其中结合5-氮杂-胞嘧啶的寡核苷酸类似物的利记博彩app

专利名称：：其中结合5-氮杂-胞嘧啶的寡核苷酸类似物的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及用作治疗、诊断以及研究试剂的寡核苷酸类似物的设计、合成和应用。提供在寡核苷酸序列中结合胞嘧啶的类似物，5-氮杂-胞嘧啶，例如，以5-氮杂-2'-脱氧胞苷或5-氮杂-胞苷的形式的寡核苷酸类似物。这样的类似物可以用于调节DNA的甲基化，尤其用于通过更特异性地靶向人基因组的CpG岛而有效抑制胞嘧啶在C-5位置的甲基化。本发明提供合成这些寡核苷酸类似物的方法和调控C-5胞嘧啶甲基化的方法。特别地，提供亚磷酰胺(phosphoramidite)结构单元和含有地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷；D)、富含DpG(地西他滨-磷酸二酯连接-鸟苷)岛和衍生物的寡核苷酸。还提供制备、配制和施用这些化合物或组合物作为需要其的宿主的治疗剂的方法。相关技术描述地西他滨是目前研发的用于治疗慢性髓细胞白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非小细胞肺(NSCL)癌、镰刀细胞贫血症和急性髓细胞白血病(AML)的新药物。可以区分地西他滨的两种异构形式。(3-正向异构体是活性形式，其在图1中显示。地西他滨拥有多种药理学特性。在分子水平上，它在细胞周期的S期结合到DNA中。在细胞水平上，地西他滨可以诱导细胞分化和行使血液学毒性。除了在体内具有短半衰期之外，地西他滨具有极好的组织分布。地西他滨的一种功能是其特异性并且有效抑制DNA甲基化的能力。DNA甲基化是许多系统常见的外遗传作用。这种修饰包括胞嘧啶在C-5位置(la")的共价修饰。通过识别DNA复制后半甲基化的DNA的DNA甲基转移酶家族，甲基化模式稳定地保持在CpG二核苷酸。在细胞内，地西他滨首先通过脱氧胞苷激酶转化成它的活性形式，磷酸化的5-氮杂-脱氧胞苷，其主要在细胞周期的S期合成。地西他滨对脱氧胞苷激酶的催化位点的亲和力与天然底物，脱氧胞苷相似(Momparler等1985Mol.Pharmacol.(分子药理学)30:287-299)。在通过脱氧胞苷激酶转化成它的三磷酸形式后，地西他滨以与天然底物dCTP相似的速率结合到正在复制的DNA中(Bouchard和Momparler1983Mol.Pharmacol.(分子药理学)24:109-114)。在正常细胞中，持家基因的富含CpG的序列通常免受甲基化。在癌细胞中，在肿瘤抑制基因的启动子区域CpG-岛中的异常的过度甲基化作用是与肿瘤发生表型的发展相关的最常见的事件之一。每种分化的细胞具有其独特的甲基化模式。地西他滨结合到DNA链中具有甲基化不足作用。在染色体复制后，为了保持这种甲基化模式，在亲本链中的5-甲基胞嘧啶作用为在互补子DNA链的直接甲基化。用在胞嘧啶的C-5位置的碳取代氮干扰这种正常的DNA甲基化过程。在甲基化特异性位点用地西他滨取代胞嘧啶产生DNA甲基转移酶的不可逆的失活。地西他滨忠实地作用为胞嘧啶残基，直到DNA甲基转移酶试图将甲基基团转移到子代细胞的半甲基化的DNA链上。在这一步骤中，DNA甲基转移酶酶被地西他滨共价截留在DNA中，并且不能进一步沉默(甲基化)其余的胞嘧啶残基(Juttermann等.1994Proc,Natl.Acad.SciUSA(美国国家科学院学报)91:11797-11801)。地西他滨的这种独特的作用机制允许从前轮细胞分裂沉默的(一旦被甲基化)基因重新表达。在地西他滨处理后这种活性截留在半甲基化的DNA中存在达到48小时。在进一步DNA合成和细胞周期分裂后，来自半甲基化DNA的子代链导致在这些位点完全未甲基化的DNA链(JonesP.2001Nature(自然)409:141,143-4)。通过特异性抑制DNA甲基转移酶，甲基化所需要的酶，可以逆转肿瘤抑制基因的异常甲基化。除了它在CML、MDS和AML中已证明的抗白血病作用外，地西他滨的潜在应用己经受到延迟和延长的骨髓抑制的阻碍。在更长的时间阶段给与的更低剂量的地西他滨，已经将骨髓抑制作用减小到易于管理的程度，而没有破坏其通过其甲基化不足作用而抑制癌症的能力。在更高的剂量，相关的毒性是被抑制的。然而，在地西他滨的最大耐受剂量对血液和实体瘤的治疗是无效的。骨髓抑制作用的起因尚不清楚。可能是由于地西他滨随机地和广泛地结合到S期细胞的DNA中，包括参与正常造血作用的骨髓细胞的DNA中。由于地西他滨的不稳定性引起的严重DNA损伤导致坏死。由于地西他滨的结合不仅仅限于富含CpG的序列，所以由于地西他滨的不稳定性，DNA可以断裂，并且需要在CpG岛之外的多个位点进行修复。地西他滨和阿扎胞苷在水性介质中不稳定，并且进行水解降解。在酸性介质中，地西他滨在室温下水解成5-氮杂胞嘧啶和2-脱氧核糖。在室温下在中性介质中，三嗪环的开环发生在6-位置，以形成瞬时的中间甲酰基衍生物，其进一步降解成脒基脲衍生物和甲酸(Piskala,A.;Synackova,M.;Tomankova,H.;Fiedler,P.;Zizkowsky，V.NucleicAcidsRes.(核酸研究)1978,4,sl09-s-113.)。在6-位置的这种水解在酸性和碱性水性介质中以甚至更快的速率发生。考虑与地西他滨相关的化学不稳定性和毒性，存在开发不但更加稳定的地西他滨衍生物而且较好的甲基化不足的试剂的需要，其中结合尽可能地定位在CpG岛，或者实现甲基化不足作用而没有显著影响DNA的完整性。发明概述本发明提供在寡核苷酸序列中结合5-氮杂-胞嘧啶，例如，以5-氮杂-2'-脱氧核苷(地西他滨)或5-氮杂-胞苷形式的寡核苷酸类似物。在本发明的一个方面中，提供在长度上具有12个或更少的碱基的分离的或合成的寡核苷酸类似物，其在所述寡核苷酸类似物序列中包括一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有通式—Z-L-G—,或一G-L-Z—，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。所述寡核苷酸类似物任选地在寡核苷酸类似物序列中具有大于30%、35%或40°/。的鸟嘌呤残基。在特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物选自由下列各项组成的组5，-DpG-3'，5，-GpD-3，，5，-DpGpD-3，，5'画GpGpD-3，，5，-GpDpG-3，,5，-GpDpD-3，，5，-DpDpG-3，，5，-DpGpG-3，，5，-GpDpD-3，，5，-DpGpA-3，,5，-DpGpDpG-3，，5，-DpGpGpD-3，，5，-GpDpGpD-3，，5，-GpDpDpG-3，,5，-DpGpDpGpA-3'，其中D是地西他滨；p是磷酸接头；A是2'-脱氧腺苷,和G是2'-脱氧鸟苷。在本发明的另一个方面中，提供一种分离的或合成的寡核苷酸类似物，其包括2个或多个拷贝的具有下述通式的二核苷酸类似物—Z-L-G—,或一G-L-Z—，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。任选地，所述寡核苷酸类似物包含少于10个、8个、6个或4个拷贝的二核苷酸类似物一Z-L-G—，或一G-L-Z—。在特别的实施方案中，寡核苷酸类似物包括选自由下列各项组成的组的片段5，-DpG-3，，5'層GpD-3'，5，-DpGpD-3，，5，-GpGpD-3，，5，-GpDpG-3，，5'同GpDpD-3',5，-DpDpG-3，，5，-DpGpG-3，，5'-GpDpD-3',5,誦DpGpA-3',5，-DpGpDpG-3',5，-DpGpGpD-3，，5，-GpDpGpD-3，，5，-GpDpDpG-3，,5'-DpGpDpGpA-3',其中D是地西他滨；p是磷酸接头；A是2'-脱氧腺苷,和G是2'-脱氧鸟苷。在本发明的另一个方面中，提供在长度上具有至少6个碱基的分离的或合成的寡核苷酸类似物，其在所述寡核苷酸类似物的序列中包含一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基，并且与基因片段，优选是基因的5'-非翻译区，诸如基因的启动子，具有至少75。/。的序列同源性。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有通式—Z-L-G—,或一G-L-Z—,其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。所述寡核苷酸类似物任选地在所述寡核苷酸类似物序列中具有大于30%，35%,或40%的鸟嘌呤残基。在特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物包含选自由下列各项组成的组的片段5，-DpG-3，，5，-GpD-3，，5，-DpGpD-3，，5，-GpGpD-3，,5,-GpDpG-3，，5,-GpDpD-3，，5，-DpDpG-3，，5，-DpGpG-3,，5，-GpDpD-3,,5，-DpGpA-3，，5,-DpGpDpG醫3，，5，-DpGpGpD-3，，5'-GpDpGpD-3',5，-GpDpDpG-3，，5，-DpGpDpGpA-3，，其中D是地西他滨；p是磷酸接头;A是2'-脱氧腺苷，和G是2'-脱氧鸟苷。在本发明的另一个方面中，提供结合DNA甲基转移酶上的变构位点并且由此抑制DNA甲基转移酶的寡核苷酸类似物。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有下述序列5'-CTGGATCCTTGCCCCGCCCCTTGAATTCCC-3'(SEQIDNO:25);5'-GGGAATTCAAATGACGTCAAAAGGATCCAG-3'(SEQIDNO:26);5'-CCTACCCACCCTGGATCCTTGCCCCGCCCCTTGAATTCCCAACCCTCCAC-3，(SEQIDNO:27);5'-ATCCTTGCCCCGCCCCTTGAAT-3'(SEQIDNO:28);或5'-TTGCCCCGCCCCTT(SEQIDNO:29),其中SEQIDNOs:25-29中的至少一个胞嘧啶残基用5-氮杂-胞嘧啶取代。例如，所述寡核苷酸类似物可以是5'-CTGGATCCTTGCCCDGCCCCTTGAATTCCC-3'(SEQIDNO:30)，其中在SEQIDNO:25中的14个胞嘧啶残基在核苷酸位置15的一个用5-氮杂-胞嘧啶取代。在本发明的另一个方面中，提供一种寡核苷酸类似物，其为至少6个核苷酸长，具有至少一个5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基，并且在室温如20-25。C在水溶液如水、盐水或包含20mMHEPES(pH7),12%甘油，1mMEDTA,4mM二硫苏糖醇，0.1。/。乙基苯基聚乙二醇(Nonidet)P-40,和3mMMgCl2的缓冲液中采取发夹构象。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有下述通用的二级结构其中N是任何核苷酸；N'是与N互补的核苷酸；Z是作为碱基残基的5-氮5^~Nn-Z—Nm-HM'n——G——N'm.杂-胞嘧啶；G是作为碱基残基的鸟嘌呤；I,n,或m是整数；核苷酸Nn,Nm,N'n,和N'm位于发夹的干区；和N,位于发夹的环区。优选地，1,n,或m是大于2，3,4,或5的整数。任选地，1是2,3,4,5,或6。还任选地，如果Nn,Nm,或N,具有一个或多个胞嘧啶残基，那么所述胞嘧啶残基用5-氮杂-胞嘧啶取代。在一个特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物(SEQIDNO:31)具有下述发夹构象其中D是地西他滨，A是腺苷或2'-脱氧腺苷.,T是胸苷或2'-脱氧胸苷,和在核苷酸位置21的C任选地用5-甲基-2'-脱氧胞苷取代。在任何上述实施方案中，所述寡核苷酸类似物可以是单链的或双链的。当所述寡核苷酸类似物是双链的时，第一链是所述寡核苷酸类似物，并且第二链可以是具有与第一链互补的序列而胞嘧啶残基没有被5-氮杂-胞嘧啶取代的寡核苷酸。例如，第一链可以是5'-TTDGDGAA-3'(SEQIDNO:32)，其中D是地西他滨；而第二链可以是5'-TTCGCGAA-3'(SEQIDNO:33)。任选地，当寡核苷酸的第二链包含一个或多个胞嘧啶残基时，至少一个胞嘧啶残基被5-甲基-胞嘧啶取代。还任选地，当第一链具有5'-Z-L-G-3'片段时，第二链包含与第一链中的5'-Z-L-G-3'片段匹配的3'-G-L-C'-5'片段，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；L是共价连接Z和G或G和C'的化学接头；和C'是5-甲基-胞嘧啶。还任选地，当第一链具有5'-G-L-Z-3'片段时，第二链包含与第一链中的5'-G-L-Z-3'片段匹配的3'-C，-L-G-5'片段，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶;G是鸟嘌呤；L是共价连接Z和G或G和C'的化学接头；和C'是5-甲基-胞嘧啶。本发明还提供合成所述寡核苷酸类似物的方法和调控核酸甲基化的方法。还提供用于合成所述寡核苷酸类似物、配制并且施用这些化合物或组合物以治疗病况如癌症和血液学疾病的亚磷酰胺结构单元。参考文献结合本说明书中提及的所有公布和专利申请通过引用结合于此，其程度与单个公布或专利申请通过引用特别和单独指示结合相同。附图简述本发明的新颖特征特别在后附的权利要求中描述。通过参考下述在应用本发明原理的示例性实施方案中阐述的详细描述将获得对本发明的特征和优点的更好理解，并且其附图为图l显示地西他滨，D(la)，胞嘧啶，C(la'),和5-甲基胞嘧啶，mC(la")的结构。图2A描述地西他滨亚磷酰胺结构单元的实例。图2B描述地西他滨亚磷酰胺结构单元ld，其中R严苯氧乙酰基。图3A描述3'-和5'-0-封端的和控制孔玻璃3'-连接的地西他滨衍生物。图3B描述保护的地西他滨3'-连接到控制孔的玻璃支持物上。图4描述3'-6>-封端的地西他滨衍生物的实例。图5图示寡核苷酸合成的标准循环。图6A显示GpD二核苷酸和四核苷酸的合成方案，其中X+是平衡离子。图6B显示GpD二核苷酸(2a)和DpGpGpD四核苷酸(3b)的模式合成循环。图7显示DpGpGpD四核苷酸。图8显示GpD二核苷酸和四核苷酸的合成方案。图9显示GpDpG三核苷酸和GpDpDpG四核苷酸。图10显示3'-连接在聚(乙二醇)上的保护的地西他滨。图11显示3'-和5'-0-封端的GpD二核苷酸的合成方案。图12显示3'-和5'-0-封端的DpG二核苷酸的合成方案。图13显示具有核酸酶抗性硫代磷酸酯(phosphorthioate)连接的GpD和DpG二核苷酸。图14显示具有核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的GpDpGpD和DpGpGpD四核苷酸。图15显示具有核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的DpGpDpG和GpDpDpG四核苷酸。图16显示具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团的GpD和DpG二核苷酸。图17描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团和核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的GpD和DpG二核苷酸。图18描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团的GpDpGpD和DpGpGpD四核苷酸。图19描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团和核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的GpDpGpD和DpGpGpD四核苷酸。图20描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团的帽-0-GpD-0-帽和帽-O-DpG-O-帽二核苷酸。图21描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团和核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的帽-O-GpD-O-帽和帽-O-DpG-O-帽二核苷酸。图22描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团的DpGpDpG和GpDpDpG四核苷酸。图23描述具有胞苷脱氨酶抗性4-氨基基团和核酸酶抗性硫代磷酸酯连接的DpGpDpG和GpDpDpG四核苷酸。图24A描述具有天然磷酸二酯主链或修饰的主链的-DpG-岛。图24B描述-DpG-岛肽主链。图25示例性图示关于DNA甲基化的基于细胞的GFP测定。版a)显示对照细胞；和版b)的细胞用本发明的寡核苷酸和表达的GFP处理。图26列出特异性耙向P15、BRAC1或P16的启动子区的本发明寡核苷酸类似物的实例，其中D可以是地西他滨或地西他滨类似物，和对于天然磷酸酯连接，px=p，对于硫代磷酸酯连接，px=ps，对于硼代磷酸酯(boranophospate)，px=bp，对于甲基磷酸酉旨连接，px=mp。图27列出P15启动子区的序列以及其片段的实例，基于其可以制备富含DpG和GpD的寡核苷酸类似物。图28列出P16启动子区的序列以及其片段的实例，基于其可以制备富含DpG和GpD的寡核苷酸类似物。图29列出BRCA1启动子区的序列以及其片段的实例，基于其可以制备富含DpG和GpD的寡核苷酸类似物。图30是GpD(2a)三乙基铵盐的质谱。图31是DpG(2b)三乙基铵盐的质谱。图32是DpGpGpD(3b)三乙基铵盐的质谱。图33是GpDpG(3c')三乙基铵盐的质谱。图34是DpGpDpG(3c)三乙基铵盐的质谱。图35是硫代磷酸酯连接的DpG(2f)三乙基铵盐的质谱。图36是DpG(2b)钠盐的质谱。图37是HEG-DpG(2d)三乙基铵盐的质谱。图38是地西他滨亚磷酰胺结构单元(ld;=苯氧乙酰基)的质谱。发明详述本发明提供在寡核苷酸类似物序列中结合胞嘧啶的类似物，5-氮杂-胞嘧啶，例如，以5-氮杂-2'-脱氧胞苷(也称为地西他滨)或5-氮杂-胞苷(5-氮杂C)的形式的寡核苷酸类似物。据信，由于用地西他滨取代在甲基化的特异性位点的胞嘧啶产生不可逆的DNA甲基转移酶的失活，所以在寡核苷酸中结合一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基将具有DNA甲基化不足作用。优选地，为了更特异性地靶向人基因组的CpG岛，地西他滨结合到5'-临近鸟嘌呤残基的寡核苷酸中，以形成DpG岛。本发明目的是克服与常规甲基化不足试剂诸如地西他滨和5-氮杂-胞嘧啶相关的潜在的毒性。与随机和广泛地结合到整个基因组中的游离核苷形式比较，本发明的化合物可以作为引物，并且在复制过程中主要结合到DNA的富含CpG的岛中。优选地，本发明的化合物作为引物，并且特异性结合到治疗或诊断重要的基因如肿瘤抑制基因的启动子的富含CpG的岛中。本发明的化合物可以形成具有亲本链的暂时半甲基化的链，并且作用为DNA甲基转移酶的活性截留物(tmp)而不被结合。本发明的化合物还可以直接占据并且截留DNA甲基转移酶而不被结合到基因组中。由于DNA修饰定位在肿瘤抑制基因启动子区的富含CpG的岛，当结合本发明的化合物时，活性截留物被最佳放置，并且更大基因组的整体稳定性保持不被破坏。通过调控DNA甲基化，本发明的化合物可以用作治疗、诊断以及研究试剂，特别是在癌症和血液学疾病的领域中。许多基因如肿瘤抑制基因的异常转录沉默直接与癌症和其它疾病的发病机理相关。由于癌症-相关基因的甲基化，这些基因的表达受到抑制或完全沉默。同时，这些基因的表达是诱导转化的细胞的生长停滞、分化和/或凋亡性细胞死亡所需要的。在转化的细胞中这些基因的失活导致这些细胞的不可控制的增殖，这最终导致癌症。因此，通过使用本发明的化合物直接主动截留DNA甲基转移酶并且不结合到基因组中或者结合到这些基因的富含CpG的岛中，这些基因的转录可以通过抑制启动子的甲基化而被失活，由此导致癌细胞增殖的抑制。由于本发明化合物的一些实施方案可以与基因的5'-非翻译区或启动子序列杂交，使得夹心式和其它测定容易地建立以研究这一事实，所以本发明的化合物还可以用于研究和诊断。本发明的寡核苷酸类似物与启动子序列的杂交可以通过本领域已知的方法检测。所述方法可以包括酶与寡核苷酸类似物的缀合或非共价结合，寡核苷酸类似物的放射性标记，或任何其它适宜的检测方法。还可以制备使用这样的关于样品中基因启动子活性调控的检测方法的试剂盒。本发明还提供合成这些寡核苷酸类似物的方法和调控C-5胞嘧啶甲基化的方法。特别地，提供亚磷酰胺结构单元和含有地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷；D)、富含DpG(地西他滨-磷酸二酯连接-鸟嘌呤)的岛和衍生物的寡核苷酸。还提供制备、配制和施用这些化合物或组合物作为需要其的宿主的治疗剂的方法。下文详细描述本发明的化合物、合成方法、药物组合物的配制、容器和试剂盒制备、以及所述化合物或组合物用于治疗疾病或病况的应用。1.本发明的寡核苷酸类似物通常，本发明的寡核苷酸类似物具有结合到寡核苷酸序列中的一个或多个5-氮杂-胞嘧啶(以下简写为"Z')残基。在本发明的一个方面中，提供长度上具有12个或更少碱基的分离的或合成的寡核苷酸类似物，其在所述寡核苷酸类似物的序列中包含一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有通式—Z-L-G—，或一G-L-Z—,其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。所述寡核苷酸类似物任选地在寡核苷酸类似物序列中具有大于30%、35%或40%的鸟嘌呤残基。在特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物选自由下列各项组成的组5，-DpG-3，，5，-GpD-3，，5，-DpGpD-3，，5，-GpGpD-3，，5，-GpDpG-3，,5,-GpDpD-3，，5,-DpDpG画3'，5'-DpGpG-3',5，-GpDpD-3，，5，-DpGpA-3，，5，-DpGpDpG-3，，5，-DpGpGpD-3，，5，-GpDpGpD-3，，5，-GpDpDpG-3，，5'-DpGpDpGpA-3',其中D是地西他滨；p是磷酸接头；A是2'-脱氧腺苷,和G是2'-脱氧鸟苷。在本发明的另一个方面中，提供一种分离的或合成的寡核苷酸类似物，其包括2个或多个拷贝的具有下述通式的二核苷酸类似物一Z-L-G—，或一G-L-Z—,其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。任选地，所述寡核苷酸类似物包含少于10个、8个、6个或4个拷贝的二核苷酸类似物一Z-L-G—，或一G-L-Z—。在特别的实施方案中，寡核苷酸类似物包括选自由下列各项组成的组的片段5，-DpG-3，，5，-GpD-3，，5，-DpGpD-3，，5，-GpGpD-3，，5，-GpDpG-3，,5,-GpDpD-3，，5，-DpDpG-3，，5，-DpGpG-3，，5，-GpDpD-3，，5，-DpGpA-3，,5，-DpGpDpG-3，，5'-DpGpGpD-3',5，-GpDpGpD-3，，5，-GpDpDpG-3，,5，-DpGpDpGpA-3',其中D是地西他滨；p是磷酸接头；A是2'-脱氧腺苷,和G是2'-脱氧鸟苷。在本发明的另一个方面中，提供在长度上具有至少6个碱基的分离的或合成的寡核苷酸类似物，其在所述寡核苷酸类似物的序列中包含一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基，并且与基因片段，优选是基因的5'-非翻译区，诸如基因的启动子，具有至少75%的序列同源性。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有通式一Z-L-G—，或一G-L-Z—，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。所述寡核苷酸类似物任选地在所述寡核苷酸类似物序列中具有大于30%，35%,或40%的鸟嘌呤残基。在特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物包含选自由下列各项组成的组的片段5，-DpG-3，，5，-GpD-3，，5，-DpGpD陽3，，5，-GpGpD-3，，5，-GpDpG-3，，5'-GpDpD-3',5，-DpDpG-3，，5，-DpGpG-3，，5，-GpDpD-3'，5，-DpGpA-3，，5，-DpGpDpG-3，，5，-DpGpGpD-3，，5，-GpDpGpD_3，，5，-GpDpDpG-3',5，-DpGpDpGpA-3，，其中D是地西他滨；p是磷酸接头；A是2'-脱氧腺苷，和G是2'-脱氧鸟苷。所述基因优选的是哺乳动物基因，并且更优选地是人基因，并且最优选地是人肿瘤抑制基因。人基因的实例包括，但不限于，VHL(涉及肾细胞癌的VonHipponLandau基因)；P16/INK4A(涉及淋巴瘤)；E-钙黏着蛋白(涉及乳腺癌、甲状腺癌、胃癌的转移);hMLHl(涉及结肠癌、胃癌和子宫内膜癌中的DNA修复)；BRCA1(涉及乳腺癌和卵巢癌中的DNA修复)；LKB1(涉及结肠癌和乳腺癌)；P15/INK4B(涉及白血病如AML和ALL);ER(雌激素受体，涉及乳腺癌、结肠癌和白血病)；06-MGMT(涉及脑癌、结肠癌、肺癌和淋巴瘤中的DNA修复);GST-pi(涉及乳腺癌、前列腺癌和肾癌);TIMP-3(组织金属蛋白酶，涉及结肠癌、肾癌和脑癌转移);DAPK1(DAP激酶，涉及B-细胞淋巴瘤细胞的程序性细胞死亡);P73(涉及淋巴瘤细胞的程序性细胞死亡);AR(雄激素受体，涉及前列腺癌);RAR-卩(视黄酸受体-卩，涉及前列腺癌)；内皮缩血管肽-B受体(涉及前列腺癌);Rb(涉及成视网膜细胞瘤的细胞周期调控)；P14ARF(涉及细胞周期调控)；RASSF1(涉及信号传导)；APC(涉及信号传导)；胱天蛋白酶-8(涉及程序性细胞死亡)；TERT(涉及衰老)；TERC(涉及衰老)；TMS-1(涉及程序性细胞死亡)；SOCS-l(涉及肝癌的生长因子应答)；PITX2(肝癌乳腺癌)；MINT1;MINT2;GPR37;SDC4;MYOD1;MDR1;THBS1;PTC1;禾flpMDRl，如在Santini等.(2001)Ann.ofIntern.Med.(国际医学年刊)134:573-586中所述，其通过引用完全结合于此。这些基因的核苷酸序列可以从国家生物技术信息中心(NCBI)的网址找到。例如，肿瘤抑制基因的启动子序列，pl5,pl6,禾QBRCA1，分别显示在图27，28和29中。与p15，p16,和BRCA1片段具有至少75%的序列同源性的寡核苷酸类似物的实例分别显示在图27，28和29中。核酸领域的技术人员应该理解，测试多核苷酸与其目标多核苷酸的序列同源性程度越高，测试多核苷酸可以保持与目标多核苷酸杂交的条件的严格性越高。因此，设计靶向特异性基因的本发明的寡核苷酸类似物是那些在非常低到非常高的严格条件下与目标基因杂交的寡核苷酸类似物。对于长度上至少约100个核苷酸的寡核苷酸类似物，非常低到非常高的严格条件定义为在42。C在5XSSPE,0.3%SDS,200吗/ml剪切的和变性的鲑精DNA，以及用于非常低和低严格性的25%甲酰胺，用于中等和中高严格性的35%甲酰胺，或用于高和非常高严格性的50%甲酰胺中的预杂交和杂交，其按照标准DNA印迹方法进行。使用2XSSC，0.2%SDS将载体材料最后清洗三次，每次15分钟，优选地至少在45。C(非常低的严格性)，更优选地至少在5(TC(低严格性)，更优选地至少在55。C(中等严格性)，更优选地至少在60°C(中高严格性)，甚至更优选地至少在65°C(高严格性)，和最优选地至少在7(TC(非常高的严格性)清洗。对于长度上约50个核苷酸到约100个核苷酸的更短的寡核苷酸类似物，严格性条件定义为在低于使用按照Bolton和McCarthy(1962,尸raceW"gsAeiVa"'omz/Jc<3(iem_yo/5We"ces(美国国家禾斗学院学报)48:1390)的计算而计算出的Tm的5。C到10°C，在0.9MNaCl,0.09MTris-HClpH7.6,6mMEDTA，0.5%NP-40,1XDenhardt's溶液，1mM焦磷酸钠，1mM磷酸二氢钠，0.1mMATP,和0.2mg酵母RNA/ml中的预杂交、杂交和杂交后的清洗，其按照标准DNA印迹方法进行。在低于计算的L的5'C至ij10°C，将载体材料在6XSCC加0.1%SDS清洗一次持续15分钟，用6XSSC清洗两次每次15分钟。高严格性条件的另一个非限制性实例包括含有例如约5XSSC，0.5%SDS,100pg/ml变性的鲑精DNA和50%的甲酰胺的杂交溶液，在42。C进行。在允许，例如，小于5%bp的错配(例如，在65"在0.1%SSC和0.1%SDS中洗涤30分钟，洗涤两次)，即，选择具有95。/。或更大的序列相同性的序列的高严格性条件下清洗印迹。高严格性条件的另一个非限制性实例包括在65"C在含有30mMNaCl和0.5%SDS的水性缓冲液中的最终清洗。高严格性条件的另一个实例是在7%SDS，0.5MNaP04,pH7,1mMEDTA中在50。C杂交，例如，杂交过夜，然后在42"C用1%SDS溶液清洗一次或多次。而高严格性清洗可以允许小于5%的错配，减小的或低严格性条件可以允许达到20%的核苷酸错配。在低严格性的杂交可以按上述完成，但是使用更低的甲酰胺条件，更低的温度和/或更低的盐浓度，以及更长的温育时间。在一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸类似物能够在低严格性条件下与目标序列杂交。在更优选的实施方案中，所述寡核苷酸类似物能够在中等严格性条件下与目标基因杂交。在最优选的实施方案中，所述寡核苷酸类似物能够在高严格性条件下与目标基因杂交。在本发明的另一个方面中，提供结合DNA甲基转移酶上的变构位点并且由此抑制DNA甲基转移酶的寡核苷酸类似物。DNA甲基转移酶的抑制防止DNA甲基化，由此治疗与异常的DNA甲基化相关的疾病，诸如癌症和血液疾病。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有下述序列5，-CTGGATCCTTGCCCCGCCCCTTGAATTCCC■3,(SEQIDNO:25);5,-GGGAATTCAAATGACGTCAAAAGGATCCAG-3，(SEQIDNO邻；.5，:CCJACCCACCCTGGATCCTTGCCGGGCCCGTTGAATTCCCAA-CCCTCCAC"3'(SEQIDNO:27);5，-ATCCTTGCCCCGCCCCTTGAAT-3'(SEQIDNO:28);或5，-TTGCCCCGCCCCTT(SEQIDNO:29)，其中SEQIDNOs:25一28中的至少一个胞嘧啶残基用5-氮杂-胞嘧啶取代。例如，、所述寡核苷酸类似物可以是5'-CTGGATCCTTGCCCDGCCCCTTGAATTCCC-3'(SEQIDNO:30)，其中SEQIDNO:25中14个胞嘧啶残基中在核苷酸位置15的那个用5-氮杂-胞嘧啶取代。与DNA甲基转移酶结合的寡核苷酸的其它实例可以按照本发明进行修饰，通过取代至少一个胞嘧啶残基而修饰，所述实例可以在WO99/12027中找到，其通过引用完全结合于此。用于检测本发明的寡核苷酸类似物在结合和抑制DNA甲基转移酶活性中的活性的测定也可以在WO99/12027中找到。在本发明的另一个方面中，提供一种寡核苷酸类似物，其为至少6个核苷酸长，具有至少一个5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基，并且在室温如20-25。C在水溶液如水、盐水或包含20mMHEPES(pH7),12%甘油，1mMEDTA,4mM二硫苏糖醇，0.1%乙基苯基聚乙二醇P-40，和3mMMgCl2的缓冲液中采取发夹构象。据信，通过采取发夹构象，所述寡核苷酸类似物比单链寡核苷酸更好地模拟DNA甲基转移酶的双链DNA底物，因此更有效地抑制DNA甲基转移酶的活性。在一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有下述通用的二级结构5^Nn-Z——Nnrr"^N'3^N'n——G——N'm~\^乂或5^~Nn-G—Nm"^N,3LN'n—Z—N'm、>其中N是任何核苷酸；N'是与N互补的核苷酸；Z是作为碱基残基的5-氮杂-胞嘧啶；G是作为碱基残基的鸟嘌呤；1,n,或m是整数；核苷酸Nn，Nm，N'n，和N'm位于发夹的干区；和N,位于发夹的环区。优选地，1,n,或m是大于2，3，4,或5的整数。任选地，1是2,3,4,5，或6。还任选地，如果Nn,Nm,或N,具有一个或多个胞嘧啶残基，所述胞嘧啶残基用5-氮杂-胞嘧啶取代。在一个特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物具有下述通用的二级结构5'~~Nn~ZG——Nm~//~~^N,3'~N'n—GC'——N'm、」^~~^或5'~Nn~C'G—Nm^"~\！3'~N'n—GZ-N'm、」其中C'是5-甲基-胞嘧啶。在另一个特别的实施方案中，所述寡核苷酸类似物(SEQIDNO:31)具有下述发夹构象其中D是地西他滨，A是腺苷或2'-脱氧腺苷，T是胸苷或2'-脱氧胸苷，和在核苷酸位置21的C任选地用5-甲基-2'-脱氧胞苷取代。在任何上述实施方案中，所述寡核苷酸类似物可以是单链的或双链的。当所述寡核苷酸类似物是双链的时，第一链是所述寡核苷酸类似物，并且第二链可以是具有与第一链互补的序列而胞嘧啶残基没有被5-氮杂-胞嘧啶取代的寡核苷酸。例如，第一链可以是5'-TTDGDGAA-3'(SEQIDNO:32)，其中D是地西他滨；而第二链可以是5'-TTCGCGAA-3'(SEQIDNO:33)。任选地，在第一链或第二链中的至少一个胞嘧啶残基可以用5-甲基-胞嘧啶取代。在任何上述实施方案中，在Z和G残基之间或在所述寡核苷酸类似物的任意两个碱基残基之间的接头优选地是糖磷酸二酯连接。优选地所述接头是通过2'-脱氧核糖或核糖的磷酸二酯连接，分别如同在DNA和RNA中的天然糖磷酸二酯主链。任选地，为了增强对体内核酸酶降解的抗性，天然磷酸二酯接头一0-P(0)(0')-0-CH2—可以被修饰成硫代磷酸酯接头—0-P(=0)(S-)-0-CH2—，硼代磷酸酯或甲基磷酸酯接头；核糖的2'-羟基基团可以被修饰成2'-甲氧基基团，2'-甲氧基乙基基团，或2'-氟基团。具有非天然主链的这样的寡核苷酸类似物的实例在图24A中显示，其中地西他滨通过核糖磷酸主链与鸟嘌呤连接。还任选地，天然糖磷酸二酯主链可以用蛋白质核苷酸(PNA)主链替代，其中所述主链由通过肽键连接的重复N-(2-氨基乙基)-甘氨酸单位形成。具有PNA主链的这样的寡核苷酸类似物的实例在图24B中显示，其中5-氮杂-胞嘧啶通过PNA主链与鸟嘌呤连接。在美国专利号6，900,540和6,900,301中描述了设计成比天然的更加抗核酸酶降解的用于寡核苷酸的其它类型的接头，所述专利通过引用结合于此。本发明的寡核苷酸类似物可以是从生物来源如组织、细胞和体液分离的那些，并且优选地纯化到基本的纯度等级，更优选地至少80%的纯度，并且最优选至少95%的纯度。所述寡核苷酸类似物还可以是合成的那些，其是包含5-氮杂-胞苷的非天然存在的寡核苷酸，例如，在体外化学或酶促合成的。本发明的寡核苷酸类似物包括任何药用盐、酯、或所述酯的盐、或任何其它的化合物，当施用给动物包括人时，其能够提供(直接或间接地)生物活性代谢物或其残基。因此，例如，本发明公开内容还涉及本发明的化合物的前体药物(prodrugs)和药用盐，所述前体药物的药用盐，及其它生物等价物。术语"前体药物"指以无活性形式制备的治疗剂，所述无活性形式在体内或其细胞内通过内源酶或其它化学品和/或条件的作用可以转化成活性形式(即，药物)。特别地，本发明的寡核苷酸类似物的前体药物形式可以这样制备，通过按照于1993年12月9日公布的Gosselin等的WO93/24510，或在Imbach等的WO94/26764和美国专利号5,770,713中公开的方法，使用含有羧基基团的有机化合物，或作为SATE[(S-乙酰基-2-硫代乙基)磷酸酯]衍生物，与在糖环中的任意羟基基团形成一个或多个酯键而制备。术语"药用盐"指本发明的化合物的生理和药用盐即，保留亲本化合物的需要的生物活性并且没有对其赋予不需要的毒物学作用的盐。药用碱加成盐用金属或胺诸如碱和碱土金属或有机胺形成。用作阳离子的金属的实例是钠、钾、镁、钙等。适当的胺的实例是N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因(参见，例如，Berge等，"PharmaceuticalSalts(药物盐)，"J.ofPharmaSci.(药学科学杂志)，1977,66,1-19)。所述酸式化合物的碱加成盐通过将游离的酸形式与足够量的需要的碱接触从而以常规方式产生所述盐而制备。所述游离酸形式可以通过将所述盐形式与酸接触并且以常规方式分离游离酸而再生。游离酸形式与它们各自的盐形式在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性稍微不同，但是另外为了本发明的目的，所述盐等价于它们各自的游离酸。当用在本文时，"药物添加盐"包括本发明的组合物的一种成分的酸性形式的药用盐。这些包括胺的有机或无机酸盐。优选的酸式盐是盐酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、硝酸盐和磷酸盐。其它适当的药用盐是本领域的技术人员公知的，并且包括各种无机和有机酸的碱式盐，诸如，例如，使用无机酸，诸如例如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸；使用有机羧酸、磺酸、硫代酸或膦酸或N-取代的氨基磺酸，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、延胡索酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酸基苯甲酸、embonicacid、烟酸或异烟酸；和使用氨基酸，诸如涉及天然蛋白质合成的20种a-氨基酸，例如，谷氨酸或天冬氨酸，并且还使用苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙垸-l,2-二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、2-或3-磷酸甘油酯、葡萄糖-6-磷酸，N-环己基氨基磺酸(形成cyclamates)、或使用其它酸性有机化合物，诸如抗坏血酸。化合物的药用盐还可以用药用阳离子制备。适当的药用阳离子是本领域的技术人员公知的，并且包括碱、碱土、铵和季铵阳离子。碳酸盐或碳酸氢盐也是可以的。对于本发明的寡核苷酸类似物，优选的药用盐的实例包括但不限于，(a)用阳离子形成的盐，阳离子例如钠、钾、铵、镁、钙、聚胺如精胺和亚精胺，等；(b)用无机酸形成的酸加成盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等；(c)与有机酸形成的盐，有机酸诸如例如，乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、延胡索酸、葡糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、褐藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对-甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等；和(d)由基本的阴离子如氯、溴和碘形成的盐。本发明还包括分离的化合物。分离的化合物是指代表在混合物中存在的化合物的至少10%,优选地20%,更优选地50%和最优选地80%的化合物，并且当在生物测定如结合的亚硫酸氢盐限制性分析或COBRA(Xiong,Z.;Laird,RW.NucleicAcidsRes.(核酸研究)1997,25,2532-2534)以及放射性标记的甲基结合测定(Francis，K.T.;Thompson,R.W.;Krumdieck，C.L.Am.J.Clin.Nutr.(美国临床营养学杂志)1977，30,2028-2032)中检测时，表现出可检测的(即，统计学显著的)DNA甲基化的抑制活性。2.本发明的药物制剂按照本发明，本发明的寡核苷酸类似物或化合物可以配制成用于治疗各种疾病和病况的药用组合物。本发明的药用组合物包括一种或多种本发明的化合物，其与一种或多种在本文中笼统叫作"载体"物质的无毒的、药用的载体和/或稀释剂和/或佐剂和/或赋形剂缔合，，并且如果需要还包含其它活性成分。本发明的化合物通过任何途径施用，优选地适合这样的途径的药物组合物的形式，如在下文举例说明，并且取决于要治疗的病况。例如，所述化合物和组合物可以通过口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、经颊、鼻内、脂质体、通过吸入、阴道、眼内、通过局部递送(例如通过导管或斯滕特印模(stent))、皮下、脂肪内(intraadiposally)、关节内、或鞘内施用。所述药物制剂可以任选地进一步包含赋形剂，其以足以增强所述组合物的稳定性，将产物保持在溶液中，或者防止与本发明制剂的施用相关的副作用(例如，潜在的溃疡、血管发炎或外渗)的量添加。赋形剂的实例包括，但不限于，甘露醇，山梨糖醇，乳糖，葡萄糖(dextrox)，环糊精诸如a-、卩-和Y-环糊精，和修饰的、无定形的环糊精，诸如羟丙基-、羟乙基-、葡糖基-、麦芽糖基-、麦芽三糖基-、羧基酰胺甲基-、羧基甲基-、硫代丁基醚-、和二乙基氨基-取代的a-、P-和"环糊精。环糊精诸如来自杨森制药(JanssenPharmaceuticals)的Encapsin⑧或等价物可以用于这一目的。对于口服施用，所述药物组合物可以以，例如，片剂、胶囊、混悬液或液体形式存在。药物组合物优选地以包含治疗有效量的活性成分的剂量单位形式制备。所述剂量单位的实例是片剂和胶囊。对于治疗目的，除了活性成分之外，所述片剂和胶囊可以包含常规载体，诸如粘合剂，例如，阿拉伯树胶、明胶、聚乙烯吡咯垸酮、山梨糖醇或西黄蓍胶；填料，例如，磷酸钙、甘氨酸、乳糖、玉米淀粉、山梨糖醇或蔗糖；滑润剂，例如，硬脂酸镁、聚乙二醇、二氧化硅或滑石；崩解剂，例如，马铃薯淀粉、调味料或着色剂，或可接受的湿润剂。口服液体制剂通常以水性或油性溶液、混悬液、乳液、糖浆或酏剂的形式存在，其可以包含常规的添加剂，诸如混悬剂、乳化剂、非水性剂、防腐剂、着色剂和调味剂。用于液体制剂的添加剂的实例包括阿拉伯树胶、杏仁油、乙醇、分馏的椰子油、明胶、葡萄糖糖浆、甘油、氢化的食用脂肪、磷脂酰胆碱、甲基纤维素、甲基或丙基对羟基苯甲酸酯、丙二醇、山梨糖醇或山梨酸。对于局部应用，本发明的化合物还可以以用于皮肤或鼻和喉粘膜的适当形式制备，并且可以采取乳膏、油膏、液体喷雾剂或吸入剂、锭剂、或喉咙涂剂的形式。这样的局部制剂还可以包括化学化合物，诸如二甲亚砜(DMSO)，以促进活性成分的表面渗透。对于应用到眼或耳，本发明的化合物可以以配制在疏水或亲水基质如油膏、乳膏、洗液、涂剂或散剂中的液体或半液体形式存在。对于直肠施用，本发明的化合物可以以与常规载体如可可油、蜡或其它甘油酯混合的栓剂形式施用。备选地，本发明的化合物可以散剂形式存在，其在递送时在适当的药用载体中重构。药物组合物可以通过注射施用。肠胃外施用的制剂可以是水性或非水性等渗无菌注射溶液或混悬液的形式。这些溶液或混悬液可以由具有一种或多种提及的载体的无菌散剂或粒剂制备，以用于口服施用的制剂。所述化合物可以溶解在聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、苯甲醇、氯化钠和/或各种缓冲剂中。本发明的寡核苷酸类似物可以制备和配制成乳剂。乳剂是一种液体以通常直径超过0.1pm的小滴分散在另一种液体中的典型异相的系统。(Idson,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中,Lieberman,Rieger和Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第199页；Rosoff,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中,Lieberman,Rieger和Banker(Eds.)，1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第245页；Block,在PharmaceuticalDosageForms(药物齐U型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第2巻，第335页；Higuchi等，inRemington'sPharmaceuticalSciences(Remington药物科学),MackPublishingCo.,Easton,Pa"1985，第301页)。乳剂通常是包含相互均匀混合和分散的两种不混溶液体相的两相系统。通常，乳剂可以是油包水(w/o)或水包油(o/w)禾中类。当水相精细地分配到并且以微小的小滴分散到大量的油相中时，得到的组合物叫作油包水(w/o)乳剂。备选地，当油相精细地分配到并且以微小的小滴分散到大量的水相中时，得到的组合物叫作水包油(o/w)乳剂。除了分散相和活性药物以外，乳剂可以含有其它成分，所述活性药物可以作为在水相、油相中的溶液或本身作为分离相而存在。当需要时，药物赋形剂诸如乳化剂、稳定剂、染料和抗氧化剂还可以存在于乳剂中。药物乳剂还可以是包含多于两相的多重乳剂，诸如例如，在油包水包油(o/w/o)和水包油包水(w/o/w)乳剂的情形中。这样复合的制剂通常提供简单二元乳剂不能提供的某些优点。其中o/w乳剂的单个油滴包含小水滴的多重乳剂构成w/o/w乳剂。同样地，在连续的油相中稳定的包含在水珠中的油滴的系统提供o/w/o乳剂。乳剂特征在于几乎没有或没有热动力学稳定性。通常，乳剂的分散或不连续相充分分散在外部或连续相中，并且通过乳化剂或制剂的粘度方式保持在这种形式中。乳剂的每一相可以是半固体或固体，如在乳剂类型的油膏基质和乳膏情形中。稳定乳剂的其它方式需要使用乳化剂，所述乳化剂可以结合到乳剂的任一相中。乳化剂可以广泛地分成四类合成的表面活性剂，天然存在的乳化剂，吸收基质和精细分散的固体(Idson,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.)，1988，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第199页)。合成的表面活性剂(surfactants),也叫作表面活性试剂，已经在乳剂制剂中发现广泛的应用，并且已经在文献中评论(Rieger,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.)，1988,MarcelDekker,Inc.，纽约，纽约，第1巻，第285页；Idson,在PharmaceuticalDosageForms(药物齐ll型)中,Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.)，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，1988，第1巻，第199页)。表面活性剂是典型地两亲性的，并且包括亲水和疏水部分。表面活性剂亲水与疏水性质的比例叫作亲水/亲脂平衡(HLB)，并且是在制备制剂中分类和选择表面活性剂的有价值的工具。基于亲水基团的性质，表面活性剂可以分类为不同的种类非离子型、阴离子型、阳离子型和两性的(Rieger,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.)，1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第285页)。用于乳剂配制的天然存在的乳化剂包括羊毛脂、蜂蜡、磷脂、磷脂酰胆碱和阿拉伯树胶。吸收基质具有亲水性质，以致它们可以吸收水形成w/o乳剂而保留它们的半固体一致性，诸如无水羊毛脂和亲水矿脂。精细分开的固体也用作良好的乳化剂，特别是与表面活性剂结合并且用在粘性制剂中。这些包括极性无机固体，诸如重金属氢氧化物、不溶胀的粘土，诸如膨润土，绿坡缕石，水辉石，高岭土，蒙脱石(mo血orillonite),胶体硅酸铝和胶体硅酸铝镁，颜料和非极性固体，诸如碳或三硬脂酸甘油酯。多种非乳化物质也包含在乳剂制剂中，并且构成乳剂的特性。这些包括脂肪、油、蜡、脂肪酸、脂肪醇、脂肪酯、保湿剂、亲水胶体、防腐剂和抗氧化剂(Block,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.)，1988，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第335页；Idson,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第199页)。亲水胶体或水状胶体包括天然存在的树胶和合成的聚合物，诸如聚糖(例如，阿拉伯树胶、琼脂、褐藻酸、角叉藻聚糖、瓜耳胶、刺梧桐树胶和西黄蓍胶)，纤维素衍生物(例如，羧甲基纤维素和羧丙基纤维素)，和合成的聚合物(例如，卡波姆，纤维素醚，和羧基乙烯基聚合物)。这些分散或膨胀在水中，形成胶体溶液，所述胶体溶液通过形成围绕分散的相小滴的强界面薄膜和通过增加外相的粘度而稳定乳剂。由于乳剂通常包含许多成分，诸如可以容易地支持微生物生长的碳水化合物、蛋白质、固醇和磷脂，这些制剂通常结合防腐剂。包含在乳剂制剂中通常所用的防腐剂包括羟苯甲酯，羟苯丙酯，季铵盐，苯扎氯铵，对-羟基苯甲酸酯，和硼酸。通常也将抗氧化剂加入到乳剂制剂中，以防止制剂变质。所用的抗氧化剂可以是游离自由基清除剂，诸如生育酚，烷基掊酸盐，丁基化羟基苯甲醚，丁基化羟基甲苯，或还原剂，诸如抗坏血酸和焦亚硫酸氢钠，和抗氧化剂增效剂，诸如柠檬酸，酒石酸和磷脂酰胆碱。乳剂制剂通过皮肤、口服和肠胃外途径的应用和它们的制备方法已经在文献中综述(Idson,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.)，1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第199页)。由于配制容易、吸收有效和生物利用度的观点的原因，用于口服递送的乳剂制剂已经非常广泛地应用。(Rosoff,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.),1988，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第245页；Idson，在PharmaceuticalDosageForms(药物齐l(型)中，Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.，纽约，纽约，第1巻，第199页)。矿物油基质泻药、油溶维生素和高脂肪营养制剂是通常作为oAv乳剂口服施用的物质之一。在本发明的一个实施方案中，所述寡核苷酸类似物配制成微乳。微乳可以定义为水、油和两亲性系统，其是单一光学各向同性的和热动力学稳定的液体溶液(Rosoff,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman，Rieger和Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第245页)。典型地，微乳是通过首先将油分散在表面活性剂水溶液中，然后加入足够量的第四成分，通常是中等链长度的醇，以形成透明系统而制备的系统。因此，微乳还被描述为两种不可混溶的液体的热动力学稳定的、各向同性清澈的分散液，其通过表面活性分子的界面薄膜而稳定(Leung禾口Shah，在ControlledReleaseofDrugs:PolymersandAggregateSystems(药物的控制性释放聚合物合聚集系统)，Rosoff,M.,Ed.,1989，VCH出版社，纽约，第185-215页)。微乳通常通过将包括油、水、表面活性剂、辅助表面活性剂和电解质的三到五种成分组合而制备。所述微乳是油包水(w/o)还是水包油(o/w)类型取决于所用的油和表面活性剂的性质，并且取决于表面活性剂分子的极性头和烃尾的结构和几何学包装(Schott，在Remington'sPharmaceuticalSciences(Remington药物禾斗学)中,Mack出版公司，Easton,Pa.,1985,第271页)。应用相图的现象学方法已经得到广泛研究，并且已经对本领域的技术人员产生怎样配制微乳的全面知识(Rosoff，在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman，Rieger禾卩Banker(Eds.),1988,MarcelDekker，Inc.,纽约，纽约，第1巻，第245页；Block,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，Lieberman,Rieger和Banker(Eds.)，1988，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第335页)。与常规乳剂相比，微乳提供使水不溶性药物溶解在自动形成的热动力学稳定的小滴中的优点。在制备微乳中所用的表面活性剂包括，但不限于，离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、Brij96、聚氧乙烯油基醚，聚甘油脂肪酸酯，四甘油单月桂酸酯(ML310)，四甘油单油酸酯(MO310)，六甘油单油酸酯(PO310),六甘油五油酸酯(P0500),十甘油单癸酸酯(MCA750),十甘油单油酸酯(M0750)，decaglycerolsequioleate(SO750),十甘油十油酸酯(DAO750),单独的或与辅助表面活性剂组合。所述辅助表面活性剂，通常是短链的醇，诸如乙醇、l-丙醇、和l-丁醇，作用为增加界面的流动性，其通过渗透到表面活性剂膜中并且由于在表面活性剂分子中产生的空空间因此产生无序的薄膜而增加界面的流动性。然而，微乳可以不使用辅助表面活性剂制备，并且不含醇的自我乳化的微乳系统是本领域公知的。水相典型地可以是，但不限于，水、药物的水性溶液，甘油、PEG300、PEG400、聚甘油、丙三醇、和乙二醇的衍生物。油相可以包括，但不限于，下述物质诸如Captex300、Captex355、CapmulMCM、脂肪酸酯、中等链(C8-C12)的单、二和三-甘油酯、聚氧乙烯化甘油脂肪酸酯、脂肪醇、聚乙二醇化甘油酯、饱和的聚乙二醇化C8-C10甘油酯、植物油和硅油。从药物溶解性和增强的药物吸收的观点来看，微乳特别令人感兴趣。已经提议基于脂质的微乳(o/w和w/o)提高药物的口服生物利用度，所述药物包括肽(Constantinides等，PharmaceuticalResearch(药学研究)，1994,11，1385-1390;Ritschel,Meth.Find.Exp.Clin.Pharmacol.(实验临床药学方法和发现)，1993,13，205)。由于表面活性剂诱导的膜流动性和渗透性的改变，制备的容易性，固体剂型口服施用的容易性，提高的临床功效，和减小的毒性(Constantinides等，PharmaceuticalResearch(药学研究)，1994，11，1385;Ho等，J.Pharm.Sci.(药学科学杂志),1996,85,138-143)，微乳提供提高的药物溶解性、保护药物免受酶水解、药物吸收的可能的提高的优点。当它们的成分在环境温度下混合在一起时，微乳通常可以自发形成。当配制不耐热的药物、肽或寡核苷酸时，这可能是特别有利的。微乳还在化妆品和药物应用中有效地透皮递送活性成分。预计本发明的微乳组合物和制剂将促进从胃肠道对寡核苷酸和核酸的增加的系统吸收，以及提高寡核苷酸和核酸在胃肠道、阴道、口腔和其它施用区域的局部细胞吸收。本发明的微乳还可以含有其它成分和添加剂，诸如失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Gri13)、Labrasol，和渗透增强剂，以改善所述制剂的性质，并且提高本发明的寡核苷酸和核酸的吸收。在本发明的微乳中所用的渗透增强剂可以分类为属于五大类中的一种表面活性剂、脂肪酸、胆酸盐、螯合剂、和非螯合非表面活性剂(Lee等，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems(治疗药物载体系统中的重要评述)，1991,第92页)。这些种类的每一种已经在上文讨论。除了微乳之外，存在许多已经研究过并且用于配制药物的有序的表面活性剂结构。这些包括单层、微团、双层和小泡。从药物递送观点看来，小泡，诸如脂质体，由于它们提供的它们的特异性和作用的持久性，已经吸引了极大的兴趣。当用在本发明中时，术语"脂质体"意指由以球形双层或多个双层排列的两亲性脂质组成的小泡。脂质体是单层的或多层的小泡，其具有由亲脂性物质形成的膜和水性的内部。所述水性部分包含要递送的组合物。阳离子脂质体具有能够融合到细胞壁上的优点。非阳离子脂质体，尽管不能有效地与细胞壁融合，但是在体内被巨噬细胞吸收。为了穿过完整的哺乳动物皮肤，在适当的透皮梯度的影响下，脂质小泡必须通过一系列细小的孔，每个孔直径小于50nm。因此，理想地使用高度可变形的并且能够通过这样的细孔的脂质体。脂质体的其它优点包括从天然磷脂获得的脂质体是生物相容的和生物可降解的；脂质体可以结合宽范围的水和脂质可溶的药物；脂质体可以保护包封在它们的内部区室中的药物免受代谢和降解(Rosoff,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中,Lieberman,Rieger禾口Banker(Eds.),1988,MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，第1巻，第245页)。在制备脂质体制剂中的重要考虑是脂质表面电荷、小泡大小和脂质体的水性体积。脂质体用于将活性成分转移并且递送到作用位点。由于脂质体膜在结构上与生物膜相似，故当将脂质体用于组织时，脂质体开始与细胞膜融合。当脂质体和细胞的融合发展时，脂质体内容物全部倒入活性剂可以作用的细胞中。脂质体制剂己经成为关于许多药物的递送模式的广泛研究的焦点。存在增长的证据表明，对于局部施用，脂质体与其它制剂相比，存在一些优点。这样的优点包括减少的与施用药物的高系统吸收相关的副作用，增加的施用药物在需要的靶点的积聚，和将宽泛种类的药物包括亲水性的和疏水性的药物施用到皮肤内的能力。脂质体分成两大类。阳离子脂质体是带正电荷的脂质体，其与带负电荷的DNA分子相互作用形成稳定的复合物。带正电荷的DNA/脂质体复合物与带负电荷细胞的表面结合，并且内含在内体中。由于在内体中的酸性pH，脂质体破裂，将它们的内含物释放到细胞质中(Wang等,Biochem.Biophys.Res.Commun.(生物化学和生物物理学研究通讯)，1987,147,980-985)。pH-敏感性或带负电荷的脂质体捕获DNA而不是与DNA复合。由于DNA和脂质都带相似的电荷，所以发生排斥而不是形成复合物。然而，一些DNA被捕获在这些脂质体的水性内部。pH-敏感的脂质体己经用于将编码胸苷激酶基因的DNA递送到培养物的细胞单层中。在耙细胞中检测到这些内源基因的表达(Zhou等，JournalofControlledRelease(控制的释放杂志)，1992,19,269-274)。除了天然来源的磷脂酰胆碱之外，一种主要类型的脂质体组合物包含磷脂。例如，中性脂质体组合物可以由二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)或二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)形成。阴离子脂质体组合物通常由二肉豆蔻酰磷脂酰甘油形成，而阴离子融合脂质体主要由二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)形成。另一种类型的脂质体组合物由磷脂酰胆碱(PC)诸如例如大豆PC和卵PC形成。另一种类型由磷脂和/或磷脂酰胆碱和/或胆固醇的混合物形成。已经检验了非离子型脂质体系统，特别是包含非离子型表面活性剂和胆固醇的系统，以确定它们在将药物递送到皮肤中的用途。包含novasomeTM.I(甘油二月桂酸酯/胆固醇/聚氧乙烯-10-硬脂酰醚)和Novasome.TM.II(甘油二硬脂酸酯/胆固醇/聚氧乙烯-10-硬脂酰醚)的非离子型脂质体制剂用于将环孢素A递送到小鼠皮肤的真皮中。结果表明，所述非离子型脂质体系统有效促进环孢素A在不同皮肤层中的沉积(Hu等.S.T.P.Pharma.Sci.(S.T.P.药物科学〉,1994,4,6,466)。脂质体还包括"空间稳定的"脂质体，其为当用于本文时是指包含一种或多种专门的脂质的脂质体的术语，所述专门的脂质当结合到脂质体中时引起相对于缺少这样的专门的脂质的脂质体提高的循环寿命。空间稳定的脂质体的实例是下述中的那些，其中脂质体的部分小泡-形成脂质部分(A)包含一种或多种糖脂，诸如单唾液酰神经节苷脂G.sub.Ml，或(B)是用一种或多种亲水聚合物如聚乙二醇(PEG)部分衍生的。尽管不希望受到任何具体理论的束缚，但是在本领域中认为，至少对于包含神经节苷脂、鞘磷脂或PEG-衍生的脂质的空间稳定的脂质体，这些空间稳定的脂质体的提高的循环半衰期来源于网状内皮系统(RES)细胞的减少的吸收(Allen等，FEBSLetters(FEBS通信),1987，223，42;Wu等，CancerResearch(癌症研究),1993，53，3765)。包含一种或多种糖脂的各种脂质体是本领域公知的。Papahadjopoulos等(Ann.N.Y.Acad.Sci.(纽约科学院年刊)，1987,507,64)报道了单唾液酰神经节苷脂Gsub.Ml、硫酸半乳糖脑苷脂和磷脂酰肌醇提高脂质体的血液半衰期的能力。Gabizon等(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(美国国家科学院学报)，1988，85,6949)对这些发现进行了详细阐释。Allen等的美国专利号4,837,028和WO88/04924，公开了包含(1)鞘磷脂和(2)神经节苷脂G.sub.Ml或半乳糖脑苷脂硫酸酯的脂质体。美国专利号5,543,152(Webb等)公开了包含鞘磷脂的脂质体。WO97/13499(Lim等)中公开了包含1，2-sn-二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的脂质体。包含用一种或多种亲水聚合物衍生的脂质的许多脂质体以及制备其的方法，在本领域内是已知的。Sunamoto等(Bull.Chem.Soc.Jpn.(日本化学学会公告)，1980,53,2778)描述了包含含有PEG部分的非离子型去污剂2C,sub.1215G的脂质体Jllum等(FEBSLett.(FEBS通信)，1984，167，79)注意到使用聚合的甘油亲水性包被聚苯乙烯颗粒导致显著提高的血液半衰期。Sears(美国专利号4,426,330和4，534,899)描述了通过连接聚亚垸基二醇(例如，PEG)的羧基基团而修饰合成的磷脂。Klibanov等(FEBSLett(FEBS通信)，1990，268，235)描述了证明包含用PEG或PEG硬脂酸酯衍生的磷脂酰乙醇胺(PE)的脂质体在血液循环半衰期中有显著提高的实验。Blume等(BiochimicaetBiophysicaActa，1990,1029,91)将这样的观察扩大到其它PEG-衍生的磷脂，例如，DSPE-PEG，其由二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)和PEG的组合形成。在其外表面具有共价结合的PEG部分的脂质体在授予Fisher的欧洲专利号EP044531Bl和WO90/04384中描述。Woodle等(美国专利号5,013,556和5,356,633)和Martin等(美国专利号5,213,804和欧洲专利号EP0496813Bl)描述了包含1-20摩尔百分数的用PEG衍生的PE的脂质体组合物及其使用方法。包含许多其它脂质-聚合物缀合物的脂质体在WO91/05545和美国专利号5,225,212(二者都授予Martin等)中和在WO94/20073(zalipsky等)中公开。包含PEG-修饰的神经酰胺脂质的脂质体在WO96/10391(Choi等)中描述。美国专利号5，540，935(Miyazaki等)和5,556,948(Tagawa等)描述了含有PEG的脂质体，其可以在其表面上用官能部分进一步衍生。在本领域内已知有限数量的含有核酸的脂质体。Thierry等的WO96/40062公开了将高分子量的核酸包封在脂质体中的方法。Tagawa等的美国专利号5,264,221公开了蛋白质结合的脂质体，并且断言这样的脂质体的内含物可以包括反义RNA。Rahman等的美国专利号5,665,710描述了将寡脱氧核苷酸包封在脂质体中的方法。Love等的WO97/04787公开了包含靶向raf基因的反义寡核苷酸的脂质体。转运体(transfersome)是另一种类型的脂质体，并且是高度可变形的脂质聚集物，其是引人注意的用于药物递送赋形剂的候选物。转运体可以描述为脂质小滴，其高度可变形，以致它们能够容易地透过比所述小滴小的孔。转运体能够适应它们应用的环境，例如，它们自我-最优化(适合皮肤中孔的形状)，自我修复，通常没有断裂地到达它们的靶点，并且通常自我-负荷。为了制备转运体，可以将表面边缘-激活剂，通常是表面活性剂加入到标准的脂质体组合物中。转运体已经用于将血清白蛋白递送到皮肤。已经表明转运体介导的血清白蛋白的递送如皮下注射含有血清白蛋白的溶液一样有效。表面活性剂在制剂如乳剂(包括微乳)和脂质体中有广泛的应用。分类并且排列天然的和合成的许多不同类型的表面活性剂的性质的最常用的方法是应用亲水性/亲脂性平衡(HLB)。亲水性基团(也叫作"头")的性质提供将制剂中所用的不同表面活性剂分类的最有用的方式(Rieger,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，MarcelDekker，Inc.，纽约，纽约，1988,第285页)。如果表面活性剂分子不是离子化的，那么将它分类为非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂在药物和化妆品产品中有广泛的应用，并且适用于宽范围的pH值。通常，它们的HLB值在2到约18之间，这取决于它们的结构。非离子型表面活性剂包括非离子型酯，诸如乙二醇酯、丙二醇酯、甘油酯、聚甘油酯、失水山梨糖醇酯、蔗糖酯和乙氧基化的酯。非离子型链垸醇酰胺和醚，诸如脂肪醇乙氧基化物、丙氧基化醇、和乙氧基化/丙氧基化嵌段聚合物也包含在这一类中。聚氧乙烯表面活性剂是非离子型表面活性剂种类中最常见的成员。如果当它溶解或分散在水中时表面活性剂分子携带负电荷，那么将所述表面活性剂分为阴离子型。阴离子表面活性剂包括羧酸盐，如皂、酰基乳酸酯(acyllactylate)、氨基酸的酰基酰胺，硫酸的酯，如烷基硫酸酯和乙氧基化烷基硫酸酯，磺酸酯，如垸基苯磺酸酯、酰基羟乙基磺酸酯、酰基牛磺酸酯和磺基琥珀酸酯，以及磷酸酯。阴离子表面活性剂种类中最重要的成员是烷基硫酸酯和皂。如果当它溶解或分散在水中时表面活性剂分子携带正电荷，那么将所述表面活性剂分为阳离子型。阳离子表面活性剂包括季铵盐和乙氧基化胺。季铵盐是这一种类中最常用的成员。如果表面活性剂分子具有携带正电荷或负电荷的能力，那么将所述表面活性剂分为两性型。两性表面活性剂包括丙烯酸衍生物、取代的垸基酰胺、N-垸基甜菜碱和磷酯。己经综述了表面活性剂在药物产品、制剂和乳剂中的应用(Rieger,在PharmaceuticalDosageForms(药物剂型)中，MarcelDekker,Inc.,纽约，纽约，1988，第285页)。在一个具体的实施方案中，本发明的化合物可以配制成包含溶解在非水性溶剂中的化合物的药用组合物，所述非水性溶剂包括甘油、丙二醇、聚乙二醇或它们的组合。据信所述化合物在这样的药物制剂中是稳定的，以致所述药物制剂可以在使用之前储存延长的时间阶段。在目前使用地西他滨的临床治疗中，为了将药物分解减小到最小，地西他滨以冻干的散剂提供，并且在含有溶剂如WFI的至少40%体积的水的冰冷的水性溶液中重构，并且在施用前稀释在冰冷的输注流体中。这样的制剂和治疗方案遭受一些缺陷。首先，将地西他滨冷冻在冰冷的溶液中变得重要，与可以在更高温度保持储存的制剂相比，这在处理上是繁琐的，并且在经济上更不理想。其次，由于地西他滨在水性溶液中快速分解，如果溶液已经在冰箱中保存了不到7小时，重构的地西他滨溶液只可以持续最多3小时输注给患者。另外，冰冷流体的输注可能对患者带来更大的不适和疼痛，这诱导了患者对这样的治疗方案的抵触性。通过修饰地西他滨的三嗪环和/或核糖环，并且用非水性溶剂配制所述化合物，药物制剂可以克服上文列出的与目前使用地西他滨的临床治疗相关的问题。据信，本发明化合物的这些制剂比在含有溶剂的至少40%体积的水的水性溶液中配制的地西他滨在化学上更加稳定。在一个优选的实施方案中，本发明的制剂含有在溶剂中少于40%的水，任选地在溶剂中少于20%的水，任选地在溶剂中少于10%的水，或任选地在溶剂中少于1%的水。在一种变化中，所述药物制剂以基本上无水的形式储存。任选地，可以将干燥剂加入到所述药物制剂中以吸收水分。由于提高的稳定性，本发明的制剂可以在环境温度下保存和运输，由此显著减少处理所述药物的成本。此外，本发明的制剂可以在施用给患者之前便利地长时间储存。另外，本发明的制剂可以用常规输注流体稀释(无需冷冻)，并且在室温下施用给患者，由此避免给患者带来与冰冷流体的输注相关的不适。在另一个实施方案中，将本发明的化合物以不同浓度溶解在甘油中。例如，所述制剂可以任选地在每ml甘油中包含0.1到200之间；1到100之间；l到50之间；2到50之间；2至(Jl00之间；5妾ljl00之间；10到100之间或20到100mg之间的本发明化合物。每甘油浓度的本发明化合物的具体实例包括但不限于2,5，10,20,22,25,30,40和50mg/ml。不同等级的甘油(glycerin)(同义词1,2，3-丙三醇；甘油(glycerol);乙二醇(glycolalcohol);无水甘油)可以用于制备所述制剂。优选地，使用具有高于90%化学纯度的甘油配制所述制剂。在另一个实施方案中，将本发明的化合物以不同浓度溶解在丙二醇中。例如，所述制剂可以任选地在每ml丙二醇中包含O.l到200之间；0,1到100之间；0.1到50之间；2到50之间；2到100之间;5到100之间；10到100之间或20到100mg之间的本发明化合物。每丙二醇浓度的地西他滨的具体实例包括但不限于2，5,10,20,22,25,30,40和50rng/ml。在另一个实施方案中，将本发明化合物以不同浓度溶解在结合甘油和丙二醇的溶剂中。丙二醇在溶剂中的浓度是在0.1-99.9%，任选地在1-卯％，10-80%，或50-70%之间。在另一个实施方案中，将本发明化合物以不同浓度溶解在结合甘油和聚乙二醇(PEG)如PEG300、PEG400和PEG1000的溶剂中。聚乙二醇在溶剂中的浓度是在0.1-99.9%，任选地在1-90%，10-80%，或50-70°/。之间。在另一个实施方案中，将本发明的化合物以不同浓度溶解在结合丙二醇、聚乙二醇和甘油的溶剂中。聚乙二醇在溶剂中的浓度是在0.1-99.9%，任选地在1-90%，10-60%，或20-40%之间；并且聚乙二醇在溶剂中的浓度是在0.1-99.9%，任选地在1-90%，10-80%，或50-70%之间。据信并且实验证明，加入丙二醇可以进一步提高化学稳定性，减小制剂的粘性，并且促进本发明的化合物在溶剂中的溶解。所述药物制剂可以进一步包含以这样的比例加入到所述制剂中的酸化剂，以致所述制剂具有获得的在约4和8之间的pH。所述酸化剂可以是有机酸。有机酸的实例包括，但不限于，抗坏血酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、草酸、甲酸、苯磺酸、苯甲酸、马来酸、谷氨酸、琥珀酸、天冬氨酸、diatrizoicacid和乙酸。酸化剂还可以是无机酸，如盐酸、硫酸、磷酸和硝酸。据信，向所述制剂中加入酸化剂保持相对中性的pH(例如，在pH4-8内)促进本发明的化合物迅速溶解在溶剂中，并且提高所述制剂的长期稳定性。在碱性溶液中，存在地西他滨快速可逆的分解成N-(甲酰脒基)-N'-(3-D-2-脱氧呋喃核糖基脲，其不可逆地分解形成l-(3-D-2'-脱氧呋喃核糖基-3-脒基脲。第一阶段的水解降解包括形成N-amidinium-N'-(2-脱氧-卩-D-赤呋喃戊糖基)脲甲酸酯(AUF)。在升高温度下的第二阶段的降解包括胍的形成。在酸性溶液中，形成N-(甲酰脒基)-N'-(3-D-2-脱氧呋喃核糖基脲和一些未鉴定的化合物。在强酸性溶液中(在pH〈.2)，生成5-氮杂胞嘧啶。因此，对于包含地西他滨的类似物和衍生物的制剂，保持相对中性的pH可以是有利的。在一种变化中，所述酸化剂是抗坏血酸，其浓度为溶剂的0.01-0.2mg/ml，任选地为溶剂的0.04-0.1mg/ml或0.03-0.07mg/ml。药物制剂的pH可以调整在pH4和pH8之间，优选地在pH5和pH7之间，和更优选地在pH5.5和pH6.8之间。当在25"C储存7天、14天、21天、28天或更多天时，所述药物制剂优选地至少80%、90%、95。/。或更加稳定。当在40。C储存7天、14天、21天、28天或更多天时，所述药物制剂还优选地至少80%、90%、95%或更加稳定。在一个实施方案中，本发明的药物制剂通过采用甘油并且将本发明的化合物溶解在甘油中而制备。例如，这可以通过将本发明的化合物加入到甘油中或者通过将甘油加入到地西他滨中而进行。通过它们的混合，形成药物制剂。任选地，所述方法还包括增加本发明的化合物被甘油溶解的比率的额外的步骤。可以进行的额外步骤的实例包括，但不限于，搅拌、加热、延长溶解时间、和应用微粉化的本发明的化合物以及它们的组合。在一种变化中，应用搅拌。搅拌的实例包括但不限于，机械搅拌、超声处理、常规混合、常规搅拌和它们的组合。例如，按照供应商的流程，通过由SilversonMachines公司(EastLongmeadow，MA)制造的匀浆器，可以进行制剂的机械搅拌。在另一种变化中，可以应用加热。任选地，制剂可以在水浴中加热。优选地，加热的制剂的温度可以低于7(TC，更优选地，在25。C和40。C之间。例如，制剂可以加热到37匸。在另一种变化中，本发明的化合物在延长的时间期间溶解在甘油中。在另一种变化中，还可以应用本发明化合物的微粉化形式，以提高溶解动力学。任选地，微粉化可以通过碾磨方法进行。例如，微粉化可以通过使用IncFluidEnergyAljet公司(Boise，IDTelford，PA)制造的喷气式(AirJet)磨粉机进行粒度分析碾磨加工而进行。任选地，所述方法还包括通过常规所用的方法调整药物制剂的pH。在一种变化中，pH通过加入酸如抗坏血酸，或者加入碱如氢氧化钠进行调整。在另一种变化中，pH通过加入缓冲溶液如(亚乙基二次氮基)四乙酸二钠盐(EDTA)溶液进行调节和稳定。由于已知地西他滨是pH-敏感的，所以将药物制剂的pH调整到接近pH7可以提高治疗成分的稳定性。任选地，所述方法还包括从药物制剂分离不溶解的本发明的化合物。分离可以通过任何适当的技术进行。例如，一种适当的分离方法可以包括药物制剂的一次或多次过滤、沉淀和离心。可能是由本发明化合物的不溶颗粒引起的堵塞(Clogging),可能成为施用所述药物制剂的障碍和对于患者潜在的危险。将不溶解的本发明化合物从药物制剂中分离可以促进施用，并且提高治疗产品的安全性。任选地，所述方法还包括将药物制剂灭菌。灭菌可以通过任何适当的技术进行。例如，适当的灭菌方法可以包括一次或多次无菌过滤、化学处理、照射、加热和向药物制剂中加入化学消毒剂。如注意到的，地西他滨在水中不稳定，并且因此可以理想地减少用于配制本发明的化合物的甘油的水含量。因此，在溶解和/或灭菌步骤之前，可以将甘油干燥。甘油或本发明的化合物在甘油中的溶液的这样的干燥可以通过向甘油中加入药用干燥剂而实现。例如，甘油或本发明的制剂可以通过含有干燥剂的层过滤而进行干燥。任选地，所述方法还可以包括加入一种或多种选自下列各项的组的成员干燥剂、缓冲剂、抗氧化剂、稳定剂、抗微生物剂和药物惰性剂。在一种变化中，可以加入抗氧化剂，如抗坏血酸、抗坏血酸盐及其混合物。在另一种变化中，可以加入稳定剂，如二醇。3.包含本发明的化合物或制剂的容器或试剂盒在本发明中所述的药物制剂，可以包含在无菌容器中，如各种大小和容量的注射器、小瓶或安瓿。所述无菌容器可以任选地容纳1-50ml,1-25ml或1-20ml或1-10ml的制剂。无菌容器保持药物制剂的无菌性，促进转运和储存，并且允许无需在前的灭菌步骤而施用所述药物制剂。本发明还提供将本发明的化合物施用给需要其的宿主的试剂盒。在一个实施方案中，所述试剂盒包含以固体，优选散剂形式的本发明的化合物和非水性稀释剂，所述非水性稀释剂包含甘油、丙二醇、聚乙二醇或它们的组合。将固体地西他滨和稀释剂混合优选地导致按照本发明的药物制剂的形成。例如，所述试剂盒可以包括第一容器，其包含以固体形式的本发明的化合物；和容器集装器"essdcontainer),其包含含有甘油的稀释剂；其中将所述稀释剂加入到固体的本发明的化合物中导致形成用于施用本发明的化合物的药物制剂。将所述固体的本发明的化合物与稀释剂混合可以任选地形成每ml稀释剂含有0.1和200mg之间的本发明化合物，任选地每ml溶剂含有0.1禾卩100mg之间，2mg禾卩50mg之间，5mg禾口30mg之间，10mg和25mg之间的本发明化合物的药物制剂。按照本实施方案，所述稀释剂是丙二醇和甘油的组合，其中丙二醇在溶剂中的浓度在0.1-99.9%,任选地1-90%,10-60%,或20-40%之间。还按照本实施方案，所述稀释剂是聚乙二醇和甘油的组合，其中聚乙二醇在溶剂中的浓度在0.1-99.9%,任选地1-90%，10-60%,或20画40%之间。还按照本实施方案，所述稀释剂是丙二醇、聚乙二醇和甘油的组合，其中丙二醇在溶剂中的浓度在0.1-99.9%,任选地1-90%，10-60%,或20-40%之间；并且聚乙二醇在溶剂中的浓度在0.1-99.9%,任选地1-90%,10-60%，或20-40%之间。所述稀释剂还任选地包含40%,20%,10%,5%,2%或更少的水。在一种变化中，所述稀释剂是无水的，并且可以任选地进一步包含干燥剂。所述稀释剂还可以任选地包含一种或多种干燥剂、二醇、抗氧化剂和/或抗所述试剂盒可以任选地包括使用说明。使用说明可以描述固体的本发明化合物和所述稀释剂应该怎样混合才能形成药物制剂。使用说明还可以描述怎样将形成的药物制剂施用给患者。应该注意到，使用说明可以任选地描述按照本发明的施用方法。所述稀释剂和本发明的化合物可以容纳在分开的容器中。所述容器可以是不同的大小。例如，所述容器可以包含1和50之间，l和25之间，1和20之间，或1和10ml之间的稀释剂。在容器或试剂盒中提供的药物制剂可以以适合直接施用的形式，或者可以以浓縮的形式存在，相对于施用给患者的形式，所述浓縮的形式需要稀释。例如，本发明所述的药物制剂可以以适合通过输注直接施用的形式存在。本文所述的方法和试剂盒提供灵活性，其中包含本发明化合物的药物制剂的稳定性和治疗作用可以进一步增强或补充。4.施用本发明的化合物/组合物的方法本发明的化合物/制剂可以通过任何途径施用，优选地以适合这样的途径的药物组合物形式进行施用，如下文举例说明，并且取决于治疗的病况。例如，化合物或制剂可以口服、肠胃外、局部、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、穿过口腔、鼻内、脂质体、通过吸入、阴道、眼内、通过局部递送(例如通过导管或斯滕特印模)、皮下、脂肪内、关节内、或鞘内施用。按照本发明的化合物和/或组合物还可以以缓慢释放剂型进行施用或共同施用。按照本发明的化合物和/或组合物还可以以任何常规剂型进行施用或共同施用。在本
发明内容中，共同施用定义意指在协调的治疗疗程中施用多于一种的治疗剂，以获得改善的临床结果。这样的共同施用还可以是同延的(coextensive),目P，在重叠的时间阶段内发生。本发明的化合物或含有本发明化合物的组合物可以以0.1-1000mg/m2，任选地1-200mg/m，任选地1-50mg/m，任选地1-40mg/m2，任选地1-30mg/m2，任选地1-20mg/m2，或任选地5-30mg/m2的剂量施用给宿主如患者。例如，本发明的化合物/组合物可以提供为用于注射的无菌散剂，与缓冲盐如二氢钾和pH调节剂如氢氧化钠一起提供。这种制剂优选地保存在28"C,其应该保持所述药物稳定至少2年。这种散剂制剂可以用10ml无菌水重构用于注射。这种溶液可以用本领域已知的输注流体如0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖(dextrose)注射液和乳酸化的ringer's注射液(lactatedringer'sinjection)进一步稀释。优选地，重构和稀释的溶液应该在4-6小时内应用，以获得最大功效的递送。在一个优选的实施方案中，本发明的化合物/组合物通过注射施用给患者，诸如皮下注射、推注(bolus)静脉内注射、连续静脉内注射和超过1小时的静脉内输注。任选地，本发明的化合物/组合物通过每天1-24小时的静脉内输注施用给患者，每个治疗周期3-5天，以每天0.1-1000mg/m2的剂量，任选地以每天1-100mg/m2的剂量，任选地以每天2-50mg/n^的剂量，任选地以每天10-30mg/m2的剂量，或任选地以每天5-20mg/r^的剂量进行施用。对于地西他滨或阿扎胞苷，认为低于50mg/n^的剂量比在癌症的常规化学治疗中所用的剂量低得多。通过应用这样低剂量的地西他滨或阿扎胞苷的类似物/衍生物，癌细胞中通过异常甲基化作用而沉默的基因的转录活性可以被激活，以引发下游信号传导，导致细胞生长停滞，分化和程序性细胞死亡，其最终导致这些癌细胞的死亡。然而，这种低剂量应该对正常细胞具有很少的系统细胞毒性作用，并且因此对治疗的患者具有更少的副作用。所述药物制剂可以以任何常规形式与一种或多种选自包含下列各项的组的成员共同施用输注流体、治疗化合物、营养流体、抗微生物流体、缓冲剂和稳定剂。如上文所述，本发明化合物通过将本发明化合物溶解在非水性溶剂如甘油中而配制成液体形式。所述药物液体制剂提供可以直接施用(例如，无需进一步稀释)的进一步的优点，并且可以以稳定形式保存到施用时。此外，由于甘油可以容易地与水混合，所以所述制剂可以恰好在施用之前容易地和快速地进行进一步稀释。例如，所述药物制剂可以在施用给患者之前180，60,40,30，20,10，5,2，1分钟或更短的时间稀释在水中。患者可以静脉内接受所述药物制剂。优选的施用途径是通过静脉内输注。任选地，本发明的药物制剂可以直接输注，无需提前重构。在一个实施方案中，所述药物制剂通过连接器输注，诸如Y形位点连接器，其具有三个臂，每个臂连接一个管。例如，可以使用各种大小的BaxterY-连接器。将容纳所述药物制剂的容器附着到管上，所述管还附着到连接器的一个臂上。输注流体，诸如0.9°/。氯化钠、或5%右旋糖(dextrose)、或5%葡萄糖(glucose)、或乳酸化的Ringer's，通过附着到Y型位点连接器的另一个臂上的管输注。输注的流体和药物制剂在Y型位点连接器内混合。将得到的混合物通过与Y型位点连接器的第三个臂连接的管输注给患者。这种施用方法比现有技术的优点在于本发明的化合物在进入患者体内之前与输注流体混合，因此减少了可能由于与水接触而发生的本发明化合物的分解的时间。例如，本发明的化合物在进入患者体内之前不到10，5，2或1分钟混合。由于制剂提高的稳定性，患者可以用所述药物制剂输注1,2,3,4，5或更多小时。延长的输注时间能够制定灵活的施用治疗制剂的时间表。备选地或另外，输注的速度和体积可以按照患者的需要进行调控。药物制剂输注的调控可以按照现有流程进行。所述药物制剂可以以任何常规形式与一种或多种选自包括下列各项的组的成员一起共同输注输注流体、治疗化合物、营养流体、抗微生物剂流体、缓冲剂和稳定剂。任选地，治疗成分可以与本发明的制剂共同输注，所述治疗成分包括但不限于，抗肿瘤形成剂、烷化剂、是类视黄醇超家族成员的药剂、抗生素药剂、激素药剂、植物来源的药剂、生物药剂、白介素、干扰素、细胞因子、免疫调控剂和单克隆抗体。在本
发明内容中，共同输注定义意指在协调的治疗疗程中输注多于一种的治疗剂，以获得改善的临床结果。这样的共同输注还可以是同时的、重叠的、或顺序的。在一个具体实施例中，所述药物制剂和输注流体的共同输注可以通过Y型连接器进行。静脉内施用的药物制剂的药物动力学和代谢与静脉内施用的本发明化合物的药物动力学和代谢相似。在人类中，当通过生物测定测量时，地西他滨表现出具有7分钟的半衰期和近似于10-35分钟的终止半衰期的分布期。分布的体积约4.6L/kg。短的血桨半衰期是由于肝脏胞苷脱氨酶通过脱氨基作用对地西他滨的快速灭活而导致。在人类中的清除是高的，近似于126mL/min/kg。在总共5名患者中在血浆曲线下的平均面积是408pg/h/L，具有2.01的峰值血浆浓度。在患者中，当以100mg/n^输注3小时进行施用时，地西他滨浓度约0.4(ig/ml(2pM)。在更长的输注时间(达到40小时)，血浆浓度约为0.1到0.4iig/mL。使用40-60小时的输注时间，以1mg/kg/h的输注速率，获得0.43-0.76吗/mL的血浆浓度。在1mg/kg/h输注速率的稳定态血浆浓度估计为0.2-0.5吗/mL。中断输注后的半衰期是12-20分钟。在100mg/n^输注6小时过程中，地西他滨的稳定态血浆浓度估计为0.31-0.39(ig/mL。在600mg/m2输注过程中的浓度范围是0.41-16jig/mL。在36小时静脉内输注结束时，地西他滨渗透进入人的脑脊液达到14-21%的血浆浓度。未改变的地西他滨的尿排泄很低，在小于总剂量的0.01%到0.9%的范围，并且在排泄和给药或血浆药物水平之间不存在联系。高清除值和小于所施用剂量的1。/。的总尿排泄表明，地西他滨快速并且主要通过代谢过程而消除。由于与地西他滨相比它们具有提高的稳定性，当储存时，本发明的化合物/组合物可以享有更长的保存限期，并且避开了与地西他滨的临床应用相关的问题。例如，本发明的化合物可以提供为冻干的散剂，任选地具有赋形剂(例如，环糊精)、酸(例如，抗坏血酸)、碱(氢氧化钠)或缓冲盐(一碱价磷酸二氢钾)。所述冻干的散剂可以用无菌水重构用于注射，例如，静脉内、腹膜内、肌内或皮下。任选地，所述散剂可以用水性或非水性溶剂重构，所述水性或非水性溶剂包括与水混溶的溶剂，如甘油、丙二醇、乙醇和PEG。得到的溶液可以直接施用给患者，或者用输注流体诸如0.9%氯化钠;5%右旋糖(dextrose);5%葡萄糖(glucose);和乳酸化的Ringer's输注流体进一步稀释。本发明的化合物/组合物可以在环境条件下或在控制的环境中如在冷冻(2-8°C;36-46下)下保存。由于与地西他滨相比它们优越的稳定性，本发明的化合物/组合物可以在室温下保存，用注射流体重构，并且无需预先冷却所述药物溶液而施用给患者。另外，由于它们提高的化学稳定性，与地西他滨的血浆半衰期相比，本发明的化合物/组合物应该具有更长的血浆半衰期。因此，本发明的化合物/组合物可以以比地西他滨更低的剂量和/或更低的频率施用给患者。5.使用本发明的药物组合物的组合治疗本发明的化合物或药物制剂可以与组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的抑制剂联合使用，从而以协同方式进一步调控基因的转录，例如，重建通过组蛋白的高甲基化作用和乙酰化作用而沉默的基因的转录。HDAC在基因的转录沉默中起重要作用。组蛋白上乙酰化的量通过两种类型的酶，组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白脱乙酰酶(HDACs)的相反的活性而得到控制。这些酶的底物包括位于组蛋白H3,H4,H2A禾BH2B的氨基端尾部的赖氨酸残基的s-氨基基团。这些氨基酸残基通过HATs被乙酰化，并且通过HDACs脱乙酰化。通过由HDACs从组蛋白赖氨酸上去除乙酰基团，赖氨酸残基恢复正电荷，由此核小体的结构更紧密，并且使核小体内包含的基因沉默。因此，为了激活这些被组蛋白的脱乙酰酶沉默的基因，应该抑制HADCs的活性。当抑制HDAC时，组蛋白被乙酰化，并且紧密缠绕在脱乙酰化的组蛋白核心周围的DNA松弛。DNA构象的开放导致特异性基因的表达。除了组蛋白的脱乙酰化(deacelation)，HDACs还可以通过将转录因子如p53(月中瘤抑制基因),GATA-l,TFIIE和TFIIF脱乙酰而调控基因表达。Gu和Roeder(1997)Cell(细胞)90:595-606(p53);和Boyes等(1998)Nature(自然)396:594-598(GATA-1)。HDACs还参与细胞周期调控，例如，通过转录抑制作用参与，其受补充HDACs的RB肿瘤抑制蛋白调控。Brehm等(1998)Nature(自然)391:597-601。因此，HDACs的抑制应该激活肿瘤抑制基因如p53和RB的表达，并且结果促进由这些基因诱导的细胞生长停滞、分化和程序性细胞死亡。如上文所述，许多基因如肿瘤抑制基因的异常转录沉默，直接与癌症和其它疾病的发病机理相关。DNA中胞嘧啶残基的甲基化和从组蛋白去除乙酰基团，是基因沉默的两种主要的机制。由于癌症相关的基因的甲基化和/或组蛋白脱乙酰酶作用，这些基因的表达受到抑制或完全沉默。同时，这些基因的表达是诱导转化的细胞的生长停滞、分化和/或凋亡性细胞死亡所必需的。在转化的细胞中使这些基因失活导致这些细胞的不受控制的增殖，其最终导致癌症。通过将本发明的化合物/组合物与HDAC抑制剂结合，可以有效地重新激活诱导转化的细胞的细胞生长停滞、分化和细胞死亡所需要的基因。本发明的化合物/组合物抑制基因DNA甲基化，特别是在调控区的甲基化，因此导致所述基因转录的激活。同时，HDAC抑制剂抑制在所述基因的核小体核心中的组蛋白的脱乙酰酶，因此导致组蛋白乙酰化的净增加，其又激活所述基因的转录。通过研究这两种互补的机制，组合治疗可以更有效地并且理想地以协同方式重建基因的转录。具有协同作用的组合治疗应该比单独使用需要更少量的每种抑制剂，因此减少与抑制剂的高剂量系统施用相关的潜在的副作用，并且改善提高治疗指数。许多抗癌剂通过引发信号传导级联而实施它们的抗癌作用，所述信号传导级联包括由这些肿瘤抑制基因编码的蛋白。由于这些基因在癌细胞中的不充分表达，这些抗肿瘤药剂的抗癌作用可以严重减小或完全消除。通过被DNA甲基化作用和组蛋白,脱乙酰酶表观遗传(epigenetically)沉默的这些基因的重新激活或重新表达，机体的内在防御机制动员起来，通过应答由所施用的抗癌剂传递的信号而恢复对癌细胞的肿瘤抑制功能，从而抵抗所述疾病。机体内在的肿瘤抑制功能的这样的刺激应该导致需要更低剂量的抗癌剂，因此导致所述药剂的更高的治疗指数(即，更大的功效和更低的毒性)。HDACs的抑制剂包括，但不限于，下述结构种类1)异羟肟酸，2)环肽，3)苯甲酰胺，和4)短链脂肪酸。异羟肟酸和异羟肟酸衍生物的实例，包括，但不限于，曲古抑菌素A(TSA)、N-辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、oxamflatin、辛二酸二异羟肟酸(SBHA),间-羧基-肉桂酸二异羟肟酸(CBHA)、和pyroxamide。TSA作为抗真菌抗生素分离(Tsuji等(1976)J.Antibiot(抗生素杂志)(东京)29:1-6)，并且发现是哺乳动物HDAC的有力的抑制齐'J(Yoshida等(1990)J.Biol.Chem.(生物的化学杂志)265:17174-17179)。TSA-抗性细胞系具有改变种酶是TSA的重要靶点。其它基于异羟肟酸的HDAC抑制剂，SAHA,SBHA，和CBHA是在体外或在体内能够以微摩尔的浓度或更低的浓度抑制HDAC的合成化合物。Glick等(1999)CancerRes.(癌症研究)59:4392-4399。这些基于异羟肟酸的HDAC抑制剂全都具有一种重要的结构特征极性异羟肟酸末端，其通过疏水亚甲基间隔区(例如，长度上6个碳)与附着末端疏水部分(例如，苯环)的另一个极性位点连接。研发具有这样的基本特征的化合物也落入可以用作HDAC的抑制剂的异羟肟酸的范围内。用作HDAC抑制剂的环肽是主要的环状四肽。环肽的实例包括，但不限于，trapoxinA、apicidin和FR901228。TrapoxinA是一种含有2-氨基-8-氧代-9,10-环氧-癸酰基(八0￡)部分的环状四肽。Kijima等(1993)J.Biol.Chem.(生物的化学杂志)268:22429-22435。Apicidin是一种真菌代谢物，其表现出有力的、广谱的抗原生动物活性，并且在纳摩尔浓度抑制HDAC活性。Darkin-Rattray等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(美国国家科学院学报)93;13143-13147。FR901228是一种从紫色色杆菌(C7zrawoZ)a"en'Mmv/o/acewm)分离的酯肽，并且已经表现出在微摩尔浓度抑制HDAC活性。苯甲酰胺的实例包括但不限于MS-27-275。Saito等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(美国国家科学院学报)96:4592-4597。短链脂肪酸的实例包括但不限于丁酸(酯)(例如，丁酸，精氨酸丁酸酯和丁酸苯酯(PB))。Newmark等(1994)CancerLett.(癌症通信)78:1-5;和Carducci等(1997)AnticancerRes.(抗癌研究)17:3972-3973。另外，已经表现出在微摩尔浓度抑制HDAC的depudecin(Kwon等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(美国国家科学院学报)95:3356-3361)也落入本发明的组蛋白脱乙酰酶抑制剂的范围。本发明的化合物或药物制剂还可以与其它治疗成分联合应用，所述其它治疗成分包括但不限于，抗肿瘤药剂、垸化剂、是类视黄醇超家族成员的药剂、抗生素药剂、激素药剂、植物来源的药剂、生物药剂、白介素、干扰素、细胞因子、免疫调控剂和单克隆抗体。在一个实施方案中，烷化剂与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用。垸化剂的实例包括，但不限于，二氯乙胺(氮芥，例如，苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、美法仑、乌拉莫司汀，吖丙啶(例如，塞替派)，垸酮磺酸盐(alkylalkonesulfonate)(例如，白消安)，亚硝基脲(例如，卡莫司汀，洛莫司汀，链佐星)，非经典的垸化剂(六甲蜜胺，达卡巴嗪，和丙卡巴肼),铂化合物(卡铂和顺铂)。在另一个实施方案中，顺铂、卡铂或环磷酰胺与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用。在另一个实施方案中，类视黄醇超家族成员与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用。类视黄醇是一族衍生于或与维生素A(全反式视黄醇)相关的结构和功能相关分子。类视黄醇的实例包括，但不限于，全反式视黄醇、全反式视黄酸(维A酸)、13-顺-视黄酸(异维A酸)和9-顺-视黄酸。在另一个实施方案中，激素药剂与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用。这样的激素药剂的实例是合成的雌激素(例如，二乙基己烯雌酚(diethylstibestrol))，抗雌激素药剂(例如，他莫昔芬，托瑞米芬，fluoxymesterol和雷洛昔芬)，抗雄激素药剂(比卡鲁胺，尼鲁米特，氟他胺)，芳香酶抑制剂(例如，氨鲁米特，阿那曲唑和四唑)，酮康唑，醋酸戈舍瑞林，亮丙立德，醋酸甲地孕酮和米非司酮。在另一个实施方案中，植物来源的药剂与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用。植物来源的药剂的实例包括，但不限于，长春花属生物碱(例如，长春新碱，长春碱，长春地辛，长春利定和长春瑞滨)，喜树碱(20(S)-喜树碱，9-硝基-20(S)-喜树碱，和9-氨基-20(S)-喜树碱)，鬼臼毒素(例如，依托泊苷(VP-16)和替尼泊苷(VM-26))，和紫杉垸类(例如，紫杉醇和多西他赛)。在另一个实施方案中，生物药剂与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用，诸如免疫调控蛋白如细胞因子，针对肿瘤抗原的单克隆抗体，肿瘤抑制基因和癌症疫苗。可以与本发明的化合物/制剂联合使用和/或加入到本发明的化合物/制剂中使用的白介素的实例包括，但不限于，白介素2(IL-2),和白介素4(IL-4),白介素12(IL-12)。可以与地西他滨-甘油制剂联合使用的干扰素的实例包括，但不限于，干扰素(X、干扰素卩(成纤维细胞干扰素)和干扰素Y(成纤维细胞干扰素)。所述细胞因子的实例包括，但不限于，红细胞生成素(epoietin),粒细胞-CSF(非格司亭)，和粒细胞，巨噬细胞-CSF(沙格司亭)。除了细胞因子之外，免疫调控剂包括，但不限于，卡介苗，左旋咪唑，和奥曲肽。可以与本发明的制剂联合使用的针对肿瘤抗原的单克隆抗体的实例包括，但不限于，HERCEPTIN(曲妥单抗(Trastruzumab))，RITUXAN(利妥昔单抗)，MYLOTARG(抗-CD33),和CAMPATH(抗-CD52)。6.本发明的化合物或药物制剂的适应症按照本发明的药物制剂可以用于治疗对用地西他滨治疗敏感的宽泛种类的疾病。可以使用本发明的药物制剂治疗的优选的适应症包括含有不理想的或不可控制的细胞增殖的那些。这样的适应症包括良性肿瘤、各种类型的癌症如原发性瘤和肿瘤转移，再狭窄(例如，冠状动脉、颈动脉和脑损伤)，血液疾病，内皮细胞的异常刺激(动脉粥样硬化)，由于手术引起的机体组织侵害，异常的伤口愈合，异常的血管发生，引起组织纤维化的疾病，重复性运动障碍，不是高度血管化的组织的疾病，和与器官移植相关的增生反应。通常，良性肿瘤中的细胞保持它们的分化特征，并且不是以完全不可控制的方式分裂。良性肿瘤通常是固定的并且不转移。可以使用本发明进行治疗的具体类型的良性肿瘤包括血管瘤，肝细胞腺瘤，海绵状血管瘤，病灶性结节增生，听力神经瘤，纤维神经瘤，胆管腺瘤，胆管囊肿，纤维瘤，脂肪瘤，平滑肌瘤，间皮瘤，畸胎瘤，粘液瘤，结节再生性增生，粒性结膜炎和脓性肉芽瘤。恶性肿瘤细胞变得不分化，不应答机体的生长控制信号，并且以不可控制的方式增殖。恶性肿瘤是侵入性的，并且能够扩散到远的位点(转移)。恶性肿瘤通常分成两类原发性瘤和继发性瘤。原发性瘤直接起因于发现它们的组织。继发性瘤，或转移瘤，是从机体中的别处起源但是现在已经扩散到远端器官的肿瘤。常见的转移途径是直接生长到相邻的结构，通过血管或淋巴系统扩散，并且沿着组织面和体间隙(腹膜液、脑脊液、等)而转移。可以使用本发明进行治疗的具体类型的癌症或恶性肿瘤，原发性的或继发性的，包括乳腺癌，皮肤癌，骨癌，前列腺癌，肝癌，肺癌，脑癌，喉癌，胆囊癌，胰腺癌，直肠癌，甲状旁腺癌，甲状腺癌，肾上腺癌，神经组织癌，头颈癌，结肠癌，胃癌，支气管癌，肾癌，基底细胞癌，溃疡和乳突型的鳞状细胞癌，转移的皮肤癌，骨肉瘤，Ewing's肉瘤，veticulum细胞肉瘤，骨髓瘤，巨细胞瘤，小细胞肺肿瘤，胆结石，胰岛细胞瘤，原发性脑瘤，急性和慢性淋巴和粒细胞瘤，毛细胞瘤，腺瘤，增生，骨髓癌，嗜铬细胞瘤，粘膜神经瘤(mucosalneuronms),肠神经节瘤(ganglloneuromas),增生性角膜神经瘤，马方体型肿瘤(marfanoidhabitustumor)，维尔姆斯瘤，精原细胞瘤，卵巢肿瘤，平滑肌瘤(leiomyomater)，宫颈发育异常和原位癌，成神经细胞瘤，成视网膜细胞瘤，软组织肉瘤，恶性类癌瘤，局部皮肤损伤，蕈样霉菌病，横纹肌肉瘤，卡波西肉瘤,骨原性和其它肉瘤，恶性高钙血症，肾细胞瘤，真性红细胞增多症，腺癌，多形成胶质细胞瘤，白血病，淋巴瘤，恶性黑素瘤，表皮样癌，以及其它癌症和肉瘤。血液疾病包括血液细胞的异常生长，其可以导致血液细胞中的发育异常变化和血液恶性病如各种白血病。血液疾病的实例包括但不限于急性粒细胞白血病，急性早幼粒细胞白血病，急性成淋巴白血病、慢性骨髓性白血病，骨髓增生异常综合征，和镰状细胞性贫血。急性粒细胞白血病(AML)是发生在成年人中最普通类型的急性白血病。一些遗传的遗传疾病和免疫缺陷状态与增加的AML危险有关。这些包括具有导致随机的染色体断裂的DNA稳定性缺陷的疾病，诸如布卢姆综合征，范科尼贫血病，Li-Fraumeni家族病，共济失调-毛细血管扩张症和X-连锁丙球蛋白缺乏血症。急性早幼粒细胞白血病(APML)代表一种不同的AML亚组。这种亚型特征在于包含15;17染色体易位的早幼粒细胞破坏。这种易位导致产生包括视黄酸受体和PML序列的融合转录物。急性淋巴白血病(ALL)是具有由各种亚型表现的不同临床特征的异型疾病。在ALL中已经表现出复发的细胞发生异常。最常见的细胞发生异常是9;22易位。导致的Philadelphia染色体代表患者的极低的预后。慢性骨髓性白血病(CML)是多能性干细胞的纯系骨髓增殖疾病。CML特征在于特异性的染色体异常，包括染色体9和22的易位，产生Philadelphia染色体。电离辐射与CML发展有关。骨髓增生异常综合征(MDS)是一种异型纯系造血干细胞疾病，由于在一个或多个造血细胞谱系中存在发育异常变化，包括在粒细胞、红细胞系和巨核细胞系中的发育异常变化，而将它们分组在一起。这些变化导致在所述三种谱系中的一种或多种的血球细胞减少。患有MDS的患者典型地发展与贫血、中性粒细胞减少症(感染)或血小板减少症(出血)相关的并发症。通常，约10。/。到约70。/。的患有MDS的患者患有急性白血病。由于在外科手术过程中刺激机体组织的异常细胞增殖治疗对于多种手术方法可以是可能的，包括关节手术、肠手术和疤痕疙瘩结疤。产生纤维化组织的疾病包括肺气肿。可以应用本发明进行治疗的反复运动障碍包括腕管综合征。可以应用本发明进行治疗的细胞增殖疾病的实例是骨瘤。可以应用本发明进行治疗的与器官移植相关的增殖反应包括促进潜在的器官排斥或相关的并发症的那些增殖反应。具体而言，这些增殖反应可以在心脏、肺、肝脏、肾脏和其它机体器官或器官系统的移植过程中发生。可以应用本发明进行治疗的异常血管发生包括那些伴随下列各项的异常血管发生类风湿性关节炎，局部缺血-再灌注相关的脑水肿和损伤，皮质局部缺血，卵巢增生和血管过多症，(多囊卵巢综合征)，子宫内膜异位，银屑病，糖尿病视网膜病，以及其它眼血管生成疾病如未熟儿视网膜病(晶状体后纤维形成)，肌肉退化，角膜移植排斥，neuroscular青光眼和OsterWebber综合征。与异常血管发生相关的疾病需要或诱导血管生长。例如，角膜血管发生包括三个阶段前血管潜伏期，活性新血管生成，以及血管成熟和退化。仍然必须揭示各种血管生成因子的身份(identity)和机制，包括炎性反应的因素，如白细胞，血小板，细胞因子和二十烷类(eicosanoid)，或未鉴定的血浆组分。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与不需要的和异常的血管发生相关的疾病。所述方法包括给患有不需要的或异常的血管发生的患者单独施用本发明的药物制剂，或者与抗肿瘤药剂组合施用，所述抗肿瘤药剂在体内作为抗肿瘤药剂的活性不利地受到高水平的DNA甲基化的影响。抑制血管发生和/或生血管疾病所需要的这些药剂的具体剂量可以取决于病况的严重性、施用的途径和可以由主治医生决定的相关因素。通常，接受的和有效的每日剂量是足以有效抑制血管发生和/或生血管疾病的量。按照这一实施方案，本发明的药物制剂可以用于治疗与不理想的血管发生如视网膜/脉络膜新血管生成和角膜新血管生成相关的各种疾病。视网膜/脉络膜新血管生成的实例包括，但不限于，贝斯特病，近视，眼凹(opticpits)，施塔加特病，佩吉特病，静脉闭塞，动脉闭塞，镰状细胞性贫血，肉瘤，梅毒，弹力纤维性假黄瘤颈动脉abostructive病(pseudoxanthomaelasticumcarotidabostructivediseases),'漫性目艮色素层炎/vitritis，分禾支杆菌感染，莱姆病，系统红斑狼疮，未熟儿视网膜病，伊尔斯病，糖尿病视网膜病，黄斑变性,Bechets病，引起视网膜炎或脉络膜炎(chroiditis)的感染，推定的眼组织胞浆菌病，扁平部睫状体炎，慢性视网膜分离，高粘滞性综合征，弓形体病，外伤和激光后并发症，与发红相关的疾病(角的新血管生成)和由纤维血管或纤维性组织的异常增殖引起的疾病，包括所有形式的增殖性玻璃体视网膜病。角膜新血管生成的实例包括，但不限于，流行性角膜结膜炎，维生素A缺乏症，过度佩戴隐形眼镜病，过敏性角膜炎，上缘角膜炎，翼状胬肉角膜炎干燥综合征(pterygiumkeratitissicca),斯耶格伦病，红斑痤疮，phylectenulosis,糖尿病视网膜病，未熟儿视网膜病，角膜移植排斥，莫伦溃疡，Terrien's边缘变性，边缘性角蛋白溶解，多动脉炎，韦格纳肉样瘤病，巩膜炎，periphigoid射线角膜切开术(periphigoidradialkeratotomy),新血管青光眼和晶状体后纤维增生，梅毒，分枝杆菌感染，脂质变性，化学烧伤，细菌性溃疡，真菌性溃疡，单纯疱疹感染，带状疱疹感染，原生动物感染和卡波西肉瘤。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与异常血管发生相关的慢性炎症疾病。所述方法包括给患有与异常血管发生相关的慢性炎症疾病的患者单独施用本发明的药物制剂，或者与抗肿瘤药剂组合施用，所述抗肿瘤药剂在体内作为抗肿瘤药剂的活性不利地受到高水平的DNA甲基化的影响。慢性炎症依赖于连续形成毛细管芽以保持炎性细胞的流入。炎性细胞的流入和存在产生肉芽瘤，并且因此维持慢性炎性状态。使用本发明的药物制剂抑制血管发生可以防止肉芽瘤(granulosmas)的形成，由此减轻所述疾病。慢性炎症疾病的实例包括，但不限于，炎性肠病，如局限性回肠炎和溃疡性大肠炎，银屑病，肉瘤和类风湿性关节炎。炎性肠病如局限性回肠炎和溃疡性大肠炎，特征在于在胃肠道中许多位置的慢性炎症和血管发生。例如，局限性回肠炎以慢性透壁炎症病发生，其最普遍地影响末端回肠和结肠，但是还可以发生在从嘴到肛门和肛门周围区域的胃肠道的任何部分。患有局限性回肠炎的患者通常患有与腹痛、发烧、厌食、体重减少和腹肿相关的慢性腹泻。溃疡性大肠炎也是一种在结肠粘膜发生的慢性的、非特异性、炎性和溃疡性疾病，并且特征在于存在血性腹泻。这些炎性肠病通常由贯穿整个胃肠道的慢性肉芽瘤炎症引起，包括由炎症细胞筒包围的新毛细管芽。本发明的药物制剂对血管发生的抑制应该抑制芽形成，并且防止肉芽瘤形成。炎性肠病还表现出额外的肠内表现(manifectations)，诸如皮肤损伤。这样的损伤特征在于炎症和血管发生，并且还可以在除胃肠道之外的许多位置发生。本发明的药物制剂对血管发生的抑制应该减少炎症细胞的流入，并且防止损伤形成。结节病(sarcoidois)，另一种慢性炎症疾病，特征是一种多系统肉芽瘤疾病。这种疾病的肉芽瘤可以在机体的任何地方形成，并且因此所述症状取决于肉芽瘤的位置和所述疾病是否是活性的。肉芽瘤通过提供恒定炎症细胞供应的生血管的毛细管芽产生。通过应用本发明的药物制剂抑制血管发生，这样的肉芽瘤形成可以被抑制。银屑病，也是一种慢性和复发性炎症疾病，特征在于各种大小的丘疹和噬斑。使用本发明的药物制剂的治疗应该防止维持特有的损伤必需的新血管的形成，并且为患者提供症状减轻。类风湿性关节炎(RA)也是一种慢性炎性病，其特征在于外周关节的非特异性炎症。据信在关节的滑膜衬里的血管经历血管发生。除了形成新的血管网络之外，内皮细胞释放导致血管翳生长和软骨破坏的因子和反应氧类别。参与血管发生的因子可以活跃地贡献于，并且帮助保持类风湿性关节炎的慢性发炎状态。本发明的药物制剂单独或与其它抗-RA药剂联合使用的治疗可以预防维持所述慢性炎症必需的新血管的形成，并且对RA患者提供症状减轻。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与异常的血红蛋白合成相关的疾病。所述方法包括给患有与异常的血红蛋白合成相关的疾病的患者施用本发明的药物制剂。由于结合到DNA中的机制与DNA甲基化不足有关，含有地西他滨的制剂刺激胎儿血红蛋白合成。与异常的血红蛋白合成相关的疾病的实例包括，但不限于，镰状细胞性贫血和卩-地中海贫血。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于控制细胞内的基因表达。所述方法包括给患有与异常的基因表达水平相关的疾病的患者施用本发明的药物制剂。DNA甲基化与基因表达的控制相关。具体而言，在启动子中或启动子附近的甲基化抑制转录，而去甲基化恢复表达。所述机制的可能的应用的实例包括，但不限于，治疗调控的生长抑制，程序性细胞死亡和细胞分化的诱导。通过本发明的药物制剂促进的基因激活可以诱导治疗目的的细胞分化。细胞分化通过甲基化不足的机制诱导。形态和功能分化的实例包括，但不限于，形成肌肉细胞、肌管、红细胞和淋巴细胞谱系的细胞的分化。尽管已经描述和叙述了本发明的示例性实施方案，但是对于普通技术人员应该是显而易见的，可以对本发明进行如本文所述的许多改变、改进或改造，这些没有一种背离本发明的精神。因此，所有这样的改变、改进和改造应该视为在本发明的范围内。实施例1.合成亚磷酰胺结构单元和3'-0-封端的衍生物本发明还提供合成下述新颖的亚磷酰胺结构单元(图2A)的有效化学方法。la的4-胺官能团可以通过转化成各种保护基团(R,)而被保护，诸如具有下列各项的氨基甲酸盐(或酯)甲基，乙基，9-芴基甲基，9-(2-硫代)芴基甲基，9-(2,7-二溴)苑基甲基17-四苯并[a，c，g,/]苑基甲基，2-氯-3-茚基甲基，苯并[/]茚-3-基甲基，2，7-二-叔-[9-(10，10-二氧代-10,10,10，10-四氢硫代D占吨基)甲基，1,1-二氧代苯并问噻吩-2-基甲基2，2,2-三氯乙基，2-三甲基甲硅烷乙基，2-苯基乙基，l-(l-金刚烷基)-l-甲基乙基2-氯乙基,l,l，陽二甲基-2-卤代乙基,1,l-二甲基-2，2-二溴甲基,1,1-二甲基-2,2，2-三氯乙基，1-甲基-l-(4-联苯基)乙基,l-(3,5-二-叔-丁基苯基)-l-甲基乙基，2画(2'-和4'-吡啶基)乙基2,2-双(4'-硝基苯基)乙基N-(2-新戊酰氨基)-l，l-二甲基乙基，2-[(2-硝基苯基)二硫代]-l-苯基乙基，2-(7V,7V-二环己基酰胺基)乙基,叔丁基，1-金刚烷基，2-金刚烷基，乙烯基，烯丙基，l-异丙基烯丙基，肉桂基(cinnayl),4-硝基肉桂基，3-(3'-吡啶基)丙-2-烯基，8-喹啉基，N-羟基哌啶基，垸基二硫代(alkyldithio),苯甲基，对-甲氧基苯甲基，对-石肖基苯甲基,对-溴苯甲基，对-氯苯甲基，2，4-二氯苯甲基，4-甲基亚磺酰苯甲基，9-蒽基甲基，二苯基甲基，2-甲硫基乙基，2-甲基磺酰乙基，2-(对-甲苯磺酰基)乙基，[2-(l，3-dithianyl)]甲基，4-甲基苯硫基(4-methylthiphenyl),2,4-二甲基苯硫基，2-磷鑰基乙基，l-甲基-l-(三苯基磷絲基)乙基，U-二甲基-2-氰基乙基，2-丹酰乙基，4-苯基乙酸基苯甲基，4-叠氮基苯甲基，4-叠氮基甲氧基苯甲基，间-氯-对-酰氧基苯甲基，对-(二羟基硼烷基)苯甲基，5-苯并异噁唑基甲基，2-(三氟乙基)-6-色酮基甲基，m-硝基苯基，3,5-二甲氧基苯甲基，1,-甲基-l-(3,5-二甲氧基苯基)乙基，a-甲基硝基胡椒基,邻-硝基苯基，3,4-二甲氧基-6-硝基苯甲基，苯基(邻-硝基苯基)乙基，2-(2-硝基苯基)乙基，6-硝基藜芦基，4-甲氧基苯酰基，3',5'-二甲氧基苯偶姻,叔戊基S-苯甲硫基，丁炔基，对-氰基苯甲基，环己基，环戊基，环丙基甲基，对-癸基氧基苯甲基，二异丙基甲基，2,2-二甲氧基羰基乙烯基，邻-(N,N-二甲基酰胺基)苯甲基，U-二甲基-3-(N,N-二甲基酰胺基)丙基，l，l-二甲基丙炔基，2-呋喃基甲基，2-碘乙基，异龙脑基，异丁基，异烟碱基，对-(p'-甲氧基苯基偶氮)苯甲基，l-甲基环丁基，l-甲基环己基，l-甲基-l-环丙基甲基，l-甲基-l-(对-苯基偶氮苯基)乙基，l-甲基-l-苯基乙基,l-甲基-l-(4'-吡啶基)乙基，苯基，对-(苯基偶氮)苯甲基，2，4,6-三-叔丁基苯基，4-(三甲基铵)苯甲基，2,4，6-三甲基苯甲基；具有下列各项的脲吩噻嗪基-(10)-羰基，N'-对-甲苯磺酰基氨基羰基,N'-苯基氨基硫代羰基；酰胺，诸如甲酰胺，乙酰胺，苯氧基乙酰胺,三氯乙酰胺，三氟乙酰胺，苯基乙酰胺，3-苯基丙酰胺(3-phenylpropamide)，戊-4-烯酰胺(pent-4-enamide)，邻-硝基苯基乙酰胺，邻-硝基苯氧基乙酰胺，3-(邻-硝基苯基)丙酰胺，2-甲基-2-(邻-硝基苯氧基)丙酰胺，3-甲基-3-硝基丁酰胺，邻-硝基肉桂酰胺，3-(4-叔丁基-2，6-二硝基苯基)-2,2-二甲基丙酰胺，邻-(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰胺，2-[(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)甲基)甲基]苯甲酰胺，3-(3'，6'-二氧代-2'，4'，5'-三甲基环己-1',4'-二烯)-3，3-二甲基丙酰胺，邻-羟基-反式-肉桂酰胺，乙酰乙酰胺，对-甲苯磺胺，和苯磺胺。地西他滨的4-0-甲氧基(lb)和4-S-甲硫基(lc)类似物可以通过改进已公布的地西他滨合成方法而获得，所述改进的方法是通过分离l-(2-脱氧-3，5-二-0-对-氯苯甲酰或苯甲酰-D-呋喃核糖基)-4-甲氧基或甲硫基-1,3,5-三嗪-2(//)-酮的a和卩正位异构体，并且不用甲醇氨处理而去除3,5-保护基团。Pliml禾BSorm(1964)Collect.Czech.Chem.Commun.29:2576-2577;Piskala和Sorm(1978)NucleicAcidChemistry(核酸化学)(Towsend和Tipson，Wiley,1978),第443-449页。5'-OH的保护通过在加入二甲氧基三苯甲基氯之前将4-氨基保护的地西他滨和4-甲氧基和4-甲硫基类似物(lb，lc)溶解在无水吡啶(5mL/毫摩尔)中而实现。例如，将地西他滨(1.2g)与无水吡啶共蒸馏两次，并且溶解在20ml无水DMF中。加入六甲基二硅氮烷(2.8mL)。将溶液搅拌并且放置过夜。将溶剂在真空中蒸发，并且将残留的残余物溶解在甲苯中，并且蒸发两次。将3',5'-二三甲基甲硅垸基5-氮杂-2'-脱氧胞苷(1^=0.67,4:1二氯甲院/甲醇)与无水吡啶(~10mL)共蒸馏两次，并且溶解在无水吡啶(20mL)中。加入苯氧乙酸酐(1.5g)，并且将得到的溶液搅拌1小时。再加入0.18g苯氧乙酸酐(0.1Sg)，并且再搅拌1小时。将反应混合物在真空中蒸发至干燥，并且与甲苯共蒸馏(3x)。将残余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，并且用1MNaHC03水溶液(50mL)中萃取，其用二氯甲烷(20mL)再萃取。将合并的有机相通过硫酸钠干燥，并且在真空中还原，以产生粗3'，5'-二三甲基甲硅烷基-N-苯氧乙酰基5-氮杂-2'-脱氧胞苷(3g;Rf=0.82,9:1二氯甲垸/甲醇)。将所述原料溶解在无水DMF(20mL)中，并且转移到50mL塑料falcon管中，并且加入TAS-F(2.4g)(气化的)。反应在22。C进行4小时(瓶子不完全封闭，以减小产生的压力)。将DMF在真空中蒸发，并且将残留的残余物进行柱色谱法(30g硅胶，2.5cm柱,99:1到9:1二氯甲烷/甲醇)。获得白色固体N-苯氧乙酰基5-氮杂-2'-脱氧胞苷(0.81g;Rf=0.26,9:l二氯甲烷/甲醇)。将这种化合物(0.6g)用无水吡啶共蒸馏，并且在加入二甲氧基三苯甲基氯(0.9g)之前溶解在无水吡啶(20mL)中，并且在22。C搅拌2小时。溶剂在真空中去除并且用甲苯共蒸馏(3次)。将残留物溶解在二氯甲烷(50mL)中，并且用1MNaHCO3水溶液(50mL)萃取，其用二氯甲垸(20mL)再萃取。将合并的有机相通过硫酸钠干燥，并且在真空中还原。残留物进行硅胶色谱法(二氯甲垸-100%到95:5二氯甲烷/甲醇)，其产生5'-二甲氧基三苯甲基-N-苯氧乙酰基5-氮杂-2'-脱氧胞苷(0.35g,0.53毫摩尔，32%;Rf=0.49，9:1二氯甲烷/甲醇)。在加入0.3M在无水乙腈中的苯甲硫基四唑(0.9mL)溶液和氰基乙基四异丙基phosphorodiamidite(0.17mL)之前，将这种中间物(0.3g)溶解在无水乙腈(2mL)中。将混合物在22。C搅拌1.5小时。TLC(2:1乙酸乙酯/己烷+2%TEA)表现出具有R^0.27和0.36的非对映异构体混合物。将溶剂真空去除，并且将残留的残留物进行柱色谱法(20g硅胶，2.5cm柱，9:1己垸/乙酸乙酯+2%TEA(300mL),1:1己烷/乙酸乙酯+1%TEA(200mL),1:2己烷/乙酸乙酯+0%TEA(250mL)。地西他滨phosphoramidite构建ld，其中R产苯氧基乙酰基(0.297g，0.34mmol,76%)，其用1:2己烷/乙酸乙酯洗脱。ld的ESI-MS(C46H53N609P的计算的精确质量是864.36)表现出m/z864.1禾卩966.4[M+NEt3+H+]+;31PNMR(CDC13，500MHz)表现出149.17和149.0ppm;NMR(CDC13,500MHz)表现出化学移动(ppm)8.63和8.59(1H，双峰，H-6),7.4-6.6(18H,多重峰，芳族DMTr/Pac),6.05(IH，三峰，H画l'),4.79(2H，单峰，Pac的CH2)，4.59(1H,单峰，H-4')，4.25到4.20(1H，双峰，H-3'),3.8-3.7(1H,多重峰，P-0-CH2),3.70(3H，单峰,DMTr的CH30),3.68(3H,单峰，DMTr的CH30),3.6-3.48(3H,多峰，异丙基的两个CH's和一个P-0-CH2),3.36-3.27(2H，多峰，H-5'),2.80(1H,单峰，H-2'),2.53(1H,单峰，H-2，)，2.40(2H,多峰，CH2CN),1.1(12H，异丙基的CH3)。另夕卜，公布方法的较小改进允许获得3'-和5'-0-封端的衍生物(图3A,lg，lh，li，lj，lk，ll)(Bagnall,Bell和Pearson(1978)J.ofFluorineChem.(氟化学杂志)11:93-107)，其中帽(cap)可以是垸基，酯和脂肪酸酯，二醇衍生物如乙二醇和丙二醇；并且保护的地西他滨3'-连接到控制孔玻璃支持物上(图3B，lm，ln，lo)。AIul，Singman,Zhan和Letsinger(1991)19:1527-1532。其它的地西他滨衍生物具有用下列各项保护的3'-OH:酯(其包括但不限于，乙酰基、苯甲酰基和卣代苯甲酰基；和脂肪酸)和醚(其包括但不限于对-硝基苯基乙基、甲氧基甲基、甲硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基、苄氧基甲基、对-甲氧基苄氧基甲基、对-硝基苄氧基甲基、邻-硝基节氧基甲基、(4-甲氧基苯氧基)甲基、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基、硅氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2,2，2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、禾Ql-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基)，二醇衍生物如乙二醇和丙二醇，如图4所示。2.在固体支持物上合成DpG和GpD二核苷酸和四核苷酸DpG和GpD二核苷酸和四核苷酸可以通过稍微修改增加偶联时间(>2分钟)的标准方法(图5)合成。Beaucage和Caruthers(1981)Tet.Lett.22:1859-1862;McBride和Caruthers(1983)Tet.Lett.24:245-248。GpD二核苷酸2a和DpGpGpD四核苷酸3a的合成可以用lm,In或lo与相似碱性保护的5'-0-DMTr2'-脱氧鸟苷-3'-0-氰基乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺和5'-0-DMTr2'-脱氧-5-氮杂-胞苷-3'-0-氰基乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺(Id,le或lf)偶联而起始，如在图6A中所示。随后从固体支持物(诸如控制孔的玻璃，CPG)的释放和用碱如DBU/吡啶(或乙腈)去除氨基甲酸盐(或酯)保护基团，并且将甲醇氨用于去除4-0-甲氧基和4-0-甲硫基保护基团，而产生具有或不具有最后DMTr基团的需要的寡核苷酸。DpGpGpD(3b)可以类似地获得(图7).例如(图6A和6B)，安玛西亚(Amersham)AKTAOligopilot10系统负载保护的地西他滨-连接的CPG固体支持物lm(其中Rf苯氧基乙酰基)，在60%的0.3M苯甲硫基四唑激活剂(在乙腈中)存在下，其与2-2.5当量的叔丁基苯氧基乙酰基2，-脱氧鸟苷亚磷酰胺偶联2.5分钟。将含有保护的GpD二核苷酸的CPG固体支持物用20ml在甲醇中的50mMK2C03处理1小时20分钟。将偶联的产物用2M在无水乙腈中的叔-丁基氢过氧化物(通过将叔丁基氢过氧化物溶解在80%的叔-丁基过氧化物中而制备)氧化5分钟。将二甲氧基三苯甲基保护基团用在甲苯中的3%二氯乙酸去除。将CPG固体支持物用无水甲醇洗涤；通过加入2mL的1M在甲醇中的乙酸而将滤出物中和。将溶液通过旋转蒸发浓縮；将残留物溶解在200mM乙酸三乙铵(pH6.9)中，用乙腈(500iiL50。/。水性乙腈)洗涤，并且通过注射器滤器过滤。随后将GpD二核苷酸通过AKTAExplorer100HPLC纯化，使用具有保护柱(菲罗门(Phenomenex)),50x21,2mm，10pm的GeminiC18制备柱(菲罗门(Phenomenex))，250x21.2mm，10|am,用50mM在MilliQ水中的乙酸三乙铵(pH7)(流动相A)和80%在MilliQ水中的乙腈(流动相B)，使用2。/。到20/25%柱体积的流动相B。GpD二核苷酸2a的ESI-MS(-ve),其中乂+=三乙铵(中性化合物dsH24N90]oP的计算的精确质量是557.14),表现出对于[M-H].m/z556.1和对于[2M-H]—的1113.1(参见图30中的质谱)。当在60。/。0.3M的苯甲硫基四唑激活剂(在乙腈中)存在下，将所述循环用2-2.5当量的叔-丁基苯氧基乙酰基2'-脱氧鸟苷或苯氧基乙酰基5-氮杂-2'-脱氧胞苷亚磷酰胺重复3次，分别为2.5分钟和10分钟时，(图6b和7)，获得DpGpGpD四核苷酸3b，其中X、三乙铵(对于中性化合物C36H47N18022P3计算的精确质量是1176.23)，表现出对[M-2H]2—，m/z587.2和1175,2[M-H]-(图32)。另外，DpG二核苷酸2b和GpDpGpD3c可以通过将ls(其中Rr氨基甲酸盐(或酯)保护基团)与亚磷酰胺结构单元ld、le或lf偶联而合成(图8)。GpDpDpG和GpDpG(3c')可以类似地获得(图9)。例如，在保护的2'-脱氧鸟苷-连接的CPG固体支持物ls(其中R产叔-丁基苯氧基乙酰基)的情形中，其在60%0.3M的苯甲硫基四唑激活剂(在乙腈中)存在下与2-2.5当量的苯氧基乙酰基地西他滨亚磷酰胺(图2A，ld,其中R,=苯氧基乙酰基；参见图38中的质谱)偶联10分钟。将包含保护的DpG二核苷酸的CPG固体支持物用20mL在甲醇中的50mMK2C03处理1小时20分钟。按照对于GpD二核苷酸所述，将偶联的产物氧化，去除保护基团，清洗，过滤，并且纯化。DpG二核苷酸2b的ESI-MS(-ve)，其中X、三乙基铵(对于中性化合物C,8H24N90,oP计算的精确质量是557.14),表现出m/z556.1[M-H]-和1113.1对于[2M-H]-(参见图31中的质谱)。DpG二核苷酸2b,其中X+^内，通过将三乙基铵盐重新溶解在4ml水，0.2ml2MNaC104溶液中而获得。当加入36mL丙酮时，所述二核苷酸沉淀。将溶液在-20'C保存几个小时，并且在4000rpm离心20分钟。倒掉上清，并且将固体用30mL丙酮洗涤，然后再在4000rpm离心20分钟。将沉淀溶解在水中，并且冷冻干燥，其表现出m/z556.0[M-H]—(参见图36中的质谱)。当在60。/。0.3M的苯甲硫基四唑激活剂(在乙腈中)存在下，将所述循环用2-2.5当量的叔丁基苯氧基乙酰基2'-脱氧鸟苷或苯氧基乙酰基5-氮杂-2'-脱氧胞苷亚磷酰胺重复2次，分别为2.5分钟和10分钟时，获得GpDpG三核苷酸3c'，其中X+=三乙基铵(对于中性化合物C28H36N14016P2计算的精确质量是886.2)，其表现出m/z885.16[M-H]—(参见质谱图33)。当循环重复3次时，获得DpGpDpG四核苷酸3c，其中X、三乙基铵(对于中性化合物C36H47N,8022P3计算的精确质量是1176.23)，其表现出m/z587.4对于[M-2Hf和1175.4[M-H]—(参见图34中的质谱)。当将在偶联步骤中最新合成的亚磷酸三酯用在二氯乙烷/均可力丁(symcollidine)4/1(v/v)中的5。/。二硫苯乙酰(PADS)在4.3mL溶液(3,6个柱体积)，流速50cm/h(接触时间3个柱体积)转化成相应的硫代磷酸三酯时，可以获得2b的硫代磷酸酯衍生物。硫化作用在3分钟内完成，在那一时间，通过用乙腈洗涤将过量的试剂从反应容器去除。随后的去保护和纯化，如关于2a所述，生成硫代磷酸酯DpG(Sp和Rp,图13，2e)，其中X+二三乙基铵(对于中性化合物C,8H24N909PS计算的精确质量是573.12)，其表现出m/z571.9对于[M-Hr(参见图35中的质谱)。当所述循环用DMT六乙二醇亚磷酰胺重复一次(60%激活剂，7分钟偶联时间)，然后按照对于2a所述进行标准的氧化和纯化，获得HEG-DpG二核苷酸2d(图12)，其中乂+=三乙基铵，和帽=六乙二醇磷酸酯(对于中性化合物(:3011491^980192计算的精确质量是901.71)，其表现出m/z900.4[M-H]-(参见图37中的质谱)。3.通过DpG和GpD二、三和四核苷酸抑制DNA甲基化DpG和GpD二、三和四核苷酸的脱甲基活性在基于细胞的GFP(绿色荧光蛋白)测定中检测。这一检测，其在图25中示意性举例说明，具有由CMV启动子调控的GFP基因，并且对所述启动子内的CpG位点的甲基化敏感。由暴露于甲基化抑制剂导致的甲基化的减少引起GFP表达，并且容易计分。具体而言，将含有表观遗传沉默的GFP转基因的CMV-EE210细胞系用于通过流式细胞术检测GFP表达的重激活。CMV-EE210通过用pTR-UF/UPl/UF2质粒(Zolotuhin等，1996)转染NIH3T3细胞而制备，其包括含有源于适合在哺乳动物细胞中表达的人源化GFP基因的巨细胞病毒(CMV)启动子的pBS(+)(Stratagene,公司)。转染后，高水平GFP表达细胞最初通过FACS分析选择，并且用MoFlo血细胞计数器(Cytomation，公司)分选。地西他滨，哺乳动物DNMT1的有效抑制剂，用作阳性对照。为了筛选CMV-EE210的重激活，将地西他滨(以lpM)或测试化合物(以30-50pM的浓度)加入到补充了10%胎牛血清(Hyclone)的完全培养基(不含酚红DMEM(Gibco，生命技术)中。然后，将细胞在含有所述测试化合物的96孔板中接种到30%汇合(5000细胞/孔)，并且在37°C5%C02中生长3天。将所述板在使用450-4卯激发滤光器(13滤光器立方体(filtercube)，莱卡迪菲尔德(Ldca,Deerfield)IL)的荧光显微镜下检査。如果(10%)的存活细胞表达GFP，那么将孔计分为gl阳性，如果30。/。的存活细胞表达GFP，那么计分g2阳性，并且如果>75%的存活细胞表达GFP，那么计分为g3。GFP50是抑制剂的浓度(类似于ICm))，其是在其上GFP表达水平从g3到gl/2的剂量。表1列出作为DNA甲基化抑制剂的地西他滨，DpG,GpD,GpDpG，DpGpGpD和DpGpDpG的检测的结果。如在表1中所示，所有检测的5种寡核苷酸类似物能够在低浓度有效地抑制DNA甲基化，导致GFP基因转录的重激活。表l:脱甲基活性的初步筛选<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>4.在溶液中合成DpG和GpD二核苷酸和四核苷酸为了大规模合成这些寡核苷酸，应用可溶的聚合物支持物是理想的。Bayer和Mutter,(1972)Nature(自然)237:512-513;Bonora(1995)Appl.Biochem.Biotechnol.(应用生物化学和生物技术)54:3-17。聚合物支持物聚(乙二醇)或PEG允许合成步骤在均质相中进行，并且保证通过简单的沉淀-和-过滤步骤容易地进行中间体纯化步骤。HarrisPolyethyleneglycol)Chemistry(聚(乙二醇){七学).BiotechnicalandBiomedicalApplications(生物技术和生物医学应用)，J.M.Harris(Ed.)，Plenum出版社，纽约(美国)，1992,第1-14页[书引用]。例如，3'-连接的衍生物如lt，lu，或lv(图10)可以容易地适合在前述固相方法中所用的标准的基于亚磷酰胺的化学法，以生成DpG和GpD二和四核苷酸2a，2b，3a，3b，3c，3d。备选地，新的DpG二核苷酸2a可以在溶液中制备，其通过将衍生物4,19或11"与相似碱性保护的5'-0-01^1>2'-脱氧鸟苷-3'-0-氰基乙基-;\^-二异丙基亚磷酰胺和GpD在乙腈和/或二氯甲烷中进行偶联，然后用碘/水氧化，去保护碱性保护基团，并且去除DMTr基团(如在寡核苷酸合成的标准循环中那样)而制备，所述GpD来自于相似地3'-保护的2'-脱氧鸟苷与5'-0-DMTr2'-脱氧-5-氮杂-胞苷-3'-0-氰基乙基-iV,iV-二异丙基亚磷酰胺(ld,le或lf)的偶联。。另夕卜，末端3'-OH和5'-OH用甲基基团封端的新的DpG(2c)二核苷酸可以通过将3'-0-甲基衍生物lg，lh或li与2'-脱氧鸟苷-3'-0-氰基乙基-A^V-二异丙基亚磷酰胺lw的5'-0-甲基衍生物偶联(图11)，然后用碘/水氧化，去保护碱性保护基团，并且去除DMTr基团(如在寡核苷酸合成的标准循环中那样)进行制备。二核苷酸GpD(2d)可以通过将3'-0-甲基2'脱氧鸟苷衍生物lx与2'-5-氮杂胞苷-3'-0-氰乙基-W7V-二异丙基亚磷酰胺lj，lk或ll的5'-0-甲基衍生物偶联而类似地制备(图12)。5.合成抗胞苷脱氨酶和核酸酶的DpG和GpD寡核苷酸通常，在生物流体中的寡核苷酸经受核酸酶的降解。Stein和Cheng(1993)Science(科学)261:1004-1012;Cohen(1994)Adv.Pharmacol.(高级药理学)25:319-339。为了提高稳定性和对核酸酶降解的抗性，还制备了硫代磷酸酯二核苷酸和四核苷酸衍生物如2e，2f，3e，3f，3g，和3h(图13,14和15)，其中核苷酸之间非键合的氧被硫替代。应用标准的亚磷酰胺流程，不同的是在氧化步骤中用双(O，O-二异丙氧基硫膦基)二硫化物(S-tetra)替换碘。Zon禾口Stec(1991)在Eckstein,F.(ed.)，'PhosphorothioateAnalogues'inOligonucleotidesandTheirAnalogs:APracticalApproach(寡核苷酸中的'硫代磷酸酯'类似物和它们的类似物实用方法).IRL出版社，第87-108页；Zon，G.(1990)在Hancock,W.S.(ed.),HighPerformanceLiquidChromatographyinBiotechnology(生物技术中的高效液相色谱).Wiley,纽约，第14章，第310-397页[书引用];Stec，Uznanski,Wilk,Hirschbein,Fearon,和Bergot(1993)Tet.Lett.34:5317-5320;Iyer,Phillips,Egan,Regan,禾BBeaucage(1990)J.Org.Chem(有机化学杂志).55:4693-4699。对于将这些寡核苷酸用作药物的另一种潜在的障碍是胞苷脱氨酶(CDA)的普遍存在，原因在于地西他滨的脱氨基导致整体的活性损失。Momparler,Cote和Eliopoulos(1997)Leukemia(白血病)11(增刊1):1-6;Chabot,Bouchard和Momparler(1983)Biochem.Pharmacol.(生物化学药理学)32:1327-1328;Laliberte,Marquez和Momparler(1992)CancerChemother.Pharmacol.(癌肿化学治疗药理学)30:7-11。为了解决这一问题，还制备包含其中4-NH2被4-NR3R4(其中R3和R4可以是烷基、烷胺和垸醇)取代的地西他滨衍生物的寡核苷酸，以生成衍生物如2g，2h，2i，2j，2k，21，2m，2n，3i，3j，3k，31，，3m，3n，3o，和3p(图16,17,18,19,20和21)。应用标准的亚磷酰胺流程，不同的是在去除4-甲氧基和4-甲硫基过程中用垸胺、烷二胺和羟胺替换在甲醇中的氨。由于二级和三级胺，二胺和羟胺比氨水使得离去基团变得更难离去，所以这些衍生物更加难以脱氨基。6.基于癌症相关基因如P15(CDKN2B)，BRCA1，和P16(CDKN2A)启动子区的CpG岛合成富含DpG和GpD的寡核苷酸可以制备富含DpG和GpD岛的寡核苷酸类似物，其长度在5到100个碱基范围内，其中D可以是地西他滨或地西他滨衍生物。与上述DpG和GpD二核苷酸和四核苷酸不同，这些相对更长的富含DpG和GpD的寡核苷酸类似物不但严格在启动子区的CpG岛内起作用，而且对在癌症相关基因如P15(CDKN2B)，P16(CDKN2A)和BRAC1的启动子区序列内部的片段特异。例如，基于P15，P16,和BRCA1启动子区序列(分别为图27,28和29)的8-mer，10-mer,和12-mer富含DpG和GpD的寡核苷酸类似物(图26)可以通过在标准的固相寡核苷酸合成中使用亚磷酰胺结构单元ld，le或lf制备。可以修饰成其中结合5-氮杂-胞嘧啶的寡核苷酸的更多实例在图27，28和29中列出。这些寡核苷酸类似物可以如引物一样作用，并且只在P15,P16或BRCA1启动子区序列的特别片段结合在正在复制的DNA中，因此有效地并且选择性地抑制所述启动子区的甲基化。尽管已经在本文中显示并且描述了本发朋的优选的实施方案，但是对本领域的技术人员应该显而易见，所述实施方案只是通过举例方式提供。现在对于本领域的技术人员将存在许多不背离本发明的改变，变化和替换。应该理解，本文所述的本发明的实施方案的各种备选方案可以用于实施本发明。意欲由下述权利要求定义本发明的范围，并且由此涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构和它们的等价物。权利要求1.一种分离的或合成的寡核苷酸类似物、其盐或酯，其在长度上具有12个或更少的碱基，并且在所述寡核苷酸类似物序列中包含一个或多个5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基。2.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物在序列中具有多于30%,35%,或40%的鸟嘌呤残基。3.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物选自由下列各项组成的组5，-DpG-3，，5，-GpD-3，，5，-DpGpD-3，，5，-GpGpD-3，,5,-GpDpG-3，，5'-GpDpD-3'，5'-DpDpG-3,，5'匿DpGpG-3，，5'-GpDpD-3'，5，-DpGpA-3，，5，-DpGpDpG-3，，5，-DpGpGpD-3，，5，-GpDpGpD-3，,5'-GpDpDpG-3，，5'-DpGpDpGpA-3，，其中D是地西他滨；p是磷酸接头;A是2'-脱氧腺苷，和G是2'-脱氧鸟苷。4.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是5'-DpG-3'或5'-GpD-3',其中D是地西他滨；p是磷酸接头；和G是脱氧鸟苷。5.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物在序列中包含具有下述通式的片段一Z-L-G—,或一G-L-Z—，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。6.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是糖磷酸二酯接头。7.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是核糖或2'-脱氧核糖磷酸二酯接头。8.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是核糖或2'-脱氧核糖硫代磷酸酯接头。9.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是核糖或2'-脱氧核糖bornophosphate接头。10.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是核糖或2'-脱氧核糖甲基磷酸酯接头。11.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是2'-甲氧基核糖磷酸二酯接头。12.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是2'-甲氧基乙基核糖磷酸二酯接头。13.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是2'-氟核糖磷酸二酯接头。14.权利要求5的寡核苷酸类似物，其中所述接头L是蛋白质核苷酸(PNA)主链。15.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述盐用选自由下列各项组成的组的酸形成盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、羧酸、磺酸、硫代酸或膦酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、延胡索酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酸基苯甲酸、embonicacid、烟酸、异烟酸、氨基酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙垸-1,2-二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-l,5-二磺酸、2-或3-磷酸甘油酯、葡萄糖-6-磷酸、N-环己基氨基磺酸和抗坏血酸。16.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述盐是盐酸盐，甲磺酸盐，EDTA,亚硫酸盐，L-天冬氨酸盐，马来酸盐，磷酸盐，L-谷氨酸盐，(+)-L-酒石酸盐，柠檬酸盐，L-乳酸盐，琥珀酸盐，乙酸盐，己酸盐，丁酸盐，或丙酸盐。17.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述盐是钠、钙、锂、钾、铵或三烷基铵盐。18.权利要求16的寡核苷酸类似物，其中所述三烷基铵盐是三甲基铵、三乙基铵或三丙基铵盐。19.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物的5'-或3'-末端的羟基基团用非羟基保护基团取代。20.权利要求1的寡核苷酸类似物，其中所述非羟基保护基团选自由下列各项组成的组二甲氧基tritoxyl(DMTr-O),O-甲基(OMe),乙二醇,四乙二醇，六乙二醇，和六乙二醇磷酸酯(或盐)。21.—种分离或合成的寡核苷酸类似物，其盐或酯，其在序列中包含两个或多个拷贝的具有下述通式的二核苷酸类似物—Z-L-G—,或一G-L-Z—,其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。22.权利要求21的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物包含小于IO,8,6,或4个拷贝的二核苷酸类似物一Z-L-G—，或一G-L-Z—。23.—种分离或合成的寡核苷酸类似物，其盐或酯，其在长度上具有至少6个碱基，并且包含；在所述寡核苷酸类似物的序列中包含一个或多个5-氮杂-胞嘧啶残基；并且与基因片段具有至少75%的序列同源性。24.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物具有通式—Z-L-G—，或一G-L-Z—，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；和L是共价连接Z和G的化学接头。25.权利要求24的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物具有两个或多个拷贝的一Z-L-G—，或一G-L-Z—。26.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因片段是所述基因的5'-非翻译区。27.权利要求26的寡核苷酸类似物，其中所述基因的5'-非翻译区是基因的启动子。28.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物在序列中具有多于30%,35%，或40%的鸟嘌呤残基。29.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因是哺乳动物基因。30.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因是人基因。31.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因是编码选自由下列各项组成的组的蛋白质的人基因VHL;P16/INK4A;E-钙黏着蛋白；hMLHl;BRCA1;LKB1;P15/INK4B;雌激素受体；06-MGMT;GST-pi;TIMP-3;DAPK1;P73;雄激素受体；视黄酸受体-卩；内皮縮血管肽-B受体；Rb;P14ARF;RASSF1;APC;胱天蛋白酶画8;TERT;TERC;TMS-1;SOCS-l;PITX2;MINT1;MINT2;GPR37;SDC4;MY0D1;MDR1;THBS1;PTC1;和pMDRl。32.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因是人肿瘤抑制基因。33.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因编码人P15。34.权利要求33的寡核苷酸类似物，其中P15基因的片段是在具有SEQIDNO:7的启动子区中的片段。35.权利要求34的寡核苷酸类似物，其中P15基因的片段选自由SEQIDNOs:8-12组成的组。36.权利要求34的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是SEQIDNO:1或2。37.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因编码人P16。38.权利要求37的寡核苷酸类似物，其中P16基因的片段是在具有SEQIDNO:13的启动子区中的片段。39.权利要求38的寡核苷酸类似物，其中P16基因的片段选自由SEQIDNOs:14-18组成的组。40.权利要求38的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是SEQIDNO:5或6。41.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述基因编码人BRCA1。42.权利要求41的寡核苷酸类似物，其中BRCA1基因的片段是在具有SEQIDNO:19的启动子区中的片段。43.权利要求42的寡核苷酸类似物，其中P15基因的片段选自由SEQIDNOs:20-24组成的组。44.权利要求42的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是SEQIDNO:3或4。45.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物能够在高严格性条件下与所述基因的片段杂交。46.权利要求45的寡核苷酸类似物，其中所述高严格性条件是在42°C，在5XSSPE,0.3%SDS，200昭/ml剪切的和变性的鲑精DNA，禾Q50%甲酰胺中的杂交。47.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物能够在中等严格性条件下与所述基因的片段杂交。48.权利要求47的寡核苷酸类似物，其中所述中等严格性条件是在42°C，在5XSSPE,0.3%SDS,200吗/ml剪切的和变性的鲑精DNA，和35%甲酰胺中的杂交。49.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物能够在低严格性条件下与所述基因的片段杂交。50.权利要求49的寡核苷酸类似物，其中所述低严格性条件是在42。C，在5XSSPE,0.3%SDS,200|ig/ml剪切的和变性的鲑精DNA，和25%甲酰胺中的杂交。51.权利要求23的寡核苷酸类似物，其中作为第一链的寡核苷酸类似物与所述寡核苷酸类似物互补的第二链寡核苷酸形成双链，不同的是与5-氮杂-胞嘧啶匹配的碱基残基是鸟嘌呤。52.权利要求51的寡核苷酸类似物，其中所述第二链寡核苷酸包含一个或多个胞嘧啶残基，并且至少一个胞嘧啶残基被5-甲基-胞嘧啶取代。53.权利要求52的寡核苷酸类似物，其中所述第一链具有5'-Z-L-G-3'片段，并且所述第二链包含与第一链中的5'-Z-L-G-3'片段匹配的3'-G-L-C'-5'片段，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；L是共价连接Z和G或者G和C'的化学接头；和C'是5-甲基-胞嘧啶。54.权利要求52的寡核苷酸类似物，其中所述第一链具有5'-G-L-Z-3'片段，并且所述第二链包含与第一链中的5'-G-L-Z-3'片段匹配的3'-C'-L-G-5'片段，其中Z是5-氮杂-胞嘧啶；G是鸟嘌呤；L是共价连接Z和G或者G和C'的化学接头；和C是5-甲基-胞嘧啶。55.—种寡核苷酸类似物，其盐或其酯，其结合DNA甲基转移酶上的变构位点，并且具有SEQIDNO:25，26,27,28,或29,其中在SEQIDNO:25，26,27，28,或29中的至少一个胞嘧啶残基用5-氮杂-胞嘧啶取代。56.权利要求55的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是SEQIDNO:30。57.—种寡核苷酸类似物，其盐或其酯，其是至少6个核苷酸长；具有至少一个5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基；并且在环境温度下在水溶液中采取发夹构象。58.权利要求57的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物具有下述共有的发夹二级结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中N是任何核苷酸；N'是与N互补的核苷酸；Z是作为碱基残基的5-氮杂-胞嘧啶；G是作为碱基残基的鸟嘌呤；1,n,或m是整数；核苷酸Nn,Nm,N'n,和N'm位于发夹的干区；和N,位于发夹的环区。59.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中l,n,或m是大于2,3，4,或5的整数。60.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中1是2，3,4,5，或6。61.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中当Nn,Nm,或N,具有一个或多个胞嘧啶残基时，所述胞嘧啶残基的至少一个被5-氮杂-胞嘧啶取代。62.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中当Nn,Nm,或N,具有一个或多个胞嘧啶残基时，至少一个所述胞嘧啶残基被5-甲基-胞嘧啶取代。63.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中所述发夹结构是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中C'是5-甲基-胞苷或5-甲基-2'-脱氧胞苷。64.权利要求58的寡核苷酸类似物，其中所述寡核苷酸类似物是SEQIDNO:31，并且具有下述发夹构象<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中D是地西他滨，A是腺苷或2'-脱氧腺苷，T是胸苷或2'-脱氧胸苷，和在核苷酸位置21的C任选地用5-甲基-2'-脱氧胞苷取代。65.权利要求57的寡核苷酸类似物，其中所述环境温度是约20-25°C。66.权利要求57的寡核苷酸类似物，其中所述水溶液是水或正常的盐水。67.权利要求57的寡核苷酸类似物，其中所述水溶液是含有20mMHEPES(pH7)，12%甘油，1mMEDTA,4mM二硫苏糖醇，0.1%乙基苯基聚乙二醇P-40，和3mMMgCl2的缓冲液。68.—种药物组合物，其包含权利要求1,21,23,55,或57的寡核苷酸类似物，或其药用盐或酯，和药用载体。69.按照权利要求68的药物组合物，所述权利要求1的寡核苷酸类似物或其药用盐或酯是以固体形式存在。70.按照权利要求68的药物组合物，其中所述药用载体是水溶液。71.按照权利要求70的药物组合物，其中所述水溶液包括选自由下列各项组成的组的可与水混溶的非水性溶剂乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇和它们的组合。72.按照权利要求68的药物组合物，其中所述药用载体是具有少于40%的水的溶液。73.按照权利要求68的药物组合物，其中所述药用载体是具有少于5%的水的溶液。74.按照权利要求73的药物组合物，其中所述药用载体是包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇或它们的组合的溶液。75.按照权利要求68的药物组合物，其中所述药用载体是脂质体。76.按照权利要求75的药物组合物，其中所述脂质体是阳离子脂质体。77.按照权利要求68的药物组合物，其中所述药物组合物是以乳剂形式存在。78.按照权利要求68的药物组合物，其中所述乳剂包括阳离子乳化剂。79.—种试剂盒，其包括包含权利要求1,21,23，55，或57的寡核苷酸类似物、其盐或酯的第一容器。80.权利要求79的试剂盒，其还包括包含稀释剂的第二容器，所述稀释剂包括水、甘油、丙二醇、聚乙二醇或它们的组合。81.权利要求80的试剂盒，其还包括描述怎样给需要其的宿主施用所述寡核苷酸类似物、其盐或其酯的书面使用说明。82.—种用于抑制细胞中的DNA甲基化的方法，其包括-将所述细胞与权利要求1,21,23，55,或57的寡核苷酸类似物、其盐或其酯接触，以致所述细胞的DNA甲基化活性被抑制。83.权利要求82的方法，其中所述细胞存在于体外细胞培养物中。84.权利要求82的方法，其中所述细胞存在于体外组织部分中。85.权利要求82的方法，其中所述细胞存在于体内组织中。86.权利要求82的方法，其中所述接触步骤包括将所述细胞与生物有效量的权利要求1的寡核苷酸类似物、其盐或酯接触，以致所述细胞的至少50%的DNA甲基化活性得到抑制。87.—种治疗患有与异常DNA甲基化相关的疾病的患者的方法，其包括给所述患者施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的权利要求1,21,23,55,或57的寡核苷酸类似物、其盐或其酯，和药用载体。88.按照权利要求87的方法，其中所述药物组合物是通过口服、肠胃外、局部、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、经颊、鼻内、脂质体、通过吸入、阴道、眼内、通过局部递送、皮下、脂肪内、关节内、或鞘内施用。89.按照权利要求87的方法，其中所述药物组合物是静脉内施用的。90.按照权利要求87的方法，其中所述药物组合物是皮下施用的。91.按照权利要求87的方法，其还包括给患者施用与所述药物组合物组合的第二治疗剂。92.按照权利要求91的方法，其中所述第二治疗剂选自由下列各项组成的组组蛋白脱乙酰酶抑制剂、抗生素药剂、垸化剂、类视黄醇、激素药剂、植物来源的药剂、生物药剂、白介素、干扰素、细胞因子、免疫-调控剂和单克隆抗体。93.按照权利要求92的方法，其中所述组蛋白脱乙酰酶抑制剂选自由下列各项组成的组曲古抑菌素A、N-辛二酰苯胺异羟肟酸、oxamflatin、辛二酸二异羟肟酸、间-羧基-肉桂酸二异羟肟酸、pyroamide、trapoxinA、apicidin、酯肽、N-(2-氨基苯基)-4-[N-(P比啶-3-基甲氧基羰基)氨基甲基]苯甲酰胺，丁酸,丁酸苯酯和精氨酸丁酸酯。94.按照权利要求87的方法，其中所述与异常的DNA甲基化相关的疾病选自由血液疾病、良性肿瘤和癌症组成的组。95.按照权利要求94的方法，其中所述血液疾病选自由急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和镰状细胞性贫血病组成的组。96.按照权利要求94的方法，其中所述癌症选自由下列各项组成的组乳腺癌，皮肤癌，骨癌，前列腺癌，肝癌，肺癌，非小细胞肺癌，脑癌,喉癌，胆囊癌，胰腺癌，直肠癌，甲状旁腺癌，甲状腺癌，肾上腺癌，神经组织癌，头颈癌，结肠癌，胃癌，支气管癌，和肾癌，基底细胞癌，溃疡和乳突型的鳞状细胞癌，转移的皮肤癌，骨肉瘤，Ewing's肉瘤，veticulum细胞肉瘤，骨髓瘤，巨细胞瘤，小细胞肺肿瘤，胆结石，胰岛细胞瘤，原发性脑瘤，急性和慢性淋巴和粒细胞瘤，毛细胞瘤，腺瘤，增生，骨髓癌，嗜铬细胞瘤，粘膜神经瘤，肠神经节瘤，增生性角膜神经瘤，马方体型肿瘤,维尔姆斯瘤，精原细胞瘤，卵巢肿瘤，平滑肌瘤，宫颈发育异常和原位癌,成神经细胞瘤，成视网膜细胞瘤，软组织肉瘤，恶性类癌瘤，局部皮肤损伤，覃样霉菌病，横纹肌肉瘤，卡波西肉瘤，骨原性肉瘤，恶性高钙血症,肾细胞瘤，真性红细胞增多症，腺癌，多形性成胶质细胞瘤，白血病，淋巴瘤，恶性黑素瘤，和表皮癌。97.—种下式的化合物，其中R,是选自由下列各项组成的组苯氧基乙酰胺(Pac-NH),O-甲基(OMe),S-甲基(SMe)，S-乙基(SEt),二甲胺(NMe2)，禾H9-荷基甲基氨基甲酸酯(Fmoc-NH);R2是选自由下列各项组成的组二甲氧基tritoxyl(DMTr-O),羟基(OH),O-甲基(OMe)，乙二醇，四乙二醇，六乙二醇，和六乙二醇磷酸酯;R3是选自由下列各项组成的组氰基乙基二异丙基亚磷酰胺，O-甲基(OMe),乙二醇，四乙二醇，和固体支持物；和R4是选自由下列各项组成的组氢，羟基(OH)，O-甲基(OMe),乙二醇，四乙二醇，六乙二醇，和六乙二醇磷酸酯。98.权利要求97的化合物，其中所述固体支持物是控制孔的玻璃固体支持物或聚苯乙烯。99.一种制备结合5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基的二核苷酸类似物的方法，其包括将权利要求97中的化合物与附着到固体支持物上的3'-或5'-保护的核苷反应，以生成附着到所述固体支持物上的保护的二核苷酸类似物；和将所述保护的二核苷酸类似物去保护，以生成二核苷酸类似物。100.权利要求99的方法，其中所述附着到固体支持物上的核苷是附着到固体支持物上的下列各项3'-或5'-保护的鸟苷、胞苷、腺苷、胸苷、尿苷、肌苷、5-甲基-胞苷，5-氮杂-胞苷，2'-脱氧鸟苷，2'-脱氧胞苷，2'-脱氧腺苷，2'-脱氧胸苷，2'-脱氧尿苷，2'-脱氧肌苷，5-甲基-2'-脱氧胞苷，或5-氮杂-2'-脱氧胞苷。101.权利要求99的方法，其中所述固体支持物是控制孔的玻璃固体支持物，或聚苯乙烯固体支持物。102.—种制备结合5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基的二核苷酸类似物的方法，其包括下列步骤将权利要求97中的其中R3是固体支持物的化合物与3'-或5'-保护的核苷反应，以生成附着到所述固体支持物上的保护的二核苷酸类似物；和将所述保护的二核苷酸类似物去保护，以生成二核苷酸类似物。103.权利要求102的方法，其中所述附着到固体支持物上的核苷是附着到固体支持物上的下列各项3'-或5'-保护的鸟苷、胞苷、腺苷、胸苷、尿苷、肌苷、5-甲基-胞苷，5-氮杂-胞苷，2'-脱氧鸟苷，2'-脱氧胞苷，2'-脱氧腺苷，2'-脱氧胸苷，2'-脱氧尿苷，2'-脱氧肌苷，5-甲基-2'-脱氧胞苷，或5-氮杂-2'-脱氧胞苷。104.权利要求102的方法，其中所述固体支持物是控制孔的玻璃固体支持物，或聚苯乙烯固体支持物。105.—种制备结合5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基的寡核苷酸类似物的方法，其包括步骤将权利要求97中的化合物与附着到固体支持物上的3'-或5'-保护的核苷反应，以生成附着到所述固体支持物上的保护的二核苷酸类似物；将所述附着到固体支持物上的保护的二核苷酸类似物与顺序的核苷酸结构单元反应，以生成保护的寡核苷酸类似物；和将所述保护的寡核苷酸类似物去保护，以生成寡核苷酸类似物。106.权利要求105的方法，其中所述附着到固体支持物上的核苷是附着到固体支持物上的下列各项3'-或5'-保护的鸟苷、胞苷、腺苷、胸苷、尿苷、肌苷、5-甲基-胞苷，5-氮杂-胞苷，2'-脱氧鸟苷，2'-脱氧胞苷，2'-脱氧腺苷，2'-脱氧胸苷，2'-脱氧尿苷，2'-脱氧肌苷，5-甲基-2'-脱氧胞苷，或5-氮杂-2'-脱氧胞苷。107.权利要求105的方法，其中所述固体支持物是控制孔的玻璃固体支持物，或聚苯乙烯固体支持物。108.权利要求105的方法，其中所述核苷酸结构单元选自由下列各项组成的组3'-或5'-保护的2'-脱氧-鸟苷，胞苷，腺苷，胸苷，尿苷，肌苷,和5-氮杂-胞嘧啶亚磷酰胺。109.权利要求105的方法，其中将权利要求97中的化合物与附着到固体支持物上的3'-或5'-保护的核苷反应的步骤包括在苯甲硫基四唑存在下，将权利要求l中的化合物与附着到固体支持物上的核苷反应的步骤。110.权利要求105的方法，其中R2是二甲氧基tritoxyl(DMTr-0);并且将所述保护的寡核苷酸类似物去保护的步骤包括将所述保护的寡核苷酸类似物在二氯乙酸中去保护。111.一种制备结合5-氮杂-胞嘧啶作为碱基残基的寡核苷酸类似物的方法，其包括下列步骤将权利要求97中的其中R3是固体支持物的化合物与3'-或5'-保护的核苷反应，以生成附着到所述固体支持物上的保护的二核苷酸类似物；将所述附着到固体支持物上的保护的二核苷酸类似物与顺序的核苷酸结构单元反应，以生成保护的寡核苷酸类似物；和将所述保护的寡核苷酸类似物去保护，以生成寡核苷酸类似物。112.权利要求lll的方法，其中所述附着到固体支持物上的核苷是附着到固体支持物上的下列各项3'-或5'-保护的鸟苷、胞苷、腺苷、胸苷、尿苷、肌苷、5-甲基-胞苷，5-氮杂-胞苷，2'-脱氧鸟苷，2'-脱氧胞苷，2'-脱氧腺苷，2'-脱氧胸苷，2'-脱氧尿苷，2'-脱氧肌苷，5-甲基-2'-脱氧胞苷，或5-氮杂-2'-脱氧胞苷113.权利要求lll的方法，其中所述固体支持物是控制孔的玻璃固体支持物，或聚苯乙烯固体支持物。114.权利要求111的方法，其中所述核苷酸结构单元选自由下列各项组成的组2'-脱氧-鸟苷，胞苷，腺苷，胸苷，尿苷，肌苷，5-甲基胞苷和5-氮杂-胞嘧啶亚磷酰胺。全文摘要本发明提供在寡核苷酸序列中结合5-氮杂-胞嘧啶，例如，以5-氮杂-2’-脱氧胞苷(地西他滨)或5-氮杂-胞苷的形式存在的寡核苷酸类似物。特别地，提供富含地西他滨-脱氧鸟苷岛(DpG和GpD)的寡核苷酸类似物，以靶向人基因组中的CpG岛，特别是在对异常的过度甲基化敏感的基因的启动子区。这样的类似物可以用于调节DNA的甲基化，诸如有效抑制胞嘧啶在C-5位置的甲基化。本发明提供合成这些寡核苷酸类似物的方法和调控核酸甲基化的方法。还提供用于合成所述寡核苷酸类似物的亚磷酰胺结构单元，用于合成、配制和施用这些化合物或组合物治疗病况如癌症和血液疾病的方法。文档编号C07H21/04GK101282986SQ200680036470公开日2008年10月8日申请日期2006年9月25日优先权日2005年9月29日发明者帕西特·皮西翁萨,桑吉维·雷德卡申请人:苏伯俭股份有限公司