人抑癌基因及其编码的蛋白质的利记博彩app

专利名称：人抑癌基因及其编码的蛋白质的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种人抑癌基因、其编码的蛋白质、包含该基因的表达载体及用该载体转化的细胞。

背景技术：
抑癌基因产物起到抑制正常细胞转化成某种癌细胞的作用，因此抑癌基因产物这种功能的丧失使正常细胞变为恶性转化体(Klein，G，FASEB J.，7，821-825(1993))。为了使癌细胞发展成癌症，细胞应该丧失控制抑癌基因正常拷贝数的功能。发现p53抑癌基因的编码序列中的变异是人类癌症中最普遍的基因变异之一(Bishop，J.M.，Cell，64，235-248(1991)；和Weinberg，R.A.，Science，254，1138-1146(1991))。
然而，因为乳腺癌中报道的p53突变总计在总的乳腺癌的30％的范围内，所以推测只有一些乳腺癌组织表现出p53突变(Keen，J.C. & Davidson，N.E.，Cancer，97，825-833(2003))和Borresen-Dale，A-L.，Human Mutation，21，292-300(2003))。而且，因为白血病中报道的p53突变总计在总的白血病的20％的范围内，所以推测只有一些白血病组织表现出p53突变(Boyapati，A.，等人，Acta Haematol.，111(1-2)，100-106(2004))。
p53突变占肝癌的至少50％，尤其是在遭受黄曲酶毒素B1的或具有高频率的乙型病毒感染的区域，其主要特征是p53癌基因中密码子249的错义突变(Montesano，R.等人，J.Natl.Cancer Inst.，89，1844-1851(1997)；Szymanska，K.& Hainaut，P.Acta Biochimica Polonica，50，231-238(2003))。然而，据报道在美国和西欧p53突变总计只在肝癌的30％的范围内，这里没有这种突变频繁发生的热点(Szymanska，K. & Hainaut，P.Acta Biochimica Polonica，50，231-238(2003))。
同时，因为子宫颈癌中报道的p53突变总计只在总的子宫颈癌的2～11％的范围内，所以推测只有一些子宫颈癌组织表现出p53突变(Crook，T.等人，Lancet，339，1070-1073(1992)；和Busby-Earle，R.M.C.等人，Br.j.Cancer，69，732-737(1994))。
而且，据报道非小细胞肺癌和小细胞肺癌中p53抑癌基因的突变频率总计分别占总的肺癌的约50％和70％(Takahashi，T.等人，Science，246，491-4941989；Bodner，S.M.等人，Oncogene，7，743-749(1992)；Mao，L.Lung Cancer，34，S27-S34(2001))。吸烟是肺癌发病和扩展的最关键因素之一，除了p53之外，其它多种抑癌基因和癌基因共同与肺癌的发病和扩展相关(Osada，H. &Takahashi，T.Oncogene，21，7421-7434(2002))。
因此，本发明人已积极尝试通过mRNA差异显示(DD)法从如乳腺、肝、子宫颈、肺等的正常组织中分离新的抑癌基因，mRNA差异显示(DD)法用于更有效地显示如乳腺、肝、子宫颈和肺的正常组织和如乳腺癌、肝癌、子宫颈癌和肺癌的癌组织之间的基因差异性表达(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))。


发明内容
为此，本发明企图解决现有技术的问题，因此本发明的一个目的是提供一种新的人抑癌基因。
本发明的另一个目的是提供由所述抑癌基因编码的抑癌蛋白。
本发明的又一个目的是提供包含所述抑癌基因的表达载体。
为实现上述目的之一，本发明提供一种具有选自由SEQ ID NO1、SEQID NO5、SEQ ID NO9、SEQ ID NO13、SEQ ID NO17、SEQ ID NO21、SEQ ID NO25、SEQ ID NO29、SEQ ID NO33、SEQ ID NO37、SEQ ID NO41、SEQ ID NO45、SEQ ID NO49、SEQ ID NO53、SEQ ID NO57、SEQID NO61、SEQ ID NO65、SEQ ID NO69、SEQ ID NO73、SEQ ID NO77、SEQ ID NO81、SEQ ID NO85、SEQ ID NO89、SEQ ID NO93、SEQ ID NO97、SEQ ID NO101、SEQ ID NO105、SEQ ID NO109和SEQ ID NO113组成的组中的DNA序列的人抑癌基因。
根据本发明的另一个上述目的，本发明提供一种具有选自由SEQ ID NO2、SEQ ID NO6、SEQ ID NO10、SEQ ID NO14、SEQ ID NO18、SEQ IDNO22、SEQ ID NO26、SEQ ID NO30、SEQ ID NO34、SEQ ID NO38、SEQ ID NO42、SEQ ID NO46、SEQ ID NO50、SEQ ID NO54、SEQ ID NO58、SEQ ID NO62、SEQ ID NO66、SEQ ID NO70、SEQ ID NO74、SEQID NO78、SEQ ID NO82、SEQ ID NO86、SEQ ID NO90、SEQ ID NO94、SEQ ID NO98、SEQ ID NO102、SEQ ID NO106、SEQ ID NO110和SEQID NO114组成的组中的氨基酸序列的人抑癌蛋白。
根据又一个上述目的，本发明提供一种包含所述抑癌基因的表达载体。
根据再一个上述目的，本发明提供一种用所述表达载体转化的细胞。



结合附图，在下面详细描述中更充分地描述本发明的优选实施方式的这些和其它特征、技术方案及优点。在附图中 图1为示出使用SEQ ID NO3的5′-13-mer随机引物H-AP33和SEQ IDNO4的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图2为示出使用SEQ ID NO7的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO8的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图3为示出使用SEQ ID NO11的5′-13-mer随机引物H-AP5和SEQ IDNO12的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图4为示出使用SEQ ID NO15的5′-13-mer随机引物H-AP2和SEQ IDNO16的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图5为示出使用SEQ ID NO19的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ IDNO20的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图6为示出使用SEQ ID NO23的5′-13-mer随机引物H-AP7和SEQ IDNO24的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图7为示出使用SEQ ID NO27的5′-13-mer随机引物H-AP11和SEQ IDNO28的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图8为示出使用SEQ ID NO31的5′-13-mer随机引物H-AP3和SEQ IDNO32的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图9为示出使用SEQ ID NO35的5′-13-mer随机引物H-AP4和SEQ IDNO36的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图10为示出使用SEQ ID NO39的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ IDNO40的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图11为示出使用SEQ ID NO43的5′-13-mer随机引物H-AP33和SEQ IDNO44的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图12为示出使用SEQ ID NO47的5′-13-mer随机引物H-AP35和SEQ IDNO48的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图13为示出使用SEQ ID NO51的5′-13-mer随机引物H-AP3和SEQ IDNO52的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图14为示出使用SEQ ID NO55的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO56的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图15为示出使用SEQ ID NO59的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO60的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图16为示出使用SEQ ID NO63的5′-13-mer随机引物H-AP7和SEQ IDNO64的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图17为示出使用SEQ ID NO67的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ IDNO68的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图18为示出使用SEQ ID NO71的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO72的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图19为示出使用SEQ ID NO75的5′-13-mer随机引物H-AP16和SEQ IDNO76的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图20为示出使用SEQ ID NO79的5′-13-mer随机引物H-AP2和SEQ IDNO80的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图21为示出使用SEQ ID NO83的5′-13-mer随机引物H-AP9和SEQ IDNO84的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图22为示出使用SEQ ID NO87的5′-13-mer随机引物H-AP9和SEQ IDNO88的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图23为示出使用SEQ ID NO91的5′-13-mer随机引物H-AP32和SEQ IDNO92的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图24为示出使用SEQ ID NO95的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO96的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图25为示出使用SEQ ID NO99的5′-13-mer随机引物H-AP22和SEQ IDNO100的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图26为示出使用SEQ ID NO103的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQID NO104的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图27为示出使用SEQ ID NO107的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQID NO108的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图28为示出使用SEQ ID NO111的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQID NO112的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图；以及 图29为示出使用SEQ ID NO115的5′-13-mer随机引物H-AP4和SEQ IDNO116的oligo-dT锚定引物的PCR结果的凝胶图； 图30～图58分别为示出本发明的GIG8基因产物(图30)、GIG10基因产物(图31)、GIG13基因产物(图32)、GIG15基因产物(图33)、GIG16基因产物(图34)、GIG24基因产物(图35)、GIG26基因产物(图36)、GIG29基因产物(图37)、GIG30基因产物(图38)、GIG32基因产物(图39)、GIG33基因产物(图40)、GIG34基因产物(图41)、GIG35基因产物(图42)、GIG38基因产物(图43)、GIG39基因产物(图44)、GIG40基因产物(图45)、GIG42基因产物(图46)、GIG43基因产物(图47)、GIG46基因产物(图48)、PIG33基因产物(图49)、PIG35基因产物(图50)、PIG36基因产物(图51)、MIG20基因产物(图52)、PIG49基因产物(图53)、PIG51基因产物(图54)、MIG12基因产物(图55)、PIG37基因产物(图56)、GIG44基因产物(图57)和GIG31基因产物(图58)的SDS-PAGE分析结果的图； 图59、图60、图61、图67、图68、图69、图70、图71、图72、图73、图76、图82、图83、图86和图87分别为示出GIG8基因、GIG10基因、GIG13基因、GIG30基因、GIG32基因、GIG33基因、GIG34基因、GIG35基因、GIG38基因、GIG39基因、GIG43基因、PIG49基因、PIG51基因、GIG44基因和GIG31基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果的图； 图62为示出本发明的GIG15基因在正常骨髓组织、白血病骨髓组织和K562白血病细胞中差异性表达的RNA印迹结果的图； 图63、图64、图65、图66、图74、图75、图78、图79、图80和图85分别为示出GIG16基因、GIG24基因、GIG26基因、GIG29基因、GIG40基因、GIG42基因、PIG33基因、PIG35基因、PIG36基因和PIG37基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果的图； 图77和图81分别为示出GIG46基因和MIG20基因在正常的外宫颈组织、原发性子宫癌组织和子宫癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果的图； 图84为示出本发明的MIG12基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转移性肺癌组织和肺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果的图，且图59～87的底部分别为示出通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果的图； 图88～116分别为示出GIG8基因(图88)、GIG10基因(图89)、GIG13基因(图90)、GIG15基因(图91)、GIG16基因(图92)、GIG24基因(图93)、GIG26基因(图94)、GIG29基因(图95)、GIG30基因(图96)、GIG32基因(图97)、GIG33基因(图98)、GIG34基因(图99)、GIG35基因(图100)、GIG38基因(图101)、GIG39基因(图102)、GIG40基因(图103)、GIG42基因(图104)、GIG43基因(图105)、GIG46基因(图106)、PIG33基因(图107)、PIG35基因(图108)、PIG36基因(图109)、MIG20基因(图110)、PIG49基因(图111)、PIG51基因(图112)、MIG12基因(图113)、PIG37基因(图114)、GIG44基因(图115)和GIG31基因(图116)在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果的图，且图88～116的底部分别为示出通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果的图； 图117～145分别为示出GIG8基因(图117)、GIG10基因(图118)、GIG13基因(图119)、GIG15基因(图120)、GIG16基因(图121)、GIG24基因(图122)、GIG26基因(图123)、GIG29基因(图124)、GIG30基因(图125)、GIG32基因(图126)、GIG33基因(图127)、GIG34基因(图128)、GIG35基因(图129)、GIG38基因(图130)、GIG39基因(图131)、GIG40基因(图132)、GIG42基因(图133)、GIG43基因(图134)、GIG46基因(图135)、PIG33基因(图136)、PIG35基因(图137)、PIG36基因(图138)、MIG20基因(图139)、PIG49基因(图140)、PIG51基因(图141)、MIG12基因(图142)、PIG37基因(图143)、GIG44基因(图144)和GIG31基因(图145)在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果的图，且图117～145的底部分别为示出通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果的图； 图146、图147、图148、图154、图155、图156、图157、图158、图159、图160、图169、图170、图173以及图174分别为示出野生型MCF-7细胞，以及分别用GIG8基因、GIG10基因、GIG13基因、GIG30基因、GIG32基因、GIG33基因、GIG34基因、GIG35基因、GIG38基因、GIG39基因、PIG49基因、PIG33基因、GIG44基因以及GIG31基因转染的MCF-7乳腺癌细胞，和用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图； 图149为示出野生型K562细胞系、用GIG15基因转染的K562白血病细胞和用表达载体pcDNA3.1转染的K562细胞的生长曲线的图； 图150、图151、图152、图153、图161、图162、图163、图165、图166、图167以及图172为示出野生型HepG2肝癌细胞系，分别用GIG16基因、GIG24基因、GIG26基因、GIG29基因、GIG40基因、GIG42基因、GIG43基因、PIG33基因、PIG35基因、PIG36基因以及PIG37基因转染的HepG2肝癌细胞，以及用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图； 图164和图168分别为示出野生型HeLa细胞、分别用GIG46基因和MIG20基因转染的HeLa子宫癌细胞以及用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞的生长曲线的图；以及 图171为示出野生型A549肺癌细胞系、用MIG12基因转染的A549肺癌细胞和以及用表达载体pcDNA3.1转染的A549细胞的生长曲线的图。

具体实施例方式 下文将参照附图详细描述本发明的优选实施方式。
1.GIG8 本发明的基因为具有SEQ ID NO1的DNA序列的人抑癌基因8(GIG8)，其以AY634687的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_002166的收录号而被存入数据库的人类DNA结合抑制因子2(即显性负相螺旋-环-螺旋蛋白(ID2))的基因的DNA序列相似。然而从这些研究结果发现GIG8基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG8抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO1的DNA序列具有一个对应于DNA序列的120～524的碱基位置的开放阅读框(ORF)(522～524的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由134个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO2的氨基酸序列和约15kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO3的随机引物H-AP33(5′-AAGCTTGCTGCTC-3′)和SEQID NO4的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得163-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.3kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
2.GIG10 本发明的基因为具有SEQ ID NO5的DNA序列的人抑癌基因10(GIG10)，其以AY542305的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以AF230904的收录号而被存入数据库的人类c-Cb1-相互作用蛋白(CIN85)mRNA基因的相似。
然而从这些研究结果发现GIG10基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG10抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO5的DNA序列具有一个对应于DNA序列的52～2,049的碱基位置的开放阅读框(ORF)(2,047～2,049的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由665个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO6的氨基酸序列和约73kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO5中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO7的随机引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQID NO8的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得321-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约3.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
3.GIG13 本发明的基因为具有SEQ ID NO9的DNA序列的人抑癌基因13(GIG13)，其以AY493418的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_016831的收录号而被存入数据库的人类昼夜节律基因亚型3(period homolog 3)(果蝇)(PER3)基因的相似。
然而从这些研究结果发现GIG13基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG13抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。SEQ ID NO9的DNA序列具有一个对应于DNA序列的72～3,677的碱基位置的开放阅读框(ORF)(3,675～3,677的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由1,201个氨基酸残基组成，其具有SEQID NO10的氨基酸序列和约132kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO11的随机引物H-AP5(5′-AAGCTTAGTAGGC-3′)和SEQID NO12的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得347-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺和肝中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.3kb大小的mRNA转录物进行过量表达。尤其是，本发明的基因只有在正常组织中差异性表达。例如，本发明的基因在如乳腺癌组织和乳腺癌细胞系MCF-7的癌组织和癌细胞中很少表达或不表达，而只有在正常乳腺组织中差异性地提高表达。
4.GIG15 本发明的基因为具有SEQ ID NO13的DNA序列的人抑癌基因15(GIG15)，其以AY927233的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年10月1日)，该存入的基因的DNA序列与以AC116533的收录号而被存入数据库的人类染色体11、克隆RP11-466H18基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG15基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG15抑癌基因在包括白血病的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO13的DNA序列具有一个对应于DNA序列的18～338的碱基位置的开放阅读框(ORF)(366～338的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由106个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO14的氨基酸序列和约12kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO13中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO15的随机引物H-AP2(5′-AAGCTTCGACTGT-3′)和SEQ ID NO16的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得133-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约0.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达。尤其是，本发明的基因只在正常组织中差异性表达。例如，本发明的基因在癌组织和如白血病细胞和白血病细胞系K562的癌细胞中很少表达，而只有在正常乳腺组织中差异性地提高表达。
5.GIG16 本发明的基因为具有SEQ ID NO17的DNA序列的人抑癌基因16(GIG16)，其以AY513277的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的一些DNA序列与以NM_016527的收录号而被存入数据库的人类羟酸氧化酶2(长链)(HAO2)基因的不同，已知HAO2基因是三个具有2-羟酸氧化酶活性的基因之一(Jones，J.M.，等人，J.Biol.Chem.275(17)，12590-12597(2000))。然而从这些研究结果发现GIG16抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO17的DNA序列具有一个对应于DNA序列的41～1,096的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,094～1,096的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由351个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO18的氨基酸序列和约39kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO17中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO19的随机引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO20的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得213-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长GIG16cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌(E.coli)DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝和肾中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。尤其是，本发明的基因只有在正常组织差异性表达。例如，本发明的基因在如肝癌组织和肝癌细胞系HepG2的癌组织和癌细胞中不表达，而只有在正常乳腺组织中差异性表达。
6.GIG24 本发明的基因为具有SEQ ID NO21的DNA序列的人抑癌基因24(GIG24)，其以AY513275的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与人类cDNA FLJ35730 fis，克隆TESTI2003131的相似，并与以AK093049的收录号而被存入数据库的α1-抗胰凝乳蛋白酶前体基因的高度相似。然而从这些研究结果发现GIG24抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO21的DNA序列具有一个对应于DNA序列的34～1,305的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,303～1,305的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由423个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO22的氨基酸序列和约47kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO23的随机引物H-AP7(5′-AAGCTTAACGAGG-3′)和SEQ ID NO24的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得221-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长GIG24cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、心脏和肌肉中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
7.GIG26 本发明的基因为具有SEQ ID NO25的DNA序列的人抑癌基因26(GIG26)，其以AY544126的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与分别以NM_153696和AF261715的收录号而被存入数据库的人类前列腺特异性膜抗原(PSMAL)基因和人类前列腺特异性膜抗原蛋白(PSMAL/GCP III)mRNA基因的相似，已知前列腺特异性膜抗原是主要在前列腺上皮中表达的标志物蛋白((Lee，S.J.，等人，J.Mol.Biol.330(4)，749-760(2003))。然而从这些研究结果发现GIG26抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO25的DNA序列具有一个对应于DNA序列的26～1,354的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,352～1,354的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由442个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO26的氨基酸序列和约50kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO25中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO27的随机引物H-AP11(5′-AAGCTTCGGGTAA-3′)和SEQ ID NO28的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得204-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
本发明人将全长GIG26cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、肾、脑和心脏中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
8.GIG29 本发明的基因为具有SEQ ID NO29的DNA序列的人抑癌基因29(GIG29)，其以AY544127的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_003049的收录号而被存入数据库的人类溶质转运家族10(钠/胆汁酸共转运家族)基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG29抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO29的DNA序列具有一个对应于DNA序列的62～1,111的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,109～1,111的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由349个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO30的氨基酸序列和约38kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO29中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO31的随机引物H-AP3(5′-AAGCTTTGGTCAG-3′)和SEQ ID NO32的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得277-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长GIG29cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
9.GIG30 本发明的基因为具有SEQ ID NO33的DNA序列的人抑癌基因30(GIG30)，其以AY524045的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以AY358814的收录号而被存入数据库的人类克隆DNA43305RIPK2(UNQ277)基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG30基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG30抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO33的DNA序列具有一个对应于DNA序列的88～1,710的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,708～1,710的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由540个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO34的氨基酸序列和约61kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO35中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO35的随机引物H-AP4(5′-AAGCTTCTCAACG-3′)和SEQ ID NO36的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得278-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、肌肉和肝中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.9kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
10.GIG32 本发明的基因为具有SEQ ID NO37的DNA序列的人抑癌基因32(GIG32)，其以AY762103的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_001753的收录号而被存入数据库的人类小窝蛋白1(小窝蛋白，22kDa)(CAV1)基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG32基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG32抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO37的DNA序列具有一个对应于DNA序列的43～579的碱基位置的开放阅读框(ORF)(577～579的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由178个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO38的氨基酸序列和约20kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO37中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO39的随机引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO40的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得172-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约4.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
11.GIG33 本发明的基因为具有SEQ ID NO41的DNA序列的人抑癌基因33(GIG33)，其以AY871273的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年10月1日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_000996的收录号而被存入数据库的人类核糖体蛋白L35a(RPL35A)基因的相似。核糖体基因为催化蛋白质合成并由40S小亚基和60S大亚基组成的细胞内细胞器。然而，该基因的功能有待于详细说明(Herzog，H.，等人，Nucleic Acids Res.，18(15)，4600(1990)；Kenmochi，N.，等人，GenomeRes.，8(5)，509-523(1998)；Lopez，C.D.，等人，Cancer Lett.180(2)，195-202(2002))。然而从这些研究结果发现GIG33基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG33抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO41的DNA序列具有一个对应于DNA序列的74～406的碱基位置的开放阅读框(ORF)(404～406的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由110个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO42的氨基酸序列和约12kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO41中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO43的随机引物H-AP33(5′-AAGCTTGCTGCTC-3′)和SEQ ID NO44的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得182-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约0.6kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
12.GIG34 本发明的基因为具有SEQ ID NO45的DNA序列的人抑癌基因34(GIG34)，其以AY871274的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年10月1日)，该存入的基因的DNA序列与以BC018970的收录号而被存入数据库的人类核糖体蛋白L11基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG34基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG34抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO45的DNA序列具有一个对应于DNA序列的5～538的碱基位置的开放阅读框(ORF)(536～538的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由177个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO46的氨基酸序列和约20kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO45中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO47的随机引物H-AP35(5′-AAGCTTCAGGGCA-3′)和SEQ ID NO48的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得205-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约0.6kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
13.GIG35 本发明的基因为具有SEQ ID NO49的DNA序列的人抑癌基因35(GIG35)，其以AY542307的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_001404的收录号而被存入数据库的人类真核翻译延伸因子1γ(EEF1G)基因的相似。该基因为在将氨酰tRNA转运到核糖体上中起重要作用的延伸因子1的亚单位((Kumabe，T.，等人，Nucleic Acids Res.，20(10)，2598(1992))。然而从这些研究结果发现GIG35基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG35抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO49的DNA序列具有一个对应于DNA序列的19～1,332的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,330～1,332的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由437个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO50的氨基酸序列和约50kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO49中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO51的随机引物H-AP3(5′-AAGCTTTGGTCAG-3′)和SEQ ID NO52的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得212-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.3kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
14.GIG38 本发明的基因为具有SEQ ID NO53的DNA序列的人抑癌基因38(GIG38)，其以AY550970的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_005870的收录号而被存入数据库的人类sin3相关多肽(18kDa)(SAP18)基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG38基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG38抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO53的DNA序列具有一个对应于DNA序列的17～478的碱基位置的开放阅读框(ORF)(476～478的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由153个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO54的氨基酸序列和约17kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO53中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO55的随机引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO56的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得172-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、肌肉、肾、肝和胎盘中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约0.7kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
15.GIG39 本发明的基因为具有SEQ ID NO57的DNA序列的人抑癌基因39(GIG39)，其以AY550972的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC030531的收录号而被存入数据库的人类染色体1开放阅读框24基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG39基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG39抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO57的DNA序列具有一个对应于DNA序列的70～2,856的碱基位置的开放阅读框(ORF)(2,854～2,856的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由928个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO58的氨基酸序列和约103kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO57中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO59的随机引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO60的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得327-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺和肝中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
16.GIG40 本发明的基因为具有SEQ ID NO61的DNA序列的人抑癌基因40(GIG40)，其以AY550966的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_005228的收录号而被存入数据库的人类表皮生长因子受体(鸟类成红细胞白血病病毒(v-erb-b)致癌基因同源体)(EGFR)基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG40抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO61的DNA序列具有一个对应于DNA序列的47～3,679的碱基位置的开放阅读框(ORF)(3,677～3,679的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由1,210个氨基酸残基组成，其具有SEQID NO62的氨基酸序列和约134kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO61中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO63的随机引物H-AP7(5′-AAGCTTAACGAGG-3′)和SEQ ID NO64的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得275-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长GIG40cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、心脏和肌肉中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
17.GIG42 本发明的基因为具有SEQ ID NO65的DNA序列的人抑癌基因42(GIG42)，其以AY550967的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC034023的收录号而被存入数据库的人类白蛋白基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG42抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO65的DNA序列具有一个对应于DNA序列的8～1,837的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,835～1,837的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由609个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO66的氨基酸序列和约69kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO65中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO67的随机引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO68的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得327-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明者将全长GIG42cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
18.GIG43 本发明的基因为具有SEQ ID NO69的DNA序列的人抑癌基因43(GIG43)，其以AY550971的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC028354的收录号而被存入数据库的人类磷脂爬行酶基因的相似。然而从这些研究结果发现GIG43基因与多种人类致癌作用密切相关。从研究结果发现GIG43抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO69的DNA序列具有一个对应于DNA序列的96～1,085的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,083～1,085的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由329个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO70的氨基酸序列和约37kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO69中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO71的随机引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO72的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得273-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、肾、肝、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约3.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
19.GIG46 本发明的基因为具有SEQ ID NO73的DNA序列的人抑癌基因1(GIG46)，其以AY692464的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年5月1日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_001613的收录号而被存入数据库的人类肌动蛋白α2(平滑肌主动脉)(ACTA2)基因的相似。然而与其以前报道的功能相反，通过研究结果发现GIG46基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG8抑癌基因在包括子宫癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO73的DNA序列具有一个对应于DNA序列的393～1,526的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,524～1,526的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由377个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO74的氨基酸序列和约42kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO73中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO75的随机引物H-AP16(5′-AAGCTTTAGAGCG-3′)和SEQ ID NO76的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得255-bp cDNA片段(对应于1,323～1,577的碱基位置)，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在子宫、脑、心脏、骨骼肌、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达，除了1.5kb的mRNA转录物之外，大约2.0kb大小的mRNA转录物也表达。
20.PIG33 本发明的基因为具有SEQ ID NO77的DNA序列的人抑癌基因(PIG33)，其以AY513278的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC033721的收录号而被存入数据库的人类SPARC样1(mast9，hevin)基因的相似。然而通过这些研究结果发现PIG35抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO77的DNA序列具有一个对应于DNA序列的81～2,075的碱基位置的开放阅读框(ORF)(2,073～2,075的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由664个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO78的氨基酸序列和约75kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO77中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO79的随机引物H-AP2(5′-AAGCTTCGACTGT-3′)和SEQ ID NO80的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得256-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
本发明者将全长PIG33cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约3.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
21.PIG35 本发明的基因为具有SEQ ID NO81的DNA序列的人抑癌基因(PIG35)，其以AY513280的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_002615的收录号而被存入数据库的人类丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子的相似。然而通过这些研究结果发现PIG35抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO81的DNA序列具有一个对应于DNA序列的50～1,306的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,304～1,306的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由418个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO82的氨基酸序列和约46kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO81中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO83的随机引物H-AP9(5′-AAGCTTCATTCCG-3′)和SEQ ID NO84的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得312-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
本发明者将全长PIG35cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、心脏、肌肉、脑、小肠、肺和胎盘中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.7kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
22.PIG36 本发明的基因为具有SEQ ID NO85的DNA序列的人抑癌基因(PIG36)，其以AY544129的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_001685的收录号而被存入数据库的人类ATP合成酶，H+转运，线粒体F0复合体，亚基F6(ATP5J)的相似。然而通过这些研究结果发现PIG36抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO85的DNA序列具有一个对应于DNA序列的102～428的碱基位置的开放阅读框(ORF)(426～428的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由108个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO86的氨基酸序列和约13kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO85中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO87的随机引物H-AP9(5′-AAGCTTCATTCCG-3′)和SEQ ID NO88的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得162-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长PIG36cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、心脏、肌肉、肾和胎盘中过量表达以抑制致癌作用。还认为其基因表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
23.MIG20 SEQ ID NO89的DNA序列以AY871271的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年10月1日)，该存入的基因的DNA序列与以BX537651的收录号而被存入数据库的人类mRNA；cDNA DKFZp686C0390基因的相似。然而通过这些研究结果发现MIG20抑癌基因在包括子宫癌的多种人类肿瘤中根本不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO89的DNA序列具有一个对应于DNA序列的8～202的碱基位置的开放阅读框(ORF)(200～202的碱基位置表示终止密码子)。而且，SEQ IDNO89的DNA序列具有另一个对应于DNA序列的233～442的碱基位置的开放阅读框(ORF)(440～442的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由64个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO90的氨基酸序列和约7kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO89中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO91的随机引物H-AP32(5′-AAGCTTCCTGCAA-3′)和SEQ ID NO92的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得311-bp cDNA片段(对应于2,067～2,377的碱基位置)，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在子宫、心脏、骨骼肌、肾和肝中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约4.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达，除了4.4kb的mRNA转录物之外，大约2.4kb和1.5kb大小的mRNA转录物也表达。
24.PIG49 本发明的基因为具有SEQ ID NO93的DNA序列的人抑癌基因(GIG49)，其以AY524047的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_005749的收录号而被存入数据库的人类ERBB2转导蛋白1(TOB1)基因的相似。然而通过这些研究结果发现GIG49基因与多种人类致癌基因密切相关。研究结果发现GIG49抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO93的DNA序列具有一个对应于DNA序列的11～1,048的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,046～1,048的碱基位置表示终止密码子)。然而，由于密码子简并性，或者考虑到生物体表达基因的密码子偏爱性，本发明的基因可以在编码区进行多种修饰而没有改变由编码区表达的蛋白的氨基酸序列，且还可以在不影响基因表达的范围内的除了编码区的区域中进行多种修饰或改变。这种修饰的基因还可以在本发明的范围内。因此，本发明还包括具有与上述基因基本相同DNA序列的多核苷酸以及基因片段。术语“基本相同的多核苷酸”指具有至少80％、优选至少90％且最优选至少95％的序列同源性的DNA序列。
由本发明的基因表达的蛋白质由345个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO94的氨基酸序列和约38kDa的分子量。而且，甚至在不影响蛋白质功能的范围内的蛋白质氨基酸序列中取代、添加或缺失一个或多个氨基酸，且根据它们的用途可以只使用一些蛋白质。这种改变的氨基酸序列还包括在本发明的范围内。因此，本发明还包括具有与所述蛋白质基本相同的氨基酸序列的多肽及其片段。术语“基本相同的多肽”指具有至少80％、优选至少90％且最优选至少95％的序列同源性的多肽。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO93中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO95的随机引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO96的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得272-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
由此制备的基因可以插入本领域中已知的用于在微生物或动物细胞中表达的载体中，以获得表达载体，然后所述基因的DNA可以大量复制或者通过将表达载体引入如大肠杆菌(Escherichia coli)、MCF-7细胞系等的合适宿主细胞中而以市场量来生产其蛋白质。在构建表达载体时，根据生产基因或蛋白质的宿主细胞的种类可以适当地选择和组合如启动子和终止子、自主复制序列、分泌信号等的表达调节序列。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、肌肉、心脏、肾、肝和胎盘中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约2.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达。而且，除了2.4kb的mRNA转录物之外，大约1.5kb大小的mRNA转录物也表达。
25.PIG51 本发明的基因为具有SEQ ID NO97的DNA序列的人抑癌基因(PIG51)，其以AY542308的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC007054的收录号而被存入数据库的人类TBC1域家族成员7基因的相似。然而通过这些研究结果发现PIG51基因与多种人类致癌基因密切相关。研究结果发现PIG51抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO97的DNA序列具有一个对应于DNA序列的59～802的碱基位置的开放阅读框(ORF)(800～802的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由247个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO98的氨基酸序列和约28kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO97中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO99的随机引物H-AP22(5′-AAGCTTTTGATCC-3′)和SEQ ID NO100的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得211-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、胎盘和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
26.MIG12 本发明的基因为具有SEQ ID NO101的DNA序列的人抑癌基因(MIG12)，其以AY453400的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年3月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC016731的收录号而被存入数据库的人类胸腺素β10基因的相似。然而通过这些研究结果发现MIG12抑癌基因在包括肺癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO101的DNA序列具有一个对应于DNA序列的29～163的碱基位置的开放阅读框(ORF)(161～163的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由44个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO102的氨基酸序列和约5kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO101中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO103的随机引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO104的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得211-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。
本发明的基因主要在这些组织中以大约0.5kb大小的mRNA转录物进行过量表达，除了0.5kb的mRNA转录物之外，大约1.0kb和0.8kb大小的mRNA转录物也表达。
27.PIG37 本发明的基因为具有SEQ ID NO105的DNA序列的人抑癌基因(PIG37)，其以AY513281的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2005年12月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_002221的收录号而被存入数据库的人类1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶B(ITPKB)基因的相似。然而通过这些研究结果发现PIG37抑癌基因在包括肝癌的多种人类肿瘤中很少表达，而在正常肝组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO105的DNA序列具有一个对应于DNA序列的4～1,422的碱基位置的开放阅读框(ORF)(1,420～1,422的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由472个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO106的氨基酸序列和约53kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO105中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO107的随机引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO108的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得263-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。本发明人将全长PIG33cDNA插入表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
认为本发明的基因在正常组织，优选在肝、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、小肠、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。还认为本发明的基因在白血病、子宫癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌中受到抑制，从而引起致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约7.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
28.GIG44 本发明的基因为具有SEQ ID NO109的DNA序列的人抑癌基因44(GIG44)，其以AY971350的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年5月31日)，该存入的基因的DNA序列与以BC042127的收录号而被存入数据库的人类推定的胰岛素样生长因子-II相关蛋白基因的相似。然而通过研究结果发现GIG44基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG44抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO109的DNA序列具有一个对应于DNA序列的59～400的碱基位置的开放阅读框(ORF)(398～400的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由113个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO110的氨基酸序列和约12kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO109中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO111的随机引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO112的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得221-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、肾、肝、胎盘和肺中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.0kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
29.GIG31 本发明的基因为具有SEQ ID NO113的DNA序列的人抑癌基因31(GIG31)，其以AY971351的收录号而被存入美国国立卫生研究院(NIH)的基因数据库(规定的公布日期2006年5月31日)，该存入的基因的DNA序列与以NM_002923的收录号而被存入数据库的人类G蛋白信号调节蛋白2基因相似。然而通过研究结果发现GIG31基因与多种人类致癌作用密切相关。从这些研究结果发现GIG31抑癌基因在包括乳腺癌的多种人类肿瘤中很少表达或不表达，而在多种正常组织中其表达显著提高。
SEQ ID NO113的DNA序列具有一个对应于DNA序列的14～649的碱基位置的开放阅读框(ORF)(647～649的碱基位置表示终止密码子)。
由本发明的基因表达的蛋白质由211个氨基酸残基组成，其具有SEQ IDNO114的氨基酸序列和约24kDa的分子量。
本发明的基因和蛋白质可以从人体组织中分离，或还可以根据用于合成DNA或肽的已知方法来合成。例如，可以以SEQ ID NO113中所列的DNA序列的信息为基础，根据常规方法筛选并克隆本发明的基因。作为另一个例子，可以使用SEQ ID NO115的随机引物H-AP4(5′-AAGCTTCTCAACG-3′)和SEQ ID NO116的oligo-dT锚定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通过用从正常组织和癌组织或癌细胞系中提取的总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)而获得223-bp cDNA片段，该片段在癌组织或癌细胞系中不表达或很少表达而在正常组织中差异性表达，用作探针的所得片段可以与cDNA文库进行噬菌斑杂交以获得全长cDNA克隆。
认为本发明的基因在正常组织，优选在乳腺、心脏、大肠、脾、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞中过量表达以抑制致癌作用。本发明的基因主要在这些组织中以大约1.4kb大小的mRNA转录物进行过量表达。
同时，由于密码子简并性，或者考虑到生物体表达基因的密码子偏爱性，本发明的基因可以在编码区进行多种修饰而没有改变由编码区表达的蛋白的氨基酸序列，且还可以在不影响基因表达的范围内的除了编码区的区域中进行多种修饰或改变。这种修饰的基因还可以在本发明的范围内。因此，本发明还包括具有与上述基因基本相同DNA序列的多核苷酸以及基因片段。术语“基本相同的多核苷酸”指具有至少80％、优选至少90％且最优选至少95％的序列同源性的DNA序列。
而且，甚至在不影响蛋白质功能的范围内的蛋白质氨基酸序列中取代、添加或缺失一个或多个氨基酸，且根据它们的用途可以只使用一些蛋白质。这种修改的氨基酸序列还包括在本发明的范围内。因此，本发明还包括具有与所述蛋白质基本相同的氨基酸序列的多肽及其片段。术语“基本相同的多肽”指具有至少80％、优选至少90％且最优选至少95％的序列同源性的多肽。
在一些实施方式中，由此制备的本发明的基因可以插入本领域中已知的用于在微生物或动物细胞中表达的载体中，以获得表达载体，然后所述基因的DNA可以大量复制或者通过将表达载体引入如大肠杆菌、MCF-7细胞系等的合适宿主细胞中而以市场量来生产其蛋白质。在构建表达载体时，根据生产基因或蛋白质的宿主细胞的种类可以适当地选择和组合如启动子和终止子、自主复制序列、分泌信号等的表达调节序列。
具体地，本发明的基因只在正常组织中差异性表达。例如，在癌组织或癌细胞，如乳腺癌组织、乳腺癌细胞系MCF-7、白血病细胞、白血病细胞系K562、肝癌组织、肝癌细胞系HepG2、子宫颈癌、子宫颈癌细胞系、肺癌组织、转移肺癌组织和肺癌细胞系(A549和NCI-H358)中稍微检测到或检测不到它们的基因表达，而只有在正常子宫组织中差异性地提高。
引入本发明的基因的癌细胞系呈现出高死亡率，因此本发明的基因可以有效地用于治疗并防治癌症。
下文将参照优选实施例详细描述本发明。因此，这里提出的描述仅是仅用于说明性目的的优选实施例，且不打算限制本发明的范围。
参考实施例总RNA的分离 使用RNeasy总RNA试剂盒(Qiagen公司，德国)从新鲜组织或培养细胞中分离总RNA样品，然后使用message clean试剂盒(GenHunter公司，MA，美国)从RNA样品中除去污染DNA。
实施例1总RNA的分离和mRNA差异性显示 观察基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的差异性表达图式如下。
正常乳腺组织样品由在乳房切除术期间的乳腺癌患者获得，原发性乳腺癌组织样品在根治性乳房切除术期间由在外科手术治疗之前未进行放射治疗和/或抗癌化学治疗的乳腺癌患者获得。使用MCF-7(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号HTB-22)作为人乳腺癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
为进行GIG15的mRNA差异性显示，还从正常人体中获得骨髓组织，并在骨髓活检时从以前未进行过抗癌化学治疗和/或放射治疗的白血病患者获得原发性白血病骨髓组织。在差异性显示方法中使用K-562(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号CCL-243)作为人慢性髓细胞性白血病细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
同时，在肝癌相关基因的情况下，在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中观察基因的差异性表达图式，如下。
正常肝组织样品和肝癌组织样品由在组织活检时的肝癌患者获得，使用肝癌细胞系HepG2(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号HB-8065)作为人肝癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
还在正常外宫颈组织、原发性子宫颈癌组织和子宫颈癌细胞系中观察目的基因的差异性表达图式，如下。正常外宫颈组织样品由在子宫切除术期间的患有子宫肌瘤的患者获得，且原发性子宫颈癌组织样品和转移性髂淋巴结癌组织样品在根治性子宫切除术期间由在外科手术治疗之前未进行放射治疗和/或抗癌化学治疗的乳腺癌患者获得。使用CUMC-6(Kim，J.W.等人，Gynecol.Oncol.62230-240，1996)作为人子宫颈癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
还在正常肺组织、原发性肺癌组织、转移性肺癌组织和肺癌细胞系中测定目的基因的差异性表达，如下。正常肺组织样品、肺癌组织样品、转移性肺癌组织样品由在外科手术操作期间的肺癌患者获得。使用肺癌细胞系A549(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号CCL-185)和NCI-H358(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号CRL-5807)作为人肺癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
根据公开文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用从组织和细胞中分离的各总RNA样品进行RT-PCR反应，如下。
1-1.GIG8 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO4的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO3的5′-13-mer随机引物H-AP33(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图1表示使用SEQ ID NO3的5′-13-mer随机引物H-AP33和SEQ ID NO4的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图1中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图1中所示，证实163-bp cDNA片段(全长GIG8基因序列的317～479的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常肺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC33。
从干胶中除去163-bp条带，FC33片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC33cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC33克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-2.GIG10 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO8的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO7的5′-13-mer随机引物H-AP10(RNAimage引物对2，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图2表示使用SEQ ID NO7的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ ID NO8的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图2中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图2中所示，证实321-bp cDNA片段(全长GIG10基因序列的1,716～2,036的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常肺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC42。
从干胶中除去321-bp条带，FC42片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC42cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC42克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-3.GIG13 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO12的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO11的5′-13-mer随机引物H-AP5(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图3表示使用SEQ ID NO11的5′-13-mer随机引物H-AP5和SEQ ID NO12的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图3中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图3中所示，证实347-bp cDNA片段(全长GIG13基因序列的3,253～3,599的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC59。
从干胶中除去347-bp条带，FC59片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC59cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC59克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-4.GIG15 为进行mRNA差异性显示，还从正常人体中获得骨髓组织，并在骨髓活检时从以前未进行过抗癌化学治疗和/或放射治疗的白血病患者获得原发性白血病骨髓组织。在差异性显示方法中使用K-562(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号CCL-243)作为人慢性髓细胞性白血病细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
根据公开文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，CancerRes.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用从组织和细胞中分离的各总RNA样品进行RT-PCR反应，如下。使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO16的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO15的5′-13-mer随机引物H-AP2(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图4表示使用SEQ ID NO15的5′-13-mer随机引物H-AP2和SEQ ID NO16的oligo-dT锚定引物的PCR结果。如图4中所示，使用差异显示(DD)方法证实该基因在正常骨髓组织和白血病细胞以及K-562细胞中以差异性水平表达。如图4中所示，133-bp cDNA片段，GV2(全长GIG15基因序列的212～344的碱基位置)在白血病和K-562细胞中很少表达，而只有在正常骨髓组织中较高地表达。该cDNA片段称为GV2。从干胶中除去133-bp条带，GV2片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增GV2cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段GV2克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-5.GIG16 在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中观察基因的差异性表达图式，如下。
正常肝组织样品和肝癌组织样品由在组织活检时的肝癌患者获得，使用肝癌细胞系HepG2(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号HB-8065)作为人肝癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
根据公开文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用从组织和细胞中分离的各总RNA样品进行RT-PCR反应，如下。使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO20的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO19的5′-13-mer随机引物H-AP8(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图5表示使用SEQ ID NO19的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ ID NO20的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图5中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝腺癌细胞系HepG2。如图5中所示，证实213-bp cDNA片段(全长GIG16基因序列的867～1,079的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP8。
从干胶中除去213-bp条带，HP8片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP8cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP8克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-6.GIG24 在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中观察基因的差异性表达图式，如下。
正常肝组织样品和肝癌组织样品由在组织活检时的肝癌患者获得，使用肝癌细胞系HepG2(美国典型微生物菌种保藏中心，ATCC号HB-8065)作为人肝癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
根据公开文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用从组织和细胞中分离的各总RNA样品进行RT-PCR反应，如下。使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO24的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO23的5′-13-mer随机引物H-AP7(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图6表示使用SEQ ID NO23的5′-13-mer随机引物H-AP7和SEQ ID NO24的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图6中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝腺癌细胞系HepG2。如图6中所示，证实221-bp cDNA片段(全长GIG42基因序列的1,057～1,277的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP71。
从干胶中除去221-bp条带，HP71片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP71cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP71克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-7.GIG26 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO28的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO27的5′-13-mer随机引物H-AP11(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图7表示使用SEQ ID NO27的5′-13-mer随机引物H-AP11和SEQ ID NO28的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图7中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝腺癌细胞系HepG2。如图7中所示，证实204-bp cDNA片段(全长GIG26基因序列的1,036～1,239的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP115。
从干胶中除去204-bp条带，HP115片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP115cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP115克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-8.GIG29 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO32的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO31的5′-13-mer随机引物H-AP3(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图8表示使用SEQ ID NO31的5′-13-mer随机引物H-AP3和SEQ ID NO32的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图8中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝腺癌细胞系HepG2。如图8中所示，证实277-bp cDNA片段(全长GIG26基因序列的8,23～1,099的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP3。
从干胶中除去277-bp条带，HP3片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP3cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP3克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-9.GIG30 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO36的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO35的5′-13-mer随机引物H-AP4(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图9表示使用SEQ ID NO35的5′-13-mer随机引物H-AP4和SEQ ID NO36的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图9中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图9中所示，证实278-bp cDNA片段(全长GIG30基因序列的1,452～1,739的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC48。
从干胶中除去278-bp条带，FC48片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC48cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC48克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-10.GIG32 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO40的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO39的5′-13-mer随机引物H-AP8(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图10表示使用SEQ ID NO39的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ ID NO40的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图10中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图10中所示，证实172-bp cDNA片段(全长GIG32基因序列的428～599的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC82。
从干胶中除去172-bp条带，FC82片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC82cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC82克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-11.GIG33 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO44的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO43的5′-13-mer随机引物H-AP33(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图11表示使用SEQ ID NO43的5′-13-mer随机引物H-AP33和SEQ IDNO44的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图11中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图11中所示，证实182-bp cDNA片段(全长GIG32基因序列的216～397的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC86。
从干胶中除去182-bp条带，FC86片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC86cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC86克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-12.GIG34 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO48的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO47的5′-13-mer随机引物H-AP35(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图12表示使用SEQ ID NO47的5′-13-mer随机引物H-AP35和SEQ IDNO48的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图12中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图12中所示，证实205-bp cDNA片段(全长GIG34基因序列的343～547的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC35。
从干胶中除去205-bp条带，FC42片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC35cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC35克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-13.GIG35 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO52的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO51的5′-13-mer随机引物H-AP3(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图13表示使用SEQ ID NO51的5′-13-mer随机引物H-AP3和SEQ ID NO52的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图13中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图13中所示，证实212-bp cDNA片段(全长GIG35基因序列的1,108～1,319的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC38。
从干胶中除去212-bp条带，FC38片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC38cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC38克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-14.GIG38 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO56的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO55的5′-13-mer随机引物H-AP12(RNAimage引物对2，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图14表示使用SEQ ID NO55的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO56的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图14中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图14中所示，证实172-bp cDNA片段(全长GIG38基因序列的328～499的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC122。
从干胶中除去172-bp条带，FC122片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC122cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC122克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-15.GIG39 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO60的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO59的5′-13-mer随机引物H-AP12(RNAimage引物对2，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图15表示使用SEQ ID NO59的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO60的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图15中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图15中所示，证实327-bp cDNA片段(全长GIG39基因序列的2,553～2,859的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC126。
从干胶中除去327-bp条带，FC 126片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC126cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC126克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-16.GIG40 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO64的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO63的5′-13-mer随机引物H-AP7(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图16表示使用SEQ ID NO63的5′-13-mer随机引物H-AP7和SEQ ID NO64的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图16中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝腺癌细胞系HepG2。如图16中所示，证实275-bp cDNA片段(全长GIG40基因序列的3,112～3,386的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中很少表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP79。
从干胶中除去275-bp条带，HP79片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP79cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP79克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-17.GIG42 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO68的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO67的5′-13-mer随机引物H-AP8(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图17表示使用SEQ ID NO67的5′-13-mer随机引物H-AP8和SEQ ID NO68的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图17中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝癌细胞系HepG2。如图17中所示，证实327-bp cDNA片段(全长GIG42基因序列的1,473～1,799的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP85。
从干胶中除去327-bp条带，HP85片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP85cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP85克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-18.GIG43 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO72的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO71的5′-13-mer随机引物H-AP10(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图18表示使用SEQ ID NO71的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO72的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图18中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图18中所示，证实273-bp cDNA片段(全长GIG43基因序列的727～999的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC102。
从干胶中除去273-bp条带，FC102片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC102cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC102克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-19.GIG46 在正常外宫颈组织、原发性子宫颈癌组织和子宫颈癌细胞系中观察目的基因的差异性表达，如下。正常外宫颈组织样品由在子宫切除术期间的患有子宫肌瘤的患者获得，且原发性子宫颈癌组织样品和转移性髂淋巴结癌组织样品在根治性子宫切除术期间由在外科手术治疗之前未进行放射治疗和/或抗癌化学治疗的乳腺癌患者获得。使用CUMC-6(Kim，J.W.等人，Gynecol.Oncol.62230-240，1996)作为人子宫颈癌细胞系。按照与如参考实施例中所述的相同方法从这些组织和细胞中分离总RNA。
根据公开文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，CancerRes.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用从组织和细胞中分离的各总RNA样品进行RT-PCR反应，如下。使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO76的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO75的5′-13-mer随机引物H-AP16(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图19表示使用SEQ ID NO75的5′-13-mer随机引物H-AP16和SEQ IDNO76的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图19中，泳道1表示正常外宫颈组织；泳道2表示子宫颈癌组织；泳道3表示转移性髂淋巴结组织；以及泳道4表示子宫颈癌细胞系CUMC-6。如图19中所示，证实255-bp cDNA片段在子宫颈癌组织、转移性髂淋巴结组织以及子宫颈癌细胞系CUMC-6中不表达，而只有在正常外宫颈组织中差异性表达。该cDNA片段称为CA161。
从干胶中除去255-bp条带，CA161片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增CA161cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段CA161克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-20.PIG33 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO80的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO79的5′-13-mer随机引物H-AP2(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图20表示使用SEQ ID NO79的5′-13-mer随机引物H-AP2和SEQ ID NO80的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图20中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝癌细胞系HepG2。如图20中所示，证实256-bp cDNA片段(全长PIG33基因序列的1,623～1,878的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达或很少表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP29。
从干胶中除去256-bp条带，HP29片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP29cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP29克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-21.PIG35 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO84的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO83的5′-13-mer随机引物H-AP9(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图21表示使用SEQ ID NO83的5′-13-mer随机引物H-AP9和SEQ ID NO84的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图21中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝癌细胞系HepG2。如图21中所示，证实312-bp cDNA片段(全长PIG35基因序列的966～1,277的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达或很少表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP95。
从干胶中除去312-bp条带，HP95片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP95cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP95克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-22.PIG36 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO88的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO87的5′-13-mer随机引物H-AP9(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图22表示使用SEQ ID NO87的5′-13-mer随机引物H-AP9和SEQ ID NO88的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图22中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝癌细胞系HepG2。如图22中所示，证实162-bp cDNA片段(全长PIG36基因序列的238～399的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达或很少表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP96。
从干胶中除去162-bp条带，HP96片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP96cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP96克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemicai公司)测定其DNA序列。
1-23.MIG20 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO92的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO91的5′-13-mer随机引物H-AP32(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图23表示使用SEQ ID NO91的5′-13-mer随机引物H-AP32和SEQ IDNO92的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图23中，泳道1表示正常外宫颈组织；泳道2表示子宫颈癌组织；泳道3表示转移性髂淋巴结组织；以及泳道4表示子宫颈癌细胞系CUMC-6。如图23中所示，证实311-bp cDNA片段在子宫颈癌组织、转移性髂淋巴结组织以及子宫颈癌细胞系CUMC-6中不表达，而只有在正常外宫颈组织中差异性表达。该cDNA片段称为CA324。
从干胶中除去311-bp条带，CA324片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增CA324cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段CA324克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-24.PIG49 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO96的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO95的5′-13-mer随机引物H-AP10(RNAimage引物对2，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图24表示使用SEQ ID NO95的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO96的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图24中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图24中所示，证实272-bp cDNA片段(全长PIG49基因序列的767～1,038的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC101。
从干胶中除去272-bp条带，FC101片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC101cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC101克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-25.PIG51 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO100的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO99的5′-13-mer随机引物H-AP22(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图25表示使用SEQ ID NO99的5′-13-mer随机引物H-AP22和SEQ IDNO100的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图25中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图25中所示，证实211-bp cDNA片段(全长PIG51基因序列的519～729的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC22。
从干胶中除去211-bp条带，FC22片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC22cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC22克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-26.MIG12 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO104的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO103的5′-13-mer随机引物H-AP12(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图26表示使用SEQ ID NO103的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO104的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图26中，泳道1表示正常肺组织；泳道2表示肺癌组织；泳道3表示转移性肺癌组织；以及泳道4表示肺癌细胞系A549。如图26中所示，证实161-bp cDNA片段(全长MIG12基因序列的35～195的碱基位置)在肺癌组织、转移性肺癌组织以及肺癌细胞系中很少表达，而只有在正常肺组织中差异性表达。该cDNA片段称为L927。
从干胶中除去161-bp条带，L927片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增L927cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段L927克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-27.PIG37 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO108的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO107的5′-13-mer随机引物H-AP10(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图27表示使用SEQ ID NO107的5′-13-mer随机引物H-AP10和SEQ IDNO108的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图27中，泳道1、2和3表示正常肝组织；泳道4、5和6表示肝癌组织；以及泳道7表示肝癌细胞系HepG2。如图27中所示，证实263-bp cDNA片段(全长PIG37基因序列的1,217～1,479的碱基位置)在肝癌组织和肝癌细胞系中不表达或很少表达，而只有在正常肝组织中差异性表达。该cDNA片段称为HP102。
从干胶中除去263-bp条带，HP102片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增HP102cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段HP102克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-28.GIG44 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO112的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO111的5′-13-mer随机引物H-AP12(RNAimage引物对5，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图28表示使用SEQ ID NO111的5′-13-mer随机引物H-AP12和SEQ IDNO112的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图28中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图28中所示，证实221-bp cDNA片段(全长GIG44基因序列的179～399的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC123。
从干胶中除去221-bp条带，FC123片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC123cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC123克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
1-29.GIG31 使用试剂盒(RNAimage试剂盒，GenHunter)通过SEQ ID NO116的oligo-dT锚定引物将0.2μg总RNA反转录，然后在0.5mM[α-35S]标记的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT锚定引物和SEQ ID NO115的5′-13-mer随机引物H-AP4(RNAimage引物对1，GenHunter公司，美国)进行PCR反应。在下面条件下进行PCR反应总共40个扩增循环，每个循环由95℃下40秒的变性步骤、40℃下2分钟的退火步骤以及72℃下40秒的延伸步骤组成，接着一个72℃下5分钟的延伸步骤。扩增片段在6％的用于DNA碱基序列的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，然后放射自显影。
图29表示使用SEQ ID NO115的5′-13-mer随机引物H-AP4和SEQ IDNO116的oligo-dT锚定引物的PCR结果。在图29中，泳道1、2和3表示正常乳腺组织；泳道4、5和6表示乳腺癌组织；以及泳道7表示乳腺癌细胞系MCF-7。如图29中所示，证实223-bp cDNA片段(全长GIG31基因序列的445～667的碱基位置)在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中很少表达，而只有在正常乳腺组织中以提高的水平差异性表达。该cDNA片段称为FC47。
从干胶中除去223-bp条带，FC47片段，煮沸15分钟以洗脱cDNA，然后除了在这里不使用[α-35S]标记的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述条件下使用如上所述的相同引物对进行PCR反应，以再扩增FC47cDNA。使用TA克隆系统(Promega)将再扩增的cDNA片段FC47克隆进表达载体pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA测序系统(美国Biochemical公司)测定其DNA序列。
实施例2cDNA文库筛选 根据公开文本(Feinberg，A.P.和Vogelstein，B.，Anal.Biochem.，132，6-13(1983))的方法分别将实施例1-1中获得的cDNA片段FC33、FC42、FC59、GV2、H-AP8、HP71、HP115、HP3、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、HP79、HP85、FC102、CA161、HP29、HP95、HP96、CA324、FC101、FC22、L927、HP102、FC123以及FC47标记以获得32P标记的探针FC33、FC42、FC59、GV2、H-AP8、HP71、HP115、HP3、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、HP79、HP85、FC102、CA161、HP29、HP95、HP96、CA324、FC101、FC22、L927、HP102、FC123以及FC47cDNA，根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，NewYorkCold Spring Harbor Laboratory(1989)中所述的方法将32P标记的探针与噬菌体λgt11人胚肺成纤维细胞cDNA文库(Miki，T.等人，Gene，83，137-146(1989))进行噬菌斑杂交以获得人抑癌基因GIG的全长cDNA克隆。
将全长cDNA克隆测序，因此GIG8的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO1一致。GIG8的DNA序列具有编码134个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO2一致。得到的蛋白质还具有大约15kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG8基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图30为示出GIG8蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图30中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG8基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图30中所示，表达的GIG8蛋白质具有大约15kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG10的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO5一致。GIG10的DNA序列具有编码665个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO6一致。得到的蛋白质还具有大约73kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG10基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图31为示出GIG10蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图31中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG10基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图31中所示，表达的GIG10蛋白质具有大约73kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG13的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO9一致。GIG13的DNA序列具有编码1,201个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO10一致。得到的蛋白质还具有大约132kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG13基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图32为示出GIG13蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图32中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG13基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图32中所示，表达的GIG13蛋白质具有大约132kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG15的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO13一致。GIG15的DNA序列具有编码106个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO14一致。得到的蛋白质还具有大约12kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG15基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图33为示出GIG15蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图33中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG15基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图33中所示，表达的GIG15蛋白质具有大约12kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG16的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO17一致。GIG16的DNA序列具有编码351个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO18一致。得到的蛋白质还具有大约39kDa的分子量。将得到的全长GIG 16cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG16基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图34为示出GIG16蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图34中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG16基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图34中所示，表达的GIG16蛋白质具有大约39kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG24的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO21一致。GIG24的DNA序列具有编码423个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO22一致。得到的蛋白质还具有大约47kDa的分子量。将得到的全长GIG24cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG24基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图35为示出GIG24蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图35中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG24基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图35中所示，表达的GIG24蛋白质具有大约47kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG26的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO25一致。GIG26的DNA序列具有编码442个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO26一致。得到的蛋白质还具有大约50kDa的分子量。将得到的全长GIG26cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG26基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图36为示出GIG24蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图36中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG26基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图36中所示，表达的GIG26蛋白质具有大约50kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG29的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO29一致。GIG29的DNA序列具有编码349个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO30一致。得到的蛋白质还具有大约38kDa的分子量。将得到的全长GIG29cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG29基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图37为示出GIG29蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图37中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG29基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图37中所示，表达的GIG29蛋白质具有大约38kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG30的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO33一致。GIG30的DNA序列具有编码540个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO34一致。得到的蛋白质还具有大约61kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG30基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图38为示出GIG30蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图38中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG30基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图38中所示，表达的GIG30蛋白质具有大约61kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG32的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO37一致。GIG32的DNA序列具有编码178个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO38一致。得到的蛋白质还具有大约20kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG32基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图39为示出GIG32蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图39中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG32基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图39中所示，表达的GIG32蛋白质具有大约20kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG33的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO41一致。GIG33的DNA序列具有编码110个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO42一致。得到的蛋白质还具有大约12kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG34基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图40为示出GIG33蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图40中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG33基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图10中所示，表达的GIG33蛋白质具有大约12kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG34的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO45一致。GIG34的DNA序列具有编码177个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO46一致。得到的蛋白质还具有大约20kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG34基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图41为示出GIG34蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图41中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG34基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图41中所示，表达的GIG34蛋白质具有大约20kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG35的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO49一致。GIG35的DNA序列具有编码437个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO50一致。得到的蛋白质还具有大约50kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG35基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图42为示出GIG35蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图42中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG35基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图42中所示，表达的GIG35蛋白质具有大约50kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG38的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO53一致。GIG38的DNA序列具有编码153个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO54一致。得到的蛋白质还具有大约17kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG38基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图43为示出GIG38蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图43中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG38基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图43中所示，表达的GIG38蛋白质具有大约17kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG39的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO57一致。GIG39的DNA序列具有编码928个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO58一致。得到的蛋白质还具有大约103kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG39基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图44为示出GIG39蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图44中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG39基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图44中所示，表达的GIG39蛋白质具有大约103kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG40的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO61一致。GIG40的DNA序列具有编码1,210个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO62一致。得到的蛋白质还具有大约134kDa的分子量。将得到的全长GIG40cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG40基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图45为示出GIG40蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图45中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG40基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图45中所示，表达的GIG40蛋白质具有大约134kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG42的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO65一致。GIG42的DNA序列具有编码609个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO66一致。得到的蛋白质还具有大约69kDa的分子量。将得到的全长GIG42cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG42基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图46为示出GIG42蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图46中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG42基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图46中所示，表达的GIG42蛋白质具有大约69kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG43的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO69一致。GIG43的DNA序列具有编码329个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO70一致。得到的蛋白质还具有大约37kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG43基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图47为示出GIG43蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图47中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG43基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图47中所示，表达的GIG43蛋白质具有大约37kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG46的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO73一致。GIG46的DNA序列具有编码377个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO74一致。得到的蛋白质还具有大约42kDa的分子量。
将得到的全长GIG46cDNA克隆插入原核表达载体pBAD/thio-Topo(Invitrogen，美国)的多克隆位点，以获得载体pBAD/Thio-Topo/GIG46，然后用所得的pBAD/thio-Topo/GIG46转化大肠杆菌Top10(Invitrogen，美国)。表达蛋白HT-硫氧还蛋白插入载体pBAD/thio-Topo多克隆位点的上游。转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中振荡培养，将所得的培养基稀释1/100，然后再培养3小时。向培养的培养基中加入0.5mM L-阿拉伯糖(Sigma，美国)以诱导蛋白质的产生。将培养基中的大肠杆菌细胞在L-阿拉伯糖诱导之前和之后超声破碎，然后用超声破碎的匀浆进行12％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。图48为示出使用SDS-PAGE的用载体pBAD/thio-Topo/GIG46转化的大肠杆菌Top10株的蛋白质表达的图，其中在L-阿拉伯糖诱导后明显观察到一条具有约57kDa的分子量的融合蛋白条带。57kDa的融合蛋白包含插入载体pBAD/thio-Topo/GIG46的约15kDa的HT-硫氧还蛋白蛋白和约42kDa的GIG 46蛋白。
图48为示出GIG46蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图48中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG46基因通过L-阿拉伯糖诱导表达后的蛋白质样品。
PIG33的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO77一致。PIG33的DNA序列具有编码664个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO78一致。得到的蛋白质还具有大约75kDa的分子量。将得到的全长PIG33cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG33基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图49为示出PIG33蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图49中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG33基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图49中所示，表达的PIG33蛋白质具有大约75kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
PIG35的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO81一致。PIG35的DNA序列具有编码418个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO82一致。得到的蛋白质还具有大约46kDa的分子量。将得到的全长PIG35cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG35基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图50为示出PIG35蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图50中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG35基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图50中所示，表达的PIG35蛋白质具有大约46kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
PIG36的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO85一致。PIG36的DNA序列具有编码108个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO86一致。得到的蛋白质还具有大约13kDa的分子量。将得到的全长PIG36cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG36基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图51为示出PIG36蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图51中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG36基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图51中所示，表达的PIG36蛋白质具有大约13kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
MIG20的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO89一致。MIG20的DNA序列具有编码64个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO90一致。得到的蛋白质还具有大约7kDa的分子量。
将得到的全长MIG20cDNA克隆插入原核表达载体pBAD/thio-Topo(Invitrogen，美国)的多克隆位点，以获得载体pBAD/thio-Topo/MIG20，然后用所得的pBAD/thio-Topo/MIG20转化大肠杆菌Top10(Invitrogen，美国)。表达蛋白HT-硫氧还蛋白插入载体pBAD/thio-Topo多克隆位点的上游。转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中振荡培养，将所得的培养基稀释1/100，然后再培养3小时。向培养的培养基中加入0.5mM L-阿拉伯糖(Sigma，美国)以诱导蛋白质的产生。将培养基中的大肠杆菌细胞在L-阿拉伯糖诱导之前和之后超声破碎，然后用超声破碎的匀浆进行12％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。图52为示出使用SDS-PAGE的用载体pBAD/thio-Topo/MIG20转化的大肠杆菌Top10株的蛋白质表达的图，其中在L-阿拉伯糖诱导后明显观察到一条具有约22kDa的分子量的融合蛋白条带。22kDa的融合蛋白包含插入载体pBAD/thio-Topo/MIG20的约15kDa的HT-硫氧还蛋白蛋白和约7kDa的MIG20蛋白。
图52为示出MIG20蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图52中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示MIG20基因通过L-阿拉伯糖诱导表达后的蛋白质样品。
PIG49的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO93一致。PIG49的DNA序列具有编码345个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO94一致。得到的蛋白质还具有大约38kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG49基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图53为示出PIG49蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图53中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG49基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图53中所示，表达的PIG49蛋白质具有大约38kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
PIG51的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO97一致。PIG51的DNA序列具有编码247个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO98一致。得到的蛋白质还具有大约28kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG51基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图54为示出PIG51蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图54中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG51基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图54中所示，表达的PIG51蛋白质具有大约28kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
MIG12的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO101一致。MIG12的DNA序列具有编码44个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO102一致。得到的蛋白质还具有大约5kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达MIG12基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图55为示出MIG12蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图55中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示MIG12基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图55中所示，表达的MIG12蛋白质具有大约5kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
PIG37的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO105一致。PIG37的DNA序列具有编码472个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO106一致。得到的蛋白质还具有大约53kDa的分子量。将得到的全长PIG37cDNA插入原核表达载体pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美国)，然后用所得的表达载体转化大肠杆菌DH5α以获得转化体，其称为大肠杆菌DH5α/PIG37/pBAD/Thio-Topo。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达PIG37基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图56为示出PIG37蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图56中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示PIG37基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图56中所示，表达的PIG37白质具有大约53kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG44的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO109一致。GIG44的DNA序列具有编码113个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO110一致。得到的蛋白质还具有大约12kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG44基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图57为示出GIG44蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图57中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG44基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图57中所示，表达的GIG44蛋白质具有大约12kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
GIG31的DNA碱基测序结果与SEQ ID NO113一致。GIG31的DNA序列具有编码211个氨基酸残基的开放阅读框，来自该开放阅读框的氨基酸序列与SEQ ID NO114一致。得到的蛋白质还具有大约24kDa的分子量。
转化的大肠杆菌菌株在LB液体培养基中培养，然后将1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培养基中，并在37℃反应3小时以表达GIG31基因。从培养基获得蛋白质样品，然后根据公开文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用该蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳。
图58为示出GIG31蛋白的SDS-PAGE分析的图。在图58中，泳道1表示IPTG诱导前的蛋白质样品，泳道2表示GIG31基因通过IPTG诱导表达后的蛋白质样品。如图58中所示，表达的GIG31蛋白质具有大约24kDa的分子量，其对应于来自其DNA序列的蛋白质的分子量。
实施例3GIG基因的RNA印迹 3-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44以及GIG31 为评价GIG和PIG基因的表达水平，进行RNA印迹，如下。
分别将20μg在实施例1中从三个正常乳腺组织、三个原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系MCF-7获得的各总RNA样品变性并在1％甲醛琼脂糖凝胶中电泳，然后将得到的琼脂糖凝胶转移到尼龙膜(Boehringer-Mannheim，德国)上。然后将尼龙膜与由全长GIG cDNA的部分序列FC33、FC42、FC59、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、FC102、FC101、FC22、FC123以及FC47使用Rediprime II随机引物标记系统(Amersham，英国)而制备的32P标记的随机引物探针在42℃下杂交过夜。RNA印迹步骤重复两次，其中之一是使用光密度计将印迹定量，而另一个是使印迹与β-肌动蛋白探针杂交以确定mRNA的总量。
图59示出了GIG8基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图59的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图59和图59的底部所示，证实GIG8基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4(lymphoblastoidleukemia MOLT-4)、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图88示出了GIG8基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图88的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图88中所示，具有大约1.3kb大小的主要的GIG8mRNA转录物在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达。同时，具有大约2.5kb大小的GIG8mRNA转录物也在如肝和外周血的正常组织中表达。图117示出了GIG8基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图117的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图117中所示，GIG8基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG8基因在如乳腺、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺、大肠和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图60示出了GIG10基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图60的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图60所示，证实GIG10基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图89示出了GIG10基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图89的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图89中所示，具有大约3.5kb大小的主要的GIG10mRNA转录物在如脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达，而在大肠组织中不表达。同时，具有大约2.2kb大小的GIG10mRNA转录物也在如心脏和胎盘的正常组织中表达。图118示出了GIG10基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图118的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图118中所示，GIG8基因在如HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达，而在早幼粒白血病细胞HL-60、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞和SW480结肠癌细胞中检测到其表达。
从这些结果可以看出，本发明的GIG10基因在如乳腺、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图61示出了GIG13基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图61的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图61所示，证实GIG13基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图90示出了GIG13基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图90的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图90中所示，具有大约1.3kb大小的主要的GIG13mRNA转录物只在正常肝组织中过量表达。图119示出了GIG13基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图119的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图119中所示，GIG13基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG13基因在如乳腺和肝的正常组织中具有抑癌功能。
图67示出了GIG30基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图67的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图67所示，证实GIG30基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图96示出了GIG30基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图96的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图96中所示，具有大约1.9kb大小的主要的GIG30mRNA转录物在如心脏、肌肉和肝的正常组织中过量表达。同时，具有大约1.0kb大小的GIG30mRNA转录物也在如肝和外周血的正常组织中表达。图125示出了GIG30基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图125的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图125中所示，GIG30基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG30基因在如乳腺、心脏、肌肉和肝的正常组织中具有抑癌功能。
图68示出了GIG32基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图68的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图68所示，证实GIG32基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图97示出了GIG32基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图97的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图97中所示，具有大约4.0kb大小的主要的GIG32mRNA转录物在如肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达。同时，具有大约1.0kb大小的GIG32mRNA转录物也在如肌肉和大肠的正常组织中表达。图126示出了GIG32基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图126的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图126中所示，GIG32基因在如HeLa子宫颈癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中表达，而在早幼粒白血病细胞HL-60、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞和SW480结肠癌细胞中不表达。
从这些结果可以看出，本发明的GIG32基因在如乳腺、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、胎盘和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图70示出了GIG34基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图70的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图70所示，证实GIG34基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图99示出了GIG34基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图99的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图99中所示，具有大约0.6kb大小的主要的GIG34mRNA转录物在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达。图128示出了GIG34基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图128的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图128中所示，GIG34基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。
从这些结果可以看出，本发明的GIG34基因在如乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图71示出了GIG35基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图71的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图71所示，证实GIG35基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图100示出了GIG35基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图100的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图100中所示，具有大约1.3kb大小的GIG35mRNA转录物同样在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达。图129示出了GIG35基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图129的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图129中所示，GIG35基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG35基因在如乳腺、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺、大肠和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图72示出了GIG38基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图72的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图72所示，证实GIG38基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图101示出了GIG38基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图101的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图101中所示，具有大约0.7kb大小的主要的GIG38mRNA转录物在如心脏、肌肉、肾、肝和胎盘的正常组织中过量表达。同时，具有大约1.5kb和2.0kb大小的GIG38mRNA转录物也在如心脏和肌肉的正常组织中表达。图130示出了GIG38基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图130的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图130中所示，GIG38基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达或几乎不表达。证明具有大约1.5kb和2.0kb大小的GIG38mRNA转录物在正常组织中表达，而在癌细胞系中全部不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG38基因在如乳腺、心脏、肌肉、肾、肝和胎盘的正常组织中具有抑癌功能。
图73示出了GIG39基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图73的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图73所示，证实GIG39基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图102示出了GIG39基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图102的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图102中所示，具有大约2.4kb大小的主要的GIG39mRNA转录物只在正常肝组织中过量表达。图131示出了GIG39基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图131的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图131中所示，GIG39基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG39基因在如乳腺和肝的正常组织中具有抑癌功能。
图76示出了GIG43基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图76的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图76所示，证实GIG43基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图105示出了GIG43基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图105的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图105中所示，具有大约3.5kb大小的主要的GIG43mRNA转录物在如心脏、肾、肝、胎盘和肺的正常组织中过量表达。图134示出了GIG43基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图134的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图134中所示，GIG8基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG8基因在如乳腺、心脏、肾、肝、胎盘和肺的正常组织中具有抑癌功能。
图82示出了PIG49基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图82的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图82所示，证实PIG49基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图111示出了PIG49基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图111的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图111中所示，具有大约2.4kb大小的主要的PIG49mRNA转录物在如心脏、肌肉、肾、肝和胎盘的正常组织中过量表达。同时，具有大约1.5kb大小的PIG49mRNA转录物也在正常肌肉组织中表达。图140示出了PIG49基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图140的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图140中所示，PIG49基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达或者很少表达。
从这些结果可以看出，本发明的PIG49基因在如乳腺、心脏、肌肉、肾、肝和胎盘的正常组织中具有抑癌功能。
图83示出了PIG51基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图83的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图83所示，证实PIG51基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图112示出了PIG51基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图112的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图112中所示，具有大约1.0kb大小的主要的PIG51mRNA转录物在如心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、胎盘和外周血的正常组织中过量表达。图141示出了PIG51基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图141的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图141中所示，PIG51基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的PIG51基因在如乳腺、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、胎盘和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
图86示出了GIG44基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图86的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图86所示，证实GIG44基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图115示出了GIG44基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图115的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图115中所示，具有大约1.0kb大小的主要的GIG44mRNA转录物同样在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和白细胞的正常组织中过量表达。同时，具有大约0.5kb大小的GIG44mRNA转录物也在正常组织中表达。
图144示出了GIG44基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图144的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图144中所示，GIG44基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG44基因在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和白细胞的正常组织中具有抑癌功能。
图87示出了GIG31基因在正常乳腺组织、原发性乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图87的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图87所示，证实GIG31基因的表达水平在全部三个正常乳腺组织样品中较高地检测到，而在三个乳腺癌组织样品中其表达明显比正常组织低或检测不到，且或许在一个乳腺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图116示出了GIG31基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图116的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图116中所示，具有大约1.4kb大小的主要的GIG31mRNA转录物在如乳腺、心脏、大肠、脾、小肠、胎盘、肺和白细胞的正常组织中过量表达。图145示出了GIG31基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图145的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图145中所示，GIG31基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达，而在HeLa子宫颈癌细胞和A549肺癌细胞中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG31基因在如乳腺、心脏、大肠、脾、小肠、胎盘、肺和白细胞的正常组织中具有抑癌功能。
3-5.GIG15 为评价GIG15基因的表达水平，进行RNA印迹，如下。如实施例1中所述，从正常骨髓组织、白血病骨髓组织和K-562细胞中提取总RNA样品。分别将20μg各总RNA样品变性并在1％甲醛琼脂糖凝胶中电泳，然后将得到的琼脂糖凝胶转移到尼龙膜(Boehringer-Mannheim，德国)上。然后将尼龙膜与由全长GIG15cDNA的部分序列GV2使用Rediprime II随机引物标记系统(Amersham，英国)而制备的32P标记的随机引物探针在42℃下杂交过夜。RNA印迹步骤重复两次，其中之一是使用光密度计将印迹定量，而另一个是使印迹与β-肌动蛋白探针杂交以确定mRNA的总量。
图62示出了GIG15基因在正常骨髓组织、白血病骨髓组织和K-562细胞中差异性表达的RNA印迹结果，且图62的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图62所示，证实GIG15基因的表达水平在全部正常骨髓组织样品中较高地检测到，而在白血病骨髓组织样品中其表达明显比正常组织低，且或许在一个白血病细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图91示出了GIG15基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图91的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图91中所示，具有大约0.5kb大小的主要的GIG15mRNA转录物在如脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血的正常组织中过量表达。同时，具有大约1.0kb大小的GIG15mRNA转录物也在如肝和肾的正常组织中表达。图120示出了GIG15基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图120的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图120中所示，GIG15基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG15基因在如骨髓、脑、心脏、肌肉、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺、大肠和外周血的正常组织中具有抑癌功能。
3-3.GIG16，GIG24，GIG26，GIG29，GIG40，GIG42，PIG33，PIG35，PIG36，PIG37 为评价GIG和PIG基因的表达水平，进行RNA印迹，如下。
分别将20μg在实施例1中从三个正常肝组织、三个原发性肝癌组织和肝癌细胞系HepG2获得的各总RNA样品变性并在1％甲醛琼脂糖凝胶中电泳，然后将得到的琼脂糖凝胶转移到尼龙膜(Boehringer-Mannheim，德国)上。然后将尼龙膜与由全长GIG和PIG cDNA使用Rediprime II随机引物标记系统(Amersham，英国)而制备的32P标记的随机引物探针在42℃下杂交过夜。RNA印迹步骤重复两次，其中之一是使用光密度计将印迹定量，而另一个是使印迹与β-肌动蛋白探针杂交以确定mRNA的总量。
图63示出了GIG16基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图63的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图63所示，证实GIG16基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图92示出了GIG16基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图92的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图92中所示，具有大约2.0kb大小的主要的GIG16mRNA转录物在如肝和肾的正常组织中过量表达。
图121示出了GIG16基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图121的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图121中所示，GIG16基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG16基因在如肝和肾的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG16基因具有抑癌功能。
图64示出了GIG24基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图64的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图64所示，证实GIG24基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且甚至在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图93示出了GIG24基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图93的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图93中所示，具有大约2.4kb大小的主要的GIG24mRNA转录物在如肝、心脏和肌肉的正常组织中过量表达。
图122示出了GIG24基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图122的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图122中所示，GIG24基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG24基因在如肝、心脏和肌肉的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG24基因具有抑癌功能。
图65示出了GIG26基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图65的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图65所示，证实GIG26基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图94示出了GIG26基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图94的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图94中所示，具有大约2.0kb大小的主要的GIG26mRNA转录物在正常肝组织中过量表达，且同时，具有大约2.5kb和1.5kb大小的GIG26mRNA转录物也在肾、脑和心脏中表达。图123示出了GIG26基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图123的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图123中所示，GIG26基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG26基因在如肝、肾、脑和心脏的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG16基因具有抑癌功能。
图66示出了GIG29基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图66的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图66所示，证实GIG29基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图95示出了GIG29基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图95的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图92中所示，具有大约1.4kb大小的主要的GIG29mRNA转录物在正常肝组织中过量表达。
图124示出了GIG29基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图124的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图124中所示，GIG29基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG29基因在正常肝组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG29基因具有抑癌功能。
图74示出了GIG40基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图74的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图74所示，证实GIG40基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且甚至在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图103示出了GIG40基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图103的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图103中所示，具有大约1.5kb大小的主要的GIG40mRNA转录物在如肝、心脏和肌肉的正常组织中过量表达。且同时，具有大约5.0kb大小的GIG40mRNA转录物表达。
图132示出了GIG40基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图132的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图132中所示，GIG40基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG40基因在如肝、心脏和肌肉的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG40基因具有抑癌功能。
图75示出了GIG42基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图75的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图75所示，证实GIG42基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图104示出了GIG42基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图104的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图104中所示，具有大约2.5kb大小的主要的GIG42mRNA转录物在正常肝组织中过量表达。
图133示出了GIG42基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图133的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图133中所示，GIG42基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达。从这些结果可以看出，本发明的GIG42基因在正常肝组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的GIG42基因具有抑癌功能。
图78示出了PIG33基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图78的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图78所示，证实PIG33基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图107示出了PIG33基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图107的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图107中所示，具有大约3.0kb大小的主要的PIG33mRNA转录物在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中过量表达。
图136示出了PIG33基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图136的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图136中所示，PIG33基因在如HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达，而在早幼粒白血病细胞HL-60和伯基特淋巴瘤Raji细胞中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的PIG33基因在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的PIG33基因具有抑癌功能。
图79示出了PIG35基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图79的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图79所示，证实PIG35基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且甚至在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图108示出了PIG35基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图108的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图108中所示，具有大约1.7kb大小的主要的PIG35mRNA转录物在如脑、心脏、骨骼肌、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中过量表达。
图137示出了PIG35基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图137的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图137中所示，PIG35基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达，而在慢性髓细胞性白血病细胞系K-562中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的PIG35基因在如脑、心脏、骨骼肌、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的PIG35基因具有抑癌功能。
图80示出了PIG36基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图80的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图80所示，证实PIG36基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且或许在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图109示出了PIG36基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图109的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图109中所示，具有大约1.0kb大小的主要的PIG36mRNA转录物在正常肝组织中过量表达。
图138示出了PIG36基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图138的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图138中所示，PIG36基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中根本不表达或很少表达。从这些结果可以看出，本发明的PIG36基因在如肝、心脏、肌肉、肾和胎盘的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、恶性淋巴瘤、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的PIG36基因具有抑癌功能。
图85示出了PIG37基因在正常肝组织、原发性肝癌组织和肝癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图85的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图85所示，证实PIG37基因的表达水平在全部三个正常肝组织样品中较高地检测到，而在三个肝癌组织样品中其表达明显比正常组织低，且在一个肝癌细胞系样品中检测不到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒自血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图114示出了PIG37基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图114的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图114中所示，具有大约7.0kb大小的主要的PIG37mRNA转录物在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中过量表达。同时，具有大约2.0和1.0kb大小的PIG37mRNA转录物在正常组织中过量表达。
图143示出了PIG37基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图143的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图143中所示，PIG37基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、SW480结肠癌细胞和A549肺癌细胞的组织中几乎不表达，而在HeLa子宫颈癌细胞、伯基特淋巴瘤Raji细胞和G361黑色素瘤细胞中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的PIG37基因在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘和肺的正常组织中具有抑癌功能。而且，通过如下事实甚至其表达在白血病、子宫癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本发明的PIG37基因具有抑癌功能。
3-4.GIG46、MIG20 为评价GIG和PIG基因的表达水平，进行RNA印迹，如下。
分别将20μg如实施例1中所述的从三个正常外宫颈组织、三个原发性子宫颈癌组织和两个子宫颈癌细胞系获得的各总RNA样品变性并在1％甲醛琼脂糖凝胶中电泳，然后将得到的琼脂糖凝胶转移到尼龙膜(Boehringer-Mannheim，德国)上。然后将尼龙膜与使用全长GIG46和MIG20cDNA的32P标记的随机引物探针在42℃下杂交过夜。RNA印迹步骤重复两次，其中之一是使用光密度计将印迹定量，而另一个是使印迹与β-肌动蛋白探针杂交以确定mRNA的总量。
图77示出了GIG46基因在正常外宫颈组织、原发性子宫颈癌组织和子宫颈癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图77为示出β-肌动蛋白表达的RNA印迹结果。在图77中，泳道1～3表示正常外宫颈组织样品，泳道4～6表示子宫颈癌组织样品，泳道7表示子宫颈癌细胞系HeLa的样品，且泳道8表示子宫颈癌细胞系CUMC-6的样品。如图77中所示，证实GIG46基因的表达水平在全部三个正常外宫颈组织样品中较高地检测到，而在三个子宫颈癌组织的样品中其表达水平明显比正常组织低，且在两个子宫颈癌细胞系样品中检测不到。
图106示出了GIG46基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图106示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图106中所示，具有大约1.5kb大小的主要的GIG46mRNA转录物在如子宫、脑、心脏、骨骼肌、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞的正常组织中过量表达，且除了1.5kb的GIG46mRNA转录物，具有大约2.0kb大小的转录物也表达。
图135示出了GIG46基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图135的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图135中所示，GIG46基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。然而，被证明在正常组织中表达的2.0kb的mRNA转录物在癌细胞系中不表达。
从这些结果可以看出，本发明的GIG46基因在如子宫、脑、心脏、骨骼肌、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞的正常组织中具有抑癌功能。
图81示出了MIG20基因在正常外宫颈组织、原发性子宫颈癌组织和子宫颈癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图81为示出β-肌动蛋白表达的RNA印迹结果。在图81中，泳道1～3表示正常外宫颈组织样品，泳道4～6表示子宫颈癌组织样品，泳道7表示子宫颈癌细胞系HeLa的样品，且泳道8表示子宫颈癌细胞系CUMC-6的样品。如图81中所示，证实MIG20基因的表达水平在全部三个正常外宫颈组织样品中较高地检测到，而在三个子宫颈癌组织的样品中其表达水平明显比正常组织低，且在两个子宫颈癌细胞系样品中检测不到。
图110示出了MIG20基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图110示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图110中所示，具有大约4.4kb大小的主要的MIG20mRNA转录物在如心脏、骨骼肌和肝的正常组织中过量表达，且除了4.4kb的MIG20mRNA转录物，具有大约2.4kb和1.5kb大小的转录物也表达。
图139示出了MIG20基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图139的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图139中所示，MIG20基因在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中不表达。从这些结果可以看出，本发明的MIG20基因在如子宫颈、心脏、骨骼肌和肝的正常组织中具有抑癌功能。
3-5.MIG12 为评价MIG12基因的表达水平，进行RNA印迹，如下。
将20μg如实施例1中所述的从三个正常肺组织、两个原发性肺癌组织、两个转移性肺癌组织和肺癌细胞系(A549和NCI-H358)获得的各总RNA样品变性并在1％甲醛琼脂糖凝胶中电泳，然后将得到的琼脂糖凝胶转移到尼龙膜(Boehringer-Mannheim，德国)上。然后将尼龙膜与由全长MIG12 cDNA使用Rediprime II随机引物标记系统(Amersham，英国)而制备的32P标记的随机引物探针在42℃下杂交过夜。RNA印迹步骤重复两次，其中之一是使用光密度计将印迹定量，而另一个是使印迹与β-肌动蛋白探针杂交以确定mRNA的总量。
图84示出了MIG12基因在正常肺组织、原发性肺癌组织、转移性肺癌组织和肺癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图84的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图84所示，证实MIG9基因的表达水平在全部三个正常肺组织样品中较高地检测到，而两个肺癌组织样品、两个转移性肺癌组织样品和两个肺癌细胞系样品中稍微检测到。
在正常人多个组织(Clontech)和人癌细胞系(Clontech)进行RNA印迹。换句话说，通过与如上所述相同的方法，使从正常组织和癌细胞系提取的各总RNA样品转移到其上面的印迹进行杂交来进行RNA印迹，其中所述印迹可商业购自Clontech公司(美国)，正常组织例如选自由脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞组成的组，而癌细胞系例如选自由早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞组成的组。
图113示出了MIG12基因在多种正常组织中差异性表达的RNA印迹结果，且图113的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图113中所示，具有大约0.5kb大小的主要的MIG12mRNA转录物在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞的正常组织中过量表达。除了0.5kb的MIG12mRNA转录物，具有大约1.0kb和0.8kb大小的转录物在如心脏、肌肉、肝和肾的正常组织中也表达。
图142示出了MIG12基因在多种癌细胞系中差异性表达的RNA印迹结果，且图142的底部示出了通过使相同的印迹与β-肌动蛋白探针杂交而获得的RNA印迹结果。如图142中所示，在正常组织中表达的主要的0.5kb的MIG12mRNA转录物在如早幼粒白血病细胞HL-60、HeLa子宫颈癌细胞、慢性髓细胞性白血病细胞系K-562、类淋巴母细胞白血病细胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji细胞、SW480结肠癌细胞、A549肺癌细胞和G361黑色素瘤细胞的组织中很少表达。从这些结果可以看出，本发明的MIG12基因在如脑、心脏、骨骼肌、结肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血白细胞的正常组织中具有抑癌功能。
实施例4表达载体的构建和转染 4-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31 构建包含各GIG和PIG基因的编码区的表达载体，如下。首先，分别将实施例2中制备的全长cDNA克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，美国)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG8、pcDNA3.1/GIG10、pcDNA3.1/GIG13、pcDNA3.1/GIG30、pcDNA3.1/GIG32、pcDNA3.1/GIG33、pcDNA3.1/GIG34、pcDNA3.1/GIG35、pcDNA3.1/GIG38、pcDNA3.1/GIG39、pcDNA3.1/GIG43、pcDNA3.1/PIG49、pcDNA3.1/PIG51、pcDNA3.1/GIG44和pcDNA3.1/GIG31。使用lipofectamine(Gibco BRL)将各表达载体转染进MCF-7乳腺癌细胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培养基中培养以筛选转染的细胞。同时，使用用缺少GIG cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞作为对照组。
4-2.GIG15 构建包含GIG15基因的编码区的表达载体，如下。首先，将实施例2中制备的全长GIG15cDNA克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，美国)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG15。使用lipofectamine(Gibco BRL)将表达载体转染进K562白血病细胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培养基中培养以筛选转染的细胞。同时，使用用缺少GIG cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的K562细胞作为对照组。
4-3.GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37 构建包含各GIG和PIG基因的编码区的表达载体，如下。首先，分别将实施例2中制备的全长cDNA克隆GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36和PIG37插入真核表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，美国)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG16、pcDNA3.1/GIG24、pcDNA3.1/GIG26、pcDNA3.1/GIG29、pcDNA3.1/GIG40、pcDNA3.1/GIG42、pcDNA3.1/PIG33、pcDNA3.1/PIG35、pcDNA3.1/PIG36以及pcDNA3.1/PIG37。使用lipofectamine(Gibco BRL)将各表达载体转染进HepG2肝癌细胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培养基中培养以筛选转染的细胞。同时，使用用缺少GIG cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞作为对照组。
4-4.GIG46、MIG20 构建包含各GIG和MIG基因的编码区的表达载体，如下。首先，分别将实施例2中制备的全长GIG46cDNA克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，美国)以获得表达载体pcDNA3.1/GIG46和pcDNA3.1/MIG20。使用lipofectamine(Gibco BRL)将各表达载体转染进HeLa子宫颈癌细胞系(ATCC CCL-2)中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培养基中培养以筛选转染的细胞。同时，使用用缺少GIG46或MIG20cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞作为对照组。
4-5.MIG12 构建包含MIG12基因的编码区的表达载体，如下。首先，将实施例2中制备的全长MIG12cDNA克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，美国)以获得表达载体pcDNA3.1/MIG12。使用lipofectamine(Gibco BRL)将表达载体转染进A549肺癌细胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培养基中培养以筛选转染的细胞。同时，使用用缺少MIG12cDNA的表达载体pcDNA3.1转染的A549细胞作为对照组。
实施例5用GIG基因转染的乳腺癌细胞的生长曲线 5-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31 为检测GIG和PIG基因对乳腺癌细胞生成的影响，分别在DMEM培养基中以1x105个细胞/ml的细胞密度培养野生型MCF-7细胞；分别用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG8、pcDNA3.1/GIG10、pcDNA3.1/GIG13、pcDNA3.1/GIG30、pcDNA3.1/GIG32、pcDNA3.1/GIG33、pcDNA3.1/GIG34、pcDNA3.1/GIG35、pcDNA3.1/GIG38、pcDNA3.1/GIG39、pcDNA3.1/GIG43、pcDNA3.1/PIG49、pcDNA3.1/PIG51、pcDNA3.1/GIG44以及pcDNA3.1/GIG31转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞9天。分别通过用胰蛋白酶(Sigma)处理而从细胞附着的培养瓶上分离培养液中的细胞，然后根据台盼蓝染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，纽约(1987))分别在第1、3、5、7和9天计数活细胞。
图146为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG8转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图146中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG8转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约30％的用载体pcDNA3.1/GIG8转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG8基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图147为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG10转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图147中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG10转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约40％的用载体pcDNA3.1/GIG10转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG10基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图148为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG13转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图148中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG13转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约30％的用载体pcDNA3.1/GIG13转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG13基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图154为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG30转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图154中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG30转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约30％的用载体pcDNA3.1/GIG30转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG30基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图155为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG32转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图155中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG32转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约50％的用载体pcDNA3.1/GIG32转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG32基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图156为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG33转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图156中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG33转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/GIG33转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG33基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图157为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG34转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图157中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG34转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约80％的用载体pcDNA3.1/GIG34转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG34基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图158为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG35转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图158中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG35转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/GIG35转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG35基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图159为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG38转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图159中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG38转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/GIG38转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG38基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图160为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG39转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图160中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG39转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约40％的用载体pcDNA3.1/GIG39转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG39基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图163为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG43转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图163中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG43转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/GIG43转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG43基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图169为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG49转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图169中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG49转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/PIG49转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG49基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图170为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG51转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图170中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG51转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约40％的用载体pcDNA3.1/PIG51转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG51基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图173为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG44转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图173中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG44转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/GIG44转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG44基因抑制乳腺癌细胞的生长。
图174为示出野生型MCF-7细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG31转染的MCF-7乳腺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞的生长曲线的图。如图174中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG31转染的MCF-7乳腺癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的MCF-7细胞和野生型MCF-7细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型MCF-7细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/GIG31转染的MCF-7乳腺癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG31基因抑制乳腺癌细胞的生长。
5-2.GIG15 为检测GIG基因对白血病细胞生成的影响，分别在DMEM培养基中以1x105个细胞/ml的细胞密度培养野生型K562细胞；分别用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG15转染的K562白血病细胞；以及只用载体pcDNA3.1转染的K562细胞9天。分别通过用胰蛋白酶(Sigma)处理而从细胞附着的培养瓶上分离培养液中的细胞，然后根据台盼蓝染色排出法(Freshney，I.R.，Cultureof Animal Cells，第2版.A.R.Liss，纽约(1987))分别在第1、3、5、7和9天计数活细胞。
图149为示出野生型K562细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG15转染的K562白血病细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的K562细胞的生长曲线的图。如图149中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG15转染的K562细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的K562细胞和野生型K562细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型K562细胞相比只有大约80％的用载体pcDNA3.1/GIG15转染的K562细胞存活。从这种结果可以看出GIG15基因抑制乳腺癌细胞的生长。
5-3.GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37 为检测GIG和PIG基因对肝癌细胞生成的影响，分别在DMEM培养基中以1x105个细胞/ml的细胞密度培养野生型HepG2细胞；分别用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG16、pcDNA3.1/GIG24、pcDNA3.1/GIG26、pcDNA3.1/GIG29、pcDNA3.1/GIG40、pcDNA3.1/GIG42、pcDNA3.1/PIG33、pcDNA3.1/PIG35、pcDNA3.1/PIG36以及pcDNA3.1/PIG37转染的HepG2肝癌细胞；以及只用载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞9天。分别通过用胰蛋白酶(Sigma)处理而从细胞附着的培养瓶上分离培养液中的细胞，然后根据台盼蓝染色排出法(Freshney，I.R.，Culture of Animal Cells，第2版.A.R.Liss，纽约(1987))分别在第1、3、5、7和9天计数活细胞。
图150为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG16转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图150中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG16转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/GIG16转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG16基因抑制肝癌细胞的生长。
图151为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG24转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图151中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG24转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/GIG24转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG24基因抑制肝癌细胞的生长。
图152为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG26转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图152中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG26转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约50％的用载体pcDNA3.1/GIG26转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG26基因抑制肝癌细胞的生长。
图153为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG29转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图153中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG29转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/GIG29转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG29基因抑制肝癌细胞的生长。
图161为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG40转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图161中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG40转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约80％的用载体pcDNA3.1/GIG40转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG40基因抑制肝癌细胞的生长。
图162为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/GIG42转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图162中所示，证实用载体pcDNA3.1/GIG42转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/GIG42转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG42基因抑制肝癌细胞的生长。
图165为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG33转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图165中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG33转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/PIG33转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG33基因抑制肝癌细胞的生长。
图166为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG35转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图166中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG35转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/PIG35转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG35基因抑制肝癌细胞的生长。
图167为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG36转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图167中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG36转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约60％的用载体pcDNA3.1/PIG36转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG36基因抑制肝癌细胞的生长。
图172为示出野生型HepG2细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/PIG37转染的HepG2肝癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞的生长曲线的图。如图172中所示，证实用载体pcDNA3.1/PIG37转染的HepG2肝癌细胞呈现出比用表达载体pcDNA3.1转染的HepG2细胞和野生型HepG2细胞更高的死亡率。培养9天后，与野生型HepG2细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/PIG37转染的HepG2肝癌细胞存活。从这种结果可以看出PIG37基因抑制肝癌细胞的生长。
5-4.GIG46、MIG20 为检测GIG和MIG基因对子宫颈癌细胞生长的影响，分别在DMEM培养基中以1x105个细胞/ml的细胞密度培养正常HeLa细胞；用实施例4中制备的GIG46基因转染的HeLa子宫颈癌细胞；以及只用载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞9天。分别通过用胰蛋白酶(Sigma)处理而从细胞附着的培养瓶上分离培养液中的细胞，然后根据台盼蓝染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，纽约(1987))分别在第1、3、5、7和9天计数活细胞。
图164为示出正常HeLa细胞；用实施例4中制备的GIG46基因转染的HeLa子宫颈癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞的生长曲线的图。如图164中所示，证实与用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞和正常HeLa细胞相比，用GIG46基因转染的HeLa子宫颈癌细胞呈现出更高的死亡率。培养9天后，与正常HeLa细胞相比只有大约80％的用GIG46基因转染的HeLa子宫颈癌细胞存活。从这种结果可以看出GIG46基因抑制肝癌细胞的生长。
图168为示出正常HeLa细胞；用实施例4中制备的MIG20基因转染的HeLa子宫颈癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞的生长曲线的图。如图168中所示，证实与用表达载体pcDNA3.1转染的HeLa细胞和正常HeLa细胞相比，用MIG20基因转染的HeLa子宫颈癌细胞呈现出更高的死亡率。培养9天后，与正常HeLa细胞相比只有大约80％的用MIG20基因转染的HeLa子宫颈癌细胞存活。从这种结果可以看出MIG20基因抑制肝癌细胞的生长。
5-5.MIG12 为检测MIG12基因对肺癌细胞生长的影响，分别在DMEM培养基中以1x105个细胞/ml的细胞密度培养野生型A549细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/MIG12转染的A549肺癌细胞；以及只用载体pcDNA3.1转染的A549细胞9天。分别通过用胰蛋白酶(Sigma)处理而从细胞附着的培养瓶上分离培养液中的细胞，然后根据台盼蓝染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，纽约(1987))分别在第1、3、5、7和9天计数活细胞。
图171为示出野生型A549细胞；用实施例4中制备的载体pcDNA3.1/MIG12转染的A549肺癌细胞；以及只用表达载体pcDNA3.1转染的A549细胞的生长曲线的图。如图171中所示，证实与用表达载体pcDNA3.1转染的A549细胞和野生型A549细胞相比，用载体pcDNA3.1/MIG12转染的A549肺癌细胞呈现出更高的死亡率。培养9天后，与野生型A549细胞相比只有大约70％的用载体pcDNA3.1/MIG12转染的A549肺癌细胞存活。从这种结果可以看出MIG12基因抑制肝癌细胞的生长。
工业应用性 本发明的GIG、PIG或MIG基因可以有效地用于诊断、预防和治疗人癌症。
序列表
<110>金弦起
<120>人抑癌基因、其编码的蛋白质
<130>PCT06-025
<150>KR10-2005-0026254
<151>2005-03-30
<160>116
<170>Kopatentln 1.71
<210>1
<211>531
<212>DNA
<213>人类
<400>1
tcgggcttca ttctgagccg agcccggtgc caagcgcagc tagctcagca ggcggcagcg 60
gcggcctgag cttcagggca gccagctccc tcccggtctc gccttccctc gcggtcagca120
tgaaagcctt cagtcccgtg aggtccgtta ggaaaaacag cctgtcggac cacagcctgg180
gcatctcccg gagcaaaacc cctgtggacg acccgatgag cctgctatac aacatgaacg240
actgctactc caagctcaag gagctggtgc ccagcatccc ccagaacaag aaggtgagca300
agatggaaat cctgcagcac gtcatcgact acatcttgga cctgcagatc gccctggact360
cgcatcccac tattgtcagc ctgcatcacc agagacccgg gcagaaccag gcgtccagga420
cgccgctgac caccctcaac acggatatca gcatcctgtc cttgcaggct tctgaattcc480
cttctgagtt aatgtcaaat gacagcaaag cactgtgtgg ctgaataagc g 531
<210>2
<211>134
<212>PRT
<213>人类
<400>2
Met Lys Ala Phe Ser Pro Val Arg Ser Val Arg Lys Asn Ser Leu Ser
1 5 10 15
Asp His Ser Leu Gly Ile Ser Arg Ser Lys Thr Pro Val Asp Asp Pro
20 25 30
Met Ser Leu Leu Tyr Asn Met Asn Asp Cys Tyr Ser Lys Leu Lys Glu
35 40 45
Leu Val Pro Ser Ile Pro Gln Asn Lys Lys Val Ser Lys Met Glu Ile
50 55 60
Leu Gln His Val Ile Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Ile Ala Leu Asp
65 70 75 80
Ser His Pro Thr Ile Val Ser Leu His His Gln Arg Pro Gly Gln Asn
85 90 95
Gln Ala Ser Arg Thr Pro Leu Thr Thr Leu Asn Thr Asp Ile Ser Ile
100 105 110
Leu Ser Leu Gln Ala Ser Glu Phe Pro Ser Glu Leu Met Ser Asn Asp
115 120 125
Ser Lys Ala Leu Cys Gly
130
<210>3
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG8的引物H-AP33
<400>3
aagcttgctg ctc 13
<210>4
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG8的oligo-dT锚定引物
<400>4
aagctttttt ttttta 16
<210>5
<211>2090
<212>DNA
<213>人类
<400>5
gcctccgcca actttcacgc tgcctcggcg gcccggcccg gctcgacgcc aatggtggag 60
gccatagtgg agtttgacta ccaggcccag cacgatgatg agctgacgat cagcgtgggt 120
gaaatcatca ccaacatcag gaaggaggat ggaggctggt gggagggaca gatcaacggc 180
aggagaggtt tgttccctga caactttgta agagaaataa agaaagagat gaagaaagac 240
cctctcacca acaaagctcc agaaaagccc ctgcacgaag tgcccagtgg aaactctttg 300
ctgtcttctg aaacgatttt aagaaccaat aagagaggcg agcgacggag gcgccggtgc 360
caggtggcat tcagctacct gccccagaat gacgatgaac ttgagctgaa agttggcgac 420
atcatagagg tggtaggaga ggtagaggaa ggatggtggg aaggtgttct caacgggaag 480
actggaatgt ttccttccaa cttcatcaag gagctgtcag gggagtcgga tgagcttggc 540
atttcccagg atgagcagct atccaagtca agtttaaggg aaaccacagg ctccgagagt 600
gatgggggtg actcaagcag caccaagtct gaaggtgcca acgggacagt ggcaactgca 660
gcaatccagc ccaagaaagt taagggagtg ggctttggag acattttcaa agacaagcca 720
atcaaactaa gaccaaggtc aattgaagta gaaaatgact ttctgccggt agaaaagact 780
attgggaaga agttacctgc aactacagca actccagact catcaaaaac agaaatggac 840
agcaggacaa agagcaagga ttactgcaaa gtaatatttc catatgaggc acagaatgat 900
gatgaattga caatcaaaga aggagatata gtcactctca tcaataagga ctgcatcgac 960
gtaggctggt gggaaggaga gctgaacggc agacgaggcg tgttccccga taacttcgtg1020
aagttacttc caccggactt tgaaaaggaa gggaatagac ccaagaagcc accgcctcca1080
tccgctcctg tcatcaaaca aggggcaggc accactgaga gaaaacatga aattaaaaag1140
atacctcctg aaagaccaga aatgcttcca aacagaacag aagaaaaaga aagaccagag1200
agagagccaa aactggattt acagaagccc tccgttcctg ccataccgcc aaaaaagcct1260
cggccaccta agaccaattc tctcagcaga cctggcgcac tgcccccgag aaggccggag1320
agaccggtgg gtccgctgac acacaccagg ggtgacagtc caaagattga cttggccggc1380
agttcgctat ctggcatcct ggacaaagat ctctcggacc gcagcaatga cattgactta1440
gaaggttttg actccgtggt atcatctact gagaaactca gtcatccgac cacaagcaga1500
ccaaaagcta cagggaggcg gcctccgtcc cagtccctca catcttcatc cctttcaagc1560
cctgatatct tcgactcccc aagtcccgaa gaggataagg aggaacacat ttcacttgcg1620
cacagaggag tggacgcgtc aaagaaaact tccaagactg ttaccatatc ccaagtgtct1680
gacaacaaag catccctgcc gcccaagccg gggaccatgg cagcaggtgg cggtgggcca1740
gcccctctgt cctcagcggc gccctccccc ctgtcatcct ctttgggaac agctggacac1800
agagccaact ccccgtctct gttcggcacg gaaggaaaac caaagatgga gcctgcggcc1860
agcagccagg cggccgtgga ggagctaagg acacaggtcc gcgagctgag gagcatcatc1920
gagaccatga aggaccagca gaaacgagag attaaacagt tattgtctga gttggatgaa1980
gagaagaaaa tccggcttcg gttgcagatg gaagtgaacg acataaagaa agctctacaa2040
tcaaaatgaa tacttgatca atgaaatgtc acattattca tcctgagtcc 2090
<210>6
<211>665
<212>PRT
<213>人类
<400>6
Met Val Glu Ala Ile Val Glu Phe Asp Tyr Gln Ala Gln His Asp Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Ile Ser Val Gly Glu Ile Ile Thr Asn Ile Arg Lys Glu
20 25 30
Asp Gly Gly Trp Trp Glu Gly Gln Ile Asn Gly Arg Arg Gly Leu Phe
35 40 45
Pro Asp Asn Phe Val Arg Glu Ile Lys Lys Glu Met Lys Lys Asp Pro
50 55 60
Leu Thr Asn Lys Ala Pro Glu Lys Pro Leu His Glu Val Pro Ser Gly
65 70 75 80
Asn Ser Leu Leu Ser Ser Glu Thr Ile Leu Arg Thr Asn Lys Arg Gly
85 90 95
Glu Arg Arg Arg Arg Arg Cys Gln Val Ala Phe Ser Tyr Leu Pro Gln
100 105 110
Asn Asp Asp Glu Leu Glu Leu Lys Val Gly Asp Ile Ile Glu Val Val
115 120 125
Gly Glu Val Glu Glu Gly Trp Trp Glu Gly Val Leu Asn Gly Lys Thr
130 135 140
Gly Met Phe Pro Ser Asn Phe Ile Lys Glu Leu Ser Gly Glu Ser Asp
145 150 155 160
Glu Leu Gly Ile Ser Gln Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Ser Leu Arg
165 170 175
Glu Thr Thr Gly Ser Glu Ser Asp Gly Gly Asp Ser Ser Ser Thr Lys
180 185 190
Ser Glu Gly Ala Asn Gly Thr Val Ala Thr Ala Ala Ile Gln Pro Lys
195 200 205
Lys Val Lys Gly Val Gly Phe Gly Asp Ile Phe Lys Asp Lys Pro Ile
210 215 220
Lys Leu Arg Pro Arg Ser Ile Glu Val Glu Asn Asp Phe Leu Pro Val
225 230 235 240
Glu Lys Thr Ile Gly Lys Lys Leu Pro Ala Thr Thr Ala Thr Pro Asp
245 250 255
Ser Ser Lys Thr Glu Met Asp Ser Arg Thr Lys Ser Lys Asp Tyr Cys
260 265 270
Lys Val Ile Phe Pro Tyr Glu Ala Gln Asn Asp Asp Glu Leu Thr Ile
275 280 285
Lys Glu Gly Asp Ile Val Thr Leu Ile Asn Lys Asp Cys Ile Asp Val
290 295300
Gly Trp Trp Glu Gly Glu Leu Asn Gly Arg Arg Gly Val Phe Pro Asp
305 310 315 320
Asn Phe Val Lys Leu Leu Pro Pro Asp Phe Glu Lys Glu Gly Asn Arg
325 330 335
Pro Lys Lys Pro Pro Pro Pro Ser Ala Pro Val Ile Lys Gln Gly Ala
340 345 350
Gly Thr Thr Glu Arg Lys His Glu Ile Lys Lys Ile Pro Pro Glu Arg
355 360 365
Pro Glu Met Leu Pro Asn Arg Thr Glu Glu Lys Glu Arg Pro Glu Arg
370 375 380
Glu Pro Lys Leu Asp Leu Gln Lys Pro Ser Val Pro Ala Ile Pro Pro
385 390 395 400
Lys Lys Pro Arg Pro Pro Lys Thr Asn Ser Leu Ser Arg Pro Gly Ala
405 410 415
Leu Pro Pro Arg Arg Pro Glu Arg Pro Val Gly Pro Leu Thr His Thr
420 425 430
Arg Gly Asp Ser Pro Lys Ile Asp Leu Ala Gly Ser Ser Leu Ser Gly
435 440 445
Ile Leu Asp Lys Asp Leu Ser Asp Arg Ser Asn Asp Ile Asp Leu Glu
450 455 460
Gly Phe Asp Ser Val Val Ser Ser Thr Glu Lys Leu Ser His Pro Thr
465 470 475 480
Thr Ser Arg Pro Lys Ala Thr Gly Arg Arg Pro Pro Ser Gln Ser Leu
485 490 495
Thr Ser Ser Ser Leu Ser Ser Pro Asp Ile Phe Asp Ser Pro Ser Pro
500 505 510
Glu Glu Asp Lys Glu Glu His Ile Ser Leu Ala His Arg Gly Val Asp
515 520 525
Ala Ser Lys Lys Thr Ser Lys Thr Val Thr Ile Ser Gln Val Ser Asp
530 535 540
Asn Lys Ala Ser Leu Pro Pro Lys Pro Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
545 550 555560
Gly Gly Pro Ala Pro Leu Ser Ser Ala Ala Pro Ser Pro Leu Ser Ser
565 570 575
Ser Leu Gly Thr Ala Gly His Arg Ala Asn Ser Pro Ser Leu Phe Gly
580 585 590
Thr Glu Gly Lys Pro Lys Met Glu Pro Ala Ala Ser Ser Gln Ala Ala
595 600 605
Val Glu Glu Leu Arg Thr Gln Val Arg Glu Leu Arg Ser Ile Ile Glu
610 615 620
Thr Met Lys Asp Gln Gln Lys Arg Glu Ile Lys Gln Leu Leu Ser Glu
625 630 635 640
Leu Asp Glu Glu Lys Lys Ile Arg Leu Arg Leu Gln Met Glu Val Asn
645 650 655
Asp Ile Lys Lys Ala Leu Gln Ser Lys
660 665
<210>7
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG10的引物H-AP10
<400>7
aagcttccac gta13
<210>8
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG10的oligo-dT锚定引物
<400>8
aagctttttt tttttc 16
<210>9
<211>3718
<212>DNA
<213>人类
<400>9
gactgcaaag tgagcgagaa gcaggctgcg ggccgtccca gcacgacgtg gagccccgcg 60
gagacctcga gatgccccgc ggggaagctc ctggccccgg gagacggggg gctaaggacg120
aggccctggg cgaagaatcg ggggagcggt ggagccccga gttccatctg cagaggaaat180
tggcggacag cagccacagt gaacagcaag atcgaaacag agtttctgaa gaacttatca240
tggttgtcca agaaatgaaa aaatacttcc cctcggagag acgcaataaa ccaagcactc300
tagatgccct caactatgct ctccgctgtg tccacagcgt tcaagcaaac agtgagtttt360
tccagattct cagtcagaat ggagcacctc aggcagatgt gagcatgtac agtcttgagg420
agctggccac tatcgcttca gaacacactt ccaaaaacac agataccttt gtggcagtat480
tttcatttct gtctggaagg ttagtgcaca tttctgaaca ggctgctttg atcctgaatc540
gtaagaaaga tgtcctggcg tcttctcact ttgttgacct gcttgcacct caagacatga600
gggtattcta cgcgcacact gccagagctc agcttccttt ctggaacaac tggacccaaa660
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tacatcaccc tgcccagcca gaattggaat cggaaccttg ctgtctcact gtggttgaaa840
agattcactc tggttatgaa gctcctcgga tcccagtgaa taaaagaatc ttcaccacca 900
cacacacccc agggtgtgtt tttcttgaag tagatgaaaa agcagtgcct ttgctgggtt 960
acctacctca ggacctgatt ggaacatcga tcctaagcta cctgcaccct gaagatcgtt1020
ctctgatggt tgccatacac caaaaagttt tgaagtatgc agggcatcct ccctttgaac1080
attctcccat tcgattttgt actcaaaacg gagactacat catactggat tccagttggt1140
ccagctttgt gaatccctgg agccggaaga tttctttcat cattggtcgg cataaagttc1200
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acaaagacat aacagaatta caagaacaaa tttacaaact tctcttacag ccagttcacg1320
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tgtacactga gccctgtgag gatttgagga acgatgagca cagcccatcc tatcaacaga1680
tcaactgtat cgacagtgtc atcagatacc tgaagagcta caacattcca gctttgaaaa1740
gaaagtgtat ctcctgtaca aatacaactt cttcctcctc agaagaagac aaacagaacc1800
acaaggcaga tgatgtccaa gccttacaag ctggtttgca aatcccagcc atacctaaat1860
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tctgtcctct gttgtcgcca tcgtttttgc catgtccatt cctgggggcg acagcctctt2700
ctgcgatatc accctcaatg tcgtcagcaa tgagtccaac tctggaccca cccccttcag2760
tcaccagcca aaggagagag gaggaaaagt gggaggcaca aagcgagggg cacccgttca2820
ttacttcgag aagcagctca cccttgcagt taaacttact tcaggaagag atgcccagac2880
cctctgaatc tccagatcag atgagaagga acacgtgccc acaaactgag tattgtgtta2940
caggcaacaa tggcagtgag agcagtcctg ctactaccgg tgcactgtcc acggggtcac3000
ctcccaggga gaatccatcc catcctactg ccagcgctct gtccacagga tcgcctccca3060
tgaagaatcc atcccatcct actgccagcg ctctgtccac aggatcgcct cccatgaaga3120
atccatccca tcctactgcc agcacactgt ccatgggat tgcctcccagc aggactccat3180
cccatcctac tgccactgtt ctgtccacgg ggtcacctcc cagcgaatcc ccatccagaa3240
ctggttcagc agcatcagga agcagcgaca gcagtatata ccttactagt agtgtttatt3300
cttctaaaat ctcccaaaat gggcagcaat ctcaggacgt acagaaaaaa gaaacatttc3360
ctaatgtcgc cgaagagccc atctggagaa tgatacggca gacacctgag cgcattctca3420
tgacatacca ggtacctgag agggttaaag aagttgtact aaaagaagac ctggaaaagc3480
tagaaagtat gaggcagcag cagccccagt tttctcatgg gcaaaaggag gagctggcta3540
aggtgtataa ttggattcaa agccagactg tcactcaaga aatcgacatt caagcctgtg3600
tcacttgtga aaatgaagat tcagctgatg gtgcggccac atcctgtggt caggttctgg3660
tagaagacag ctgttgagtg actgtgagga tgaaccttca taccctttcc aagacgtg 3718
<210>10
<211>1201
<212>PRT
<213>人类
<400>10
Met Pro Arg Gly Glu Ala Pro Gly Pro Gly Arg Arg Gly Ala Lys Asp
1 5 10 15
Glu Ala Leu Gly Glu Glu Ser Gly Glu Arg Trp Ser Pro Glu Phe His
20 25 30
Leu Gln Arg Lys Leu Ala Asp Ser Ser His Ser Glu Gln Gln Asp Arg
35 40 45
Asn Arg Val Ser Glu Glu Leu Ile Met Val Val Gln Glu Met Lys Lys
50 55 60
Tyr Phe Pro Ser Glu Arg Arg Asn Lys Pro Ser Thr Leu Asp Ala Leu
65 70 75 80
Asn Tyr Ala Leu Arg Cys Val His Ser Val Gln Ala Asn Ser Glu Phe
85 90 95
Phe Gln Ile Leu Ser Gln Asn Gly Ala Pro Gln Ala Asp Val Ser Met
100 105 110
Tyr Ser Leu Glu Glu Leu Ala Thr Ile Ala Ser Glu His Thr Ser Lys
115 120 125
Asn Thr Asp Thr Phe Val Ala Val Phe Ser Phe Leu Ser Gly Arg Leu
130 135 140
Val His Ile Ser Glu Gln Ala Ala Leu Ile Leu Asn Arg Lys Lys Asp
145 150 155 160
Val Leu Ala Ser Ser His Phe Val Asp Leu Leu Ala Pro Gln Asp Met
165 170 175
Arg Val Phe Tyr Ala His Thr Ala Arg Ala Gln Leu Pro Phe Trp Asn
180 185 190
Asn Trp Thr Gln Arg Ala Ala Arg Tyr Glu Cys Ala Pro Val Lys Pro
195 200 205
Phe Phe Cys Arg Ile Arg Gly Gly Glu Asp Arg Lys Gln Glu Lys Cys
210 215 220
His Ser Pro Phe Arg Ile Ile Pro Tyr Leu Ile His Val His His Pro
225 230 235 240
Ala Gln Pro Glu Leu Glu Ser Glu Pro Cys Cys Leu Thr Val Val Glu
245 250 255
Lys Ile His Ser Gly Tyr Glu Ala Pro Arg Ile Pro Val Asn Lys Arg
260 265 270
Ile Phe Thr Thr Thr His Thr Pro Gly Cys Val Phe Leu Glu Val Asp
275 280 285
Glu Lys Ala Val Pro Leu Leu Gly Tyr Leu Pro Gln Asp Leu Ile Gly
290 295 300
Thr Ser Ile Leu Ser Tyr Leu His Pro Glu Asp Arg Ser Leu Met Val
305 310 315 320
Ala Ile His Gln Lys Val Leu Lys Tyr Ala Gly His Pro Pro Phe Glu
325 330 335
His Ser Pro Ile Arg Phe Cys Thr Gln Asn Gly Asp Tyr Ile Ile Leu
340 345 350
Asp Ser Ser Trp Ser Ser Phe Val Asn Pro Trp Ser Arg Lys Ile Ser
355 360 365
Phe Ile Ile Gly Arg His Lys Val Arg Thr Ser Pro Leu Asn Glu Asp
370 375 380
Val Phe Ala Thr Lys Ile Lys Lys Met Asn Asp Asn Asp Lys Asp Ile
385 390 395 400
Thr Glu Leu Gln Glu Gln Ile Tyr Lys Leu Leu Leu Gln Pro Val His
405 410 415
Val Ser Val Ser Ser Gly Tyr Gly Ser Leu Gly Ser Ser Gly Ser Gln
420 425 430
Glu Gln Leu Val Ser Ile Ala Ser Ser Ser Glu Ala Ser Gly His Arg
435 440 445
Val Glu Glu Thr Lys Ala Glu Gln Met Thr Leu Gln Gln Val Tyr Ala
450 455 460
Ser Val Asn Lys Ile Lys Asn Leu Gly Gln Gln Leu Tyr Ile Glu Ser
465 470 475 480
Met Thr Lys Ser Ser Phe Lys Pro Val Thr Gly Thr Arg Thr Glu Pro
485 490 495
Asn Gly Gly Gly Glu Cys Lys Thr Phe Thr Ser Phe His Gln Thr Leu
500 505 510
Lys Asn Asn Ser Val Tyr Thr Glu Pro Cys Glu Asp Leu Arg Asn Asp
515 520 525
Glu His Ser Pro Ser Tyr Gln Gln Ile Asn Cys Ile Asp Ser Val Ile
530 535 540
Arg Tyr Leu Lys Ser Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys Arg Lys Cys Ile
545 550 555 560
Ser Cys Thr Asn Thr Thr Ser Ser Ser Ser Glu Glu Asp Lys Gln Asn
565 570 575
His Lys Ala Asp Asp Val Gln Ala Leu Gln Ala Gly Leu Gln Ile Pro
580 585 590
Ala Ile Pro Lys Ser Glu Met Pro Thr Asn Gly Arg Ser Ile Asp Thr
595 600 605
Gly Gly Gly Ala Pro Gln Ile Leu Ser Thr Ala Met Leu Ser Leu Gly
610 615 620
Ser Gly Ile Ser Gln Cys Gly Tyr Ser Ser Thr Ile Val His Val Pro
625 630 635 640
Pro Pro Glu Thr Ala Arg Asp Ala Thr Leu Phe Cys Glu Pro Trp Thr
645 650 655
Leu Asn Met Gln Pro Ala Pro Leu Thr Ser Glu Glu Phe Lys His Val
660 665 670
Gly Leu Thr Ala Ala Val Leu Ser Ala His Thr Gln Lys Glu Glu Gln
675 680 685
Asn Tyr Val Asp Lys Phe Arg Glu Lys Ile Leu Ser Ser Pro Tyr Ser
690 695 700
Ser Tyr Leu Gln Gln Glu Ser Arg Ser Lys Ala Lys Tyr Ser Tyr Phe
705 710 715 720
Gln Gly Asp Ser Thr Ser Lys Gln Thr Arg Ser Ala Gly Cys Arg Lys
725 730 735
Gly Lys His Lys Arg Lys Lys Leu Pro Glu Pro Pro Asp Ser Ser Ser
740 745 750
Ser Asn Thr Gly Ser Gly Pro Arg Arg Gly Ala His Gln Asn Ala Gln
755 760 765
Pro Cys Cys Pro Ser Ala Ala Ser Ser Pro His Thr Ser Ser Pro Thr
770 775 780
Phe Pro Pro Ala Ala Met Val Pro Ser Gln Ala Pro Tyr Leu Val Pro
785 790 795 800
Ala Phe Pro Leu Pro Ala Ala Thr Ser Pro Gly Arg Glu Tyr Ala Ala
805 810 815
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820 825 830
Leu Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Pro Phe Pro Tyr Leu Asp Thr Phe Met
835 840 845
Thr Val Phe Leu Pro Asp Pro Pro Val Cys Pro Leu Leu Ser Pro Ser
850 855 860
Phe Leu Pro Cys Pro Phe Leu Gly Ala Thr Ala Ser Ser Ala Ile Ser
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Pro Ser Met Ser Ser Ala Met Ser Pro Thr Leu Asp Pro Pro Pro Ser
885 890 895
Val Thr Ser Gln Arg Arg Glu Glu Glu Lys Trp Glu Ala Gln Ser Glu
900 905 910
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915 920 925
Leu Leu Gln Glu Glu Met Pro Arg Pro Ser Glu Ser Pro Asp Gln Met
930 935 940
Arg Arg Asn Thr Cys Pro Gln Thr Glu Tyr Cys Val Thr Gly Asn Asn
945 950 955 960
Gly Ser Glu Ser Ser Pro Ala Thr Thr Gly Ala Leu Ser Thr Gly Ser
965 970 975
Pro Pro Arg Glu Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser Ala Leu Ser Thr
980 985 990
Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser Ala Leu
99510001005
Ser Thr Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser
101010151020
Thr Leu Ser Met Gly Leu Pro Pro Ser Arg Thr Pro Ser His Pro Thr
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Ala Thr Val Leu Ser Thr Gly Ser Pro Pro Ser Glu Ser Pro Ser Arg
104510501055
Thr Gly Ser Ala Ala Ser Gly Ser Ser Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Thr
106010651070
Ser Ser Val Tyr Ser Ser Lys Ile Ser Gln Asn Gly Gln Gln Ser Gln
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Asp Val Gln Lys Lys Glu Thr Phe Pro Asn Val Ala Glu Glu Pro Ile
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Trp Arg Met Ile Arg Gln Thr Pro Glu Arg Ile Leu Met Thr Tyr Gln
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Val Pro Glu Arg Val Lys Glu Val Val Leu Lys Glu Asp Leu Glu Lys
112511301135
Leu Glu Ser Met Arg Gln Gln Gln Pro Gln Phe Ser His Gly Gln Lys
114011451150
Glu Glu Leu Ala Lys Val Tyr Asn Trp Ile Gln Ser Gln Thr Val Thr
115511601165
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Ala Asp Gly Ala Ala Thr Ser Cys Gly Gln Val Leu Val Glu Asp Ser
1185 119011951200
Cys
<210>11
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>11
aagcttagta ggc13
<210>12
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG13的oligo-dT锚定引物
<400>12
aagctttttt tttttc16
<210>13
<211>351
<212>DNA
<213>人类
<400>13
atagcgctca cgcaagcatg gttaacgtcc ctaaaacccg ccggactttc tgtaagaagt 60
gtggcaagca ccaaccccat aaagtgacac agtacaagaa gggcaaggat tctctgtacg120
cccagggaaa gcggcgttat gacaggaagc agagtggcta tggtgggcaa actaagccga180
ttttccggaa aaaggctaaa actacaaaga agattgtgct aaggcttgag tgcgttgagc240
ccaactgcag atctaagaga atgctggcta ttaaaagatg caagcatttt gaactgggag300
gagataagaa gagaaagggc caagtgatcc agttctaagt gtcatctttt a 351
<210>14
<211>106
<212>PRT
<213>人类
<400>14
Met Val Asn Val Pro Lys Thr Arg Arg Thr Phe Cys Lys Lys Cys Gly
1 5 10 15
Lys His Gln Pro His Lys Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Lys Asp Ser
20 25 30
Leu Tyr Ala Gln Gly Lys Arg Arg Tyr Asp Arg Lys Gln Ser Gly Tyr
35 40 45
Gly Gly Gln Thr Lys Pro Ile Phe Arg Lys Lys Ala Lys Thr Thr Lys
50 55 60
Lys Ile Val Leu Arg Leu Glu Cys Val Glu Pro Asn Cys Arg Ser Lys
65 70 75 80
Arg Met Leu Ala Ile Lys Arg Cys Lys His Phe Glu Leu Gly Gly Asp
85 90 95
Lys Lys Arg Lys Gly Gln Val Ile Gln Phe
100 105
<210>15
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG15的引物H-AP2
<400>15
aagcttcgac tgt 13
<210>16
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG15的oligo-dT锚定引物
<400>16
aagctttttt tttttc 16
<210>17
<211>1131
<212>DNA
<213>人类
<400>17
tttccctgag gactggaaga cattagaata aggtccagaa atgtccttgg tgtgtctgac 60
agactttcag gcccatgcgc gagagcagct gtctaagtca actcgggatt ttattgaagg120
tggagcagat gacagcatca cgcgggatga caacattgca gcgtttaaaa gaattcgcct180
ccgtccgcgg tacctgagag atgtgtctga ggtggacacc agaaccacaa tccaagggga240
ggagatcagt gcccctattt gtatcgcacc cacagggttc cactgccttg tctggcctga300
tggggaaatg agcaccgcaa gagctgccca agcggctggt atctgctaca tcaccagcac360
atttgccagc tgtagccttg aagacattgt cattgcagct cccgaaggcc tccgatggtt420
ccaactctat gtgcatccag acctgcagct gaacaaacag ttgatccaga gggtagaatc480
cctaggtttc aaagctttgg taataacttt ggatacacct gtatgtggca acaggcgaca540
tgacattcga aaccagttga ggaggaactt aacactaaca gatcttcaat cacctaaaaa600
gggaaatgca ataccttatt tccagatgac tcctatcagc acttctctct gctggaatga660
tctctcctgg tttcagagca taactcgatt gcccatcatc ctgaaaggga ttttgacaaa720
agaggatgca gagttagctg tgaagcacaa tgtccagggt atcattgttt ccaaccatgg 780
tgggaggcag cttgatgagg ttcttgcttc aattgatgct ttgacagaag tggtggctgc 840
tgtaaagggg aaaattgaag tctacctgga tggcggggtc cgaactggca atgatgtgct 900
gaaggctctg gcccttggag ctaagtgcat ttttcttggg agaccaatcc tatggggcct 960
tgcctgcaag ggtgaacatg gtgttaagga agttttgaac attttaacaa atgagttcca1020
cacttccatg gcccttacag gctgccggtc ggtcgctgag atcaatcgaa acttggtcca1080
gttttccagg ctgtaagaaa aaagggccaa caaccagact gctgaggttg c 1131
<210>18
<211>351
<212>PRT
<213>人类
<400>18
Met Ser Leu Val Cys Leu Thr Asp Phe Gln Ala His Ala Arg Glu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Lys Ser Thr Arg Asp Phe Ile Glu Gly Gly Ala Asp Asp Ser
20 25 30
Ile Thr Arg Asp Asp Asn Ile Ala Ala Phe Lys Arg Ile Arg Leu Arg
35 40 45
Pro Arg Tyr Leu Arg Asp Val Ser Glu Val Asp Thr Arg Thr Thr Ile
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Ile Ser Ala Pro Ile Cys Ile Ala Pro Thr Gly Phe
65 70 75 80
His Cys Leu Val Trp Pro Asp Gly Glu Met Ser Thr Ala Arg Ala Ala
85 90 95
Gln Ala Ala Gly Ile Cys Tyr Ile Thr Ser Thr Phe Ala Ser Cys Ser
100 105 110
Leu Glu Asp Ile Val Ile Ala Ala Pro Glu Gly Leu Arg Trp Phe Gln
115 120 125
Leu Tyr Val His Pro Asp Leu Gln Leu Asn Lys Gln Leu Ile Gln Arg
130 135 140
Val Glu Ser Leu Gly Phe Lys Ala Leu Val Ile Thr Leu Asp Thr Pro
145 150 155 160
Val Cys Gly Asn Arg Arg His Asp Ile Arg Asn Gln Leu Arg Arg Asn
165 170 175
Leu Thr Leu Thr Asp Leu Gln Ser Pro Lys Lys Gly Asn Ala Ile Pro
180 185 190
Tyr Phe Gln Met Thr Pro Ile Ser Thr Ser Leu Cys Trp Asn Asp Leu
195 200 205
Ser Trp Phe Gln Ser Ile Thr Arg Leu Pro Ile Ile Leu Lys Gly Ile
210 215 220
Leu Thr Lys Glu Asp Ala Glu Leu Ala Val Lys His Asn Val Gln Gly
225 230 235 240
Ile Ile Val Ser Asn His Gly Gly Arg Gln Leu Asp Glu Val Leu Ala
245 250 255
Ser Ile Asp Ala Leu Thr Glu Val Val Ala Ala Val Lys Gly Lys Ile
260 265 270
Glu Val Tyr Leu Asp Gly Gly Val Arg Thr Gly Asn Asp Val Leu Lys
275 280 285
Ala Leu Ala Leu Gly Ala Lys Cys Ile Phe Leu Gly Arg Pro Ile Leu
290 295 300
Trp Gly Leu Ala Cys Lys Gly Glu His Gly Val Lys Glu Val Leu Asn
305 310 315 320
Ile Leu Thr Asn Glu Phe His Thr Ser Met Ala Leu Thr Gly Cys Arg
325 330 335
Ser Val Ala Glu Ile Asn Arg Asn Leu Val Gln Phe Ser Arg Leu
340 345 350
<210>19
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG16的引物H-AP8
<400>19
aagcttttac cgc 13
<210>20
<211>16
<212>0NA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG16的oligo-dT锚定引物
<400>20
aagctttttt tttttc 16
<210>21
<211>1336
<212>DNA
<213>人类
<400>21
agctacatcc agctccctga ggcagagttg agaatggaga gaatgttacc tctcctgact 60
ctggggctct tagcggctgg gttctgccct gctgtcctct gccaccctaa cagcccactt 120
gacgaggaga atctgaccca ggagaaccaa gaccgaggga cacacgtgga cctcggatta 180
gcctccgcca acgtggactt cgctttcagc ctgtacaagc agttagtcct gaaggcccct 240
gataagaatg tcatcttctc cccactgagc atctccaccg ccttggcctt cctgtctctg 300
ggggcccata ataccaccct gacagagatt ctcaaaggcc tcaagttcta cctcacggag 360
acttctgagg cagaaattca ccagagcttc cagcacctcc tgcgcaccct caatcagtcc 420
agcgatgagc tgcagctgag tatgggaaat gccatgtttg tcaaagagca actcagtctg 480
ctggacaggt tcacggagga tgccaagagg ctgtatggct ccgaggcctt tgccactgac 540
tttcaggact cagctgcagc taagaagctc atcaacgact acgtgaagaa tggaactagg 600
gggaaaatca cagatctgat caaggacctt gactcgcaga caatgatggt cctggtgaat 660
tacatcttct ttaaagccaa atgggagatg ccctttgacc cccaagatac tcatcagtca 720
aggttctact tgagcaagaa aaagtgggta atggtgccta tgatgagttt gcatcacctg 780
actatacctt acttccggga cgaggagctg tcctgcaccg tggtggagct gaagtacaca 840
ggcaatgcca gcgcactctt catcctccct gatcaagaca agatggagga agtggaagcc 900
atgctgctcc cagagaccct gaagcggtgg agagactctc tggagttcag agagataggt 960
gagctctacc tgccaaagtt ttccatctcg agggactata acctgaacga catacttctc1020
cagctgggca ttgaggaagc cttcaccggc aaggctgacc tgtcagggag cacaggggcc1080
aggaacctag cagtctccca ggtggtccat aaggctgtgc ttgatgtatt tgaggagggc1140
acagaagcat ctgctgccac agcagtcaaa atcaccctcc tttctgcatt agtggagaca1200
aggaccattg tgcgtttcaa caggcccttc ctgatgatca ttgtccctac agacacccag1260
aacatcttct tcatgagcaa agtcaccaat cccaagcaag cctagagctt gccatcaagc1320
agtggggctc tcagta1336
<210>22
<211>423
<212>PRT
<213>人类
<400>22
Met Glu Arg Met Leu Pro Leu Leu Thr Leu Gly Leu Leu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Phe Cys Pro Ala Val Leu Cys His Pro Asn Ser Pro Leu Asp Glu Glu
20 25 30
Asn Leu Thr Gln Glu Asn Gln Asp Arg Gly Thr His Val Asp Leu Gly
35 40 45
Leu Ala Ser Ala Asn Val Asp Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Lys Gln Leu
50 55 60
Val Leu Lys Ala Pro Asp Lys Asn Val Ile Phe Ser Pro Leu Ser Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ala Leu Ala Phe Leu Ser Leu Gly Ala His Asn Thr Thr Leu
85 90 95
Thr Glu Ile Leu Lys Gly Leu Lys Phe Tyr Leu Thr Glu Thr Ser Glu
100 105 110
Ala Glu Ile His Gln Ser Phe Gln His Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln
115 120 125
Ser Ser Asp Glu Leu Gln Leu Ser Met Gly Asn Ala Met Phe Val Lys
130 135 140
Glu Gln Leu Ser Leu Leu Asp Arg Phe Thr Glu Asp Ala Lys Arg Leu
145 150 155 160
Tyr Gly Ser Glu Ala Phe Ala Thr Asp Phe Gln Asp Ser Ala Ala Ala
165 170 175
Lys Lys Leu Ile Asn Asp Tyr Val Lys Asn Gly Thr Arg Gly Lys Ile
180 185 190
Thr Asp Leu Ile Lys Asp Leu Asp Ser Gln Thr Met Met Val Leu Val
195 200 205
Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Ala Lys Trp Glu Met Pro Phe Asp Pro Gln
210 215 220
Asp Thr His Gln Ser Arg Phe Tyr Leu Ser Lys Lys Lys Trp Val Met
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Leu His His Leu Thr Ile Pro Tyr Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Glu Leu Ser Cys Thr Val Val Glu Leu Lys Tyr Thr Gly Asn Ala
260 265 270
Ser Ala Leu Phe Ile Leu Pro Asp Gln Asp Lys Met Glu Glu Val Glu
275 280 285
Ala Met Leu Leu Pro Glu Thr Leu Lys Arg Trp Arg Asp Ser Leu Glu
290 295300
Phe Arg Glu Ile Gly Glu Leu Tyr Leu Pro Lys Phe Ser Ile Ser Arg
305 310 315 320
Asp Tyr Asn Leu Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Gly Ile Glu Glu Ala
325 330 335
Phe Thr Gly Lys Ala Asp Leu Ser Gly Ser Thr Gly Ala Arg Asn Leu
340 345 350
Ala Val Ser Gln Val Val His Lys Ala Val Leu Asp Val Phe Glu Glu
355 360 365
Gly Thr Glu Ala Ser Ala Ala Thr Ala Val Lys Ile Thr Leu Leu Ser
370 375 380
Ala Leu Val Glu Thr Arg Thr Ile Val Arg Phe Asn Arg Pro Phe Leu
385 390 395 400
Met Ile Ile Val Pro Thr Asp Thr Gln Asn Ile Phe Phe Met Ser Lys
405 410 415
Val Thr Asn Pro Lys Gln Ala
420
<210>23
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG24的引物H-AP7
<400>23
aagcttaacg agg13
<210>24
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG24的oligo-dT锚定引物
<400>24
aagctttttt tttttc 16
<210>25
<211>1402
<212>DNA
<213>人类
<400>25
tgatgcacag aagctcctag aaaaaatggg tggctcagca ccaccagata gcagctggag 60
aggaagtctc aaagtgtcct acaatgttgg acctggcttt actggaaact tttctacaca120
aaaagtcaag atgcacatcc actctaccaa tgaagtgacg agaatttaca atgtgatagg180
tactctcaga ggagcagtgg aaccagacag atatgtcatt ctgggaggtc accgggactc240
atgggtgttt ggtggtattg accctcagag tggagcagct gttgttcatg aaactgtgag300
gagctttgga acactgaaaa aggaagggtg gagacctaga agaacaattt tgtttgcaag360
ctgggatgca gaagaatttg gtcttcttgg ttctactgag tgggcagagg ataattcaag420
actccttcaa gagcgtggcg tggcttatat taatgctgac tcatctatag aaggaaacta480
cactctgaga gttgattgta caccactgat gtacagcttg gtatacaacc taacaaaaga540
gctgaaaagc cctgatgaag gctttgaagg caaatctctt tatgaaagtt ggactaaaaa600
aagtccttcc ccagagttca gtggcatgcc caggataagc aaattgggat ctggaaatga660
ttttgaggtg ttcttccaac gacttggaat tgcttcaggc agagcacggt atactaaaaa720
ttgggaaaca aacaaattca gcggctatcc actgtatcac agtgtctatg aaacatatga780
gttggtggaa aagttttatg atccaatgtt taaatatcac ctcactgtgg cccaggttcg840
aggagggatg gtgtttgagc tagccaattc catagtgctc ccttttgatt gtcgagatta900
tgctgtagtt ttaagaaagt atgctgacaa aatctacaat atttctatga aacatccaca960
ggaaatgaag acatacagtt tatcatttga ttcacttttt tctgcagtaa aaaattttac1020
agaaattgct tccaagttca gcgagagact ccaggacttt gacaaaagca acccaatatt1080
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<210>26
<211>442
<212>pRT
<213>人类
<400>26
Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Arg Gly Ser Leu Lys
1 5 10 15
Val Ser Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn Phe Ser Thr Gln
20 25 30
Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val Thr Arg Ile Tyr
35 40 45
Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro Asp Arg Tyr Val
50 55 60
Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly Gly Ile Asp Pro
65 70 75 80
Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Thr Val Arg Ser Phe Gly Thr
85 90 95
Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile Leu Phe Ala Ser
100 105 110
Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr Glu Trp Ala Glu
115 120 125
Asp Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala Tyr Ile Asn Ala
130 135 140
Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu Arg Val Asp Cys Thr Pro
145 150 155 160
Leu Met Tyr Ser Leu Val Tyr Asn Leu Thr Lys Glu Leu Lys Ser Pro
165 170 175
Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser Trp Thr Lys Lys
180 185 190
Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile Ser Lys Leu Gly
195 200 205
Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu Gly Ile Ala Ser
210 215 220
Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn Lys Phe Ser Gly
225 230 235 240
Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu Leu Val Glu Lys
245 250 255
Phe Tyr Asp Pro Met Phe Lys Tyr His Leu Thr Val Ala Gln Val Arg
260 265 270
Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val Leu Pro Phe Asp
275 280 285
Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Tyr
290 295 300
Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Thr Tyr Ser Leu Ser
305 310 315 320
Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr Glu Ile Ala Ser
325 330 335
Lys Phe Ser Glu Arg Leu Gln Asp Phe Asp Lys Ser Asn Pro Ile Leu
340 345 350
Leu Arg Met Met Asn Asp Gln Leu Met Phe Leu Glu Arg Ala Phe Ile
355 360 365
Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg His Val Ile Tyr
370 375 380
Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly Glu Ser Phe Pro Gly Ile
385 390 395 400
Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp Pro Ser Lys Ala
405 410 415
Trp Gly Asp Val Lys Arg Gln Ile Ser Val Ala Ala Phe Thr Val Gln
420 425 430
Ala Ala Ala Glu Thr Leu Ser Glu Val Ala
435 440
<210>27
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG26的引物H-AP11
<400>27
aagcttcggg taa 13
<210>28
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG26的oligo-dT锚定引物
<400>28
aagctttttt tttttg16
<210>29
<211>1160
<212>DNA
<213>人类
<400>29
ctgcacaaga aacggagtca gccggagaac aaggagtggt cttccactgc ctcacaggag 60
gatggaggcc cacaacgcgt ctgccccatt caacttcacc ctgccaccca actttggcaa 120
gcgccccaca gacctggcac tgagcgtcat cctggtgttc atgttgttct tcatcatgct 180
ctcgctgggc tgcaccatgg agttcagcaa gatcaaggct cacttatgga agcctaaagg 240
gctggccatc gccctggtgg cacagtatgg catcatgccc ctcacggcct ttgtgctggg 300
caaggtcttc cggctgaaga acattgaggc actggccatc ttggtctgtg gctgctcacc 360
tggagggaac ctgtccaatg tcttcagtct ggccatgaag ggggacatga acctcagcat 420
tgtgatgacc acctgctcca ccttctgtgc ccttggcatg atgcctctcc tcctgtacat 480
ctactccagg gggatctatg atggggacct gaaggacaag gtgccctata aaggcatcgt 540
gatatcactg gtcctggttc tcattccttg caccataggg atcgtcctca aatccaaacg 600
gccacaatac atgcgctatg tcatcaaggg agggatgatc atcattctct tgtgcagtgt 660
ggccgtcaca gttctctctg ccatcaatgt ggggaagagc atcatgtttg ccatgacacc 720
actcttgatt gccacctcct ccctgatgcc ttttattggc tttctgctgg gttatgttct 780
ctctgctctc ttctgcctca atggacggtg cagacgcact gtcagcatgg agactggatg 840
ccaaaatgtc caactctgtt ccaccatcct caatgtggcc tttccacctg aagtcattgg 900
accacttttc ttctttcccc tcctctacat gattttccag cttggagaag ggcttctcct 960
cattgccata ttttggtgct atgagaaatt caagactccc aaggataaaa caaaaatgat1020
ctacacagct gccacaactg aagaaacaat tccaggagct ctgggaaatg gcacctacaa1080
aggggaggac tgctcccctt gcacagccta gcccttcccc tggtggcctg gattctggtc1140
ccaaagcaat tctgaaagcc1160
<210>30
<211>349
<212>PRT
<213>人类
<400>30
Met Glu Ala His Asn Ala Ser Ala Pro Phe Asn Phe Thr Leu Pro Pro
1 5 10 15
Asn Phe Gly Lys Arg Pro Thr Asp Leu Ala Leu Ser Val Ile Leu Val
20 25 30
Phe Met Leu Phe Phe Ile Met Leu Ser Leu Gly Cys Thr Met Glu Phe
35 40 45
Ser Lys Ile Lys Ala His Leu Trp Lys Pro Lys Gly Leu Ala Ile Ala
50 55 60
Leu Val Ala Gln Tyr Gly Ile Met Pro Leu Thr Ala Phe Val Leu Gly
65 70 75 80
Lys Val Phe Arg Leu Lys Asn Ile Glu Ala Leu Ala Ile Leu Val Cys
85 90 95
Gly Cys Ser Pro Gly Gly Asn Leu Ser Asn Val Phe Ser Leu Ala Met
100 105 110
Lys Gly Asp Met Asn Leu Ser Ile Val Met Thr Thr Cys Ser Thr Phe
115 120 125
Cys Ala Leu Gly Met Met Pro Leu Leu Leu Tyr Ile Tyr Ser Arg Gly
130 135 140
Ile Tyr Asp Gly Asp Leu Lys Asp Lys Val Pro Tyr Lys Gly Ile Val
145 150 155 160
Ile Ser Leu Val Leu Val Leu Ile Pro Cys Thr Ile Gly Ile Val Leu
165 170 175
Lys Ser Lys Arg Pro Gln Tyr Met Arg Tyr Val Ile Lys Gly Gly Met
180 185 190
Ile Ile Ile Leu Leu Cys Ser Val Ala Val Thr Val Leu Ser Ala Ile
195 200 205
Asn Val Gly Lys Ser Ile Met Phe Ala Met Thr Pro Leu Leu Ile Ala
210 215 220
Thr Ser Ser Leu Met Pro Phe Ile Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Leu
225 230 235 240
Ser Ala Leu Phe Cys Leu Asn Gly Arg Cys Arg Arg Thr Val Ser Met
245 250 255
Glu Thr Gly Cys Gln Asn Val Gln Leu Cys Ser Thr Ile Leu Asn Val
260 265 270
Ala Phe Pro Pro Glu Val Ile Gly Pro Leu Phe Phe Phe Pro Leu Leu
275 280 285
Tyr Met Ile Phe Gln Leu Gly Glu Gly Leu Leu Leu Ile Ala Ile Phe
290 295 300
Trp Cys Tyr Glu Lys Phe Lys Thr Pro Lys Asp Lys Thr Lys Met Ile
305 310 315 320
Tyr Thr Ala Ala Thr Thr Glu Glu Thr Ile Pro Gly Ala Leu Gly Asn
325 330 335
Gly Thr Tyr Lys Gly Glu Asp Cys Ser Pro Cys Thr Ala
340 345
<210>31
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG29的引物H-AP3
<400>31
aagctttggt cag 13
<210>32
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG29的oligo-dT锚定引物
<400>32
aagctttttt ttttta 16
<210>33
<211>1825
<212>DNA
<213>人类
<400>33
gtatctgggc gcctgagcgc ggcgtgggag ccttgggagc cgccgcagca gggggcacac 60
ccggaaccgg cctgagcgcc cgggaccatg aacggggagg ccatctgcag cgccctgccc 120
accattccct accacaaact cgccgacctg cgctacctga gccgcggcgc ctctggcact 180
gtgtcgtccg cccgccacgc agactggcgc gtccaggtgg ccgtgaagca cctgcacatc 240
cacactccgc tgctcggcag tgaaagaaag gatgtcttaa gagaagctga aattttacac 300
aaagctagat ttagttacat tcttccaatt ttgggaattt gcaatgagcc tgaatttttg 360
ggaatagtta ctgaatacat gccaaatgga tcattaaatg aactcctaca taggaaaact 420
gaatatcctg atgttgcttg gccattgaga tttcgcatcc tgcatgaaat tgcccttggt 480
gtaaattacc tgcacaatat gactcctcct ttacttcatc atgacttgaa gactcagaat 540
atcttattgg acaatgaatt tcatgttaag attgcagatt ttggtttatc aaagtggcgc 600
atgatgtccc tctcacagtc acgaagtagc aaatctgcac cagaaggagg gacaattatc 660
tatatgccac ctgaaaacta tgaacctgga caaaaatcaa gggccagtat caagcacgat 720
atatatagct atgcagttat cacatgggaa gtgttatcca gaaaacagcc ttttgaagat 780
gtcaccaatc ctttgcagat aatgtatagt gtgtcacaag gacatcgacc tgttattaat 840
gaagaaagtt tgccatatga tatacctcac cgagcacgta tgatctctct aatagaaagt 900
ggatgggcac aaaatccaga tgaaagacca tctttcttaa aatgtttaat agaacttgaa 960
ccagttttga gaacatttga agagataact tttcttgaag ctgttattca gctaaagaaa1020
acaaagttac agagtgtttc aagtgccatt cacctatgtg acaagaagaa aatggaatta1080
tctctgaaca tacctgtaaa tcatggtcca caagaggaat catgtggatc ctctcagctc1140
catgaaaata gtggttctcc tgaaacttca aggtccctgc cagctcctca agacaatgat1200
tttttatcta gaaaagctca agactgttat tttatgaagc tgcatcactg tcctggaaat1260
cacagttggg atagcaccat ttctggatct caaagggctg cattctgtga tcacaagacc1320
actccatgct cttcagcaat aataaatcca ctctcaactg caggaaactc agaacgtctg1380
cagcctggta tagcccagca gtggatccag agcaaaaggg aagacattgt gaaccaaatg1440
acagaagcct gccttaacca gtcgctagat gcccttctgt ccagggactt gatcatgaaa1500
gaggactatg aacttgttag taccaagcct acaaggacct caaaagtcag acaattacta1560
gacactactg acatccaagg agaagaattt gccaaagtta tagtacaaaa attgaaagat1620
aacaaacaaa tgggtcttca gccttacccg gaaatacttg tggtttctag atcaccatct1680
ttaaatttac ttcaaaataa aagcatgtaa gtgactgttt ttcaagaaga aatgtgtttc1740
ataaaaggat atttatatct ctgttgcttt gacttttttt atataaaatc cgtgagtatt1800
aaagctttat tgaaggttct ttggg 1825
<210>34
<211>540
<212>PRT
<213>人类
<400>34
Met Asn Gly Glu Ala Ile Cys Ser Ala Leu Pro Thr Ile Pro Tyr His
1 5 10 15
Lys Leu Ala Asp Leu Arg Tyr Leu Ser Arg Gly Ala Ser Gly Thr Val
20 25 30
Ser Ser Ala Arg His Ala Asp Trp Arg Val Gln Val Ala Val Lys His
35 40 45
Leu His Ile His Thr Pro Leu Leu Gly Ser Glu Arg Lys Asp Val Leu
50 55 60
Arg Glu Ala Glu Ile Leu His Lys Ala Arg Phe Ser Tyr Ile Leu Pro
65 70 75 80
Ile Leu Gly Ile Cys Asn Glu Pro Glu Phe Leu Gly Ile Val Thr Glu
85 90 95
Tyr Met Pro Asn Gly Ser Leu Asn Glu Leu Leu His Arg Lys Thr Glu
100 105 110
Tyr Pro Asp Val Ala Trp Pro Leu Arg Phe Arg Ile Leu His Glu Ile
115 120 125
Ala Leu Gly Val Asn Tyr Leu His Asn Met Thr Pro Pro Leu Leu His
130 135 140
His Asp Leu Lys Thr Gln Asn Ile Leu Leu Asp Asn Glu Phe His Val
145 150 155 160
Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Trp Arg Met Met Ser Leu Ser
165 170 175
Gln Ser Arg Ser Ser Lys Ser Ala Pro Glu Gly Gly Thr Ile Ile Tyr
180 185 190
Met Pro Pro Glu Asn Tyr Glu Pro Gly Gln Lys Ser Arg Ala Ser Ile
195 200 205
Lys His Asp Ile Tyr Ser Tyr Ala Val Ile Thr Trp Glu Val Leu Ser
210 215 220
Arg Lys Gln Pro Phe Glu Asp Val Thr Asn Pro Leu Gln Ile Met Tyr
225 230 235 240
Ser Val Ser Gln Gly His Arg Pro Val Ile Asn Glu Glu Ser Leu Pro
245 250 255
Tyr Asp Ile Pro His Arg Ala Arg Met Ile Ser Leu Ile Glu Ser Gly
260 265 270
Trp Ala Gln Asn Pro Asp Glu Arg Pro Ser Phe Leu Lys Cys Leu Ile
275 280 285
Glu Leu Glu Pro Val Leu Arg Thr Phe Glu Glu Ile Thr Phe Leu Glu
290 295 300
Ala Val Ile Gln Leu Lys Lys Thr Lys Leu Gln Ser Val Ser Ser Ala
305 310 315 320
Ile His Leu Cys Asp Lys Lys Lys Met Glu Leu Ser Leu Asn Ile Pro
325 330 335
Val Asn His Gly Pro Gln Glu Glu Ser Cys Gly Ser Ser Gln Leu His
340 345 350
Glu Asn Ser Gly Ser Pro Glu Thr Ser Arg Ser Leu Pro Ala Pro Gln
355 360 365
Asp Asn Asp Phe Leu Ser Arg Lys Ala Gln Asp Cys Tyr Phe Met Lys
370 375 380
Leu His His Cys Pro Gly Asn His Ser Trp Asp Ser Thr Ile Ser Gly
385 390 395 400
Ser Gln Arg Ala Ala Phe Cys Asp His Lys Thr Thr Pro Cys Ser Ser
405 410 415
Ala Ile Ile Asn Pro Leu Ser Thr Ala Gly Asn Ser Glu Arg Leu Gln
420 425 430
Pro Gly Ile Ala Gln Gln Trp Ile Gln Ser Lys Arg Glu Asp Ile Val
435 440 445
Asn Gln Met Thr Glu Ala Cys Leu Asn Gln Ser Leu Asp Ala Leu Leu
450 455 460
Ser Arg Asp Leu Ile Met Lys Glu Asp Tyr Glu Leu Val Ser Thr Lys
465 470 475 480
Pro Thr Arg Thr Ser Lys Val Arg Gln Leu Leu Asp Thr Thr Asp Ile
485 490 495
Gln Gly Glu Glu Phe Ala Lys Val Ile Val Gln Lys Leu Lys Asp Asn
500 505 510
Lys Gln Met Gly Leu Gln Pro Tyr Pro Glu Ile Leu Val Val Ser Arg
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Ser Pro Ser Leu Asn Leu Leu Gln Asn Lys Ser Met
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<210>35
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG30的引物H-AP4
<400>35
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG30的oligo-dT锚定引物
<400>36
aagctttttt tttttg 16
<210>37
<211>648
<212>DNA
<213>人类
<400>37
cagggaaacc tcctcacagt tttcatccag ccacgggcca gcatgtctgg gggcaaatac 60
gtagactcgg agggacatct ctacaccgtt cccatccggg aacagggcaa catctacaag120
cccaacaaca aggccatggc agacgagctg agcgagaagc aagtgtacga cgcgcacacc180
aaggagatcg acctggtcaa ccgcgaccct aaacacctca acgatgacgt ggtcaagatt240
gactttgaag atgtgattgc agaaccagaa gggacacaca gttttgacgg catttggaag300
gccagcttca ccaccttcac tgtgacgaaa tactggtttt accgcttgct gtctgccctc360
tttggcatcc cgatggcact catctggggc atttacttcg ccattctctc tttcctgcac420
atctgggcag ttgtaccatg cattaagagc ttcctgattg agattcagtg catcagccgt480
gtctattcca tctacgtcca caccgtctgt gacccactct ttgaagctgt tgggaaaata540
ttcagcaatg tccgcatcaa cttgcagaaa gaaatataaa tgacatttca aggatagaag600
tatacctgat tttttttcct tttaattttc ctggtgccaa tttcaagt 648
<210>38
<211>178
<212>PRT
<213>人类
<400>38
Met Ser Gly Gly Lys Tyr Val Asp Ser Glu Gly His Leu Tyr Thr Val
1 5 10 15
Pro Ile Arg Glu Gln Gly Asn Ile Tyr Lys Pro Asn Asn Lys Ala Met
20 25 30
Ala Asp Glu Leu Ser Glu Lys Gln Val Tyr Asp Ala His Thr Lys Glu
35 40 45
Ile Asp Leu Val Asn Arg Asp Pro Lys His Leu Asn Asp Asp Val Val
50 55 60
Lys Ile Asp Phe Glu Asp Val Ile Ala Glu Pro Glu Gly Thr His Ser
65 70 75 80
Phe Asp Gly Ile Trp Lys Ala Ser Phe Thr Thr Phe Thr Val Thr Lys
85 90 95
Tyr Trp Phe Tyr Arg Leu Leu Ser Ala Leu Phe Gly Ile Pro Met Ala
100 105 110
Leu Ile Trp Gly Ile Tyr Phe Ala Ile Leu Ser Phe Leu His Ile Trp
115 120 125
Ala Val Val Pro Cys Ile Lys Ser Phe Leu Ile Glu Ile Gln Cys Ile
130 135 140
Ser Arg Val Tyr Ser Ile Tyr Val His Thr Val Cys Asp Pro Leu Phe
145 150 155 160
Glu Ala Val Gly Lys Ile Phe Ser Asn Val Arg Ile Asn Leu Gln Lys
165 170 175
Glu Ile
<210>39
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG32的引物H-AP8
<400>39
aagcttttac cgc 13
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG32的oligo-dT锚定引物
<400>40
aagctttttt tttttg 16
<210>41
<211>406
<212>DNA
<213>人类
<400>41
ggcctcgtcc ttctcttacc gccatcttgg ctcctgtgga ggcctgctgg gaacgggact 60
tctaaaagga actatgtctg gaaggctgtg gtccaaggcc atttttgctg gctataagcg 120
gggtctccgg aaccaaaggg agcacacagc tcttcttaaa attgaaggtg tttacgcccg 180
agatgaaaca gaattctatt tgggcaagag atgcgcttat gtatataaag caaagaacaa 240
cacagtcact cctggcggca aaccaaacaa aaccagagtc atctggggaa aagtaactcg 300
ggcccatgga aacagtggca tggttcgtgc caaattccga agcaatcttc ctgccaaggc360
cattggacac agaatccgag tgatgctgta cccctcaagg atttaa 406
<210>42
<211>110
<212>PRT
<213>人类
<400>42
Met Ser Gly Arg Leu Trp Ser Lys Ala Ile Phe Ala Gly Tyr Lys Arg
1 5 10 15
Gly Leu Arg Asn Gln Arg Glu His Thr Ala Leu Leu Lys Ile Glu Gly
20 25 30
Val Tyr Ala Arg Asp Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Gly Lys Arg Cys Ala
35 40 45
Tyr Val Tyr Lys Ala Lys Asn Asn Thr Val Thr Pro Gly Gly Lys Pro
50 55 60
Asn Lys Thr Arg Val Ile Trp Gly Lys Val Thr Arg Ala His Gly Asn
65 70 75 80
Ser Gly Met Val Arg Ala Lys Phe Arg Ser Asn Leu Pro Ala Lys Ala
85 90 95
Ile Gly His Arg Ile Arg Val Met Leu Tyr Pro Ser Arg Ile
100 105 110
<210>43
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG33的引物H-AP33
<400>43
aagcttgctg ctc 13
<210>44
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG33的oligo-dT锚定引物
<400>44
aagctttttt tttttg16
<210>45
<211>560
<212>DNA
<213>人类
<400>45
catcatggcg gatcaaggtg aaaaggagaa ccccatgcgg gaacttcgca tccgcaaact 60
ctgtctcaac atctgtgttg gggagagtgg agacagactg gcgcgagcag ccaaggtgtt120
ggagcagctc acagggcaga cccctgtgtt ttccaaagct agatacactg tcagatcctt180
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agaaatcttg gagaagggtc taaaggtgcg ggagtatgag ttaagaaaaa acaacttctc300
agatactgga aactttggtt ttgggatcca ggaacacatc gatctgggta tcaaatatga360
cccaagcatt ggtatctacg gcctggactt ctatgtggtg ctgggtaggc caggtttcag420
catcgcagac aagaagcgca ggacaggctg cattggggcc aaacacagaa tcagcaaaga480
ggaggccatg cgctggttcc agcagaagta tgatgggatc atcct tcctg gcaaataaat 540
tcccgtttct atccaaaaga560
<210>46
<211>177
<212>PRT
<213>人类
<400>46
Met Ala Asp Gln Gly Glu Lys Glu Asn Pro Met Arg Glu Leu Arg Ile
1 5 10 15
Arg Lys Leu Cys Leu Asn Ile Cys Val Gly Glu Ser Gly Asp Arg Leu
20 25 30
Ala Arg Ala Ala Lys Val Leu Glu Gln Leu Thr Gly Gln Thr Pro Val
35 40 45
Phe Ser Lys Ala Arg Tyr Thr Val Arg Ser Phe Gly Ile Arg Arg Asn
50 55 60
Glu Lys Ile Ala Val His Cys Thr Val Arg Gly Ala Lys Ala Glu Glu
65 70 75 80
Ile Leu Glu Lys Gly Leu Lys Val Arg Glu Tyr Glu Leu Arg Lys Asn
85 90 95
Asn Phe Ser Asp Thr Gly Asn Phe Gly Phe Gly Ile Gln Glu His Ile
100 105 110
Asp Leu Gly Ile Lys Tyr Asp Pro Ser Ile Gly Ile Tyr Gly Leu Asp
115 120 125
Phe Tyr Val Val Leu Gly Arg Pro Gly Phe Ser Ile Ala Asp Lys Lys
130 135 140
Arg Arg Thr Gly Cys Ile Gly Ala Lys His Arg Ile Ser Lys Glu Glu
145 150 155 160
Ala Met Arg Trp Phe Gln Gln Lys Tyr Asp Gly Ile Ile Leu Pro Gly
165 170 175
Lys
<210>47
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG34的引物H-AP35
<400>47
aagctcagg gca 13
<210>48
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG34的oligo-dT锚定引物
<400>48
aagctttttt tttttc 16
<210>49
<211>1398
<212>DNA
<213>人类
<400>49
tttctttgcg gaatcaccat ggcggctggg accctgtaca cgtatcctga aaactggagg 60
gccttcaagg ctctcatcgc tgctcagtac agcggggctc aggtccgcgt gctctccgca 120
ccaccccact tccattttgg ccaaaccaac cgcacccctg aatttctccg caaatttcct 180
gccggcaagg tcccagcatt tgagggtgat gatggattct gtgtgtttga gagcaacgcc 240
attgcctact atgtgagcaa tgaggagctg cggggaagta ctccagaggc agcagcccag 300
gtggtgcagt gggtgagctt tgctgattcc gatatagtgc ccccagccag tacctgggtg 360
ttccccacct tgggcatcat gcaccacaac aaacaggcca ctgagaatgc aaaggaggaa 420
gtgaggcgaa ttctggggct gctggatgct tacttgaaga cgaggacttt tctggtgggc 480
gaacgagtga cattggctga catcacagtt gtctgcaccc tgttgtggct ctataagcag 540
gttctagagc cttctttccg ccaggccttt cccaatacca accgctggtt cctcacctgc 600
attaaccagc cccagttccg ggctgtcttg ggcgaagtga aactgtgtga gaagatggcc 660
cagtttgatg ctaaaaagtt tgcagagacc caacctaaaa aggacacacc acggaaagag 720
aagggttcac gggaagagaa gcagaagccc caggctgagc ggaaggagga gaaaaaggcg 780
gctgcccctg ctcctgagga ggagatggat gaatgtgagc aggcgctggc tgctgagccc 840
aaggccaagg accccttcgc tcacctgccc aagagtacct ttgtgttgga tgaatttaag 900
cgcaagtact ccaatgagga cacactctct gtggcactgc catatttctg ggagcacttt 960
gataaggacg gctggtccct gtggtactca gagtatcgct tccctgaaga actcactcag1020
accttcatga gctgcaatct catcactgga atgttccagc gactggacaa gctgaggaag1080
aatgccttcg ccagtgtcat cctttttgga accaacaata gcagctccat ttctggagtc1140
tgggtcttcc gaggccagga gcttgccttt ccgctgagtc cagattggca ggtggactac1200
gagtcataca catggcggaa actggatcct ggcagcgagg agacccagac gctggttcga1260
gagtactttt cctgggaggg ggccttccag catgtgggca aagccttcaa tcagggcaag1320
atcttcaagt gaacatctct tgccatcacc tagctgcctg cacctgccct tcagggagat1380
gggggtcatt aaaggaaa 1398
<210>50
<211>437
<212>PRT
<213>人类
<400>50
Met Ala Ala Gly Thr Leu Tyr Thr Tyr Pro Glu Asn Trp Arg Ala Phe
1 5 10 15
Lys Ala Leu Ile Ala Ala Gln Tyr Ser Gly Ala Gln Val Arg Val Leu
20 25 30
Ser Ala Pro Pro His Phe His Phe Gly Gln Thr Asn Arg Thr Pro Glu
35 40 45
Phe Leu Arg Lys Phe Pro Ala Gly Lys Val Pro Ala Phe Glu Gly Asp
50 55 60
Asp Gly Phe Cys Val Phe Glu Ser Asn Ala Ile Ala Tyr Tyr Val Ser
65 70 75 80
Asn Glu Glu Leu Arg Gly Ser Thr Pro Glu Ala Ala Ala Gln Val Val
85 90 95
Gln Trp Val Ser Phe Ala Asp Ser Asp Ile Val Pro Pro Ala Ser Thr
100 105 110
Trp Val Phe Pro Thr Leu Gly Ile Met His His Asn Lys Gln Ala Thr
115 120125
Glu Asn Ala Lys Glu Glu Val Arg Arg Ile Leu Gly Leu Leu Asp Ala
130 135 140
Tyr Leu Lys Thr Arg Thr Phe Leu Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ala
145 150 155 160
Asp Ile Thr Val Val Cys Thr Leu Leu Trp Leu Tyr Lys Gln Val Leu
165 170 175
Glu Pro Ser Phe Arg Gln Ala Phe Pro Asn Thr Asn Arg Trp Phe Leu
180 185 190
Thr Cys Ile Asn Gln Pro Gln Phe Arg Ala Val Leu Gly Glu Val Lys
195 200 205
Leu Cys Glu Lys Met Ala Gln Phe Asp Ala Lys Lys Phe Ala Glu Thr
210 215 220
Gln Pro Lys Lys Asp Thr Pro Arg Lys Glu Lys Gly Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Lys Gln Lys Pro Gln Ala Glu Arg Lys Glu Glu Lys Lys Ala Ala Ala
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Glu Glu Met Asp Glu Cys Glu Gln Ala Leu Ala Ala
260 265 270
Glu Pro Lys Ala Lys Asp Pro Phe Ala His Leu Pro Lys Ser Thr Phe
275 280 285
Val Leu Asp Glu Phe Lys Arg Lys Tyr Ser Asn Glu Asp Thr Leu Ser
290 295 300
Val Ala Leu Pro Tyr Phe Trp Glu His Phe Asp Lys Asp Gly Trp Ser
305 310 315 320
Leu Trp Tyr Ser Glu Tyr Arg Phe Pro Glu Glu Leu Thr Gln Thr Phe
325 330 335
Met Ser Cys Asn Leu Ile Thr Gly Met Phe Gln Arg Leu Asp Lys Leu
340 345 350
Arg Lys Asn Ala Phe Ala Ser Val Ile Leu Phe Gly Thr Asn Asn Ser
355 360 365
Ser Ser Ile Ser Gly Val Trp Val Phe Arg Gly Gln Glu Leu Ala Phe
370 375 380
Pro Leu Ser Pro Asp Trp Gln Val Asp Tyr Glu Ser Tyr Thr Trp Arg
385 390 395 400
Lys Leu Asp Pro Gly Ser Glu Glu Thr Gln Thr Leu Val Arg Glu Tyr
405 410 415
Phe Ser Trp Glu Gly Ala Phe Gln His Val Gly Lys Ala Phe Asn Gln
420 425 430
Gly Lys Ile Phe Lys
435
<210>51
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG35的引物H-AP3
<400>51
aagctttggt cag13
<210>52
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG35的oligo-dT锚定引物
<400>52
aagctttttt tttttc 16
<210>53
<211>560
<212>DNA
<213>人类
<400>53
aggccgtagg aggaagatgg cggtggagtc gcgcgttacc caggaggaaa ttaagaagga 60
gccagagaaa ccgatcgacc gcgagaagac atgcccactg ttgctacggg tcttcaccac 120
caataacggc cgccaccacc gaatggacga gttctcccgg ggaaatgtac cgtccagcga 180
gttgcagatc tacacttgga tggatgcaac tttgaaagaa ctgacaagct tagtaaaaga 240
agtctaccca gaagctagaa agaagggcac tcacttcaat tttgcaatcg tttttacaga 300
tgttaaaaga cctggctatc gagttaagga gattggcagc accatgtctg gcagaaaggg 360
gactgatgat tccatgaccc tgcagtcgca gaagttccag ataggagatt acttggacat 420
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tctatttact atttgttgaa tttatttttc cgtcagttat gtaaaataaa catactcttc 540
ttcctcccct gattattgcc 560
<210>54
<211>153
<212>PRT
<213>人类
<400>54
Met Ala Val Glu Ser Arg Val Thr Gln Glu Glu Ile Lys Lys Glu Pro
1 5 10 15
Glu Lys Pro Ile Asp Arg Glu Lys Thr Cys Pro Leu Leu Leu Arg Val
20 25 30
Phe Thr Thr Asn Asn Gly Arg His His Arg Met Asp Glu Phe Ser Arg
35 40 45
Gly Asn Val Pro Ser Ser Glu Leu Gln Ile Tyr Thr Trp Met Asp Ala
50 55 60
Thr Leu Lys Glu Leu Thr Ser Leu Val Lys Glu Val Tyr Pro Glu Ala
65 70 75 80
Arg Lys Lys Gly Thr His Phe Asn Phe Ala Ile Val Phe Thr Asp Val
85 90 95
Lys Arg Pro Gly Tyr Arg Val Lys Glu Ile Gly Ser Thr Met Ser Gly
100 105 110
Arg Lys Gly Thr Asp Asp Ser Met Thr Leu Gln Ser Gln Lys Phe Gln
115 120 125
Ile Gly Asp Tyr Leu Asp Ile Ala Ile Thr Pro Pro Asn Arg Ala Pro
130 135 140
Pro Pro Ser Gly Arg Met Arg Pro Tyr
145 150
<210>55
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG38的引物H-AP12
<400>55
aagcttgagt gct 13
<210>56
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG38的oligo-dT锚定引物
<400>56
aagctttttt tttttc 16
<210>57
<211>2874
<212>DNA
<213>人类
<400>57
caacctccag gagctagcag cgggcgcgga ccgggcagtt tccgcgctca gcacaggcag 60
ctcgcggtca tgggcggctc agcctccagc cagctggacg agggcaagtg cgcttacatc 120
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aaggaagctg ctatcttgaa gaaacacaac ttatttgaag ataacatggc cttgcccagt1800
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<211>928
<212>PRT
<213>人类
<400>58
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1 5 10 15
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65 70 75 80
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130 135 140
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Gly His Tyr Gly Ser Trp Glu Met Ile Thr Gly Asp Glu Ile Gln Ile
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Leu Ser Asn Leu Val Met Glu Glu Leu Leu Pro Thr Leu Gln Thr Asp
245 250 255
Leu Leu Pro Lys Met Lys Gly Lys Lys Asn Asp Arg Lys Arg Thr Trp
260 265 270
Leu Gly Leu Leu Glu Glu Ala Tyr Thr Leu Val Gln His Gln Val Ser
275 280 285
Glu Gly Leu Ser Ala Leu Lys Glu Glu Cys Arg Ala Leu Thr Lys Gly
290 295 300
Leu Glu Gly Thr Ile Arg Ser Asp Met Asp Gln Ile Val Asn Ser Lys
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Asn Tyr Leu Ile Gly Lys Ile Lys Ala Met Val Ala Gln Pro Ala Glu
325 330 335
Lys Ser Cys Leu Glu Ser Val Gln Pro Phe Leu Ala Ser Ile Leu Glu
340 345 350
Glu Leu Met Gly Pro Val Ser Ser Gly Phe Ser Glu Val Arg Val Leu
355 360 365
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Leu His Ser Val Lys Met Glu Pro Cys Tyr Thr Lys Val Asn Leu Leu
405 410 415
His Glu Arg Leu Gln Asp Leu Lys Ser Arg Phe Arg Phe Pro His Ile
420 425 430
Asp Leu Val Val Gln Arg Thr Gln Asn Tyr Met Gln Glu Leu Met Glu
435 440 445
Asn Ala Val Phe Thr Phe Glu Gln Leu Leu Ser Pro His Leu Gln Gly
450 455 460
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Leu Lys Gln Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Thr Ile Arg Lys Lys Ile Phe
485 490 495
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770 775 780
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Gly Glu Ala Cys Thr Leu Thr Ala His Glu Gly Arg Gly Gly Lys Cys
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<210>59
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
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<400>59
aagcttgagt gct 13
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG39的oligo-dT锚定引物
<400>60
aagctttttt ttttta16
<210>61
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<212>DNA
<213>人类
<400>61
ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg60
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<211>1210
<212>PRT
<213>人类
<400>62
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
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Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
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Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
405 410 415
Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
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Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu
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Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro
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515 520 525
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Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro
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Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro
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Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val
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Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly
625 630 635 640
Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu
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Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His
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Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu
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Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser
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Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu
725 730 735
Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser
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Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala
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<213>人工序列
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<210>65
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<212>DNA
<213>人类
<400>65
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<211>609
<212>PRT
<213>人类
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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
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Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
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His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
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Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
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Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510
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Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
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Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
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Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
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<212>DNA
<213>人类
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Gly Ser Ile Ile Arg Lys Trp Asn Gly Leu Leu Ser Ala Met Ala Asp
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<213>人类
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Val Thr His Asn Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala
165 170 175
Ile Met Arg Leu Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met
180 185 190
Lys Ile Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Ser Phe Val Thr Thr Ala Glu Arg
195 200 205
Glu Ile Val Arg Asp Ile Lys Glu Lys Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp
210 215 220
Phe Glu Asn Glu Met Ala Thr Ala Ala Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys
225 230 235 240
Ser Tyr Glu Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg
245 250 255
Phe Arg Cys Pro Glu Thr Leu Phe Gln Pro Ser Phe Ile Gly Met Glu
260 265 270
Ser Ala Gly Ile His Glu Thr Thr Tyr Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp
275 280 285
Ile Asp Ile Arg Lys Asp Leu Tyr Ala Asn Asn Val Leu Ser Gly Gly
290 295 300
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG46的引物H-AP16
<400>75
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG46的oligo-dT锚定引物
<400>76
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<400>77
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tacttaaaga tctggaaagc atgaagactg ggcttttttt cctatgtctc ttgggaactg 120
cagctgcaat cccgacaaat gcaagattat tatctgatca ttccaaacca actgctgaaa 180
cggtagcacc cgacaacact gcaatcccca gtttaagggc tgaagatgaa gaaaatgaaa 240
aagaaacagc agtatccaca gaagacgatt cccaccataa ggctgaaaaa tcatcagtac 300
taaagtcaaa agaggaaagc catgaacagt cagcagaaca gggcaagagt tctagccaag 360
agctgggatt gaaggatcaa gaggacagtg atggtgactt aagtgtgaat ttggagtatg 420
caccaactga aggtacattg gacataaaag aagatatgag tgagcctcag gagaaaaaac 480
tctcagagaa cactgattttt tggctcctg gtgttagttc cttcacagat tctaaccaac 540
aagaaagtat cacaaagaga gaggaaaacc aagaacaacc tagaaattat tcacatcatc 600
agttgaacag gagcagtaaa catagccaag gcctaaggga tcaaggaaac caagagcagg 660
atccaaatat ttccaatgga gaagaggaag aagaaaaaga gccaggtgaa gttggtaccc 720
acaatgataa ccaagaaaga aagacagaat tgcccaggga gcatgctaac agcaagcagg 780
aggaagacaa tacccaatct gatgatattt tggaagagtc tgatcaacca actcaagtaa 840
gcaagatgca ggaggatgaa tttgatcagg gtaaccaaga acaagaagat aactccaatg 900
cagaaatgga agaggaaaat gcatcgaacg tcaataagca cattcaagaa actgaatggc 960
agagtcaaga gggtaaaact ggcctagaag ctatcagcaa ccacaaagag acagaagaaa1020
agactgtttc tgaggctctg ctcatggaac ctactgatga tggtaatacc acgcccagaa1080
atcatggagt tgatgatgat ggcgatgatg atggcgatga tggcggcact gatggcccca1140
ggcacagtgc aagtgatgac tacttcatcc caagccaggc ctttctggag gccgagagag1200
ctcaatccat tgcctatcac ctcaaaattg aggagcaaag agaaaaagta catgaaaatg1260
aaaatatagg taccactgag cctggagagc accaagaggc caagaaagca gagaactcat1320
caaatgagga ggaaacgtca agtgaaggca acatgagggt gcatgctgtg gattcttgca1380
tgagcttcca gtgtaaaaga ggccacatct gtaaggcaga ccaacaggga aaacctcact1440
gtgtctgcca ggatccagtg acttgtcctc caacaaaacc ccttgatcaa gtttgtggca1500
ctgacaatca gacctatgct agttcctgtc atctattcgc tactaaatgc agactggagg1560
ggaccaaaaa ggggcatcaa ctccagctgg attattttgg agcctgcaaa tctattccta1620
cttgtacgga ctttgaagtg attcagtttc ctctacggat gagagactgg ctcaagaata1680
tcctcatgca gctttatgaa gccaactctg aacacgctgg ttatctaaat gagaagcaga1740
gaaataaagt caagaaaatt tacctggatg aaaagaggct tttggctggg gaccatccca1800
ttgaccttct cttaagggac tttaagaaaa actaccacat gtatgtgtat cctgtgcact1860
ggcagtttag tgaacttgac caacacccta tggatagagt cttgacacat tctgaacttg1920
ctcctctgcg agcatctctg gtgcccatgg aacactgcat aacccgtttc tttgaggagt1980
gtgaccccaa caaggataag cacatcaccc tgaaggagtg gggccactgc tttggaatta2040
aagaagagga catagatgaa aatctcttgt tttgaacgaa gattttaaag aactcaactt2100
tccagcatcc tcctctg 2117
<210>78
<211>664
<212>PRT
<213>人类
<400>78
Met Lys Thr Gly Leu Phe Phe Leu Cys Leu Leu Gly Thr Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ile Pro Thr Asn Ala Arg Leu Leu Ser Asp His Ser Lys Pro Thr Ala
20 25 30
Glu Thr Val Ala Pro Asp Asn Thr Ala Ile Pro Ser Leu Arg Ala Glu
35 40 45
Asp Glu Glu Asn Glu Lys Glu Thr Ala Val Ser Thr Glu Asp Asp Ser
50 55 60
His His Lys Ala Glu Lys Ser Ser Val Leu Lys Ser Lys Glu Glu Ser
65 70 75 80
His Glu Gln Ser Ala Glu Gln Gly Lys Ser Ser Ser Gln Glu Leu Gly
85 90 95
Leu Lys Asp Gln Glu Asp Ser Asp Gly Asp Leu Ser Val Asn Leu Glu
100 105 110
Tyr Ala Pro Thr Glu Gly Thr Leu Asp Ile Lys Glu Asp Met Ser Glu
115 120 125
Pro Gln Glu Lys Lys Leu Ser Glu Asn Thr Asp Phe Leu Ala Pro Gly
130 135 140
Val Ser Ser Phe Thr Asp Ser Asn Gln Gln Glu Ser Ile Thr Lys Arg
145 150 155 160
Glu Glu Asn Gln Glu Gln Pro Arg Asn Tyr Ser His His Gln Leu Asn
165 170 175
Arg Ser Ser Lys His Ser Gln Gly Leu Arg Asp Gln Gly Asn Gln Glu
180 185 190
Gln Asp Pro Asn Ile Ser Asn Gly Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Pro
195 200 205
Gly Glu Val Gly Thr His Asn Asp Asn Gln Glu Arg Lys Thr Glu Leu
210 215 220
Pro Arg Glu His Ala Asn Ser Lys Gln Glu Glu Asp Asn Thr Gln Ser
225 230 235 240
Asp Asp Ile Leu Glu Glu Ser Asp Gln Pro Thr Gln Val Ser Lys Met
245 250 255
Gln Glu Asp Glu Phe Asp Gln Gly Asn Gln Glu Gln Glu Asp Asn Ser
260 265 270
Asn Ala Glu Met Glu Glu Glu Asn Ala Ser Asn Val Asn Lys His Ile
275 280 285
Gln Glu Thr Glu Trp Gln Ser Gln Glu Gly Lys Thr Gly Leu Glu Ala
290 295 300
Ile Ser Asn His Lys Glu Thr Glu Glu Lys Thr Val Ser Glu Ala Leu
305 310 315 320
Leu Met Glu Pro Thr Asp Asp Gly Asn Thr Thr Pro Arg Asn His Gly
325 330 335
Val Asp Asp Asp Gly Asp Asp Asp Gly Asp Asp Gly Gly Thr Asp Gly
340 345 350
Pro Arg His Ser Ala Ser Asp Asp Tyr Phe Ile Pro Ser Gln Ala Phe
355 360 365
Leu Glu Ala Glu Arg Ala Gln Ser Ile Ala Tyr His Leu Lys Ile Glu
370 375 380
Glu Gln Arg Glu Lys Val His Glu Asn Glu Asn Ile Gly Thr Thr Glu
385 390 395 400
Pro Gly Glu His Gln Glu Ala Lys Lys Ala Glu Asn Ser Ser Asn Glu
405 410 415
Glu Glu Thr Ser Ser Glu Gly Asn Met Arg Val His Ala Val Asp Ser
420 425 430
Cys Met Ser Phe Gln Cys Lys Arg Gly His Ile Cys Lys Ala Asp Gln
435 440 445
Gln Gly Lys Pro His Cys Val Cys Gln Asp Pro Val Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Thr Lys Pro Leu Asp Gln Val Cys Gly Thr Asp Asn Gln Thr Tyr Ala
465 470 475 480
Ser Ser Cys His Leu Phe Ala Thr Lys Cys Arg Leu Glu Gly Thr Lys
485 490 495
Lys Gly His Gln Leu Gln Leu Asp Tyr Phe Gly Ala Cys Lys Ser Ile
500 505 510
Pro Thr Cys Thr Asp Phe Glu Val Ile Gln Phe Pro Leu Arg Met Arg
515 520 525
Asp Trp Leu Lys Asn Ile Leu Met Gln Leu Tyr Glu Ala Asn Ser Glu
530 535 540
His Ala Gly Tyr Leu Asn Glu Lys Gln Arg Asn Lys Val Lys Lys Ile
545 550 555 560
Tyr Leu Asp Glu Lys Arg Leu Leu Ala Gly Asp His Pro Ile Asp Leu
565 570 575
Leu Leu Arg Asp Phe Lys Lys Asn Tyr His Met Tyr Val Tyr Pro Val
580 585 590
His Trp Gln Phe Ser Glu Leu Asp Gln His Pro Met Asp Arg Val Leu
595 600 605
Thr His Ser Glu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Ser Leu Val Pro Met Glu
610 615 620
His Cys Ile Thr Arg Phe Phe Glu Glu Cys Asp Pro Asn Lys Asp Lys
625 630 635 640
His Ile Thr Leu Lys Glu Trp Gly His Cys Phe Gly Ile Lys Glu Glu
645 650 655
Asp Ile Asp Glu Asn Leu Leu Phe
660
<210>79
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG33的引物H-AP2
<400>79
aagcttcgac tgt13
<210>80
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG33的oligo-dT锚定引物
<400>80
aagctttttt ttttta 16
<210>81
<211>1349
<212>DNA
<213>人类
<400>81
agagggacta ggctgggtgt ggagctgcag cgtatccaca ggccccagga tgcaggccct 60
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ccccccggag gagggctccc ctgaccccga cagcacaggg gcgctggtgg aggaggagga180
tcctttcttc aaagtccccg tgaacaagct ggcagcggct gtctccaact tcggctatga240
cctgtaccgg gtgcgatcca gcatgagccc cacgaccaac gtgctcctgt ctcctctcag300
tgtggccacg gccctctcgg ccctctcgct gggagcggag cagcgaacag aatccatcat360
tcaccgggct ctctactatg acttgattag cagcccagac atccatggta cctataagga420
gctccttgac acggtcactg ccccccagaa gaacctcaag agtgcctccc ggatcgtctt480
tgagaagaag ctgcgcataa aatccagctt tgtggcacct ctggaaaagt catatgggac540
caggcccaga gtcctgacgg gcaaccctcg cttggacctg caagagatca acaactgggt600
gcaggcgcag atgaaaggga agctcgccag gtccacaaag gaaattcccg atgagatcag660
cattctcctt ctcggtgtgg cgcacttcaa ggggcagtgg gtaacaaagt ttgactccag720
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gtcggaccct aaggctgttt tacgctatgg cttggattca gatctcagct gcaagattgc840
ccagctgccc ttgaccggaa gcatgagtat catcttcttc ctgcccctga aagtgaccca900
gaatttgacc ttgatagagg agagcctcac ctccgagttc attcatgaca tagaccgaga960
actgaagacc gtgcaggcgg tcctcactgt ccccaagctg aagctgagtt atgaaggcga 1020
agtcaccaag tccctgcagg agatgaagct gcaatccttg tttgattcac cagactttag1080
caagatcaca ggcaaaccca tcaagctgac tcaggtggaa caccgggctg gctttgagtg1140
gaacgaggat ggggcgggaa ccacccccag cccagggctg cagcctgccc acctcacctt1200
cccgctggac tatcacctta accagccttt catcttcgta ctgagggaca cagacacagg1260
ggcccttctc ttcattggca agattctgga ccccaggggc ccctaatatc ccagtttaat1320
attccaatac cctagaagaa aacccgagg 1349
<210>82
<211>418
<212>PRT
<213>人类
<400>82
Met Gln Ala Leu Val Leu Leu Leu Cys Ile Gly Ala Leu Leu Gly His
1 5 10 15
Ser Ser Cys Gln Asn Pro Ala Ser Pro Pro Glu Glu Gly Ser Pro Asp
20 25 30
Pro Asp Ser Thr Gly Ala Leu Val Glu Glu Glu Asp Pro Phe Phe Lys
35 40 45
Val Pro Val Asn Lys Leu Ala Ala Ala Val Ser Asn Phe Gly Tyr Asp
50 55 60
Leu Tyr Arg Val Arg Ser Ser Met Ser Pro Thr Thr Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Ser Pro Leu Ser Val Ala Thr Ala Leu Ser Ala Leu Ser Leu Gly Ala
85 90 95
Glu Gln Arg Thr Glu Ser Ile Ile His Arg Ala Leu Tyr Tyr Asp Leu
100 105 110
Ile Ser Ser Pro Asp Ile His Gly Thr Tyr Lys Glu Leu Leu Asp Thr
115 120 125
Val Thr Ala Pro Gln Lys Asn Leu Lys Ser Ala Ser Arg Ile Val Phe
130 135 140
Glu Lys Lys Leu Arg Ile Lys Ser Ser Phe Val Ala Pro Leu Glu Lys
145 150155 160
Ser Tyr Gly Thr Arg Pro Arg Val Leu Thr Gly Asn Pro Arg Leu Asp
165 170 175
Leu Gln Glu Ile Asn Asn Trp Val Gln Ala Gln Met Lys Gly Lys Leu
180 185 190
Ala Arg Ser Thr Lys Glu Ile Pro Asp Glu Ile Ser Ile Leu Leu Leu
195 200 205
Gly Val Ala His Phe Lys Gly Gln Trp Val Thr Lys Phe Asp Ser Arg
210 215 220
Lys Thr Ser Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Asp Glu Glu Arg Thr Val Arg
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Asp Pro Lys Ala Val Leu Arg Tyr Gly Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Leu Ser Cys Lys Ile Ala Gln Leu Pro Leu Thr Gly Ser Met
260 265 270
Ser Ile Ile Phe Phe Leu Pro Leu Lys Val Thr Gln Asn Leu Thr Leu
275 280 285
Ile Glu Glu Ser Leu Thr Ser Glu Phe Ile His Asp Ile Asp Arg Glu
290 295 300
Leu Lys Thr Val Gln Ala Val Leu Thr Val Pro Lys Leu Lys Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Glu Gly Glu Val Thr Lys Ser Leu Gln Glu Met Lys Leu Gln Ser
325 330 335
Leu Phe Asp Ser Pro Asp Phe Ser Lys Ile Thr Gly Lys Pro Ile Lys
340 345 350
Leu Thr Gln Val Glu His Arg Ala Gly Phe Glu Trp Asn Glu Asp Gly
355 360 365
Ala Gly Thr Thr Pro Ser Pro Gly Leu Gln Pro Ala His Leu Thr Phe
370 375 380
Pro Leu Asp Tyr His Leu Asn Gln Pro Phe Ile Phe Val Leu Arg Asp
385 390 395 400
Thr Asp Thr Gly Ala Leu Leu Phe Ile Gly Lys Ile Leu Asp Pro Arg
405 410 415
Gly Pro
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG35的引物H-AP9
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aagcttcatt ccg13
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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aagctttttt tttttc 16
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<211>430
<212>DNA
<213>人类
<400>85
ggaagcactt accctccact tcctcctcct gtttggcttc tgtctcacct agacccgtcc 60
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tgaatacatt tcccaccttc aaatttgaag atcccaaatt tgaagtcatc gaaaaacccc420
aggcctgaag 430
<210>86
<211>108
<212>PRT
<213>人类
<400>86
Met Ile Leu Gln Arg Leu Phe Arg Phe Ser Ser Val Ile Arg Ser Ala
1 5 10 15
Val Ser Val His Leu Arg Arg Asn Ile Gly Val Thr Ala Val Ala Phe
20 25 30
Asn Lys Glu Leu Asp Pro Ile Gln Lys Leu Phe Val Asp Lys Ile Arg
35 40 45
Glu Tyr Lys Ser Lys Arg Gln Thr Ser Gly Gly Pro Val Asp Ala Ser
50 55 60
Ser Glu Tyr Gln Gln Glu Leu Glu Arg Glu Leu Phe Lys Leu Lys Gln
65 70 75 80
Met Phe Gly Asn Ala Asp Met Asn Thr Phe Pro Thr Phe Lys Phe Glu
85 90 95
Asp Pro Lys Phe Glu Val Ile Glu Lys Pro Gln Ala
100 105
<210>87
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG36的引物H-AP9
<400>87
aagcttcat ccg 13
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG36的oligo-dT锚定引物
<400>88
aagctttttt tttttg 16
<210>89
<211>2289
<212>DNA
<213>人类
<400>89
gcaatacatg gctactaagt ctttgatcat aagtcgaatt tatagacctg gaatttgcca 60
tcctagtctt tcctttttag taagacttct gtcctctggc agtgcatatg gtaggtctct120
aatgtttctg catctccagg aagatgcaga tccttatttt tgctgggaaa tccttctaaa180
tagaaatgta acatttttat aaaaacagat taatgtgttt ttcacttagt aaatgttttc240
aagagctgaa ttgagaagga aagagactgg agtggttaat ggtgatttga tttctggcat300
tctgagtttt ctgctacaat tagctgcatt acttggtgcc aaagagcagt ggggaattgt360
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tcacaagatg ttacaaaaat agtagagtgg ccttacccta gatccagttt tccccattta480
taacatttca cttagtccat tttcggaacc agaaaattaa cattggcata atgctattaa540
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gtcatgagca ataccctgcc tacactgctt ctaaattttc tgatttgttt ggctgtttgg 780
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ttctacgtga gtaggattag cactggggac aaaataagga gtttagagta aaccagtatt 960
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gttttatttg cctaaatagc cgttattaaa tggaataaca accacattag accaaattaa1140
ttgcaaacac agcggcaacc tggggagaag ttgaaactcc agttttgtgg attacagttt1200
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aaacaagcta tctagtttct cctgcagaca ccttgtcaac aacatgcaac agtgtcaggt1680
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acatgtcaag gaagaatttg cagagactca agggaagcac aatgggataa ggtaatcact1800
ttcagtgaaa aactgttttc ctgaaaacag gcttggacac aattgaaagc tggcttcctg1860
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tagacgttcc aaatagaata tgtaaaattt ctctgtatta gaaaaagaaa cgtgatacca2160
attgtatatt ttcttttctt tatttattct ctgtaagtct gtcagatgat aaattgtaaa2220
taacaatgat taaagagtca tgcttctgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa2280
aaaaaaaaa2289
<210>90
<211>69
<212>PRT
<213>人类
<400>90
Met Phe Ser Arg Ala Glu Leu Arg Arg Lys Glu Thr Gly Val Val Asn
1 5 10 15
Gly Asp Leu Ile Ser Gly Ile Leu Ser Phe Leu Leu Gln Leu Ala Ala
20 25 30
Leu Leu Gly Ala Lys Glu Gln Trp Gly Ile Val Glu Leu Leu Tyr Pro
35 40 45
Leu Lys Lys Asn Lys Lys Leu Val Ile Leu Lys Glu Leu Lys Ala His
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Lys Met Leu Gln Lys
65
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG20的引物H-AP32
<400>91
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG20的oligo-dT锚定引物
<400>92
aagctttttt ttttta 16
<210>93
<211>1087
<212>DNA
<213>人类
<400>93
cgtagcagct atgcagcttg aaatccaagt agcactaaat tttattattt cgtatttgta 60
caataagctt cccaggagac gtgtcaacat ttttggtgaa gaacttgaaa gacttcttaa120
gaagaaatat gaagggcact ggtatcctga aaagccatac aaaggatcgg ggtttagatg180
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taatgaaaat ggatgtgagt tggataagga gatcaaaaac agctttaacc cagaggccca420
ggtttttatg cccataagtg acccagcctc atcagtgtcc agctctccat cgcctccttt480
tggtcactct gctgctgtaa gccctacctt catgccccgg tccactcagc ctttaacctt540
taccactgcc acttttgctg ccaccaagtt cggctctacc aaaatgaaga atagtggccg600
tagcaacaag gttgcacgta cttctcccat caacctcggc ttgaatgtga atgacctctt660
gaagcagaaa gccatctctt cctcaatgca ctctctgtat gggcttggct tgggtagcca720
gcagcagcca cagcaacagc agcagccagc ccagccgcca ccgccaccac caccaccaca 780
gcagcaacaa cagcagaaaa cctctgctct ttctcctaat gccaaggaat ttatttttcc 840
taatatgcag ggtcaaggta gtagtaccaa tggaatgttc ccaggtgaca gcccccttaa 900
cctcagtcct ctccagtaca gtaatgcctt tgatgtgttt gcagcctatg gaggcctcaa 960
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cacgggc 1087
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<212>PRT
<213>人类
<400>94
Met Gln Leu Glu Ile Gln Val Ala Leu Asn Phe Ile Ile Ser Tyr Leu
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Tyr Asn Lys Leu Pro Arg Arg Arg Val Asn Ile Phe Gly Glu Glu Leu
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35 40 45
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65 70 75 80
Asp Val Arg Gly Asn Leu Pro Gln Asp Leu Ser Val Trp Val Asp Pro
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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260 265 270
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275 280 285
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325 330 335
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340 345
<210>95
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG49的引物H-AP10
<400>95
aagcttccac gta 13
<210>96
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG49的oligo-dT锚定引物
<400>96
aagctttttt ttttta 16
<210>97
<211>826
<212>DNA
<213>人类
<400>97
ggcgctgagt tttgtctccc cggccgtctg ggcgcgcgcg ggtgtcccag aatgaaatat 60
gactgaggac tctcagagaa actttcgttc agtatattat gagaaagtgg ggtttcgtgg120
agttgaagaa aagaaatcat tagaaattct cctaaaagat gaccgtctgg atactgagaa180
actttgtact tttagtcaga ggttccctct cccgtccatg taccgtgcat tggtatggaa240
ggtgcttcta ggaatcttgc ctccacacca cgagtcccat gccaaggtga tgatgtatcg300
taaggagcag tacttggatg tccttcatgc cctgaaagtc gttcgctttg ttagtgatgc360
cacacctcag gctgaagtct atctccgcat gtatcagctg gagtctggga agttacctcg420
aagtccctct tttccactgc caaaagcgtt tgaacaatac ttgaatctgg aagatggcag480
actgctgact catctgagga tgtgttccgc ggcgcccaaa cttccttatg atctctggtt540
caagaggtgc tttgcgggat gtttgcctga atccagttta cagagggttt gggataaagt600
tgtgagtgga tcctgtaaga tcctagtttt tgtagctgtc gaaattttat taacctttaa660
aataaaagtt atggcactga acagtgcaga gaagataaca aagtttctgg aaaatattcc720
ccaggacagc tcagacgcga tcgtgagcaa ggccattgac ttgtggcaca aacactgtgg780
gaccccggtc cattcaagct gaacgcaccc gctggttgtg gaccgt 826
<210>98
<211>247
<212>PRT
<213>人类
<400>98
Met Thr Glu Asp Ser Gln Arg Asn Phe Arg Ser Val Tyr Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Val Gly Phe Arg Gly Val Glu Glu Lys Lys Ser Leu Glu Ile Leu Leu
20 25 30
Lys Asp Asp Arg Leu Asp Thr Glu Lys Leu Cys Thr Phe Ser Gln Arg
35 40 45
Phe Pro Leu Pro Ser Met Tyr Arg Ala Leu Val Trp Lys Val Leu Leu
50 55 60
Gly Ile Leu Pro Pro His His Glu Ser His Ala Lys Val Met Met Tyr
65 70 75 80
Arg Lys Glu Gln Tyr Leu Asp Val Leu His Ala Leu Lys Val Val Arg
85 90 95
Phe Val Ser Asp Ala Thr Pro Gln Ala Glu Val Tyr Leu Arg Met Tyr
100 105 110
Gln Leu Glu Ser Gly Lys Leu Pro Arg Ser Pro Ser Phe Pro Leu Pro
115 120 125
Lys Ala Phe Glu Gln Tyr Leu Asn Leu Glu Asp Gly Arg Leu Leu Thr
130 135 140
His Leu Arg Met Cys Ser Ala Ala Pro Lys Leu Pro Tyr Asp Leu Trp
145 150 155 160
Phe Lys Arg Cys Phe Ala Gly Cys Leu Pro Glu Ser Ser Leu Gln Arg
165 170 175
Val Trp Asp Lys Val Val Ser Gly Ser Cys Lys Ile Leu Val Phe Val
180 185 190
Ala Val Glu Ile Leu Leu Thr Phe Lys Ile Lys Val Met Ala Leu Asn
195 200 205
Ser Ala Glu Lys Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Ile Pro Gln Asp Ser
210 215 220
Ser Asp Ala Ile Val Ser Lys Ala Ile Asp Leu Trp His Lys His Cys
225 230 235 240
Gly Thr Pro Val His Ser Ser
245
<210>99
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG51的引物H-AP22
<400>99
aagcttttga tcc 13
<210>100
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG51的oligo-dT锚定引物
<400>100
aagctttttt tttttg16
<210>101
<211>207
<212>DNA
<213>人类
<400>101
acgagactgc acggattgtt ttaagaaaat ggcagacaaa ccagacatgg gggaaatcgc 60
cagcttcgat aaggccaagc tgaagaaaac ggagacgcag gagaagaaca ccctgccgac120
caaagagacc attgagcagg agaagcggag tgaaatttcc taagatcctg gaggatttcc180
tacccccgtc ctcttcgaga ccccagt207
<210>102
<211>44
<212>PRT
<213>人类
<400>102
Met Ala Asp Lys Pro Asp Met Gly Glu Ile Ala Ser Phe Asp Lys Ala
1 5 10 15
Lys Leu Lys Lys Thr Glu Thr Gln Glu Lys Asn Thr Leu Pro Thr Lys
20 25 30
Glu Thr Ile Glu Gln Glu Lys Arg Ser Glu Ile Ser
35 40
<210>103
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG12的引物H-AP12
<400>103
aagcttgagt gct 13
<210>104
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG12的oligo-dT锚定引物
<400>104
aagctttttt tttttc 16
<210>105
<211>1527
<212>DNA
<213>人类
<400>105
agaatgctgg agcctttgcc ctgttgggac gctgcgaaag atctgaaaga acctcagtgc 60
cctcctgggg acagggtggg tgtgcagcct gggaactcca gggtttggca gggcaccatg120
gagaaagccg gtttggcttg gacgcgtggc acaggggtgc aatcagaggg gacttgggaa180
agccagcggc aggacagtga tgccctccca agtccggagc tgctacccca agatcaggac240
aagcctttcc tgaggaaggc ctgcagcccc agcaacatac ctgctgtcat cattacagac300
atgggcaccc aggaggatgg ggccttggag gagacgcagg gaagccctcg gggcaacctg360
cccctgagga aactgtcctc ttcctcggcc tcctccacgg gcttctcctc atcctacgaa420
gactcagagg aggacatctc cagtgaccct gagcgcaccc tggaccccaa ctcagccttc480
ctgcataccc tggaccagca gaaacccaga gtgagcaaat catggaggaa gataaaaaac540
atggtgcact ggtctccctt cgtcatgtcc ttcaagaaga agtacccctg gatccagctg600
gcaggacacg cagggagttt caaggcagct gccaatggca ggatcctgaa gaagcactgt660
gagtcagagc agcgctgcct ggaccggctg atggtggatg tgctgaggcc cttcgtacct720
gcctaccatg gggatgtggt gaaggacggg gagcgctaca accagatgga cgacctgctg780
gccgacttcg actcgccctg tgtgatggac tgcaagatgg gaatcaggac ctacctggag840
gaggagctca cgaaggcccg gaagaagccc agcctgcgga aggacatgta ccagaagatg900
atcgaggtgg accccgaggc ccccaccgag gaggaaaaag cacagcgggc tgtgaccaag 960
ccacggtaca tgcagtggcg ggagaccatc agctccacgg ccaccctggg gttcaggatc1020
gagggaatca agaaagaaga cggcaccgtg aaccgggact tcaagaagac caaaacgagg1080
gagcaggtca ccgaggcctt cagagagttc actaaaggaa accataacat cctgatcgcc1140
tatcgggacc ggctgaaggc cattcgaacc actctagaag tttctccctt cttcaagtgc1200
cacgaggtca ttggcagctc cctcctcttc atccacgaca agaaggaaca ggccaaagtg1260
tggatgatcg actttgggaa aaccacgccc ctgcctgagg gccagaccct gcagcatgac1320
gtcccctggc aggaggggaa ccgggaggat ggctacctct cggggctcaa taacctcgtc1380
gacatcctga ccgagatgtc ccaggatgcc ccactcgcct gagctgccca cgccctccct1440
ggcccccgcc tgggcctcct ttcctcctcc tgtgcttcct ttctcgttcc taacttttcc1500
ttcacttaca cctgactgac cctcctg1527
<210>106
<211>472
<212>PRT
<213>人类
<400>106
Met Leu Glu Pro Leu Pro Cys Trp Asp Ala Ala Lys Asp Leu Lys Glu
1 5 10 15
Pro Gln Cys Pro Pro Gly Asp Arg Val Gly Val Gln Pro Gly Asn Ser
20 25 30
Arg Val Trp Gln Gly Thr Met Glu Lys Ala Gly Leu Ala Trp Thr Arg
35 40 45
Gly Thr Gly Val Gln Ser Glu Gly Thr Trp Glu Ser Gln Arg Gln Asp
50 55 60
Ser Asp Ala Leu Pro Ser Pro Glu Leu Leu Pro Gln Asp Gln Asp Lys
65 70 75 80
Pro Phe Leu Arg Lys Ala Cys Ser Pro Ser Asn Ile Pro Ala Val Ile
85 90 95
Ile Thr Asp Met Gly Thr Gln Glu Asp Gly Ala Leu Glu Glu Thr Gln
100 105 110
Gly Ser Pro Arg Gly Asn Leu Pro Leu Arg Lys Leu Ser Ser Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Ser Thr Gly Phe Ser Ser Ser Tyr Glu Asp Ser Glu Glu Asp
130 135 140
Ile Ser Ser Asp Pro Glu Arg Thr Leu Asp Pro Asn Ser Ala Phe Leu
145 150 155 160
His Thr Leu Asp Gln Gln Lys Pro Arg Val Ser Lys Ser Trp Arg Lys
165 170 175
Ile Lys Asn Met Val His Trp Ser Pro Phe Val Met Ser Phe Lys Lys
180 185 190
Lys Tyr Pro Trp Ile Gln Leu Ala Gly His Ala Gly Ser Phe Lys Ala
195 200 205
Ala Ala Asn Gly Arg Ile Leu Lys Lys His Cys Glu Ser Glu Gln Arg
210 215 220
Cys Leu Asp Arg Leu Met Val Asp Val Leu Arg Pro Phe Val Pro Ala
225 230 235 240
Tyr His Gly Asp Val Val Lys Asp Gly Glu Arg Tyr Asn Gln Met Asp
245 250 255
Asp Leu Leu Ala Asp Phe Asp Ser Pro Cys Val Met Asp Cys Lys Met
260 265 270
Gly Ile Arg Thr Tyr Leu Glu Glu Glu Leu Thr Lys Ala Arg Lys Lys
275 280 285
Pro Ser Leu Arg Lys Asp Met Tyr Gln Lys Met Ile Glu Val Asp Pro
290 295 300
Glu Ala Pro Thr Glu Glu Glu Lys Ala Gln Arg Ala Val Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Tyr Met Gln Trp Arg Glu Thr Ile Ser Ser Thr Ala Thr Leu Gly
325 330 335
Phe Arg Ile Glu Gly Ile Lys Lys Glu Asp Gly Thr Val Asn Arg Asp
340 345 350
Phe Lys Lys Thr Lys Thr Arg Glu Gln Val Thr Glu Ala Phe Arg Glu
355 360 365
Phe Thr Lys Gly Asn His Asn Ile Leu Ile Ala Tyr Arg Asp Arg Leu
370 375 380
Lys Ala Ile Arg Thr Thr Leu Glu Val Ser Pro Phe Phe Lys Cys His
385 390 395 400
Glu Val Ile Gly Ser Ser Leu Leu Phe Ile His Asp Lys Lys Glu Gln
405 410 415
Ala Lys Val Trp Met Ile Asp Phe Gly Lys Thr Thr Pro Leu Pro Glu
420 425 430
Gly Gln Thr Leu Gln His Asp Val Pro Trp Gln Glu Gly Asn Arg Glu
435 440 445
Asp Gly Tyr Leu Ser Gly Leu Asn Asn Leu Val Asp Ile Leu Thr Glu
450 455 460
Met Ser Gln Asp Ala Pro Leu Ala
465 470
<210>107
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG37的引物H-AP10
<400>107
aagcttccac gta 13
<210>108
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG37的oligo-dT锚定引物
<400>108
aagctttttt tttttg 16
<210>109
<211>415
<212>DNA
<213>人类
<400>109
gcagcccgac tagcagtcta gaggcctgag gcttctgggt cctggtgacg gggctggcat 60
gaccccgggg gtcgtccatg ccagtccgcc tcagtcgcag agggtccctc ggcaagcgcc120
ctgtgagtgg gccattcgga acattggaca gaagcccaaa gagccaaatt gtcacaattg180
tggaacccac attggcctga gatccaaaac gcttcgaggc accccaaatt acctgcccat240
tcgtcaggac acccacccac ccagtgttat attctgcctc gccggagtgg gtgttcccgg300
gggcacttgc cgaccagccc cttgcgtccc caggtttgca gctctcccct gggccactaa360
ccatcctggc ccgggctgcc tgtctgacct ccgtgcctag tcgtggctct ccatc 415
<210>110
<211>113
<212>PRT
<213>人类
<400>110
Met Thr Pro Gly Val Val His Ala Ser Pro Pro Gln Ser Gln Arg Val
1 5 10 15
Pro Arg Gln Ala Pro Cys Glu Trp Ala Ile Arg Asn Ile Gly Gln Lys
20 25 30
Pro Lys Glu Pro Asn Cys His Asn Cys Gly Thr His Ile Gly Leu Arg
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Arg Gly Thr Pro Asn Tyr Leu Pro Ile Arg Gln Asp
50 55 60
Thr His Pro Pro Ser Val Ile Phe Cys Leu Ala Gly Val Gly Val Pro
65 70 75 80
Gly Gly Thr Cys Arg Pro Ala Pro Cys Val Pro Arg Phe Ala Ala Leu
85 90 95
Pro Trp Ala Thr Asn His Pro Gly Pro Gly Cys Leu Ser Asp Leu Arg
100 105 110
Ala
<210>111
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG44的引物H-AP12
<400>111
aagcttgagt gct 13
<210>112
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG44的oligo-dT锚定引物
<400>112
aagctttttt tttttg 16
<210>113
<211>723
<212>DNA
<213>人类
<400>113
cgggagaacg ataatgcaaa gtgctatgtt cttggctgtt caacacgact gcagacccat 60
ggacaagagc gcaggcagtg gccacaagag cgaggagaag cgagaaaaga tgaaacggac120
ccttttaaaa gattggaaga cccgtttgag ctacttctta caaaattcct ctactcctgg180
gaagcccaaa accggcaaaa aaagcaaaca gcaagctttc atcaagcctt ctcctgagga240
agcacagctg tggtcagaag catttgacga gctgctagcc agcaaatatg gtcttgctgc300
attcagggct tttttaaagt cggaattctg tgaagaaaat attgaattct ggctggcctg360
tgaagacttc aaaaaaacca aatcacccca aaagctgtcc tcaaaagcaa ggaaaatata420
tactgacttc atagaaaagg aagctccaaa agagataaac atagattttc aaaccaaaac480
tctgattgcc cagaatatac aagaagctac aagtggctgc tttacaactg cccagaaaag540
ggtatacagc ttgatggaga acaactctta tcctcgtttc ttggagtcag aattctacca600
ggacttgtgt aaaaagccac aaatcaccac agagcctcat gctacatgaa atgtaaaagg660
gagcccagaa atggaggaca tttcattctt tttcctgagg ggaaggactg tgacctgcca720
taa 723
<210>114
<211>211
<212>PRT
<213>人类
<400>114
Met Gln Ser Ala Met Phe Leu Ala Val Gln His Asp Cys Arg Pro Met
1 5 10 15
Asp Lys Ser Ala Gly Ser Gly His Lys Ser Glu Glu Lys Arg Glu Lys
20 25 30
Met Lys Arg Thr Leu Leu Lys Asp Trp Lys Thr Arg Leu Ser Tyr Phe
35 40 45
Leu Gln Asn Ser Ser Thr Pro Gly Lys Pro Lys Thr Gly Lys Lys Ser
50 55 60
Lys Gln Gln Ala Phe Ile Lys Pro Ser Pro Glu Glu Ala Gln Leu Trp
65 70 75 80
Ser Glu Ala Phe Asp Glu Leu Leu Ala Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Ala
85 90 95
Phe Arg Ala Phe Leu Lys Ser Glu Phe Cys Glu Glu Asn Ile Glu Phe
100 105 110
Trp Leu Ala Cys Glu Asp Phe Lys Lys Thr Lys Ser Pro Gln Lys Leu
115 120 125
Ser Ser Lys Ala Arg Lys Ile Tyr Thr Asp Phe Ile Glu Lys Glu Ala
130 135 140
Pro Lys Glu Ile Asn Ile Asp Phe Gln Thr Lys Thr Leu Ile Ala Gln
145 150 155 160
Asn Ile Gln Glu Ala Thr Ser Gly Cys Phe Thr Thr Ala Gln Lys Arg
165 170 175
Val Tyr Ser Leu Met Glu Asn Asn Ser Tyr Pro Arg Phe Leu Glu Ser
180 185 190
Glu Phe Tyr Gln Asp Leu Cys Lys Lys Pro Gln Ile Thr Thr Glu Pro
195 200 205
His Ala Thr
210
<210>115
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG31的引物H-AP4
<400>115
aagcttctca acg 13
<210>116
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG31的oligo-dT锚定引物
<400>116
aagctttttt ttttta 1权利要求
1.一种人抑癌蛋白，其具有选自由SEQ ID NO2、SEQ ID NO6、SEQID NO10、SEQ ID NO14、SEQ ID NO18、SEQ ID NO22、SEQ ID NO26、SEQ ID NO30、SEQ ID NO34、SEQ ID NO38、SEQ ID NO42、SEQ ID NO46、SEQ ID NO50、SEQ ID NO54、SEQ ID NO58、SEQ ID NO62、SEQID NO66、SEQ ID NO70、SEQ ID NO74、SEQ ID NO78、SEQ ID NO82、SEQ ID NO86、SEQ ID NO90、SEQ ID NO94、SEQ ID NO98、SEQ ID NO102、SEQ ID NO106、SEQ ID NO110和SEQ ID NO114组成的组中的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的人抑癌蛋白，其中，所述癌症为选自由正常乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血组成的组中的组织的癌症。
3.一种编码权利要求1中所述的原癌蛋白的人抑癌基因，所述人抑癌基因由选自由SEQ ID NO1、SEQ ID NO5、SEQ ID NO9、SEQ ID NO13、SEQ ID NO17、SEQ ID NO21、SEQ ID NO25、SEQ ID NO29、SEQ ID NO33、SEQ ID NO37、SEQ ID NO41、SEQ ID NO45、SEQ ID NO49、SEQID NO53、SEQ ID NO57、SEQ ID NO61、SEQ ID NO65、SEQ ID NO69、SEQ ID NO73、SEQ ID NO77、SEQ ID NO81、SEQ ID NO85、SEQ ID NO89、SEQ ID NO93、SEQ ID NO97、SEQ ID NO101、SEQ ID NO105、SEQ ID NO109和SEQ ID NO113组成的组中的DNA序列表示。
4.根据权利要求3所述的人抑癌基因，其中，所述癌症为选自由正常乳腺、脑、心脏、肌肉、大肠、胸腺、脾、肾、肝、小肠、胎盘、肺和外周血组成的组中的组织的癌症。
全文摘要
本发明公开了人抑癌基因、由其编码的蛋白质、包含该基因的表达载体以及用该载体转化的微生物。本发明的抑癌基因可以有效地用于诊断、预防和治疗人类癌症。
文档编号C07K14/47GK101184774SQ200680018897
公开日2008年5月21日 申请日期2006年3月30日 优先权日2005年3月30日
发明者金弦起, 金振宇 申请人:金弦起