g，收率87%。
3-(1//-吲哚-3)-4-(1-吗啉基)-1-甲基-1//-吡咯-2，5-二酮的性质，如下
本品为浅红色结晶，mp:209~213 °C;
IR(KBr): 3391, 3282,1701,1651,1539， 1452, 1386， 746 cm";红外IR光谱中3391 cm-1附 近为吲哚上N-H伸縮振动吸收峰，1701和1651 cm"为马来酰亚胺C=0伸縮振动吸收峰， 1386 cm—'为甲基C-H面外弯曲振动吸收峰。
!HNMR (400 MHz, CDC13， 3 ppm): 3.09(s，4H)， 3.67(m，7H), 7.18(m，lH)， 7.29(m,lH)， 7.37(s,lH)， 7.44(m,m),7.55(m，lH), 8.38(s，lH);化学位移在S在3.09的单峰显示为4个氢， 为吗啉环亚甲基CH2产生的氢信号，化学位移在3.67的多重峰显示为7H，为N上甲基和 吗啉环上亚甲基的氢信号，化学位移在7.18、 7.29、 7.37、 7.44和7.55各显示为1个氢， 总共为5个氢为吲哚环上氢信号，化学位移在8.38的单峰为1H，为吲哚环N上氢信号。
MS(ESI) m/e:[M++H] 312.3， [M++Na] 334.2;
元素分析得到C:65.36%, N:13.32%, H:5.451%， C17H17N303的计算值分别为C:65.58%, N: 13.49%, H: 5.503%。
实施例4 3-(1//-吲哚-3)-4-(1-吡咯垸基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮
0.5g (1.64mmol) 3-溴-4-(l/f』引哚-3)-N-甲基马来酰亚胺、0.20 g (2.8 mmol)吡咯烷、 5mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)、 0.2 g U.98mmo1)三乙胺，依次加入带搅拌的烧瓶中，
CH
山、
885。C下反应12小时，冷却至室温，加入20mL水，用乙酸乙酯(20 mL")提取，合并有 机相，水洗，无水Na2S04干燥，旋干溶剂后，正己烷和乙酸乙酯(1:1)的混合溶剂重结 晶，得深红色固体0.43g，收率88%。
3-(1//-吲哚-3)-4-(1-吡咯烷基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮的性质，如下
mp:209 212。C;
IR(KBr): 3276,2968,1683,1630,1540,1455,1386, 746 cm";红外IR光谱中3276 cm"附近 为吲哚上N-H伸缩振动吸收峰，1683和1630 cm"为马来酰亚胺C=0伸縮振动吸收峰，1386 cm—1为甲基C-H面外伸縮振动吸收峰
'HNMR(CDC13) S:1.75(m，4H,CH2), 3.06 (s，3H,NCH3),3.55(m,4H,NCH2),7.12(m,2H,Ph-H)， 7.20(m,lH, Ph-H),7.26(s,lH, Ph-H)， 7.35(m，H，Ph-H), 7.46(m,lH，Ph-H)， 8.28(s，lH,NH);化学 位移在S在1.75的多重峰显示为4个氢，为吡咯环亚甲基CH2产生的氢信号，化学位移在 3.06的单峰显示为3H,为N上甲基的氢信号，化学位移在3.55的多重峰显示4个氢，为 吡咯环上与N相连的亚甲基CH2的氢信号，化学位移在7.12、 7.20、 7.26、 7.35和7.46各 显示为1个氢，总共为5个氢，为吲哚环上氢信号，化学位移在8.28的单峰为1H，为B引 哚环N上氢信号。
MS(ESI) m/e [M+H〗+ 296.3, [M+Na〗+318.1;
元素分析得到C:69.04%, N:14.12%, H:5.572%, C17H17N302的计算值为C:69.14%, N: 14.23%, H:5.802%.
(二) 3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的应用
实施例5抗肿瘤活性筛选实验 用MTT法检测了 3-氨基-4-B引哚-N-马来酰亚胺化合物对体外培养人宫颈癌Hela细胞 和肝癌SMMC7721的抑制作用，测定方法和条件如下 筛选方法MTT法
细胞株人宫颈癌Hela细胞株和肝癌SMMC 7721细胞株 操作歩骤
取处于指数生长期生长状态良好的细胞一瓶，加入0.25%胰蛋白酶消化，使贴壁细胞 脱落，制成每毫升含2"04 4><104细胞的悬液，接种于96孔板中，每孔150 pL，置5% C02 培养箱中于37"C培养72 h，每孔加入5 mg/mL MTT [3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二溴苯溴 化四氮唑]溶液IOO ^LDMSO溶解甲臢(formazan)结晶，用微量振荡器混匀后，用酶标
9仪于492 nm为吸收波长，630 nm为参比波长测定光密度，计算化合物对肿瘤细胞生长的 抑制率。
药理研究结果表明，在lxl0—5 mol/L浓度下，化合物3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基) -1//-吡咯-2,5-二酮对宫颈癌Hela细胞和肝癌SMMC 7721细胞有一定的抑制活性，抑制率 分别为28.8%禾卩62.5%,阳性对照药Ro 31-6233分别为33.2%和48.5%。
权利要求
1. 一种3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其特征在于，该化合物的结构通式如下其中，R1和R2为氢、乙基、丙基、异丙基、丁基、苄基、环状的吗啉、四氢吡咯或哌啶基团，该化合物是淡黄色至红色结晶。
2. 根据权利要求l所述的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其特征在于，所述通 式中的Ri和R2均为正丁基。
3. 根据权利要求l所述的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其特征在于，所述3-氣基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物是3-二丁胺基-4-(l/f-吲哚-3)-N-甲基马来酰亚胺，系 统名称为3-(1//-吲哚-3)-4-(二正丁基胺基)-1-甲基-1//-吡咯-2,5-二酮，分子式为C2lH27N302，结构式为 H ，是淡红色结晶，熔点为197 199'C。
4. 3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的制备方法，包括下列步骤3-溴-4』引哚-N-甲基马来酰亚胺在N,N-二甲基甲酰胺、三乙胺存在下，与取代胺在 80 95'C反应1 48小时后，向反应液中加水，用乙酸乙酯提取，有机层用无水硫酸钠干 燥，然后减压蒸去乙酸乙酯，制得3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其中，3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺与N,N-二甲基甲酰胺的重量体积比为1克:1~50毫升，3-溴-4-吲哚 -N-甲基马来酰亚胺与三乙胺的重量体积比为1克:0.卜10毫升，3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰 亚胺与取代胺的摩尔比为1:1~10。
5. 根据权利要求4所述的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在 于，所述的3-溴-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺是3-溴-4-(l/Z-吲哚-3)-N-甲基马来酰亚胺。
6. 根据权利要求4所述的3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在 于，所述取代胺是正丙胺、异丙胺、正丁胺、二乙胺、二丁胺、吗啉、哌啶或四氢吡咯。
7. 3-氨基-4』引哚-N-甲基马来酰亚胺化合物的应用，是制备预防和治疗肿瘤、糖尿病及其 并发症中的药物中的应用。1. 一种3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物，其特征在于，该化合物的结构通式如下:
全文摘要
本发明涉及一种3-氨基-4-吲哚-N-甲基马来酰亚胺化合物、其制备及应用，该化合物的结构通式如右式；制备3-溴-4-引哚-N-甲基马来酰亚胺在N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺存在下，与各种取代胺在80～95℃反应所得；应用在制备预防和治疗肿瘤、糖尿病及其并发症中的药物中的应用。
文档编号C07D403/00GK101475563SQ200810203169
公开日2009年7月8日 申请日期2008年11月21日 优先权日2008年11月21日
发明者卿凤翎, 筠 孙, 张海泉, 赵圣印, 陈志龙 申请人:东华大学