专利名称：：调控鲇鱼降解菊酯类农药的转录因子及其编码基因与应用的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及一种转录因子及其编码基因与应用，特别是涉及一种调控鲇鱼降解菊酯类农药的转录因子及其编码基因与应用。
背景技术：
：随着农药使用量的逐步增加，导致环境污染也日趋加重，威胁着人类的健康。进入环境中的农药有相当数量经生物圈物质循环后汇集到水体中，从而降低了水生态环境的质量，影响水生系统中水生生物的多样性和水产品的品质。在被农药污染的水生态环境中，水生生物是最直接的受害者，农药对水生生物的影响可以表现在分子、组织、器官个体以及种群、群落等不同水平上。大多数情况下，水生生物暴露在亚致死浓度农药下，但不论长期或是短期都会受到影响。在水生态环境中，蚤、藻、鱼组成了一条重要的水生食物链，农药对水体的污染势必给蚤、藻、鱼三种水生生物造成毒害。水中食物链是捕食生物与被捕食生物之间一个错综复杂的关系，农药污染可能以某种方式破坏或消除这一食物链中一个重要组成部分，而使生态平衡失调。为了环境和人类的安全，新克隆了由高效氯氰菊酯诱导的调控n相解毒酶基因和抗氧化蛋白基因表达的转录因子SiNrf2。此研究对于降解环境中的农药以及有毒化合物，保护人类赖以生存的环境，具有重要的理论意义和实际价值。67AW^是一个有效的转录激活因子。5Y^n^与ARE顺式作用元件特异性结合，诱导II相解毒酶和抗氧化胁迫蛋白基因的表达，II相解毒酶基因包括苯醌氧化还原酶、谷胱甘肽-S-转移酶和UDP-葡萄糖醛酸基转移酶等，对农药的代谢具有重要的解毒功能。是调控解毒酶和抗氧化胁迫蛋白基因的顺式作用元件。小鼠M^基因的种系突变实验证明，泡，/^是多数11相解毒酶和抗氧化酶的关键调控基因。无M^的突变小鼠的实验分析揭示了解毒酶基因和抗氧化应答基因的诱导表达对预防致癌作用和亲电子试剂、氧化剂引起的毒性是重要的，可以防御各种异源有毒物质的污染，阻塞异源有毒物质诱导的DNA突变，可以通过解毒酶基因的表达减少细胞损伤，将为减少农药污染，保护生态环境开辟新的途径。
发明内容本发明的目的是提供一种转录因子，该转录因子的表达能增加鱼类代谢酶的表达能力。该鱼类代谢酶为n相解毒酶，该n相解毒酶具体为谷胱甘肽-s-转移酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶。该转录因子是与n相解毒酶相关的蛋白，特别是与6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶相关的蛋白。本发明所提供的转录因子，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与代谢菊酯类农药相关的由(a)衍生的蛋白质。本发明的另一个目的是提供一种编码上述解毒相关蛋白的编码基因。本发明所提供的编码上述解毒相关蛋白的编码基因为如下l)、2)或3)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；2)在严格条件下与l)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；3)与l)限定的DNA序列有90。/。以上同源性且编码具有相同功能蛋白的DNA分子。该编码基因，主要受农药(菊酯类农药)、重金属(砷)等异源有毒物质诱导表达，是II相解毒酶和抗氧化蛋白的关键调控基因，调控异源有毒物质(菊酯类农药)的结合反应，使细胞免受破坏。该编码基因是b-Zip类的转录因子CNC家族的新成员本发明的另一个目的是提供一种含有上述任一种编码基因的重组表达载体。其中，重组表达载体具体可为在表达载体pCMVnramp的fcoW/和5k//酶位点间插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重组表达载体pCMVnramp-含有上述任一所述编码基因的转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围。本发明的另一个目的是提供一种培育抗毒性物质的转基因鱼的方法。本发明所提供的培育抗毒性物质的转基因鱼的方法，是将上述任意一种重组表达载体导入鱼的受精卵细胞中，培养得到抗毒性物质转基因鱼。所述抗毒性物质的转基因鱼具体可为抗重金属鱼或农药代谢鱼。其中，所述毒性物质为重金属或农药。所述重金属具体可为砷或镉；所述鱼具体可为鲇鱼。实验结果表明转入重组表达载体pCMVnramp-57Wr/^鲇鱼与转入空载体pCMVnramp鲇鱼相比，其代谢农药的能力显著加强，0.356mg/L高效氯氰菊酯处理转基因鲇鱼比野生型鲇鱼脑、腮、肝和肌肉中6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性分别增加2.543、2.099、3.905、0.86U/g组织。其中肝脏代谢酶活性增加显著。因此本发明的农药代谢转录因子及其编码基因，以及培育农药代谢鱼的方法将对改善水生生物代谢农药具有重要意义，在鱼的育种中有巨大的应用前景。图i为鲇鱼57yiw^基因的表达特征。图2为转入pCMVnramp-577Vr/^转基因鲇鱼组织中6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性测定。图3为出膜3天转入pCMVnramp-5Y7Vr/^的鱼和转入pCMVnramp的鱼照片。具体实施例方式实施例l、鲇鱼cDNA文库的构建以及57iVr/^cDNA克隆，序列分析以0.356mg/L高效氯氰菊酯诱导鲇鱼幼苗15天，根据Promega公司RNAgentsTotalRNAIsolationSystems系统提取鲇鱼总RNA，采用Promega公司PolyATtractmRNAIsolationSystems系统分离m薩。用Stratagene公司的ZAP—cDNAGigaPackIIIcloningkit构建LambdaZapIIphagelibrary。cDNA按1:10比列连接于LambdaZAPII载体，质粒为pBlueScriptII(Stratagene公司)，酶切位点为6"a7/和iW，构建成噬菌体cDNA文库。57yVr/^cDNA克隆使用15cm平板，每个平板上约20,000个噬菌斑。生长4-6小时，噬菌斑大小为lmm左右时取出平板。加入8SM，于4'C放置过夜。将SM吸至50离心管中，再加2SM到平板上，室温轻摇15分钟后移入同一离心管中。4°C，5000rpm离心5分钟，取上清分装1.5离心管，加二甲基亚砜(DMS0)至终浓度0.7%。将噬菌体cDNA文库、XL1-Blue感受态细胞和Exassisthelperphage按1:10:100比例混匀，置入37。C15min，力n3mLLB，置于37。C摇3h，放入65。C水浴20min，离心15min，涂到LBAmp平板，每平板15，00020,000菌斑培养。培养约68小时取出。用尼龙膜铺于菌表面，在膜边缘上做不对称标记。l分钟后，取下尼龙膜，有DNA的一面朝上置于滤纸上干燥10分钟。经变性液、中和液2XSSC漂洗处理。室温干燥30分钟，8(TC烘烤2小时，使DNA固定于膜上，封于塑料袋中备用。用PCR方法扩增小鼠Nrf2的保守片段，以小鼠总RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增引物分别为MNF:5'-GGACAGAGATCTGATTGG-3';MNR:5、-GAGGAGAAGGATCGTTTG-3、。PCR反应体系为<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>PCR反应条件为94°C30秒，56°C45秒，72°C1分钟，33个循环，72°C10分钟。PCR产物的纯化采用冻融法回收。通过随机引物法用a-32P-dCTP标记上述PCR扩增产物作为探针，将探针与菌斑进行原位杂交，筛选获得阳性cDNA克隆。然后又进行二次杂交，获得l个阳性cDNA克隆。从大肠杆菌(Acoh')中提取阳性克隆的质粒DNA，用^7/和K/限制性内切酶消化质粒DNA，确定阳性cDNA克隆片段大小，测序，将测得的序列在Genbank核酸序列数据库中进行同源性比对，比对结果表明杂交得到的阳性克隆是鲇鱼的池^基因，将其命名为57yVr/2。其核苷酸长度为1761bp(核苷酸序列如序列表中序列1所示)，编码587个氨基酸组成的蛋白质(氨基酸序列如序列表中序列2所示)，通过ProteinMol.Wt&AACompositionCalculator(ProMACC)计算，57AW^基因编码的蛋白分子量可能是66.1KD。5YyVr/^基因(序列表中序列1)含有一个典型的转录因子b-Zip类的转录因子CNC家族中所特有Neh结构保守域，由该基因编码的氨基酸序列(序列表中序列2)与小鼠7Vr/^基因编码的氨基酸同源性较高，其中自氮端到碳端第481-520个氨基酸残基是该序列的保守结构域。实施例2、鲇鱼&Wr/^基因的表达特征从经过0.356mg/L高效氯氰菊酯诱导的鲇鱼15天幼苗的血、肝、肾和肌肉中分别提取总RNA。取5ug各组织的总RNA，用组成型表达基因ubiquitin作为内标。577W^基因以NMF:5'-ATGATGGAGATTGAGTGG-3、和NMR:5-GCCACTTTGTTCTTGCCA-3、为引物，ubiquitin基因以UbF:5-CAGATCTTCGTCAAAACCCT-3、和UbR:5-GACTCCTTCTGGATGTTGTA-3'为引物，通过RT-PCR分析5"iiVr/2基因在鲇鱼血、肝、肾和肌肉中的表达特征。结果如图l所示。RT-PCR反应体系10xPCRbuffer5pldNTPMgCl2,AMV反转录酶l^ilRNaseinhibitor1^1AMVTaq酶1^1正向引物l^il反向引物lplRNAl^il水24^1Total50ulRT-PCR反应程序5(TC反转录30分钟，94。C反转录酶失活2分钟。94°C30秒56°C45秒72°C2分钟进入35个循环，72'C延伸10分钟，扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳。Si7Vr/2在鲇鱼组织中表现了组织特异性。^Wr/^在肝和肾中表达量较高，在血中表达量较低，而在肌肉中检测不到，由此，推测57vVr/i"在具有代谢作用和解毒功能的器官中mRNA累积量较高。实施例3、培育转入5YyVr/邀因的鲇鱼及其代谢农药的能力的检测一、培育转入57;Vr/邀因的鲇鱼(一)5"i;Vr/邀因的获得用0.356mg/L高效氯氰菊酯诱导兰州鲇(&7w2T^Zay^力owe/7w's)幼苗15天。提取诱导后的兰州鲇幼苗的总RNA，反转录得到cDNA。设计扩增57^r/2基因的引物，并使引物含有限制性内切酶&oy/和6^/的识别位点，设计的引物序列如下:(&71W^F):5、-ACAAGAATTCGGACAGAGATCTGATTGG-3、和(5"^r/^R)5-AACAjGTCGACpAGGAGAAGGATCGTTTG-3。以上述反转录得到的cDNA为模板，用上述设计的引物进行PC財广增，对该PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果得到1761bp的DNA片段，回收纯化PCR产物，对该PCR产物进行测序，测序结果表明，得到的PCR产物具有序列表序列1的核苷酸序列。该核苷酸序列编码序列表中序列2的&Wr/2蛋白。(二)构建含有67/fr/邀因的重组表达载体pCMVnramp-^TVr/^用限制性内切酶^co^/和5k7/进行酶切步骤(一)获得的PCR产物；将pCMVnra即质粒表达载体(Promega)用限制性内切酶^boj/和^J/进行酶切；将酶切后的577Vr/邀因插入到表达载体pCMVnramp的Aco//和6^2/酶切位点，得到重组表达载体pCMVnramp-57yVr/么(三)重组表达载体pCMVnramp-5"iWr/i的转化采用显微注射法进行鲇鱼转化。兰州鲇(5V7wy/sj朋z力we/^A)来自宁夏水产研究所繁殖实验基地，肌肉注射激素，用LHRH-A人工催产。采集高质量成熟卵子和精子，干法受精获得大量鲇鱼受精卵，加水激活后取上层优质浮卵于10-14"C条件下培养，取1-2细胞期的胚胎用于显微注射。显微注射DNA溶液的配制用限制性内切酶&7/将重组表达载体pCMVnramp-57#r/2线性化，并将其溶解于Tris-HC1(pH:7.6)溶液中，使其终浓度为100ng/^L，再将其用0.02Mm滤器过滤除菌，得到的溶液即为显微注射DNA溶液。采用Nikon公司的拉针仪和磨针仪，制成针尖约为4-9Mm注射针，针尖要求尖锐，能够刺穿受精卵膜，并用Nikon公司的显微注射仪将转基因表达载体射入鱼单细胞期受精卵动物极细胞质内。每卵注射50pL上述显微注射DNA溶液(浓度为50ng/uL)。筛选出产生绿色荧光的转基因胚胎，检测&7Vr/i基因在体内的整合和表达，证实&Wr/邀因能够在兰州鲇胚胎内超表达。将显微注射受精卵置于培养皿中，用Danieau，s液培养(1.74mol/LNaCl，21画1/LKC1，12画1/LMgS04，18mmol/LCaCl2，150醒ol/LHEPES，pH:7.6)，每5小时换培养液。孵化后转入无菌的暴气自来水中培养。得到转入重组表达载体pCMVnramp-5"iWr/2的仔鱼，仔鱼孵化3天后开始饲喂。按照上述方法，将空载体pCMVnramp用限制性内切酶5"a2/线性化后，转入鱼中，培育得到转入空载体pCMVnramp的仔鱼，作为对照。出膜3天的转入pCMVnramp-5^7VW^的仔鱼和转入空载体pCMVnramp的仔鱼如图3所示。二、转入重组表达载体pCMVnramp-5Y7Vr/^鲇鱼的农药代谢特征检测取转入重组表达载体pCMVnramp-577^n^的鲇鱼苗和转入空载体pCMVnramp的鲇鱼苗，其体长均5cm，体重均45g。饵料为水蚯蚓。饲养鱼苗采用过滤自来水，水质参数pH:7.3±0.27，碱度186.65±22.4mg/L，Cr<13mg/L，K+、Na+<24.3mg/L,Ca2+〈29.5mg/L，P<0.01mg/L，H2S、Hg、As未检出。水温2226。C。实验用水族箱规格为200cmX100cmX75cm，整体并联lkw罗磁鼓风机增氧设备一套。每一水族箱配置日生外置式CY-165水质过滤器一台。实验前14d，将鱼苗投放到水族箱以适应环境。取4只水族箱，分别加入1200L水，分别加入高效氯氰菊酯至终浓度为0.356mg/L。向其中的2只水族箱分别放入20尾上述转入重组表达载体pCMVnramp-5^7Vr/^的鱼苗，另外2只水族箱分别放入20尾上述转入空载体pCMVnramp的鱼苗。每24h换一次含有0.356mg/L高效氯氰菊酯的水。在培养第7d、14d分别各采集5尾转入重组表达载体pCMVnramp-577Vr/^和转入空载体pCMVnra卿的鱼的脑、鳃、肝脏、肌肉组织样品用于测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性。酶的提取提取酶的过程在4"C进行。取出鲇鱼脑、腮、肝和肌肉，得到鱼组织样品，用0.6y。盐水冲洗并迅速称重研磨，将组织放在Tris-HCl(O.lmol/L，pH7.5)缓冲液中(包括0.25mol/L蔗糖)制成10%匀浆液。将匀浆液离心，700X《离心15min。将上清液移入新离心管并离心，12,OOOXrpm离心20min，取上清液，测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性。6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性测定6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性用介质来测量，包括IOOmmol/LTris-HClbuffer(pH7.5)，7mmol/LMgCl2，0.4mmol/LNADP+和lmmol/L葡萄糖-6-磷酸盐，反应混合液体积3ml，空白对照中没有底物，以空白管调零，然后放在340nm检测。乳酸脱氢酶介质包括100ramol/LTris-HC1(pH7.5)，5画1/L丙酮酸盐和0.15咖ol/LNADH，反应混合液体积3ml，空白对照中没有底物，以空白管调零，测其0D34。。反应管加入底物后立即测定0D34。。组织中酶活力(U/g组织)=(对照Aw—x稀释倍数一待测AMwx稀释倍数)/g表1相同浓度的各待测样品在相同条件下测得6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶活性结果(单位U/g组织，unitXgwettissuemass—1)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果如表1和图2所示被高效氯氰菊酯染毒转入重组表达载体pCMVnramp-5Y7Vr/^鲇鱼和转入空载体pCMVnra即鲇鱼脑、鳃、肝脏、肌肉都表现为酶活性的变化，规律是肝脏>脑>鳃〉肌肉。转入重组表达载体pCMVnramp-5Y7Vr/^鲇鱼比转入空载体pCMVnramp鲇鱼脑、鳃、肝脏、肌肉组织中6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性增高，其中肝脏比脑、鳃、肌肉组织中6-磷酸葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性高。转基因鲇鱼代谢农药次序为肝脏〉脑〉鳃〉肌肉。图2中，A表示0.356mg/L高效氯氰菊酯处理7天兰州鲇鱼的酶活性测定结果，B表示0.356mg/L高效氯氰菊酯处理14天兰州鲇鱼的酶活性测定结果。图2中，每个组织的两个柱状图中，左侧柱状图为转入重组表达载体pCMVnramp-SiNrf2的鱼，右侧柱状图为转入pCMVnramp的鱼。序列表〈160>2<210>1<211>1761<212〉靈<213〉鲇属兰州鲇(572wras2朋劲owe/j^'s)<400〉1atgstgg卿ttgagttgcctaaagtgcaccc犯gtc犯ca_ggatatagatctgattgat60atcctgtggaggcaggatattgacctaggagC3ggC卿g3ggtgttcgacttaagctac1208ggtgC3gCtgcagcggcagaaggagctgggaggcagcag180atagtgagggagcagg卿aggcacttcttgcccagctacagcttg3cg3gg卿Ctgg3240gagtttgtgcctcggctcacgcctaccaacei3cax:gttg3CgC8ggCt犯cactgtgcct300gctg3gatc3cacagaatgttgatttcacgg3卿g犯tgg3gatgccatgtcatttgac360gagtgcatgcaactgctggcagagacgtttcctctagtgga_gcc3gcagtggagcatgct420cctccttgtctggatccctccattcctixctgca_ca_ga_taacagccagctcatgatgcct480ggaga_aatacccatgcttacccagaatcccttgatgccaggacccatggacc3ae1cctgg540atggatctccaacactgcctgaacattcaggagatcctgg3t3tgtCElggELt3Cgta^3C600ax:ax:ccc3gcctgccaatgtctcggagtccagtatctgcctaaattaagt660gatgtcactactggcactga3g3ca_tgtgctctcccgagttc3tgaacacgt3Cg3tggg720gcttacagcaatgttaatcagatgagcctg肪eiaccccagagataaacEiaaagctttgaa780cceigacgaattctgcgacatattctacccagatttggaggccaaagtgaacagtgcatcg840cttccttgtg犯ggaggaaagscagatgggcagctggatgagcttccagatgttcctttg900ctaaaacccatgga_cctgc3tagcctgtctcctggagactttagcacagaaaaagctgaa960gacattgctgaatttccagattcggattccggtttatcccttgatgccagtCCg朋33tg1020agctctcctgaaaagtccctgcatggtgatggctctgctggattc8gtgactcagacatg1080g3tg卿tgg柳gtggtcctggtagcatggattctggttacgcagagatgtttcccctg1140cttttccagagtgatggcaatcaacagtcttttCt3g3g3aatccagcttteictgcg3ca1200caagaaaagaatgttaaaca￡icca￡Laga_tggagg3ggc3gaggc朋gtgggC3ttcgeieig1260gcacccttcagC卿g朋3gcgcttagaggcccggctctcgcgtgacgag1320gagccatgcagatcccattcactgtggacctgatc3tc朋cctgccagtg1380gatgscttta3cg8gatga_tggccaagcax:cagttaaacgaggcacagctcgcactggtg1440cgtgacattcgccggcgtggcaagaacaaggtagcagcgcaaaactgccgcaagcgcaag1500atgg6Lga^ceitcateiggtctggsgteicgsgctggactccctcaaggaggagaaggatcgt1560ttgatgaaggaaacagcagc3gtctaasgga_g￡itgaagca_gcsgctca_gc1620tcgctgtatcttgaggtgttcagcatgctg3Cgg3tg3gCagggaaagccctactcccct1680aacgactactcccttcagcagacatcagacggcagtgtcttccttgtccctcgcgttaaa1740aag3ctcttgctaagagtaeic1761<210>2<211〉587〈212>PRT〈213〉鲇属兰州鲇(577w27As7朋z/o〃朋w's)<400〉2MetMetGlulieGluLeuProLysValHisProSerGinGinAsplie151015AspLeulieAsplieLeuTrpArgGinAsplieAspLeuGlyAlaGly202530ArgGluValPheAspLeuSerTyrArgGinLysLysValGinLeuGin354045ArgGinLysGluLeuGluGluGluLysArgGinGinlieValArgGlu505560GinGluLysAlaLeuLeuAlaGinLeuGinLeuAspGluGluThrGly65707580GluPheValProArgLeuThrProThrAsnAsnThrLeuThrGinAla859095AsnThrValProAlaGlulieThrGinAsnValAspPheThrGluGlu100105110AsnGlyAspAlaMetSerPheAspGluCysMetGinLeuLeuAlaGlu115120125ThrPheProLeuValGluProAlaValGluHisAlaProProCysLeu130135140AspProSerlieProSerCysThrAspAsnSerGinLeuMetMetPro145150155160GlyGlulieProMetLeuThrGinAsnProLeuMetProGlyProMet165170175AspGinThrTrpMetAspLeuGinHisCysLeuAsnlieGinGlulie180185190LeuAspMetSerGlyTyrValAsnThrProGinProAlaAsnValSer195200205GluSerAsnTyrSerGinTyrLeuProLysLeuSerAspValThrThr210215220GlyThrGluAspMetCysSerProGluPheMetAsnThrTyrAspGly225230235240AlaTyrSerAsnValAsnGinMetSerLeuLysThrProGlulieAsn245250255LysSerPheGluProAspGluPheCysAspliePheTyrProAspLeu260265270GluAlaLysValAsnSerAlaSerLeuProCysGluGlyGlyLysThr275280285AspGlyGinLeuAspGluLeuProAspValProLeuLeuLysProMet290295300AspLeuHisSerLeuSerProGlyAspPheSerThrGluLysAlaGlu305310315320AsplieAlaGluPheProAspSerAspSerGlyLeuSerLeuAspAla325330335SerProLysMetSerSerProGluLysSerLeuHisGlyAspGlySer340345350AlaGlyPheSerAspSerAspMetAspGluMetGluSerGlyProGly355360365SerMetAspSerGlyTyrAlaGluMetPhePro'LeuLeuPheGinSer370375380AspGlyAsnGinGinSerPheLeuGluLysSerSerPheThrAlaThr385390395400GinGluLysAsnValLysGinProLysMetGluGluAlaGluAlaSer405410415GlyHisSerLysAlaProPheThrLysAspLysGinArgLysArgLeu420425楊GluAlaArgLeuSerArgAspGluGluArgAlaArgAlaMetGinlie435440445ProPheThrValAspLeulielieAsnLeuProValAspAspPheAsn450455460GluMetMetAlaLysHisGinLeuAsnGluAlaGinLeuAlaLeuVal465470475480ArgAsplieArgArgArgGlyLysAsnLysValAlaAlaGinAsnCys485490495ArgLysArgLysMetGluAsnlielieGlyLeuGluTyrGluLeuAsp500505510SerLeuLysGluGluLysAspArgLeuMetLysGluLysSerLysAsn515520525SerSerSerLeuLysGluMetLysGinGinLeuSerSerLeuTyrLeu530535540GluValPheSerMetLeuThrAspGluGinGlyLysProTyrSerPro545550555560AsnAspTyrSerLeuGinGinThrSerAspGlySerValPheLeuVal565570575ProArgValLysLysThrLeuAlaLysSerAsn58058权利要求1、一种蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与解毒相关的由(a)衍生的蛋白质。2、权利要求l所述蛋白的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述编码基因为如下l)、2)或3)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；2)在严格条件下与l)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；3)与1)限定的DNA序列有90%以上同源性且编码具有相同功能蛋白的DNA分子。4、含有权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体。5、根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体为在表达载体pCMVnramp的^co7/和/酶位点间插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重组表达载体pCMVnramp-5Y;Vr/么6、含有权利要求2或3所述编码基因的转基因细胞系或重组菌。7、一种培育抗毒性物质的转基因鱼的方法，是将权利要求4或5所述的重组表达载体导入鱼的受精卵细胞中，培养得到抗毒性物质转基因鱼。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述抗毒性物质的转基因鱼为抗重金属鱼或农药代谢鱼。9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述重金属为砷；所述农药为菊酯类农药。10、根据权利要求7、8或9所述的方法，其特征在于所述转基因鱼为鲇鱼。全文摘要本发明公开了一种调控农药代谢相关的转录因子及其编码基因与应用。该调控农药代谢转录因子，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与调控农药代谢相关的由(a)衍生的蛋白质。因此本发明的调控农药代谢相关蛋白及其编码基因，以及培育代谢农药转基因鱼的方法对培育降解异源有毒物质水生生物品种中的应用具有重要意义，对保护人类赖以生存的环境具有重要的理论意义和实际价值，将为减少污染，保护生态环境开辟新的途径。文档编号C07K14/435GK101186640SQ20071017842公开日2008年5月28日申请日期2007年11月30日优先权日2007年11月30日发明者侯士聪,侯玉霞,吴旭东,奇张,麻冬梅,龚玉梅申请人:宁夏回族自治区水产研究所;中国农业大学