专利名称：：一种查尔霉素化合物及其制备和应用的利记博彩app
技术领域：
：本发明属医药
技术领域：
，具体地说是一种查尔霉素化合物及其制备和应用。
背景技术：
：查耳霉素首次从链霉菌5^eptom少ceyZ^/w/m^分离得到，为16元环大环内酯，其糖苷配基带有2,3反向双键。查耳霉素具有非常强的抑菌活性，可以抑制多种细菌如5ya//7j/的生长(FrohardtRP,PitilloRF,andEhrlichJ.Chalcomycinanditsfermentativeproduction.1962.U.S.patent3,065,137.)。同时，chalcomycin能够抑制HeLa细胞的蛋白合成(GuptaRS，MurrayW，andGuptaR.Crossresistancepatterntowardsanticancerdrugsofahumancarcinomamultidmg-resistantcellline.BrJCancer.1988(58):441-447)。目前已报道多例査耳霉素同系物，它们在C-5和C-19各连有一个中性糖(KimSD，RyooIJ,KimCJ,KimWG，KimJP,KongJY,KoshinoH，UramotoM,andYooID.GERI-155,anewmacrolideantibioticrelatedtochalcomycin.JAntibiot.1996(49):955957;GooYM，LeeYY,andKimBT.Anew16-memberedchalcomycintypemacrolideantibiotic,250-144C.JAntibiot.1997(50):8588;Asolkar脂，MaskeyRP，HelmkeE,andLaatschH.ChalcomycinB，anewmacrolideantibioticfromthemarineisolate5V/'e/to附F^sp.B7064.JAntibiot.2002(55):893898;ChatterjeeS,ReddyGCS，FrancoCMM,RuppRH,GanguliBN,FehlhaberHW，andKoglerRSwalpamycin,anewmacrolideantibioticii.Structureelucidation.JournalofAntibiotics.1987(40):1368-1374)。鉴于查耳霉素类化合物的活性，进一步发现新结构的査耳霉素类化合物具有重要意义。同时，该族化合物的抗肿瘤活性却未见有专利保护。
发明内容本发明目的在于提供一种查尔霉素化合物及其制备和应用。为了实现上述目的，本发明釆用的的技术方案为查尔霉素化合物具有式一、式二或式三的结构式，分别为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式一化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>18式三化合物查尔霉素化合物的制备方法按如下步骤操作1)固体培养将海洋链霉菌M491接种于JT固体培养基，在28-30°C下培养直至长出青灰色的孢子；其中链霉菌M491保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为CGMCCNo.2446;2)摇床培养将上述培养的0.5-1.02带有孢子丝的琼脂块接种到200-250ml豆粉液体培养基，在28-30。C温度以110-130rpm的转速下进行摇床培养4-5天后，待用；3)萃取将上述发酵液用有机溶剂浸提3-4次，合并有机相浓缩得粗提物.纯化将粗提物经硅胶柱层析，以1-3L二氯甲烷，2-4L二氯甲烷/2%(体积比例)甲醇，1-3L二氯甲烷/5y。(体积比例)甲醇，1-3L二氯甲烷/10%(体积比例)甲醇梯度进行洗脱，流速为8-llmL/min,将所得组分3经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带，经葡聚糖层析后，在展开剂为二氯甲烷/0/。甲醇时尺/=0.50-0.52分离得到式一化合物；组分4经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带，再将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7%甲醇进行梯度洗脱，待以展开剂为二氯甲垸/10%甲醇时Af=0.22-0.24处，分离得到式二化合物，在Af=0.25-0.27分离得到式三化合物。所述所述M2+琼脂平板培养基成份为大麦提取物9-11g,酵母粉3-5g,葡萄糖3-5g，琼脂粉12-18g,1L天然海水，pH7.5-8.0;所述豆粉液体培养基为大豆粉19-21g，甘露醇19-21g，1L天然海水，pH7.5-8.0。所述豆粉液体培养基为大豆粉19-21g，甘露醇19-21g，人工海水450-550ml，自来水450-550ml,调整pH为7.6-8.0。查尔霉素化合物的应用所述式一化合物、式二化合物或式三化合物可在制备抗肿瘤、抗菌、或抗病毒药物中。本发明具有如下优点1.本发明所涉及的化合物为新颖结构，迄今为止，尚未发现有专利或文献报道。同时其查尔霉素尚未有抗肿瘤化合物专利保护。2.本发明利用海洋微生物资源，寻找到一种化学结构新颖的化合物，它具有抗肿瘤活性，对多种人体肿瘤细胞有抑制作用；为临床提供了新型药物或先导化合物。图1为本发明式二化合物的HMBC相关图谱。图2为本发明式三化合物的糖酐配基的HMBC相关图谱。图3为本发明式二化合物和式三化合物的糖侧链结构的HMBC效应图。图4为本发明化合物的制备流程图。具体实施方式实施例1查尔霉素化合物具有式一、式二或式三的结构式，分别为式一化合物式一化合物的物理常数及波谱数据white,cryst;OR[a]2D7(-43.5,c=l,EtOH)(-40，EtOH);mp(121-123)(120-121);R产0.55(CHC13/10%MeOH);UV(EtOH)入max(218,319)(240，198);(219,281)(240，170);IR(KBr)v3490,2930，1718,1630,1498,1350,1236，1170,1083，982，8卯，726m1.NMR(CDC13，300MHz):6.66(dd，15.4，10.2Hz,3-H),6.58(m，10，ll-H)，5.82(d,15.4Hz，2-H),5.34(dq，10.9，6.5Hz,15-H),4.58(d,7.5Hz,l"-H),4.22(dd，15.4，10.2Hz，l'陽H),4.19(dd，10.2，3.0Hz,19-HA),3.85(brs，H7D20-ex，1H)，3.78(t，3.0Hz，3"-H),3.66(dd,10.2,3.4Hz，19-HB),3.63(s,3"-OMe),3.57(s,2"-OMe),3.51(m,5"画H),3.45(m,5'隱H),3.42(s，3'-OMe),3.31(m,2",10-H),3.22(m，3'-H)，3.18(m，4"-H),3.16(dd,9.4,1.8Hz,13-H),3.08(dd,9.9,2.6Hz，2"-H)，2.72(m，4-H),2.05(m，4'-HA)，1.88(m,7-H),1.39(s,18-Me),1.38(m,14-H)，1.35(d,6.4Hz，20-Me)，1.28(d，6.4Hz，6"-Me)，1.26(m，4'，6-H),1.23(d，6.2Hz，6'隱Me)，1.21(d，6.3Hz,16-Me)，1.01(d，6.8Hz,17-Me);'3CNMR(CDC13，75.5MHz):165.3(Cl)，120.7(C2)，151.8(C3),41.7(C4)，87.8(C5),34.0(C6),37.0(C7),78.4(C8),200.2(C9),124.8(CIO)，146.5CC11),59.7(C12)，59.0(C13),49.5(C14)，68.9(C15),18.6(C16)，19.2(C17)，27.8(C18),66.9(C19),18.3(C20)，103.2(Cl')，75.0(C2'),80.5(C3'),36.8(C4')，67.7(C5'),20.9(C6')，100.9(Cl"),81.9(C2")，79.6(C3")，72.9(C4")，70.7(C5")，17.8(C6")，56.7(3'0Me),58.7(2'OMe),61.7(3"OMe)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式二化合物(参见图1)式三化合物(参见图2)所述式二化合物和式三化合物的物理常数、核磁共振氢谱数据、核磁共振碳谱数据分别参见表1-3。式二化合物和式三化合物的糖侧链结构由HMBC确定(图3)。表l所述二化合物和式三化合物的物理常数<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2所述式二化合物和式三化合物的'HNMR数据(CDC13，600MHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3所述式二化合物和式三化合物的"CNMR数据(CDC13,150MHz)。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例2制备式一化合物、式二化合物和式三化合物(参见图4):1)样品采集从青岛近海釆集海泥样品，在实验室中利用高氏一号培养基进行梯度10—、10—2，10—3稀释划线培养，纯化得到一株海洋链霉菌M491;其中链霉菌M491保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏编号为CGMCCNo.2446;所述高氏一号培养基为可溶性淀粉20g,硝酸钾lg，磷酸二氢钾O.5g，硫酸镁O.5g，氯化钠O.5g,硫酸亚铁O.01g,重铬酸钾O.1g,琼脂粉18g，天然海水500ml，自来水500ml，调整pH为7.2。2)固体培养将海洋链霉菌M491接种于NT固体培养基，28。C培养3天，直至长出青灰色的孢子；所述M2+固体培养基为大麦提取物10g,酵母粉4g,葡萄糖4g,天然海水500ml,自来水500ml,琼脂粉14g，调整pH为7.4。3)摇床培养从所述M2+固体培养基上挑取菌苔接种到100个1000ml的Erlenmeyer三角瓶中，每个三角瓶中含有已灭菌的250ml豆粉液体培养基，在28。C下回旋式摇床培养，转速为110rpm，4天后，收获发酵液待用；所述豆粉液体培养基为大豆粉20g,甘露醇20g，人工海水500ml，自来水500ml，调整pH为7.8。4)有机溶剂萃取将上述发酵液通过板式过滤器分开菌液与菌泥，分别用乙酸乙酯浸提4次，合并有机溶剂相后采用旋转蒸发仪旋转浓缩蒸干，得到膏状粗提物10g;(5)分离纯化将粗提物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇为梯度洗脱，即2L二氯甲烷，3L二氯甲烷/2%(体积比例)甲醇，2L二氯甲烷/5%(体积比例)甲醇，2L二氯甲烷/10y。(体积比例)甲醇，流速为10ral/min，分别得到组分l，2，.3，4。组分3含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，经葡聚糖(甲醇)层析后，在展开剂为二氯甲烷/10%甲醇，7/^0.51分离得到式一化合物；组分4也含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7%甲醇为洗脱剂，流速为5ml/min,以展开剂为二氯甲烷/10%甲醇时/^=0.23处，分离得到式二化合物，在玎=0.26分离得到式三化合物。实施例2与实施例1不同之处在于1)固体培养将海洋链霉菌M491接种于!T固体培养基，在29C下培养直至长出青灰色的孢子。2)摇床培养将上述培养的0.5，2带有孢子丝的琼脂块接种到200ml豆粉液体培养基，在28。C温度以130rpm的转速下进行摇床培养4-5天后，待用；3)萃取将上述发酵液用有机溶剂浸提4次，合并有机相浓缩得粗提'所述所述M2+琼脂平板培养基成份为大麦提取物9g，酵母粉3g,葡萄糖3g，琼脂粉12g，1L天然海水，pH7.5;所述豆粉液体培养基为大豆粉19g,甘露醇19g，1L天然海水，pH7.5。所述豆粉液体培养基为大豆粉19g,甘露醇19g,人工海水45Oml,自来水450ml，调整pH为7.6。5)分离纯化将粗提物经硅胶柱层析分别得到组分l,2,3，4。组分3含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，经葡聚糖(甲醇)层析后，在展开剂为二氯甲烷/10%甲醇，A/=0.50分离得到式一化合物；组分4也含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7%甲醇为洗脱剂，流速为5ral/min,以展开剂为二氯甲烷/10%甲醇时红=0.22处，分离得到式二化合物，在耵=0.25分离得到式三化合物。实施例3与实施例1不同之处在于1)固体培养将海洋链霉菌M491接种于M"固体培养基，在3(TC下培养直至长出青灰色的孢子。2)摇床培养将上述培养的1.0cn带有孢子丝的琼脂块接种到230ml豆粉液体培养基，在30'C温度以120rpm的转速下进行摇床培养4-5天后，待用；所述所述M2琼脂平板培养基成份为大麦提取物11g，酵母粉5g,葡萄糖5g，琼脂粉18g,1L天然海水，pH8.0;所述豆粉液体培养基为大豆粉21g,甘露醇21g,1L天然海水，pH8.0。所述豆粉液体培养基为大豆粉21g,甘露醇21g，人工海水550ml，自来水550ml，调整pH为8.0。5)分离纯化将粗提物经硅胶柱层析分别得到组分l，2,3，4。组分3含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，经葡聚糖(甲醇)层析后，在展开剂为二氯甲烷/10%甲醇，7/=0.52分离得到式一化合物；组分4也含有一条经浓硫酸/茴香醛显棕黄色的条带，将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7%甲醇为洗脱剂，流速为5ml/min，以展开剂为二氯甲烷/10%甲醇时/厂=0.24处，分离得到式二化合物，在Wf=0.27分离得到式三化合物。实施例4式一化合物、式二化合物和式三化合物的抗肿瘤活性实验抗肿瘤活性实验由德国Oncotest生物公司进行测定，选用人体肿瘤细胞系(H腿anCancerCellLines),包括膀胱癌细胞1218L,T24;宫颈癌细胞498NL,SF268;结肠直肠癌细胞HCT116,HT29;胃癌细胞251L;头颈部肿瘤536L;肺癌细胞1121L，289L，526L，529L，629L，H460;乳腺癌细胞401NL，MCF7,MDA231;黑瘤细胞276L,394NL，462NL，514L,520L;卵巢癌细胞1619L，899L,0VCAR3;胰腺癌细胞1657L，PANC1;前列腺癌细胞22RV1，DU145,LNCAP,PC3M;胸膜瘤1752L;肾癌细胞1781L，393NL,486L，944L;子宫癌细胞1138L实验结果表明:平均IC5。分别为0.015pg/ml(式一化合物)，0.027pg/ml(式二化合物)，0.007pg/ml(式三化合物)，表现出抗肿瘤活性。权利要求1.一种查尔霉素化合物，其特征在于具有式一、式二或式三的结构式，分别为式一化合物式二化合物式三化合物2.—种按权利要求1所述的查尔霉素化合物的制备方法，其特征在于按如下步骤操作1)固体培养将海洋链霉菌M491接种于M2+固体培养基，在28-3(TC下培养直至长出青灰色的孢子；其中链霉菌MM1保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏编号为CGMCCNo.2"6;2)摇床培养将上述培养的Q.5-1.0cm2带有孢子丝的琼脂块接种到200-250ml豆粉液体培养基，在28-35。C温度以110-130rpm的转速下进行摇床培养4-5天后，待用；3)萃取将上述发酵液用有机溶剂浸提3-4次，合并有机相浓缩得粗提物；4)纯化将粗提物经硅胶柱层析，以l-3L二氯甲烷，2-4L二氯甲烷/2%甲醇，1-3L二氯甲烷/5^甲醇，1-3L二氯甲烷/10y。甲醇梯度进行洗脱，流速为8-11mL/min，将所得组分3经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带，经葡聚糖层析后，在展开剂为二氯甲烷/10%甲醇时肛=0.50-0.52分离得到式一化合物；组分4经浓硫酸/茴香醛显色待含棕黄色的条带，再将组分4经硅胶柱层析以二氯甲烷/7%甲醇进行梯度洗脱，待以展开剂为二氯甲垸/10%甲醇时玎=0.22-0.24处，分离得到式二化合物，在if-O.25-0.27分离得到式三化合物。3.按权利要求2所述的查尔霉素化合物的制备方法，其特征在于所述所述M2琼脂平板培养基成份为大麦提取物9-11g，酵母粉3-5g,葡萄糖3-5g,琼脂粉12-18g，1L天然海水，pH7.5-8.0;所述豆粉液体培养基为大豆粉19-21g,甘露醇19-21g，1L天然海水，pH7.5-8.0。4.按权利要求2所述的査尔霉素化合物的制备方法，其特征在于所述豆粉液体培养基为大豆粉19-21g，甘露醇19-21g,人工海水450-550ml，自来水450-550ml,调整pH为7.6-8.0。5.—种按权利要求1所述的査尔霉素化合物的应用，其特征在于所述式一化合物、式二化合物或式三化合物可在制备抗肿瘤、抗菌、或抗病毒药物中。全文摘要本发明属医药
技术领域：
，具体地说是一种查尔霉素及其制备和应用。具体化合物为式一化合物、式二化合物和式三化合物，制备方法为将海洋链霉菌M491，经发酵积累粗提物，利用硅胶层析等多种层析方法分离得到式一化合物、式二化合物和式三化合物，同时所述式一化合物、式二化合物或式三化合物可在制备抗肿瘤、抗菌、或抗病毒药物中。本发明利用海洋微生物资源，寻找到一种化学结构新颖的化合物，它具有抗肿瘤活性，对多种人体肿瘤细胞有抑制作用；为临床提供了新型药物或先导化合物。文档编号C07H17/00GK101624413SQ20081013833公开日2010年1月13日申请日期2008年7月11日优先权日2008年7月11日发明者玲丁,哈特穆特·拉赤,张伟杰,李富超,松秦申请人:中国科学院海洋研究所