用作抗肿瘤剂的21-脱氧麦克菌素类似物的利记博彩app

专利名称：：用作抗肿瘤剂的21-脱氧麦克菌素类似物的利记博彩app用作抗肿瘤剂的21-脱氧麦克菌素类似物
背景技术：
：90kDa热休克蛋白(Hsp90)是参与蛋白质折叠及装配的丰富分子伴倡，它们中的许多参与信号转导途径(综述见Neckers，2002;Sreedhar等，2004a;Wegele等，2004及其中的参考文献)。迄今接近50种的这些所谓客户蛋白已经被鉴定并且包括类固醇受体、非受体酪氨酸激酶例如src家族、依赖细胞周期蛋白的激酶例如cdk4和cdk6、嚢性纤维化跨膜调节物(cystictransmembraneregulator)、氧化氮合酶及其它等(Donze和Picard，1999;McLaughlin等，2002;Chiosis等，2004;Wegele等，2004;http:〃www.picard.ch/downloadsZHsp90interactors.pdf)。此夕卜,Hsp90在应激应答和保护细胞抗突变作用中发挥重要作用(Bagatell和Whitesell，2004;Chiosis等，2004)。Hsp90的功能是复杂的并且它参与动态多酶复合体的形成(Bohen，1998;Liu等,1999;Young等，2001;Takahashi等，2003;Sreedhar等，2004;Wegele等，2004)。Hsp90是抑制剂的乾(Fang等，1998;Liu等，1999;Blagosklonny，2002;Neckers,2003;Takahashi等，2003;Beliakoff和Whitesdl，2004;Wegele等，2004)，导致客户蛋白降解、细胞周期调节异常/或正态化(normalisation)及凋亡。最近，已经鉴定Hsp卯作为肿瘤侵入的重要细胞外中介体(Eustace等，2004)。Hsp卯被确定为用于癌症疗法的新的主要治疗性靶，这在有关Hsp90功能的透彻和详细的研究(Blagosklonny等,1996;Neckers，2002;Workman和Kaye，2002;Beliakoff和Whitesell,2004;Harris等，2004;Jez等，2003;Lee等，2004)以及开发高通量篩选试验法(Carreras等，2003;Rowlands等，2004)中得到反映。Hsp90抑制剂包括化合物类别如安莎霉素类、大环内酯类、嘌呤类、吡唑类、香豆素抗生素及其它物质(综述见Bagatell和Whitesell，2004;Chiosis等，2004及其中的参考文献)。苯型安莎霉素类是以长度不同的与芳环结构两个侧面中的任何一个侧面连接的脂族环为特征的一大类化学结构。天然存在的安莎霉素类包括:麦克菌素和18，21-二氢麦克菌素(分别也称作麦克菌素I和麦克菌素Il)(l和2;Tanida等，1980)、格尔德霉素(3;DeBoer等，1970;DeBoer和Dietz，1976;WO03/106653及其中的参考文献)和除莠霉素家族(4、5、6，Omura等，1979，Iwai等，1980，和Shibata等，1986a，WO03/106653及其中的参考文献)。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage9</formula>18，21-二氢麦克菌素(麦克菌素11)，2安莎霉素类最初因其抗菌及抗病毒活性而鉴定，然而近来它们作为抗癌药的潜在用途已经变得日益令人感兴趣(Beliakoff和Whitesell,2004)。众多Hsp卯抑制剂目前正在临床试验中进行评估(Csermely和Soti，2003;Workman,2003)。尤其，格尔德霉素具有纳摩尔级的效能以及对异常蛋白激酶依赖性肿瘤细胞的明显特异性(Chiosis等，2003;Workman,2003)。已经证实用Hsp90抑制剂的治疗增强了对因辐射所致肿瘤细胞死亡的诱导，并且也已经证实通过将Hsp90抑制剂与细胞毒性剂组合所致增加的细胞杀伤能力(例如乳癌、慢性髓样白血病和非小细胞肺癌)(Neckers，2002;Beliakoff和Whitesell，2004)。抗血管生成活性的潜能也令人感兴趣Hsp90客户蛋白HIF-la在实体瘤进展中具有重要作用(Hur等，2002;Workman和Kaye，2002;Kaur等，2004)。Hsp90抑制剂也作为免疫抑制剂发挥作用并且参与抑制Hsp90后的数个类型肺瘤细胞的补体诱导性裂解(Sreedhar等，2004)。Hsp90抑制剂作为有效抗痴疾药物的用途也已经讨论(Kumar等，2003)。此外，已经显示格尔德霉素干扰复杂的糖基化哺乳动物朊蛋白PrPc的形成(Winklhofer等，2003)。如上所述，安莎霉素类作为有效抗癌和抗B细胞恶性肿瘤的化合物令人感兴趣，然而目前可获得的安莎霉素类表现出差的药理学或药学特性，例如它们显示差的水溶性、差的代谢稳定性、差的生物利用率或差的制剂能力(Goetz等，2003;Workman2003;Chiosis2004)。因其强烈肝毒性，除莠霉素A和格尔德霉素均被确定为临床试验的不佳候选者(综述Workman,2003)并且格尔德霉素因肝毒性而从I期临床试验中撤下(Supko等，1995，WO03/106653)。格尔德霉素从吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)的培养滤液中分离并显示强烈的体外(invitro)抗原虫活性和弱的抗细菌和抗真菌活性。在1994年，证实格尔德霉素与Hsp90结合(WhiteselI等，1994)。克隆了用于格尔德霉素的生物合成基因簇并测序(AUen和Ritchie,1994;Rascher等，2003;WO03/106653)。该DNA序列可在NCBI登录号AY179507下获得。最近描述了分离衍生自吸水链霉菌二重霉素亚种(S.hygroscopicussubsp.duamyceticus)JCM4427的基因工程格尔德霉素生产菌林和分离4，5-二氢-7-0-去氨基曱酰基-7-羟基格尔德霉素和4，5-二氢-7-0-去氨基甲酰基-7-羟基-17-0-去甲基格尔德霉素(Hong等，2004)。通过喂送格尔德霉素至除莠霉素产生性菌林吸水链霉菌AM-3672,分离到化合物15-羟基格尔德霉素、三环的格尔德霉素类似物KOSN-1633和格尔德審素曱酯(Hii等，2004)。两种化合物17-甲酰基-17-去甲氧基-18-0-21-0-二氢格尔德霉素和17-羟甲基-17-去甲氧基格尔德霉素从吸水链霉菌K279-78中分离。吸水链霉菌K279-78是含有粘粒pKOS279-78的吸7JC链霉菌NRRL3602，其中粘粒pKOS279-78具有包含来自除莠霉素产生性菌抹吸水链霉菌AM-3672中多个基因的44kbp插入物(Hu等，2004)。已经在格尔德霉素生物合成簇的聚酮化合物合酶模块的四个模块(module)中进行酰基转移酶(AT)结构域的置换(Patd等，2004)。在模块l、4和5中实施AT置换，产生充分加工的类似物14-去曱基-格尔德霉素、8-去甲基-格尔德霉素和6-去曱氧基-格尔德霉素以及不充分加工的4，5-二氢-6-去甲氧基-格尔德霉素。置换AT模块7导致产生三种2-去甲基化合物KOSN1619、KOSN1558及KOSN1559,其中之一(KOSN1559)即格尔德霉素的2-去曱基-4，5-二氢-17-去曱氧基-21-脱氧衍生物以比格尔德霉素高4倍的结合亲和力，并且以比17-AAG高8倍的结合亲和力与Hsp卯结合。然而，这没有在使用SKBR3的ICso测定的改善中反映出来。另一种类似物，名为KOS-1806的新的非苯醌型格尔德霉素具有单酚结构(Rascher等，2005)。没有给出KOS-1806的活性数据。在1979年，安莎霉素抗生素-除莠霉素A从吸7JC链霉菌菌株第AM-3672号的发酵肉汤中分离并因其有效除草活性而得名。抗肿瘤活性通过使用感染罗氏肉瘤病毒(RSV)温度敏感突变体的大鼠肾细胞系以篩选使这些细胞的转化形态逆转的药物而建立(综述见Uehara，2003)。推测除莠霉素A因主要通过与Hsp90伴侣蛋白结合而发挥作用，不过也对直接结合至保守半胱氨酸残基并随后使激酶失活进行了讨论(Uehara，2003)。已经分离了化学衍生物，并且在苯醌核的C19处具有改变的取代基的化合物和在安莎链(ansachain)中卣代的化合物显示比除莠霉素A更小的毒性和更高的抗肿瘤活性(Omura等，1984;Shibata等，1986b)。在WO03/106653和最近的论文中(Rascher等，2005)确定了除莠霉素生物合成基因簇的序列。因其抗真菌活性和抗原虫活性而被鉴定的安莎霉素化合物麦克菌素(l)和18，21-二氩麦克菌素(2)(C-14919E-l和C-14919E-1)从诺卡氏菌(Nocardiasp.)第C-14919号(珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种(Actinosynnemapretiosumsubsp.pretiosum)ATCC31280)的培养上清液中分离(Tanida等，1980;Muroi等，1980;Muroi等，1981;US4,315,989和US4,187,292)。18,21-二氢麦克菌素以含有芳香核的二氢醌形式为特征。显示麦克菌素和18，21-二氢麦克菌素均具有相似抗菌活性及对癌细胞系如鼠白血病P388细胞系的相似抗肿瘤活性(Ono等，1982)。逆转录酶活性和末端脱氧核苷酸转移酶活性不受麦克菌素抑制(Ono等，1982)。已经在文献中报道了麦克菌素的Hsp90抑制功能(Bohen，1998;Liu等，1999)。在专利US4,421,687和US4,512,975中描述了麦克菌素和18，21-二氢麦克菌素在添加至微生物培养肉汤后被转化成在某个或某些位置上带羟基而非甲氧基的化合物。在篩选种类繁多的土壤微生物期间，鉴定了来自属于链霉菌属的生产菌林的化合物TAN画420A至E(7-ll，EP0110710)。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage12</formula>在2000年，描述了从链霉菌S6699的细胞培养物中分离格尔德霉素相关的非苯醌型安莎霉素代谢物利布拉霉素(rebla"in)和它在治疗类风湿性关节炎中的潜在治疗价值(Stead等，2000)。与化学不相关的苯醌型安莎霉素类明显不同的又一种Hsp90抑制剂是根赤壳素(单孢菌素)，其最初因其抗真菌活性而从真菌波诺顿单孢菌(Monosporiumbonorden)中发现(综述见Uehara，2003)并且发现其结构与分离自放射丛赤壳菌(Nectriaradicicola)的14元大环内酯相同。除其抗真菌、抗菌、抗原虫和细胞毒活性外，随后确定根赤壳素作为Hsp90分子伴侣蛋白的抑制剂(综述见Uehara，2003;Schulte等，1999)。还已经描述了根赤壳素(Hur等，2002)及其半合成衍生物(Kurebayashi等，2001)的抗血管生成活性。最近的兴趣集中在作为新一代安莎霉素抗癌化合物的格尔德霉素17-氨基衍生物(Bagatell和Whitesell，2004)，例如17-(烯丙氨基)-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG，12)(Hostein等，2001;Neckers，2002;NimmanapaUi等，2003;Vasilevskaya等，2003;Smith-Jones等，2004)和17-去甲氧基-17-^二曱氨基乙氨基-格尔德霉素(17~01\1入&13)(￡801^11等，2002;Jez等，2003)上。更为最近，格尔德霉素在17位置上衍生化以产生17-格尔德霉素酰胺、氨基曱酸酯、脲和17-芳基格尔德霉素(LeBrazidec等，2003)。超过60种17-烷氨基-17-去曱氧基格尔德霉素类似物的文库已经报道并测试了它们对Hsp90的亲和力和水溶性(Tian等，2004)。减少格尔德霉素毒性的其它方法是通过连接至肿瘤靶向性单克隆抗体而选择性地耙向并送递活性格尔德霉素化合物入恶性细胞(Mandler等，2000)。格尔德霉素，3尽管这些衍生物中的许多表现减少的肝毒性，然而它们仍具有极为有限的水溶性。例如17-AAG需要使用增溶载体(例如Cremophore,DMSO-卵磷脂)，其本身可能在一些患者中产生副作用(Hu等，2004)。大部分安莎霉素类Hsp90抑制剂具有共同的结构部分苯醌，它是能够毫不费力地与亲核体如蛋白质、谷胱甘肽等形成共价键的迈克尔受体。苯醌部分还与二氬醌发生氧化还原平衡，在此期间形成氧自由基，这产生进一步的非特异性毒性(Dikalov等，2002)。例如用格尔德霉素治疗能导致诱导的超氧化物产生(Sreedhar等，2004a)。因此，仍需要鉴定可以用于治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤的不含苯醌部分的安莎霉素新衍生物，优选地此类安莎霉素具有改善的水溶性、改善的药学特性和减少的副作用镨。本发明公开了通过对亲本生产菌林进行基因工程而产生的新安莎霉素类似物。特别地，本发明公开了与目前可获得的安莎霉素类相比，总体上具有改善的药学特性的21-脱氧麦克菌素类似物；它们尤其在一个或多个如下特性方面显示改善毒性、与亲核体如谷胱甘肽的缀合作用、水溶性、代谢稳定性、生物利用率和制剂能力。优选地，21-脱氧麦克菌素类似物显示改善的毒性和/或水溶性。发明概述本发明的发明人已经作出巨大努力以克隆并阐明负责生物合成麦克菌素的基因簇。借助这种认识，负责产生苯醌部分的基因特别地受到靶向，例如通过整合至mbcM、定向缺失麦克菌素簇中包括全部或部分mbcM基因的区域，任选地随后插入基因，或使MbcM丧失功能的其它方法例如化学抑制、定点诱变或例如通过UV使细胞诱变，以便产生无苯醌部分的新衍生物。任选地，可以实施对负责麦克菌素的后PKS(post-PKS)修饰的其它基因的定向失活或缺失。另外，这些基因中的一些基因，但不是mbcM，可以再导入至细胞内。对后PKS基因的任选性靶向可以通过多种机理进行，例如通过整合、定向缺失包括麦克菌素簇中全部或一些后PKS基因的区域，任选地随后插入基因，或使后PKS基因或它们编码的酶丧失功能的其它方法例如化学抑制、定点诱变或例如通过使用uv辐射使细胞诱变。作为结果，本发明提供了21-脱氧麦克菌素类似物、用于制备这些化合物的方法和用于这些化合物在医学中或作为中间体在产生其它化合物中使用的方法。因此，在第一方面，本发明提供了麦克菌素的类似物，其缺少通常在C21位置处存在的氧原子，在麦克菌素中，此氧原子作为酮基存在，在18,21-二氢麦克菌素中，此氧原子作为羟基存在。在更具体的方面，本发明提供了以下式(I)的21-脱氧麦克菌素类似物或其可药用盐其中Ri代表H、OH或OCBbR2代表H或CH3R3和R4均代表H或它们共同代表键(即C4至C5是双键)。Rs代表H或-C(0)-NH221-脱氧麦克菌素类似物在本文中也称作"本发明的化合物"。此类术语在本文中可互换地使用。以上结构显示代表性的互变异构体并且本发明包括式(I)化合物的全部互变异构体，其中当显示烯醇化合物时包括酮化合物，并且反之亦然。本发明包括由如上所示的结构(I)定义的化合物的全部立体异构体。在又一个方面，本发明提供了21-脱氧麦克菌素类似物如式(1)化合物或其可药用盐作为药物的用途。定义冠词"一个"和"一种"在本文中用来指一个或用来指多于一个(即至少一个)的冠词语法对象。例如，"一种类似物"意指一种类似物或多于一种类似物。如本文中所用，术语"类似物"指与另一种化学化合物在结构上相似但是在组成上略微不同的化学化合物(如一个原子由另一个原子替换，或者存在或缺少特定官能团)。如本文中所用，术语"同源物(homologue)"指基因的同源物或由本文中公开的基因所编码蛋白质的同源物，其中所述的基因来自源于不同麦克菌素产生性菌林的另外的麦克菌素生物合成簇，或指来自另外的安莎霉素生物合成基因簇例如来自格尔德霉素、除莠霉素或利布拉霉素(reblastatin)基因簇的同源物。此类同源物编码执行如所述基因或蛋白质在合成麦克菌素或相关安莎霉素聚酮化合物中那样的相同功能或本身可以执行所述相同功能的蛋白质。优选地，此类同源物与本文中公开的特定基因(表3，作为所述蔟内所有基因中的一个序列的SEQIDNO:17，从中可以推导特定基因的序列)具有至少40%序列同一性、优选至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%序列同一性。同一性百分数可以使用本领域技术人员已知的任何程序，如可在NCBI网址上获得的BLASTn或BLASTp进行计算。如本文中所用，术语"癌"指细胞在皮肤或身体器官例如但不限于乳房、前列腺、肺、肾脏、胰脏、脑、胃或肠中良性或恶性的新生长。癌总是浸润毗邻组织并扩散(转移)至远处的器官如抵达骨、肝脏、肺或脑。如本文中所用，术语"癌"包括转移性肿瘤细胞类型，如但不限于黑素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横紋肌肉瘤、肥大细胞瘤和组织癌类型，如但不限于结肠直肠癌、前列腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌和卵巢癌。如本文中所用，术语"B细胞恶性肿瘤"包括一组疾病，包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。它们是血液和血液形成器官的肿瘤性疾病。它们造成骨髓和免疫系统机能障碍，这使宿主高度易发生感染和出血。如本文中所用，术语"生物利用率"指药物或其它物质在施用后在生物学活性部位处被吸收或变得可用的程度或速率。该特性取决于多种因素，包括化合物的溶解度、在肠道内的吸收速率、蛋白质结合的程度和代谢等。本文中描述了本领域技术人员熟悉的对于生物利用率的多种试验(也见Egorin等(2002))。术语"水溶性"如本申请中所用指在水介质例如pH7.3的磷酸盐緩冲盐水(PBS)中的溶解度。对于水溶性的试验在下文如"水溶性测定法"的实施例中给出。如本文中所用，术语"后PKS基因"指对于聚酮化合物的后聚酮化合物合酶修饰所需要的基因。例如但不限于单加氧酶、O-甲基转移酶和氨基曱酰基转移酶。具体而言，在麦克菌素系统中，这些修饰基因包括mbcM、mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450。本发明化合物如式(I)化合物的可药用盐包括从可药用的无机酸或有机酸或碱中形成的常规盐以及季铵酸加成盐。更具体的合适酸盐实例包括氢氯酸、氢溴酸、硫酸、礴酸、硝酸、高氯酸、反丁二烯酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯曱酸、水杨酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟萘曱酸、氢碘酸、苹果酸、硬脂酸、鞣酸等。其它酸如草酸，尽管本身不是可药用的，但是可以用于制备在得到本发明化合物及其可药用盐中用作中间体的盐。更具体的合适碱盐的实例包括包括钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N'-二千基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-曱基葡糖胺和普鲁卡因盐。本文以后谈及本发明的化合物时包括式(I)化合物和它们的可药用盐。如本文中所用，术语"18，21-二氢麦克菌素"和"麦克菌素II"(麦克菌素的二氢醌形式)可交换地使用。附图简述图l:代表麦克菌素的生物合成，显示第一个推定的无酶中间体、前麦克菌素(pre-macbecin)和对麦克菌素的后PKS加工作用。该图中的PKS加工步骤排列不意图代表事件的顺序。以下缩写用于簇内的特定基因ALO-AHBA加载结构域(loadingdomain);ACP-酰基载体蛋白；KS-卩-酮酰基合酶；AT-酰基转移酶；DH-脱水酶；ER-烯酰还原酶；KR-卩-图2:描述对前麦克菌素的后PKS加工以产生麦克菌素的部位。图3:产生基因工程菌抹BIOT-3806的图解代表，在所述基因工程菌林中质粒pLSS308通过同源重组而整合入染色体，导致mbcM基因破坏。图4:gdmM(SEQIDNO:l)和riforfl9(SEQIDNO:2)的序列比对。简并性寡聚物的结合区用下划线标出。图5:gdmM(SEQIDNO:l)、mbcM片段(SEQIDNO:3，奇迹束丝放线菌(A.mirum)和mbcM基因(SEQIDNO:4，珍贵橙色束丝放线菌(A.pretiosum)的序列比对。简并性寡聚物的结合区用下划线标出。图6:A:通过翻译gdmM产生的GdmM(SEQIDNO:5)的蛋白质序列，B:通过翻译riforfl9产生的Riforfl9(SEQIDNO:6)的蛋白质序列；这显示所述蛋白质序列间的相似性。图7:在实施例4中所述的构建mbcM的符合读框的缺失的图解代表。图8:A-显示PCR产物PCRwv308的序列，SEQIDNO:20，B-显示PCR产物PCRwv309的序列，SEQIDNO:21。图9:A:显示因实施例4中所述的符合读框地缺失mbcM中502个氨基酸而产生的DNA序列(SEQIDNO:26和27)，关键1-21bp编码负责3-氨基-5-羟基苯甲酸生物合成的磷酸酶的3'端，136-68bp编码mbcM缺失蛋白，161-141bp编码mbcF的3'端。B:显示蛋白质的氨基酸序列(SEQIDNO:28)。该蛋白质序列从图9A中所示的互补链产生。图10:表示产生珍贵橙色束丝放线菌菌林的图解，在所述的菌林中先缺失mbcM，然后符合读框地缺失了mbcP、mbcP450、mbcMTl和mbcMT2基因。图11:扩增的PCR产物l+2a的序列(SEQIDNO:31)图12:扩增的PCR产物3b+4的序列(SEQIDNO:34)图13:显示0-80nM化合物14与0-3jig/ml丝裂霉素C的体外组合对癌细胞系DU145生长的影响。图14:显示0-160nM化合物14与O-lOOjig/ml环己基氯乙基亚硝基脲(CCNU)的体外组合对癌细胞系DU145生长的影响。图15:显示0-160nM化合物14与0-100fig/ml异环磷酰胺(ifosfamid)的体外组合对癌细胞系DU145生长的影响。图16:显示0-160nM化合物14与O-lOjig/ml米托蒽醌的体外组合对癌细胞系DU145生长的影响。图17:显示0-160nM化合物14与O-ljig/ml长春地辛的体外组合对癌细胞系DU145生长的影响。发明描述本发明提供了如上所述的21-脱氧麦克菌素类似物，用于制备这些化合物的方法、在医学中使用这些化合物的方法和这些化合物用作中间体或模板用于进一步半合成性衍生化或通过生物转化方法进行衍生化的方法。优选地，Ri代表H或OH。在本发明的一个实施方案中，Ri代表H。在本发明的另一个实施方案中，！^代表OH。优选地，R2代表H。优选地，R3和R4均代表H。优选地，Rs代表-C(0)-NH2。在本发明的一个优选实施方案中，Ri代表H，R2代表H，R3和R4均代表H并且R5代表-C(0)-NH2。在本发明的另一个优选实施方案中，Ri代表OH，R2代表H,议3和R4均代表H并且R5代表-C(0)-NH2。非氢侧链相对于安莎环的优选立体化学如以下结构(15)中和在以下图1和2中显示(也就是说优选的立体化学遵循麦克菌素的立体化学)。本发明也提供了包含21-脱氧麦克菌素类似物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。本发明也提供了21-脱氧麦克菌素类似物用作底物用于通过生物转化或通过合成化学进行进一步修饰的用途。处于或已经处于临床试验中的一些现有安莎霉素Hsp90抑制剂如格尔德霉素和17-AAG具有差的药学特性、差的水溶性和差的生物利用率。本发明提供了具有改善的特性如水溶性的新型21-脱氧麦克菌素类似物。本领域技术人员将能够毫不费力地使用标准方法确定本发明的给定化合物的水溶性。代表性的方法在本文的实施例中显示。在一个方面，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在制造药物中的用途。在又一个实施方案中，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在制备用于治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤的药物中的用途。在又一个实施方案中，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在制备用于治疗痴疾、真菌感染、中枢神经系统疾病、血管发生依赖性疾病、自身免疫性疾病的药物中的用途和/或作为对癌症的预防性预处理(pretreatment)的用途。在另一方面，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在医学中的用途。在又一个实施方案中，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤中的用途。在又一个实施方案中，本发明提供21-脱氧麦克菌素类似物在制备用于治疗疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病和神经变性疾病、血管发生依赖性疾病、自身免疫性疾病的药物中的用途和/或作为对癌症预防性预处理的用途。在又一个实施方案中，本发明提供治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤的方法，所述的方法包括对需要其的患者施用治疗有效量的21-脱氧麦克菌素类似物。在又一个实施方案中，本发明提供治疗疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病和神经变性疾病、血管发生依赖性疾病、自身免疫性疾病和/或对癌预防性预处理的方法，所述的方法包括对需要其的患者施用治疗有效量的21-脱氧麦克菌素类似物。如上所述，本发明的化合物可以预期用于治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤。本发明的化合物并且尤其那些可以对Hsp90具有好的选择性和/或好的毒理学特性和/或好的药物代谢动力学的本发明化合物也可以有效地治疗其它适应症，例如但不限于痦疾、真菌感染、中枢神经系统疾病和神经变性疾病、血管发生依赖性疾病、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎或作为对癌症的预防性预处理。中枢神经系统疾病和神经变性疾病包括但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、朊蛋白病、脊髓和延髓肌肉萎缩症(SBMA)和肌萎缩性侧索硬化(ALS)。血管发生依赖性疾病包括但不限于年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病和多种其它眼病、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化、I型糖尿病、系统性红斑狼疮和牛皮瘅。"患者"包括人和其它动物(尤其哺乳动物)受试者，优选人受试者。因此，本发明的21-脱氧麦克菌素类似物的方法和用途在人医学和兽医学，优选人医学中有用。本发明的前述化合物或其制剂可以通过常规方法施用，例如但不限于它们可以经肠胃外(包括静脉内施用)、经口、局部(包括口腔、舌下或经皮肤)、通过医学装置(例如支架)、通过吸入或经注射(皮下或肌内)施用。治疗可以由单次剂量或经过一个时间段的多次剂量组成。尽管有可能单独施用本发明的化合物，然而优选地提供本发明化合物以及一种或多种可接受载体作为药学制剂。因此，这里提供了包含本发明的化合物以及一种或多种可药用稀释剂或载体的药物组合物。稀释剂或载体就与本发明化合物相容而言必须是"可接受的"并且对其受者没有害处。合适载体的实例在下文更详细地描述。本发明的化合物可以单独地或与其它治疗药组合地施用。共施用两种(或更多种)药物可以允许显著更低地使用各种药物的剂量，因而减少所见到的副作用。还可能允许疾病如癌对现有疗法的作用再敏感化，其中疾病对所述现有疗法已经变得耐受。还提供了包含本发明化合物和其它治疗药以及一种或多种可药用稀释剂或载体的药物组合物。在又一个方面，本发明提供了本发明的化合物与第二药物例如用于治疗癌症或B细胞恶性肿瘤的第二药物如细胞毒性剂或细胞生长抑制剂在联合疗法中的用途。在一个实施方案中，本发明的化合物与另一种治疗药例如用于治疗癌症或B细胞恶性肿瘤的治疗药如细胞毒性剂或细胞生长抑制剂共施用。示例性的其它药剂包括细胞毒性剂如烷化剂和有丝分裂抑制剂(包括拓朴异构酶II抑制剂和微管蛋白抑制剂)。另外的示例性其它药剂包括DNA结合剂、抗代谢药和细胞生长抑制剂如蛋白激酶抑制剂和酪氨酸激酶受体阻滞剂。合适的药剂包括但不限于氨曱蝶呤、亚叶酸(Leucovorin)、泼尼松(prenisone)、博来霉素、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇(paclitaxel)、多西4也赛(docetaxel)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblasthie)、长春瑞滨(vinorelbine)、阿霉素(亚德里亚霉素)、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、醋酸曱地孕酮、阿那曲唑(anastrozole)、戈舍瑞林(goserelin)、抗HER2单克隆抗体(例如曲妥珠单抗(trastuzumab)，商标名HerceptinTM)、卡培他滨(capecitabine)、盐酸雷洛昔芬、EGFR抑制剂(例如吉非替尼(gefitinib)，商标名lressa、埃罗替尼(erlotinib)，商标名TarcevaTM、西妥昔单抗(cetuximab),商标名ErbituxTM)、VEGF抑制剂(例如贝伐单抗(bortezomib),商标名AvastinTM)、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米(bortezomib)，商标名VelcadeTM)或伊马替尼(imatinib)，商标名Glivec⑧。其它合适的药剂包括但不限于常规化疗药如顺鉑(cisplatin)、阿糖胞苷、环己基氯乙基亚硝基脲、吉西他滨、异环磷酰胺(ifosfamid)、亚叶酸、丝裂霉素、米托蒽醌(mitoxantone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、包括紫杉酚在内的紫杉烷类和长春地辛(vindesine);激素疗法；单克隆抗体疗法；蛋白激酶抑制剂如达沙替尼(dasatinib)、拉帕替尼(lapatinib);组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂如伏立诺他(vorinostat);血管发生抑制剂如舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、来那度胺(lenalidomide)和mTOR抑制剂如坦西莫司(temsirolimus)。另夕卜，本发明的化合物可以与其它疗法(包括但不限于》文射疗法或手术)组合施用。制剂可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域的任何众知方法制备。此类方法包括使有效成分(本发明的化合物)与构成一种或多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常，制剂通过使有效成分与液体载体或精细分散的固体载体或这两者均一和紧密地结合，并且随后根据需要使产物成型而制备。本发明的化合物通常经口地或通过任何肠胃外途径以包含有效成分的药学制剂形式，4壬选地以无毒的有机或无机酸或碱、加成盐的形式，以可药用的剂型进行施用。取决于待治疗的病症和患者，以及施用途径，该组合物可以以变动的剂量施用。例如，本发明的化合物可以经口地、口含地或舌下地以可含有调p木剂或着色剂的片剂、胶嚢剂、胚珠制剂、酏剂、溶液剂或混悬剂形式施用，用于立即、延迟或受控释放应用。此类片剂可以含有赋形剂如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸4丐、磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉)、淀粉羟乙酸钠、联曱羧纤维素钠和某些复杂硅酸盐，和颗粒化粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基曱基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，可以包括润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石。相似类型的固体组合物也可以作为填充剂应用于明胶胶嚢中。在这个方面的优选赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、奶糖或高分子量聚乙二醇。对于水混悬剂和/或酏剂，本发明的化合物可以与多种甜味剂或增味剂、着色物质或染料、与乳化剂和/或悬浮剂和与稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油以及其组合进行合并。片剂可以通过压缩或模制，任选地连同一种或多种辅助成分而产生。压片剂可以通过在合适的机器中压缩处于自由流动形式(如粉末或颗粒)下的有效成分而制备，其中所述有效成分任选地与粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟丙基曱基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如淀粉羟乙酸钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧曱基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂混合。模制片剂可以通过在合适的机器中模压以惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物而制备。片剂可以任选地包衣或刻痕并且可以如此进行配制，使用例如旨在提供所需释放特性的变动比例的羟丙基曱基纤维素而使得片剂的有效成分緩慢释放或受控释放。适于经口施用的本发明制剂可以作为不连续的单元如胶嚢剂、扁嚢剂或片剂(每个单元含有预定量的有效成分)；作为散剂或颗粒剂；作为在水质液体或非水质液体中的溶液剂或混悬剂或作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂而存在。有效成分还可以作为大丸剂、煎膏剂或糊剂而存在。适于局部施用于口中的制剂包括在调味基材(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍树胶)中包含有效成分的锭剂；在惰性基材如明胶及甘油或者蔗糖及阿拉伯胶包含有效成分的软锭剂；和在合适液体载体内包含有效成分的漱口剂。应当理解除了以上具体提到的成分之外，本发明的制剂可以包括与所讨论的制剂类型有关的本领域内常用的其它药剂，例如，适于经口施用的那些制剂可以包括增味剂。适应于局部施用的药物组合物可以配制为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、浸渍敷料、喷雾剂、气雾剂或油剂、透皮装置、撒粉剂等。这些组合物可以经常规方法制备，含有活性剂。因此，它们还可以包含相容性常规载体和辅料，如防腐剂、辅助药物渗透的溶剂、乳膏剂或软膏剂中的软化剂以及用于洗剂的乙醇或油醇。此类载体可以占组合物的约1%至多到约98%。更通常地，它们将形成组合物的至多到约80%。仅作为说明，乳骨剂或软膏剂通过如此方式制备，即足量的亲水性材料与足量的水(含有重量约5-10%的化合物)混合以产生具有所需稠度的乳膏剂或软膏剂。适应于透皮施用的药物组合物可以作为分立的贴剂而存在，其中所述的贴剂意图保持与受者表皮的紧密接触延长的时间段。例如，活性剂可以通过离子电渗疗法自贴剂中送递出来。对于应用于外部组织，例如口和皮肤，组合物优选地作为局部用软膏剂或乳膏剂施加。当配制在软膏剂中时，活性剂可以随石蜡或水混溶性软膏剂基质一起应用。另夕卜，活性剂可以随水包油乳膏剂基质或油包水基质配制在乳膏剂中。对于肠胃外施用，流体单位剂型使用有效成分和无菌载体进行制备，其中所述的载体例如是但不限于水、醇、多元醇、甘油和植物油，优选是水。取决于所用的载体和浓度，有效成分可以悬浮或溶解于载体中。在制备溶液剂中，有效成分可以溶解在注射用水中并且在装填至合适的小瓶或安瓿前过滤消毒并密封。有利地，药物如局麻药、防腐剂和緩冲剂可以溶解于载体中。为增强稳定性，组合物可以在装填至小瓶后冷冻并且将水在真空下除去。干燥的冻干粉末随后密封于小瓶内并且可以提供附带的注射用水小瓶以便在用前重建液体。肠胃外混悬剂以如溶液剂那样的基本相同方式制备，除了有效成分悬浮而不非溶解在栽体中并且消毒不能通过过滤进行。有效成分可以在悬浮于无菌载体中之前通过暴露于环氧乙烷得到消毒。有利地，可以在组合物中包括表面活性剂或湿润剂以促进有效成分均匀分布。本发明的化合物也可以使用本领域已知的医学装置施用。例如，在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以用无针头的皮下注射装置，如在U.S.5,399,163;U.S.5,383,851;U.S.5,312,335;U.S.5,064,413;U.S.4,941,880;U.S.4，7卯，824或U.S.4,596,556中公开的装置而施用。用于本发明中的众所周知的植入物和计量单元(module)的实例包括US4，487，603,其公开了用于以受控速率分配药物的可植入性微量输注泵；US4,486,194，其公开了用于施用药物穿过皮肤的治疗装置；US4，447，233，其公开了用于以精确输注速率送递药物的药物输送泵；US4,447,224，其公开了用于连续性药物送递的流量可变的可植入输注装置；US4，439，196，其公开了具有多腔室容器的渗透性药物送递系统；以及US4,475,196，其公开了渗透性药物送递系统。众多的其它装置如植入物、送递系统和计量单元是本领域技术人员已知的。本发明化合物的待施用剂量将根据特定化合物、所涉及疾病、受试者和疾病性质及严重性以及受试者的身体状况，和选择的施用途径而变化。适合的剂量可以毫不费力地由本领域技术人员确定。组合物可以含有0.1%重量、优选5-60%、更优选10-30%重量的本发明化合物，这取决于施用的方法。本领域技术人员会认识到本发明化合物的最佳量和单个剂量的间隔期将由正在治疗的疾病的性质和程度、施用的形式、途径和部位和正在治疗的具体受试者的年龄和条件决定，并且内科医生将最终确定待使用的合适剂量。这个剂量可以根据需要经常地重复使用。如果出现副作用，该剂量的量和/或频率可以按照正常临床惯例加以改变或降低。在又一个方面，本发明提供用于产生21-脱氧麦克菌素类似物的方法。可以认为麦克菌素以两个阶段生物合成。在第一阶段，核心PKS基因通过反复装配2-碳单位而装配出大环内酯核，该大环内酯核随后环化以形成第一个无酶的中间体"前麦克菌素"，见图1。在第二阶段，一系列"后PKS"剪裁酶(tailoringenzymes)(命J:i口P450单力口氧酵、甲基转寿多酵、FAD依赖性加氧酶和氨基曱酰基转移酶)发挥作用以添加多种额外的基团至前麦克菌素模板，产生最终的母体化合物结构，见图2。21-脱氧麦克菌素类似物可以按照类似方式^皮生物合成。这种生物合成产生可以通过合适生产菌林的基因工程进行利用以产生新化合物。具体地，本发明提供产生21-脱氧麦克菌素类似物的方法，所述方法包括a)提供在适宜条件下培养时产生麦克菌素或其类似物的第一宿主菌林；b)缺失或失活一个或多个后PKS基因，其中那些后PKS基因的至少一个基因是mbcM或其同源物；c)在适合产生21-脱氧麦克菌素类似物的条件下培养所述经修饰的宿主菌林；和d)任选地分离所产生的化合物。在步骤(a)中，"麦克菌素或其类似物"意指麦克菌素或由R^Rs的定义包含的麦克菌素的那些类似物。在步骤(b)中，将选择性地合适地缺失或失活一个或多个后PKS基因，其中那些后PKS基因的至少一个基因是mbcM或其同源物。在又一个实施方案中，步骤b)包含通过将DNA整合至mbcM基因(或其同源物)而失活mbcM(或其同源物)以至于没有产生功能性mbcM蛋白。在备选的实施方案中，步骤b)包括进行mbcM基因或其同源物的定向缺失。在又一个实施方案中，mbcM或其同源物由定点诱变失活。在又一个实施方案中，步骤a)的宿主菌株受到诱变处理并且选择其中一个或多个后PKS酶丧失功能的经l务饰菌林，其中这些后PKS酶中的至少一种酶是MbcM。本发明还包含对控制mbcM或其同源物的表达的调节子突变。本领域技术人员知道使调节子缺失或失活可以产生如使基因缺失或失活那样相同的结果。在本发明的具体实施方案中，选择性缺失或失活后PKS基因的方法包括(i)基于(例如来自格尔德霉素PKS生物合成簇和/或来自利福霉素生物合成簇的)目的基因的同源物设计简并性寡聚物，并且通过在PCR反应中使用这些引物而分离来自合适的麦克菌素产生性菌林的目的基因(例如mbcM)的内部片段；(ii)通过同源重组而整合含有所述片段的质粒至相同或不同的麦克菌素产生性菌林中，这导致破坏所靶向的基因(例如mbcM或其同源物)；(iii)在适于产生麦克菌素类似物即21-脱氧麦克菌素类似物的条件下培养如此产生的菌林。在具体的实施方案中，步骤(i)中的麦克菌素产生性菌林是奇迹束丝放线菌(Actinosynnemamirum)。在又一个具体实施方案中，步骤(ii)中的麦克菌素产生性菌林是珍贵橙色束丝放线菌。本领域^L术人员将认识到等同菌林可以使用相对如上所述方法为备选的方法而实现，例如■简并性寡聚物可以用来扩增来自其它麦克菌素产生性菌林例如但不限于珍贵橙色束丝放线菌或奇迹束丝放线菌中的目的基因，"可以设计成功地扩增麦克菌素生产者的mcbM基因或其同源物中合适区域的不同简并性寡聚物。"珍贵橙色束丝放线菌菌株inbcM基因的序列可以用来产生对珍贵橙色束丝放线菌mbcM基因为特异性的寡聚物，并且内部片段随后可以从任何麦克菌素产生性菌林例如珍贵橙色束丝放线菌或奇迹束丝放线菌(A.mirum)中扩增出来。"珍贵橙色束丝放线菌菌林的mbcM基因的序列可以随同源基因的序列一起用来产生针对珍贵橙色束丝放线菌mbcM基因的简并性寡聚物，并且内部片段随后可以从任何麦克菌素产生性菌林例如珍贵橙色束丝放线菌或奇迹束丝放线菌中扩增出来。在本发明的其它方面，除mbcM之外，也可以缺失或失活额外的后PKS基因。图2显示后PKS基因在麦克菌素生物合成簇中的活性。本领域技术人员因此能够确定需要缺失或失活哪些额外的后PKS基因以便获得会产生目的化合物的菌林。在本发明的其它方面，其中一个或多个后PKS基因(包括mbcM)已经如上所述缺失或失活的基因工程菌林已经再导入相同的一个或多个例如来自备选的麦克菌素产生性菌林，或甚至来自相同菌林的后PKS基因(不包:括mbcM)或其同源物。因此才艮据本发明的又一个方面，提供了用于产生21-脱氧麦克菌素类似物的方法，所述方法包括a)提供在适宜条件下培养时产生麦克菌素的第一宿主菌林；b)缺失或失活一个或多个后PKS基因，其中后PKS基因中的至少一个基因是mbcM或其同源物；c)再导入不包括mbcM的一些或所有的后PKS基因；d)在适合产生21-脱氧麦克菌素类似物的条件下培养所述经修饰的宿主菌林；和e)任选地分离所产生的化合物。在又一个实施方案中，其中一个或多个后PKS基因(包括mbcM)已经缺失或失活的基因工程菌抹由一个或多个来自异源PKS簇的后PKS基因弥补，其中所述的异源PKS簇包括但不限于指导利福霉素、安丝菌素、格尔德霉素或除莠霉素的生物合成的簇。特别地，宿主菌抹可以是基于其中mbcM已经缺失或失活的麦克菌素产生性菌林的基因工程菌抹。备选地，该宿主菌林可以是基于其中mbcM、mbcMTl、mbcMT2、mbcP和mbcP450已经缺失或失活的麦克菌素产生性菌株的基因工程菌林。可以在这些系统中观察到当产生了其中mbcM或其同源物由于所述方法之一(包括失活或缺失)而丧失功能的菌林时，可以产生多于一种的麦克菌素类似物。就此存在多种本领域技术人员知道的可能原因。例如，可能存在后PKS步骤的优选顺序，并且单个活性的去除导致在对所涉及酶不是天然的底物上进4亍全部后续步骤。这可以导致中间体因呈递至后PKS酶的新底物上的效率降低而累积于培养肉汤中，或使如此产物分流，其中所述产物可能因为步骤顺序已经改变而导致不再是其余酶的底物。混合物中观察到的化合物的比例可以利用生长条件的变化如设定震摇培养箱中每分钟转速(转/分钟)和震摇培养箱行程(throw)而操纵。如实施例中描述，在具有较小行程(2.5cm)但较高每分钟转速(300转/分钟)的培养箱中温育BIOT-3806的生产培养物导致朝向较少的已加工类似物的偏移，而在具有较大幅度行程(5cm)但较低每分钟转速(200转/分钟或250转/分钟)的培养箱中的平行实验导致朝向较多的已加工中间体的偏移。本领域技术人员理解在生物合成簇中，一些基因以操纵子方式组织并且破坏一个基因往往会影响相同操纵子的后续基因的表达。当观察到化合物的混合物时，可以亳不费力地使用标准技术分离这些化合物，其中一些技术在以下实施例中描述。21-脱氧麦克菌素类似物可以如本文中所述通过众多方法进行筛选，并且在其中单种化合物显示有利特性的环境下，可以设计优选制造这种化合物的菌林。在其中前述情况不可能时的罕有环境下，可以产生中间体，这种中间体随后可以受到生物转化以产生所需的化合物。本发明提供通过选择性地缺失或失活来自麦克菌素PKS基因簇中一个或多个后PKS基因而产生的新麦克菌素类似物。特别地，本发明提供通过选择性地缺失或失活来自麦克菌素生物合成基因簇中至少mbcM或其同源物而产生的新21-脱氧麦克菌素类似物。在一个实施方案中，仅缺失或失活mbcM或其同源物。在备选实施方案中，除mbcM之外，额外地缺失或失活其它后PKS基因。在具体的实施方案中，在宿主菌林中缺失或失活选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的额外基因。在又一个实施方案中，额外地缺失或失活选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的1个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，额外地缺失或失活选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的2个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，额外地缺失或失活选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的3个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，额外地缺失或失活选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的4个或多个后PKS基因。本领域技术人员理解为了造成基因丧失功能，不需要彻底缺失该基因，因此，术语"缺失或失活"如本文中所用，包括造成基因丧失功能的任何方法，包括但不限于缺失完整的基因、通过插入耙基因所致的失活、导致基因不表达或以非活性形式表达的定点诱变、导致基因不表达或以非活性形式表达的对宿主菌林的诱变(例如通过辐射或暴露于诱变化学品，原生质体融合或转座子诱变)。此外，它包括缺失基因的内部片段。备选地，活性基因的功能可以用抑制剂化学地破坏，例如曱基双吡啶丙酮(metapyrone)(备选名称2-曱基-l，2-双(3-吡咬基-l-丙酮)，EP0627009)和嘧啶醇是加氧酶的抑制剂并且这些化合物可以添加至生产培养基以产生类似物。此外，西奈芬净是可以类似地使用但旨在体内抑制甲基转移酶活性的甲基转移酶抑制剂(McCammon和Parks1981)。在备选实施方案中，可以缺失或失活全部的后PKS基因并且随后通过(例如在att位点，在自我复制性质粒上或通过插入染色体的同源区的)补充作用再导入一个或多个后PKS基因，但不包括mbcM或其同源物。因此，在具体的实施方案中，本发明涉及用于产生21-脱氧麦克菌素类似物的方法，所述方法包括a)提供在适宜条件下培养时产生麦克菌素的第一宿主菌抹；b)选择性地缺失或失活全部后PKS基因；c)在适合产生21-脱氧麦克菌素类似物的条件下培养所述经修饰的宿主菌林；和d)任选地分离所产生的化合物。在备选实施方案中，再导入一个或多个缺失的后PKS基因，条件是mbcM不是再导入的基因之一。在又一个实施方案中，再导入选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的1个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，再导入选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的2个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，再导入选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的3个或多个后PKS基因。在又一个实施方案中，再导入选自mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450的4个或多个后PKS基因。在又一个备选实施方案中，再导入mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2和mbcP450。另外，本领域技术人员显而易见的是可以失活包括mbcM或其同源物的后PKS基因的亚群，并且可再导入不包括mbcM的所述后PKS基因的更小亚群以获得产生21-脱氧麦克菌素类似物的菌林。本领域技术人员理解存在众多方式以产生含有产生用于麦克菌素但缺少至少mbcM或其同源物的生物合成基因簇的菌林。本领域技术人员众所周知聚酮化合物基因簇可以在异源宿主中表达(Pfeifer和Khosla，2001)。因此，本发明包括转移不含mbcM或具有mbcM的无功能性突变体、具有或没有抗性基因和调节基因、完整的或者含有额外缺失的麦克菌素生物合成基因簇至异源宿主中。备选地，具有或没有抗性基因和调节基因的完整麦克菌素生物合成簇可以转移至异源宿主内，随后它可以通过本文中所述方法操作以缺失或失活mbcM。用于转移如上所定义的如此巨大DNA片段的方法和载体是本领域众所周知的(Rawlings,2001;Staunton和Weissman,2001)或在本文中在公开的方法中提供。在本上下文中，优选的宿主细胞菌林是原核生物，更优选地是放线菌(actinomycete)或大肠杆菌(Escherichiacoli),仍旧更优选的宿主细胞菌林包括但不限于奇迹束丝放线菌(ActinosynnnemamirumXA.mirum)、珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种(A.pretiosum)、吸7jC链霉菌、吸7JC链霉菌的种(Streptomyceshygroscopicussp.)、吸7K链霉菌子嚢霉素变种(Streptomyceshygroscopicusvar.ascomyceticus)、筑波链霉菌(Streptomycestsukubaensis)、天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)、变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)、潜,孩血審斷Saccharopolysporaerythraea)、脆弱链霉菌(Streptomycesfradiae)、阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)、肉桂地链霉菌(Streptomycescinnamonensis)、龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus)、白色链霉菌(Streptomycesalbus)、灰褐链霉菌(Streptomycesgriseofuscus)、黄色长孑包链霉菌(Streptomyceslongisporoflavus)、委内瑞拉链霉菌(Streptomycesvenezuelae)、白色链霉菌(Streptomycesalbus)、微单孢菌(Micromonosporasp.)、灰红微单孢菌(Micromonosporagriseorubida)、地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsismediterranei)或游动放线菌(Actinoplanessp.)N卯2-109。其它实施例包括吸水链霉菌去势亚种(Streptomyceshygroscopicussubsp.geldanus)和紫黑链霉菌(Streptomycesviolaceusniger)。在一个实施方案中，转移了完整的生物合成簇。在备选实施方案中，转移了无mbcM的完整PKS。在备选实施方案中，转移了无任何相关的后PKS基因(包括mbcM)的完整PKS。在又一个实施方案中，才艮据本文中所述而转移并随后操作完整的麦克菌素生物合成簇。在本发明的备选方面，本发明的21-脱氧麦克菌素类似物可以通过生物转化用合适菌抹进一步加工。合适菌抹是可获得的野生型菌抹，例如但不限于奇迹束丝放线菌、珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种、吸水链霉菌、吸7JC链霉菌的种。备选地，可以设计合适的菌林以允许用特定的后PKS酶的生物转化，所述的后PKS酶例如是但不限于由mbcN、mbcP、mbcMTl、mbcMT2、mbcP450(如本文中所定义)、gdmN、gdmM、gdmL、gdmP(Rascher等，2003)格尔德霉素17-0-曱基转移酶基因、asm7、asm10、asmll、asml2、asml9和asm21(Cassady等，2004，Spiteller等，2003)编码的那些后PKS酶。尽管基因仍需鉴定或序列不属于公共领域，然而通过标准技术获得此类序列对本领域技术人员而言是常规的。例如，编码格尔德霉素17-0-甲基转移酶的基因的序列不属于公共领域，但是本领域技术人员可产生探针，使用相似O-甲基转移酶产生异源探针或通过从可获得的同源基因中设计简并引物而产生同源探针以便对格尔德霉素产生性菌林开展DNA印迹并且因此获得这种基因以产生生物转化系统。在具体的实施方案中，菌抹可能已经完全或部分地使其一个或多个天然的聚酮化合物簇缺失或失活，以至于阻止由所述天然聚酮化合物簇所产生的聚酮化合物的产生。所述的基因工程菌林可以选自例如但不限于奇迹束丝放线菌、珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种、吸水链霉菌、吸7jC链霉菌的种、吸水链霉菌子嚢霉素变种、筑波链霉菌、天蓝色链霉菌、变铅青链霉菌、糖多孢红霉菌、脆弱链霉菌、阿维链霉菌、肉桂地链霉菌、龟裂链霉菌、白色链霉菌、灰褐链霉菌、黄色长孢链霉菌、委内瑞拉链霉菌、微单孢菌、灰红微单孢菌、地中海拟无枝酸菌或游动放线菌N902-109。其它可能的菌抹包括吸7K链霉菌去势亚种和紫黑链霉菌。在又一个方面，本发明提供了天然产生麦克菌素或其类似物的宿主菌林，在所述的宿主菌林中mbcM基因或其同源物已经缺失或失活以至于该宿主菌抹因而产生21-脱氧麦克菌素或其类似物(例如如式(1)化合物所定义的21-脱氧麦克菌素类似物)，并发明还提供了它们在产生21-脱氧麦克菌素或其类似物中的用途。因此，在一个实施方案中，本发明提供了在未改变的状态下天然产生麦克菌素的基因工程菌林，所述菌抹中来自麦克菌素PKS基因簇的一个或多个后PKS基因4皮缺失，其中所述的被缺失或被失活的后PKS基因之一是mbcM或其同源物。本发明包括本文中所述的本发明的全部产物。虽然用于制备如上所述的本发明21-脱氧麦克菌素类似物的方法基本上或完全地是生物合成性的，然而不排除通过包含标准合成化学方法的方法产生或转化本发明的21-脱氧麦克菌素类似物。为了允许遗传操作麦克菌素生物合成基因簇，首先对来自珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种的基因簇进行测序。然而，本领域技术人员理解存在产生麦克菌素的备选菌林，例如但不限于奇迹束丝放线菌。来自这些菌林的麦克菌素生物合成基因簇可以如本文中对珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种所述那样进行测序，并且使用序列信息来产生等同菌抹。本发明的其它方面包括-基于麦克菌素产生性菌林的基因工程菌林，其中mbcM和任选地其它后PKS基因已经被缺失或失活，特别是其中mbcM已经被缺失或失活的基因工程菌林或其中mbcM、mbcMTl、mbcMT2、mbcP和mbcP450已经被缺失或失活的基因工程菌林。合适地，麦克菌素产生性菌林是珍贵橙色束丝放线菌或奇迹束丝放线菌。-此类基因工程菌林在制备21-脱氧麦克菌素类似物中的用途。本发明化合物的优点在于预期它们可以具有一个或多个如下特性与Hsp90牢固结合、与Hsp90的快速结合、好的溶解度、好的稳定性、好的制剂能力、好的经口生物利用率、好的药物代谢动力学特性包括但不限于低葡糖醛酸化、好的细胞摄取、好的脑药物代谢动力学、对红细胞的低结合作用、好的毒理学特性、好的肝毒性特性、好的肾毒性、低副作用和低的心脏副作用。实施例一般方法培养物的发酵用于培育细菌菌林珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种ATCC31280(US4,315,989)和奇迹束丝放线菌DSM43827(KCCA-0225，Watanabe等，1982)的条件在专利US4，315，989和US4,187,292中描述。本文中所用方法改编自这些专利中并且如下用于在震摇培养箱内的管或烧瓶的肉汤里培养，在实施例中指出对已公开方案的改变。两个菌抹均在ISP2琼脂(培养基3，Shirling，E.B.和Gottlieb,D.，1966)上在28。C培育2隱3天并且用来接种种子培养基(培养基1，见改编自US4,315,989和US4,187,292的下文)。接种的种子培养基随后于5或2.5cm的行程以200-300转/分钟震摇，在28。C温育48小时。为产生麦克菌素、18,21-二氢麦克菌素和麦克菌素类似物如21-脱氧麦克菌素，将发酵培养基(培养基2,见下文和US4，315，989及US4，187，292)用2.5%-10%的种子培养物接种并于5或2.5cm的行程以200-300转/分钟的震摇，开始是在28。C温育24小时，随后26°C温育4-6天。随后收获培养物用于提取。培养基培养基1-种子培养基在1L蒸馏水中__<table>complextableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>在121°C高压灭菌20分钟进行消毒。培养基4—MAM在1L蒸馏水中<table>complextableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>在121。C高压灭菌20分钟进行消毒。提取培养肉汤用于LCMS分析添加培养肉汤(lml)和乙酸乙酯(lml)并混合15-30分钟，随后离心10分钟。收集0.5ml有机层、蒸发至干燥并随后在0,25ml曱醇中重溶解。用于发酵肉汤分析的LCMS分析方法和体内转化研究使用整合型AgilentHP1100HPLC系统联合在正离子和/或负离子模式下操作的BrukerDaltonicsEsquire3000+电喷质i瞽仪而开展LCMS。层才斤在PhenomenexHyperclone柱(dsBDS，3u,150x4.6mm)上实施，经11分钟以流速1mL/分钟以乙腈+0.1。/o曱酸/水+0.1。/o曱酸(40/60)至乙腈+0.1%甲^/7^+0.1%曱酸(80/20)的线性梯度洗脱。在190和400nm之间记录UV镨，在210、254和276nm处取得提取的色谱图。在100和1500amu之间记录质i普。对抗癌活性的体外生物测定在单层增殖测定法中对化合物在一组38种的人肿瘤细胞系中的抗癌活性的体外评估于位于弗莱堡(Frdburg)的实验肺瘤学研究所肿瘤检测GmbH的肿瘤检测测试实验室实施。所选细胞系中的9种细胞系的特征在表l中汇总。表1-测试的细胞系#细胞系特征1MCF-7乳腺，NCI标准2NCI-H460肺，NCI标准3SF隱268CNS，NCI标准4OVCAR-3卵巢-p85突变，AKT扩增5GXF251L胃6MEXF394NL黑素瘤7UXF1138L子宫8LNCAP前列腺-PTEN阴性9DU145前列腺-PTEN阳性肿瘤检测细胞系如Roth等(1999)所述从人肿瘤异种移植物中建立。供体异种移植物的来源由Fiebig等(1999)描述。其它细胞系从NCI(H460、SF-268、OVCAR-3、DU145、MDA-MB-231、MDA-MB-468)获得或从DSMZ，Braunschweig,德国(LNCAP)购买。除非另外说明，全部细胞系均在37。C在加湿空气中(95%空气，5%CO;j)在含有RPMI1640培养基、10%胎牛血清和0.1mg/mL庆大霉素(PAA，C61be，德国)的"即用混合(ready-mix)"培养基中培育。改良的碘化丙锭测定法用来评估试验化合物对人肺瘤细胞系生长的影响(Dengler等，(1995))。简而言之，细胞通过胰酶消化法从指数期培养物中收获、计数并以取决于细胞系的细胞密度(5-10.000个活细胞/孔)置于在96孔平底孩i量平板内。在24小时恢复以允许细胞恢复指数生长后，将0.010mL培养基(每个平板有6个对照孔)或含有21-脱氧麦克菌素类似物的培养基添加至孔内。每个浓度一式三份。化合物以5个浓度(100;10;1;0.1和0.01jiM)施加。连续暴露4天后，含有或不含试验化合物的细胞培养基用0.2mL多典化丙锭(Pl)水溶液(7mg/L)替换。为测量活细胞比例，细力包通过冷冻所述平板进行透化处理。在平板融化后，使用Cytofluor4000微量平板读数仪(激发530nm,发射620nm)测量荧光，产生与活细胞总数的直接联系。生长抑制表示为处理孔/对照孔xlOO(%T/C)。对于活性化合物，IC70值通过将化合物浓度对细胞成活力作图进行估计。对联合抗癌活性的体外生物测定法改良的碘化丙锭测定法也用来如上所述评估化合物的联合应用对DU145细胞生长生的影响，除了用于每种标准药物，准备了4个平板一个平板仅用于标准药物，并且三个平板分别用于该标准药物与化合物14的3个不同的固定浓度的组合。标准药物在10个浓度上以半对数增量方式一式六份施加。未处理的细胞以及仅与化合物14温育的细胞分别以6孑L/平板播种。生长抑制表示为处理孔/对照孔xl00(%T/C)。对于每一组合，IC70值通过化合物浓度对细胞成活力作图进行估计。实施例1-对麦克菌素生物合成基因簇的测序基因组DNA使用Kieser等(2000)中所述的标准方案从珍贵橙色束丝放线菌(ATCC31280)和奇迹束丝放线菌(DSM43827，ATCC29888)分离。DNA测序通过位于剑桥CB21QW的TennisCourt路的剑桥大学生物化学系的测序设备，使用标准方法实施。使用引物BIOSG1045'曙GGTCTAGAGGTCAGTGCCCCCGCGTACCGTCGT-3'(SEQIDNO:7)和BIOSG1055'-GGCATATGCTTGTGCTCGGGCTCAAC-3'(SEQIDNO:8)，利用标准技术扩增来自吸水链霉菌NRRL3602(序列登录号AY179507)的格尔德霉素生物合成基因簇中的氨基甲酰基转移酶编码基因gdmN。DNA印迹实验使用DIG试剂和用于非放射性核酸标记和检测的试剂盒根据制造商的说明书(Roche)实施。DIG标记的gdmNDNA片段用作异源探针。使用gdmN产生的探针和从珍贵橙色束丝放线菌2112分离的基因组DNA,在DNA印迹分析中鉴定到大约8kbEcoRI片段。该片段采用标准方法克隆至Litmus28并且通过菌落杂交法鉴定转化体。克隆p3被分离并对大约7.7kb插入物测序。从克隆p3中分离的DNA用EcoRI和EcoRI/Sacl消化并且分别分离在约7.7kb和在约1.2kb处的条带。标记反应才艮据制造商的方案实施。使用载体SuperCos1和GigapackIIIXL包装试剂盒(Stratagene)根据制造商的说明书产生以上所提及两个菌林的粘粒文库。这两个文库使用标准方案加以筛选并且4吏用来自克隆p3的7.7kbEcoRI片段的DIG标记片段作为探针。粘粒52从珍贵橙色束丝放线菌的粘粒文库中鉴定并提交至剑桥大学生物化学系测序设备进行测序。类似地，粘粒43和粘粒46从奇迹束丝放线菌的粘粒文库鉴定。这三种粘粒如DNA印迹分析所示均含有7.7kbEcoRI片段。粘粒43的PKS区的约0.7kbp片段使用引物BIOSG1245國CCCGCCCGCGCGAGCGGCGCGTGGCCGCCCGAGGGC-3'(SEQIDNO:9)和BIOSG1255'GCGTCCTCGCGCAGCCACGCCACCAGCAGCTCCAGC-3'(SEQIDNO:10)采用标准方案扩增、克隆并且用作探针对珍贵橙色束丝放线菌粘粒文库篩选重叠克隆。粘粒52的序列信息也用来产生用于筛选珍贵橙色束丝放线菌粘粒文库的衍生自DNA片段的探针，其中所述的DNA片段由引物BIOSG1305'-CCAACCCCGCCGCGTCCCCGGCCGCGCCGAACACG-3'(SE(^IDNO:ll)和BIOSG1315'-GTCGTCGGCTACGGGCCGGTGGGGCAGCTGCTGT-3，(SEQIDNO:12)以及BIOSG1325，-GTCGGTGGACTGCCCTGCGCCTGATCGCCCTGCGC-3'(SEQIDNO:13)和BIOSG1335'-GGCCGGTGGTGCTGCCCGAGGACGGGGAGCTGCGG-3'(SEQIDNO:14)扩增。分离粘粒311和352并且将粘粒352送交测序。粘粒352含有与粘粒52的大约2.7kb重叠区。为筛选其它粘粒，使用引物BIOSG1365'画CACCGCTCGCGGGGGTGGCGCGGCGCACGACGTGGCTGC誦3，(SEQIDNO:15)和BIOSG1375'画CCTCCTCGGACAGCGCGATCAGCGCCGCGCACAGCGAG-3'(SEQIDNO:16)和粘粒311作为模板，采用标准方案扩增大约0.6kbPCR片段。筛选珍贵橙色束丝放线菌的粘粒文库并分离粘粒410。粘粒410与粘粒352重叠大约17kb并将粘粒410送交测序。将三个重叠粘粒(粘粒52、粘粒352和粘粒410)的序列装配起来。测序的区域覆盖约100kbp并且鉴定到潜在地构成麦克菌素生物合成基因簇(SEQIDNO:17)的23个可读框。每个可读框在SEQIDNO:17中的位置在表3显示。表2-粘粒的总结<table>complextableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表3-每个可读框在SEQIDNO:17中的位置<table>complextableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>注1:c表示该基因由互补DNA链编码；注2:有时候可以鉴定出多于一个的潜在候选起始密码子。本领域技术人员会认出这种情况并且能够鉴定备选的可能起始密码子。我们已经用符号'*'标出具有多于一个可能起始密码子的那些基因。尽管我们标出了我们所认为的起始密码子，然而，本领域技术人员理解可以有使用备选起始密码子产生活性蛋白质的可能实施例2-产生菌抹BIOT-3806:其中gdmM同源物mcbM已经因插入质粒而破坏的一种珍贵橙色束丝放线菌菌抹构建pLSS308的概要在图3中显示。2.1.质粒dLSS308的构建来自吸水链霉菌菌林NRRL3602(AY179507)的格尔德霉素生物合成基因簇的gdmM基因的DNA序列和来自地中海拟无枝酸菌(AF040570AF040571)的利福霉素生物合成基因簇的orfl9的DNA序列使用VectorNTI序列比对程序进行比对(图4)。该比对确定适于i殳计简并性寡聚物的同源性区域，其中所述的简并性寡聚物用来扩增来自迹束丝放线菌(BIOT-3134;DSM43827;ATCC29888)的同源基因的片段。所述简并性寡聚物是FPLS1:5':ccscgggcgnycngsttcgacngygag3';(SEQIDNO:18)FPLS3:5':cgtcncggaimccggagcacatgccctg3';(SEQIDNO:19)其中n=G、A、T或C;y-C或T;s-G或C。用于PCR扩增的模板是奇迹束丝放线菌粘粒43。粘粒43的产生在上文实施例1中描述。寡聚物FPLS1和FPLS3用来在标准PCR反应中使用粘粒43作为模板及TaqDNA聚合酶扩增来自奇迹束丝放线菌的gdmM同源物的内部片段。产生的793bpPCR产物克隆至已经用Smal线性化的pUC19内，得到质粒pLSS301。测序克隆的区域并证实与gdmM具有显著同源性(图5)。比对扩增自粘粒43(奇迹束丝放线菌)的基因片段与珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种的麦克菌素生物合成基因簇中mbcM基因的序列，仅显示这些序列间lbp的差异(排除由简并性寡聚物的序列所确定的区域)，见图5。推测扩增的序列来自奇迹束丝放线菌的麦克菌素簇的mcbM基因。质粒pLSS301用EcoRI/Hindlll消化并将片段克隆至已经用EcoRI/Hind111消化的质粒pKC1132(Bierman等，1992)内。命名为pLSS308的所得质粒具有安泊拉霉素抗性并含有奇迹束丝放线菌mbcM基因的内部片段。2.2珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种的转化携带质粒pUZ8002的大肠杆菌ET12567用pLSS308通过电穿孔法转化以产生用于接合的大肠杆菌供体菌抹。这种菌株用来通过营养接合(Matsushima等，1994)而转化珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种。接合后体涂布在培养基4上并在28°C温育。平板在24小时后铺50mg/L安泊拉霉素和25mg/L萘啶酮酸。因为pLSS308不能够在珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种中复制，预期任意安泊拉霉素抗性菌落是含有质粒的转化体，其中所述的质粒通过同源重组借助质粒来源的mcbM内部片段整合至染色体的mbcM基因(图3)。这产生位于染色体上的mbcM基因的两个截短型拷贝。转化体通过PCR分析予以证实并将扩增片段测序。将菌落贴在培养基4(含有50mg/L安泊拉霉素和25mg/L萘啶酮酸)上。来自每个贝占块(patch)的6mm环状填块(circularplug)用来接种含有10mL种子培养基(培养基l的变型-2%葡萄糖，3%可溶性淀粉，0.5%玉米浆固体，1%大豆粉，0.5%胨，0.3%氯化钠，0.5%碳酸4丐)夕卜加50mg/L安泊拉霉素的分别的50mL福尔肯(Falcon)管。这些种子培养物在28。C以5cm行程200转/分钟温育2天。它们随后用来接种(5。/。v/v)发酵培养基(培养基2)并且在28。C培育24小时及随后在26°C培育另外5天。代谢产物从这些培养物中根据上文所述标准方案提取。通过HPLC使用上文所述标准方案对样品评估麦克菌素类似物的产生。所选择的生产性分离林命名为BIOT-3806。2.3巷定来自BIOT-3806的化合物使用整合型AgilentHP1100HPLC系统联合在正离子和/或负离子模式下操作的BrukerDaltonicsEsquire3000+电喷质^普仪而开展LCMS。层析在PhenomenexHyperclone柱(dsBDS,3u，150x4.6mm)上实现，4吏用以下梯度洗脱过程T=0，10%B;T=2,10%B;T=20，100%B;T=22，100%B;T=22.05,10%B;T=25，10%B以流速1mL/分钟洗脱。流动相入=水+0.1%甲酸；流动相8=乙腈+0.1%甲酸。在1卯和400录UV镨，在210、254和276nm处取得提取色i普图。在100和1500amu之间记录质i普。表4-通过LCMS鉴定的化合物<table>complextableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>实施例3-新化合物的产生和分离3.17-0-氨基曱酰基前麦克菌素的发酵和分离BIOT-3806的营养贮存液在含有50mg/L安泊拉霉素的培养基1中生长后进行制备并保存在蒸馏水中的20%w/v甘油10。/。w/v乳糖并且在-80°C贮藏。营养贮存液在补充以50mg/L安泊拉霉素的ISP2培养基(培养基3)平板上恢复并在28°C温育48小时。营养培养物通过从ISP2平板中取出两块直径5mm的琼脂块并将它们接种至250mL摇瓶中含有50mg/L安泊拉霉素的30mL培养基1内。烧瓶在28。C以200转/分钟(5cm行程)温育48小时。营养培养物以5%V/V接种至2L摇瓶中的200mL生产培养基(培养基2)内。培养以300转/分钟(2.5cm行程)在28。C实施1天随后在260C进行5天。BIOT-3806的发酵肉汤(lL，粉红色)用等体积的乙酸乙酯(EtOAc)提取3次。溶剂在真空下从合并的EtOAc提取物中除去以产生2.34g棕色油。提取物随后在珪胶(SilicaGel)60上层析，初始用CHCL3和MeOH混合物(95:5)洗脱，随后增加MeOH浓度至多到10%,并收集几个级分(每个级分约250ml)。使用HPLC对级分分析代谢产物的存在。含有新化合物的特定级分(级分5;除去溶剂后334mg粗制物质)通过在PhenomenexLunaC18-BDS柱(21.2x250mm;5粒度)上层析，经25分钟时间以水乙腈(80:20)至(50:50)的梯度以流速21mL/分钟洗脱而进一步纯化。级分通过分析性HPLC加以分析并且合并那些含有新化合物的级分，并且除去溶剂以产生灰白色固体(86mg)。在丙酮-d6中通过LCMS/MS和通过1D及2DNMR实验实施的分析确定化合物为7-0-氨基甲酰基前麦克菌素(14)。3.27-0-氨基曱酰基-15-羟基前麦克菌素的发酵和分离BIOT-3806的营养贮存液在含有50mg/L安泊拉霉素的培养基1中生长后进行制备并保存在蒸馏水中的20%w/v甘油10。/。w/v乳糖并且在-80。C贮藏。营养贮存液在补充以50mg/L安泊拉霉素的ISP2培养基(培养基3)平板上恢复并在28。C温育48小时。营养培养物通过从ISP2平板中取出两块直径5mm的琼脂填块并将它们接种至250mL摇瓶中含有50mg/L安泊拉霉素的30mL培养基1内。烧瓶在28°C以200转/分钟(5cm行程)温育48小时。营养培养物以5%v/v接种至2L摇瓶中的200mL生产培养基(培养基2)内。培养以200转/分钟(Scm行程)在280C实施1天随后在26。C进行5天。BIOT-3806的发酵肉汤(1.3L,乳白色)用等体积的乙酸乙酯(EtOAc)提取3次。溶剂在真空下从合并的EtOAc提取物中除去以产生2.87g棕色油。提取物随后在珪胶60上层析，初始用CHCL3和MeOH混合物(95:5)洗脱，随后增加MeOH浓度至多到10%，并收集几个级分(每个级分约250ml)。使用HPLC对级分分析代谢产物的存在。含有新化合物的特定级分(级分7;除去溶剂后752mg粗制物质)通过在PhenomenexLunaC18-BDS柱(21.2x250mm;5nm粒度)上层析，经25分钟以水乙腈(85:15)至(55:45)的梯度以流速21mL/分钟洗脱而进一步纯化。^分通过分析性HPLC加以(245.5mg)。为鉴定和表征，MS和lD及2DNMR实验在丙酮-d6中实施。在丙酮46中通过LCMS/MS和通过1D及2DNMR实验实施的分析确定化合物为7-0-氨基曱酰基-15-羟基前麦克菌素(15)。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage47</formula>《15)3.3鉴定和表征开展了一系列MS和NMR实验vizLCMS、MSMS、1H、13C、APT、COSY-45、HMQC、HMBC。对这些数据彻底且详尽的了解能够指派确定前麦克菌素的这两种类似物中大部分的质子和碳。NMR测定结果在表5中描述。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage48</formula>表5<table>complextableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>实施例4-产生其中gdmM同源物mbcM具有符合读框的缺失的珍贵橙色束丝放线菌菌林4.1克隆与mbcM下游侧翼区同源的DNA寡聚物BV145(SEQIDNO:22)和BV146(SEQIDNO:23)用来在标准PCR反应中使用(来自实施例1的)粘粒52作为模板及PfuDNA聚合酶扩增来自珍贵橙色束丝放线菌(ATCC31280)的DNA的1421bp区域。在每种寡聚物中设计5，延伸物以便导入辅助扩增片段克隆的限制性位点(图7)。扩增的PCR产物(PCRwv308，SEQIDNO:20，图8A)编码mbcM的3，端的33bp和下游同源性的另外1368bp。这个1421bp片段克隆至已经用Smal线性化的pUC19内，得到质粒pWV308。4.2克隆与mbcM上游侧翼区同源的DNA寡聚物BV147(SEQIDNO:24)和BV148(SEQIDNO:25)用来在标准PCR反应中使用(来自实施例1的)粘粒52作为模板及PfuDNA聚合酶扩增来自珍贵橙色束丝放线菌(ATCC31280)的DNA的1423bp区域。在每种寡聚物中设计5，延伸物以便导入辅助扩增片段克隆的限制性位点(图7)。扩增的PCR产物(PCRwv309，SEQIDNO:21，图8B)编码mbcM的5，端的30bp和上游同源性的另外1373bp。这个1423bp片段克隆至已经用Smal线性化的pUC19内，得到质粒pWV309。BV145ATATACTAGTCACGTCACCGGCGCGGTGTCCGCGGACTTCGTCAACG(SEQIDNO:22)BV146ATATCCTAGGCTGGTGGCGGACCTGCGCGCGCGGTTGGGGTG4v/"I1(SEQIDNO:23)BV147ATATCCTAGGCACCACGTCGTGCTCGACCTCGCCCGCCACGC勿II(SEQIDNO:24)BV148ATATTCTAGACGCTGTTCGACGCGGGCGCGGTCACCACGGGC(SEQIDNO:25)产物PCRwv308和PCRwv309以相同方向克隆至pUC19以便利用pUC19多接头内的Pstl位点用于下一个克隆步骤。来自pWV309的1443bpAvrll/Pstl片段克隆入pWV308的4073bpAvrll/Pstl片段以产生pWV310。pWV310因此含有Spel/Xbal片段，该片段编码与在AvrII位点处融合的mbcM的侧翼区同源的DNA。这个2816bpSpel/Xbal片段克隆入已经用Spel线性化的pKC1132(Bierman等，1992)内以产生pWV320。4.3珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种的转化携带质粒pUZ8002的大肠杆菌ET12567用pWV320通过电穿孔法转化以产生用于接合的大肠杆菌供体菌林。这种菌株用来通过营养接合(Matsushima等，1994)而转化珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种。接合后体涂布在培养基4上并在28°C温育。平板在24小时后铺上50mg/L安泊拉霉素和25mg/L萘啶酮酸。因为pWV320不能够在珍贵橙色束丝放线菌珍贵橙色亚种中复制，预期任意安泊拉霉素抗性菌落是含有质粒pWV320的转化体，其中所述的质粒pWV320通过同源重组借助同源性的质粒来源的mcbM侧翼区之一整合至染色体。基因组DNA从六个接合后体中分离并消化，并且通过DNA印迹进行分析。该印迹显示在6个分离抹中的4个分离林中，整合已经在同源性的上游区域出现，而在6个分离抹中的2个分离株中，同源整合已经在下游区域出现。选择因上游区域内同源整合而产生的一个菌林(命名为BIOT-3831)以筛选次生杂种(secondarycrosses)。还选择因下游区域内同源整合而产生的一个菌抹(BIOT-3832)以筛选次生杂种。4.4筛选次生杂种菌林贴到培养基4(补充以50mg/L安泊拉霉素)上并在28。C培育4天。每个贴块的1cm2部分用来接种在50ml福尔肯管中不含抗生素的7ml改良ISP2(1L蒸馏水中的0.4%酵母提取物，1%麦芽提取物，0.4%右旋糖)内。培养物培育2-3天，随后以(5。/。接种物)在50ml福尔肯管内的另一份7ml改良ISP2(见上文)中传代培养。在4-5个世代传代培养后，将培养物用声波处理、连续稀释、涂布在培养基4上并在28°C温育4天。单菌落随后一式两份贴到含有安泊拉霉素的培养基4和不含抗生素的培养基4上，并且将平板在28°C温育4天。在无抗生素平板上生长而在安泊拉霉素平板上不生长的贴块再次贴到+/-安泊拉霉素平板上以证实它们已经丢失抗生素标记。基因组DNA从全部安泊拉霉素敏感菌林分离并通过DNA印迹分析。在此阶段，一半次级交换型菌抹已经回复至野生型，但是一半次级交换型菌林已经产生所需的mbcM缺失突变体。该突变菌林编码符合读框地缺失502个氨基酸的mbcM蛋白(图9)。mbcM缺失突变体贴到培养基4上并且在28°C培育4天。来自每个贝占^6^6mm环状填块(circularplug)用来接种含有10mL种子培养基(改良自培养基l:2%葡萄糖，3%可溶性淀粉，0.5%玉米浆固体，1%大豆粉，0.5%胨，0.3%氯化钠，0.5。/o碳酸钩)的单个50mL福尔肯管。这些种子培养物在28。C以2英寸行程200转/分钟温育2天。这些种子培养物随后用来接种(0.5ml至10ml)生产培养基(培养基2:5%甘油，1%玉米浆固体，2%酵母提取物，2%磷酸二氢钾，0.5%氯化镁，0.1。/。碳酸钩)并且在28。C培育24小时及随后在26。C培育另外5天。通过添加等体积的乙酸乙酯而从这些培养物中提取次级代谢产物。细胞残片通过离心除去。将上清液转移至清洁的管内并且将溶剂在真空中除去。样品在0.23ml甲醇中重建，随后添加0.02mll%(w/v)FeCl3溶液。对样品评估麦克菌素类似物的产生。使用上文实施例2.3中所述的方法通过LCMS进行的化学分析基于化合物14和15具有相同的保留时间和质谱而明确无误地确定化合物14和15的存在。4.5通过产生BIOT-3872的原生质体选择单个菌落原生质体使用改良自Weber和Losick1988的具有以下培养基改变的方法从BIOT-3872产生。珍贵橙色束丝放线菌培养物在ISP2平板(培养基3)上在28°C培育3天并且5mii^刮片用于接种至在水中的2ml无菌10Vo(w/v)甘氨酸补充的40mlISP2肉汤。原生质体如Weber和Losick1988中所述产生并且随后在R2平板上再生(R2配方-蔗糖103g，K2S040.25g,MgCl2.6H2010.12g，葡萄糖10g,Difco酪蛋白氨基酸0.1g,Difco细菌用琼脂22g，蒸馏水至800mL，该混合物通过在121。C高压灭菌20分钟消毒。在高压灭菌后，添加以下高压灭菌的溶液0.5%KH2PO410mL,3.68%CaCl2.2H2080mL，20。/。L-脯氨酸15mL，5.73。/。TES緩冲液(pH7.2)100mL，微量元素溶液(ZnCl240mg,FeCl3.6H20200mg,CuCl2.2H2010mg，Mna2.4H2010mg，Na2B4O7.10H2O10mg，(NH4)6Mo7024.4H2010mg,蒸馏水至1升)2mL，NaOH(lN)(未灭菌)5mL)。80个单菌落贴到MAM平板(培养基4)并如以上实施例2.3所述分析麦克菌素类似物的产生。大部分生成原生质体的贴块以与亲本菌林相似的水平产生化合物14和15。测验的80个样品中有15个样品比亲本菌林产生显著更多的化合物14和15。观察到最佳生产菌林WV4a-33(BIOT-3870)以比亲本菌抹显著更高的水平产生化合物14和15。实施例5-生物学数据-麦克菌素类似物抗癌活性的体外评估如一般方法中所述，使用改良碘化丙锭测定法实施对试验化合物在单层增殖测定中在一组人胂瘤细胞系中的抗癌活性的体外评估。9个细胞系的结果在下表6中显示；每个值代表重复实验的中位数。表7显示化合物在测试的38个细胞系组中的平均IC70，以麦克菌素为参考。表6-体外细胞系数据<table>complextableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>表7-在38个细胞系组中的平均IC7o值<table>complextableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>实施例6-溶解度测定试验化合物的溶液(25mM)通过在合适量的DMSO中溶解3-5mg等分样而制备。等分样(O.OlmL)添加至玻璃小瓶内的0.490mLpH7.3的PBS中。对于每个时间点，在琥珀玻璃小瓶内制备3个PBS小瓶量。对于6小时时间点，还制备在DMSO中的三个重复等分样。产生的0.5mM溶液震摇持续至多到6个小时，在第1、3和6小时除去小瓶以便分析。样品通过HPLC(0.025mL注射)进行分析。化合物通过测定在274nm处的峰面积而定量。在每个时间点处在PBS中的2%DMSO中的溶解度通过比较每个色镨图的总峰面积与从相应的6小时DMSO溶液中产生的色语图的平均总峰面积而确定(假定DMSO溶液中的平均总峰面积等同于0.5mM溶液)。结果在下文表8中显示。表8-溶解度结果<table>complextableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>*-这些化合物的溶解度处于本测定法的最大测量界限或高于所述最大测量界限。实施例7-Hsp90结合等温滴定量热法和Kd测定酵母Hsp90对含有1mMEDTA和5mMNaCl的20mMTrispH7.5透析并且随后在相同但含有2%DMSO的緩冲液中稀释至0.008mM。试-验化合物以浓度50mM溶解在100%DMSO中并且随后在如Hsp90所述那样在相同的含有2%DMSO的緩冲液中稀释至0.1mM。相互作用的热量在30°C在具有1.458ml小室体积的MSC系统(Microcal)上测量。每种试验化合物的10个0.100mM的0.027ml等分样注射入0.008mM酵母Hsp90。稀释的热量在独立的实验中通过注射试验化合物至含有2%DMSO的緩冲液中而测定，并且校正的数据使用非线性最小二乘曲线-拟合算法(MicrocalOrigin)以三个浮点变量(floatingvariable):化学计量、结合常数和相互作用的焓变化进行拟合。结果在表9中显示。表9-用于Hsp90结合的Kd值<table>complextableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>实施例8-产生其中mbcM具有符合读框的缺失并且已经额外缺失mbcMTl、mbcMT2、mbcP和mbcP450的珍贵橙色束丝放线菌菌抹8.1克隆与mbcMT2下游侧翼区同源的DNA寡聚物Is4dell(SEQIDNO:29)和Is4del2a(SEQIDNO:30)用来在标准PCR反应中使用(来自实施例1的)粘粒52作为模板及PfuDNA聚合酶扩增来自珍贵橙色束丝放线菌(ATCC31280)的DNA的1595bp区域。在寡聚物Is4del2a中设计5，延伸物以便导入辅助扩增片段克隆的AvrII位点(图10)。扩增的PCR产物(l+2a，图11，SEQIDNO:3)编码mbcMT2的3，端的196bp和下游同源性的另外1393bp。这个1595bp片段克隆入已经用Smal线性化的pUC19内，得到质粒pLSSl+2a。Is4del1(SEQIDNO:29)5'-GGTCACTGGCCGAAGCGCACGGTGTCATGG画3'Is4del2a(SEQIDNO:30)5'-CCTAGGCGACTACCCCGCACTACTACACCGAGCAGG-3'8,2克隆与mbcM上游侧翼区同源的DNA寡聚物Is4del3b(SEQIDNO:32)和Is4del4(SEQIDNO:33)用来在标准PCR反应中使用(来自实施例1的)粘粒52作为模板及PfuDNA聚合酶扩增来自珍贵橙色束丝放线菌(ATCC31280)的DNA的1541bp区域。在寡聚物Is4del3b中设计5，延伸物以便导入辅助扩增片段克隆的AvrII位点(图10)。扩增的PCR产物(3b+4，图12，SEQIDNO:34)编码mbcP的5，端的-100bp和上游同源性的另外1450bp。这个1550bp片段克隆入已经用Smal线性化的pUC19内，得到质粒pLSS3b+4。Is4del3b(SEQIDNO:32)5'-CCTAGGAACGGGTAGGCGGGCAGGTCGGTG國3'Is4del4(SEQIDNO:33)5'-GTGTGCGGGCCAGCTCGCCCAGCACGCCCAC陽3'产物l+2a和3b+4克隆入pUC19以便利用pUC19多接头内的HindIII和BamHI位点用于下一个克隆步骤。来自pLSSl+2a的1621bpAvrll/Hindlll片段和来自pLSS3b+4的1543bpAvrlI/BamHI片段克隆入pKC1132的3556bpHindlII/BamHI片段以产生pLSS315。pLSS315因此含有编码如此DNA的HindlII/BamHI片段，其中所述DNA与在AvrII位点处融合的4个目的ORF缺失区域的侧翼区同源(图7)。8.3用pLSS315转化BIOT-3870携带质粒pUZ8002的大肠杆菌ET12567用pLSS315通过电穿孔法转化以产生用于接合的大肠杆菌供体菌抹。这种菌抹用来通过营养接合(Matsushima等，1994)而转化BIOT-3870。接合后体涂布在MAM培养基(1%小麦淀粉，0.25%玉米浆固体，0.3%酵母提取物，0.3%碳酸钩，0.03%硫酸铁，2%琼脂)上并在28°C温育。平板在24小时后铺上50mg/L安泊拉霉素和25mg/L萘啶酮酸覆盖。因为pLSS315不能够在BIOT-3870中复制，预期任意安泊拉霉素抗性菌落是含有质粒的转化体，其中所述的质粒通过同源重组借助质粒来源的同源性区域整合至染色体。8.4筛选次生杂种选择BIOT-3870:pLSS315的3个原代转化体用于传代培养以筛选次生杂种。菌林贴到MAM培养基(补充以50mg/L安泊拉霉素)上并在28°C培育4天。2个6mm环状填块用来接种在250ml锥形瓶内的30mlISP2(0.4%酵母提取物，1%麦芽提取物，0.4%右旋糖，不补充抗生素)中。培养物培育2-3天，随后传代培养(5%接种物)至250ml锥形瓶内的30mlISP2中。在4-5轮传代培养后，将培养物如实施例3.6中所述形成原生质体，将原生质体连续稀释、涂布在再生培养基(见实施例3.6)上并在28。C温育4天。单菌落随后一式两份贴在含有安泊拉霉素的MAM培养基和不含抗生素的MAM培养基上，并且将平板在28°C温育4天。在无抗生素平板上生长而在安泊拉霉素平板上不生长的7个衍生自1号克隆的贴块(32-37号)和4个衍生自3号克隆的贴块(38-41号)再次贴到+/-安泊拉霉素平板上以证实它们已经丢失抗生素标记。麦克菌素类似物的产生如一般方法中所述而实施。如一般方法和实施例2中所述进行分析。化合物14以与亲本菌林BIOT-3870可比较的产量产生并且对于贴块33、34、35、37、39和41没有观察到化合物15产生。该结果表明除mbcM的初始缺失外，所需的突变菌林具有麦克菌素簇的含有基因mbcP、mbcP450、mbcMTl和mbcMT2的3892bp缺失。实施例9-生物学数据-化合物14与标准的细胞毒性剂丝裂霉素C、异环磷酰胺、环己基氯乙基亚硝基脲(CCNU)、米托蒽醌和长春地辛的抗癌组合的体外评估使用改良碘化丙锭测定法如一般方法中所述实施体外评估化合物14与标准细胞毒性剂组合时在单层增殖测定法中对肿瘤细胞系DU145的抗癌活性。化合物14的4个独立浓度随标准药物的10个浓度一起使用，其中所述化合物14的4个独立浓度对于丝裂霉素C是0-80nM,对于异环磷酰胺、CCNU、米托蒽醌和长春地辛是0-160nM。对处理/对照的相对细胞生长百分数(。/。T/C)值作图并用来绘制图13-17中所示的图。这些图随后用来计算表10-11中所示的IC70值。表IO<table>complextableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>数据显示了标准细胞毒性剂，如烷化剂丝裂霉素c、异环磷酰胺和CCNU、拓朴异构酶II抑制剂米托蒽醌和有丝分裂抑制剂长春地辛的作用可以通过添加化合物14而改善。已知细胞毒性剂如丝裂霉素C、异环磷酰胺、CCNU、米托蒽醌和长春地辛的可用性受其毒性限制并且它们常规地在疗法中以接近其最大耐受剂量的高水平加以使用。可以因此推断本发明的化合物14和其它化合物应当在减少疗法中待使用细胞毒性剂(如丝裂霉素C、异环磷酰胺、CCNU、米托蒽醌、长春地辛)的量方面具有有益作用。因此，有可能实现比单独用细胞毒性剂或一种细胞毒性剂与另一种细胞毒性剂的组合所实现治疗效力更高的治疗效力或具有更少副作用的效力。参考文献Allen,I.W.和Ritchie,D.A.(1994)来自吸水链霉菌的编码格尔德霉素生物合成的DNA序列的克隆和分析。Mol.Gen.Genet.243:593-599.Bagatell，R.和Whitesell，L.(2004)癌中改变的Hsp卯功能独特的治疗机会。MolecularCancerTherapeutics3:1021-1030.Beliakoff，J.和Whitesell,L.(2004)Hsp90:用于乳癌疗法的新出现革巴。Anti-CancerDrugs15:651-662.Bierman，M.，Logan,R.，O'Brien,K.，Seno，ET.，NagarajaRao，R.和Schoner,BE.(1992)"用于DNA从大肠杆菌接合转移至链霉菌(Streptomycesspp)的质粒克隆载体"，Gene116:43-49.Blagosklonny，M.V.(2002)Hsp-卯结合的癌蛋白质格尔德霉素及其类似物的多重耙。Leukemia16:455-462.Blagosklonny,M.V"Toretsky，J"Bohen，S.和Neckers，L.(1996)，体外或体内翻译的p53的突变构型需要功能性HSP90。Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8379-8383.Bohen，S.P.(1998)，对p23和安莎霉素抗生素在Hsp卯依赖性信号作用蛋白功能中的遗传分析和生物化学分析。MolCellBiol18:3330-3339.Carreras，C.W.，Schirmer，A.,Zhong，Z.和SantiD.V.(2003),对格尔德霉素-热休克蛋白90相互作用的滤膜结合试验。AnalyticalBiochemistry317:40-46.Cassady，J.M.，Chan,K，K.，Floss，H,G.和LeistnerE.(2004)类美坦西(maytansinoid)抗肿瘤剂最新ii^。Chem.Pharm.Bull.52(1)1-26.Chiosis，G.，Huezo，H.，Rosen,N.，Mimnaugh，E.，Whitesell，J.和Neckers，L.(2003),17AAG:低靼标结合亲和力和有效细胞活性-找到一种解释。MolecularCancerTherapeutics2:123-129.Chiosis，G.，Vilenchik，M.，Kim，J.和SoNt，D.(2004)Hsp卯脆弱的分子伴倡。DrugDiscoveryToday9:881-888.Csermely，P.和Soti，C.(2003)抑制Hsp90作为抑制蛋白激酶的特殊途径。Cell.Mol.Biol丄ett.8:514-515.DeBoer，C和Dietz，A.(1976)对吸水链霉菌去势变种(Streptomyceshygroscopicusvar.geldanus)的描述及其抗生素产生。J.Antibiot.29:1182-1188.DeBoer,C，Meulman，P.A"Wnuk，R.J.和Peterson,D.H.(1970)格尔德霉素，一种新抗生素.J.Antibiot.23:442-447.DenglerW.A.，SchulteJ.，BergerD.P.，MertelsmannR.和FiebigHH.(1995)用于增殖和毒性分析的碘化丙锭荧光测定法的开发。Anti-CancerDrugs,6:522-532.Dikalov，s"Landmesser，U"Harrison,DG"2002，格尔德霉素通过酶的和非酶的氧还反应循环导致超氧化物形成，TheJournalofBiologicalChemistry,277(28)，第25480-25485页DonzeO.和Picard，D.(1999)Hsp90结合并调节真核翻译起始因子激酶Gcn2的配体裔导性a亚基。MolCellBiol19:8422-8432.EgorinMJ，LagattutaTF，HamburgerDR，CoveyJM，WhiteKD，MusserSM，EisemanJL.(2002),"17画(二曱氨基乙氨基)-17-去曱氧基格尔60德霉素(NSC707545)在CD2F1小鼠和Fischer344大鼠中的药物代谢动力学、组织分布和代谢"，CancerChemotherPharmacol,49(1)，第7-19页.Eustace,B.K.，Sakurai，T.，Stewart,J.K.等(2004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失或失活。35.根据权利要求29至34任一项中所述的基因工程菌林，其中初始麦克菌素产生性菌林是珍贵橙色束丝放线菌(A.pretiosum)或奇迹束丝放线菌(A.mimm)。36.根据权利要求29至34任一项中所述的基因工程菌抹在制备21-脱氧麦克菌素类似物或其可药用盐中的用途。37.根据权利要求36所述的用途，其中21-脱氧麦克菌素类似物由权利要求1至11任一项定义。38.根据权利要求28所述的宿主菌林用于产生21-脱氧麦克菌素或其类似物的用途。39.根据权利要求14至16任一项中所述的21-脱氧麦克菌素类似物、用途或方法，用于治疗癌症和/或B细胞恶性肿瘤。40.能够通过权利要求22-27任一项中所述的方法产生的21-脱氧麦克菌素类似物。全文摘要本发明涉及例如在治疗癌症、B细胞恶性肿瘤、疟疾、真菌感染、中枢神经系统疾病和神经变性疾病、血管发生依赖性疾病、自身免疫性疾病中有用的或作为对癌症的预防性预处理有用的21-脱氧麦克菌素类似物。本发明也提供了用于产生这些化合物的方法和这些化合物在医药学特别是在治疗和/或预防癌症或B细胞恶性肿瘤中的用途。文档编号C07D225/00GK101346354SQ200680048686公开日2009年1月14日申请日期2006年12月22日优先权日2005年12月24日发明者B·威尔金森,C·J·马丁,L·S·希恩,M·努尔阿拉姆,M-Q·张,R·E·莱尔,R·M·谢里登,S·盖瑟,W·A·沃斯登申请人:百奥帝卡技术有限公司