具有抗病毒活性的化合物的利记博彩app

专利名称：：具有抗病毒活性的化合物的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及具有抗病毒等活性的新化合物或其立体异构体，这些化合物或其立体异构体的制备方法，含有这些化合物或其立体异构体作为必需的活性成分的药物组合物，以及这些化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预防病毒性感染和肝脏疾病的药物中的应用，属于医药
技术领域：
。2
背景技术：
：病毒感染引起多种疾病，严重危害人类的健康和生命。据不完全统计，约60%的流行性传染病由病毒引起。已发现对人有致病性的病毒达1200多种，其中发病率最高、危害性最大的是20世纪80年代发现的人类免疫缺陷病毒(HIV)所致的艾滋病(AIDS)和乙型肝炎病毒(HBV)引起的慢性乙型肝炎(CHB)。自20世纪80年代初发现首例AIDS病例以来，AIDS横行全球，严重威胁人类的健康和生存，至2003年底全球有4000多万人患有AIDS或者属病毒携带者，约300万人由于AIDS死亡。AIDS已经成为人类的第四大死亡原因。我国卫生部2003年公布中国HIV感染者84万，AIDS患者8万，死亡近20万人。我国HIV病毒感染者正以30%40%的速度递增，AIDS已成为我国重点控制的重大疾病之一。据世界卫生组织统计，2000年全球约有3.5亿人为慢性肝炎患者或乙型肝炎病毒(HBV)携带者，每年有100多万人死于和肝炎、肝硬化、肝癌有关的疾病。我国是病毒性肝炎的高发区，HBV携带者有1.2亿人，占世界HBV感染人数的1/3，其中慢性乙型肝炎病人约为3000万，约10%20%可发展为肝硬化，1%5%可演变为肝癌。目前a-干扰素和拉米夫定为国际公认的疗效较好的抗乙肝病毒的药物，但有半数以上的患者经治疗后长期不愈，免疫调节药物亦难以清除病毒，致使病毒在肝细胞内长期复制活动，肝组织持续损害，肝功能持续异常。因此保护肝细胞，改善肝功能是治疗慢性乙型肝炎(CHB)重要的必不可少的一个方面。3
发明内容HIV所致的艾滋病和HBV所致的慢性乙型肝炎已经成为严重危害人类的健康和生命的疾病，为了提高AIDS和CHB患者的生存质量，有效的治疗AIDS和CHB，我们的药物研究人员进行了许多探索，致力于寻找新的抗病毒药物。我们研究合成了大量新化合物，通过药理实验研究筛选发现，本发明的新化合物具有显著的抗病毒活性。本发明的技术方案如下本发明提供了如式(I)所示的化合物或其立体异构体<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(I)其中X为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、2,6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基嘌呤-9-基或其l-去氮杂、3-去氮杂或8-氮杂类似物，或者为胞嘧啶-l-基、尿嘧啶-l-基、胸腺嘧啶-l-基或其3-去氮杂类似物；W为H、F、Cl、Br或I;W为H,或者13分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基、鼠李糖基、核糖基、脱氧核糖基、乳糖基、半乳糖基、半乳糖醛酸基、麦芽糖基、甘露糖基、木糖基；R3、R4、RS各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的CL6的直链或支链的垸基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、l-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、l-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；其中，所述的取代基可以为羟基，氨基，硝基，氟，氯，溴，碘，Cw的直链或支链的垸基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、l-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、l-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基，C6-u)的芳基，选自苯基、a-萘基或P-萘基，cm直链或支链的垸基酰氨基，选自甲酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基，Cm直链或支链的垸氧基羰基，选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基；W取代或未被取代的cl6的直链或支链的烷基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、l-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、l-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；其中，所述的取代基可以为羟基，氨基，硝基，卤素，选自氟、氯、溴、碘，Cm的直链或支链的垸基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基。优选的化合物为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基嘌呤-9-基、胞嘧啶-l-基、尿嘧啶-l-基或胸腺嘧啶-l-基；R1为H、F、Cl或Br;W为H，或者13分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基、鼠李糖基；R3、R4、RS各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的Cw的直链或支链的烷基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、乙烯基、1-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；所述的取代基同上所述；W为取代或未被取代的cm的直链或支链的烷基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基；所述的取代基同上所述。进一步优选的化合物为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、胞嘧啶-l-基、尿嘧啶-l-基或胸腺嘧啶-l-基；R!为H、F或C1;W为H，或者13分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基；R3、R4、RS各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的d.3的直链或支链的烷基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、羟甲基、羟乙基、羟丙基；所述的取代基同上所述；RS为取代或未被取代的CM的直链或支链的烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基；所述的取代基同上所述。更进一步优选的化合物为〉C=0〉CH2X为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>;Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基或胞嘧啶-1-基；W为H、F或C1;W为H，-p-D-葡萄糖基、-ct-D-葡萄糖基或-p-D-葡萄糖醛酸基-a-D-葡萄糖醛酸基；W为甲基或羟甲基；R"为甲基或羟甲基；RS为甲基、羟基或羟甲基；W为甲基、乙基、丙基或异丙基。最优选的化合物为X为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>;Y为鸟嘌呤-9-基；R!为H;W为H或-P-D-葡萄糖醛酸基-a-D-葡萄糖醒酸基；113为甲基；114为甲基；RS为甲基；W为乙基或异丙基。艮P:2-(腺嘌呤-9-萄乙基3P-羟基-ll-氧代-18p,20p-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物A)，结构式如下所示NH2-(腺嘌呤-9-基)丙基3卩-羟基-ll-氧代-18p,20p-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物B)，结构式如下所示NH.2-(腺嘌呤-9-基)乙基3-(|3基-2-0+0-葡萄吡喃糖苷醛酸基-01-0-葡萄吡喃糖苷醛酸)-11-氧代-l眼20P-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物C)，结构式如下所示NH.OH2-(腺嘌呤-9-基)丙基3-((3基-2-0-卩-0-葡萄吡喃糖苷醛酸基-0[-0-葡萄吡喃糖苷醛酸)-11-氧代-18(3，20p-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物D)，结构式如下所示OH2-(腺嘌呤-9-基)乙基3p-羟基-18(3,20p-齐墩果垸-12-烯酸酯(以下简称化合物E)，结<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>式如下所示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>2-(腺嘌呤-9-基)丙基3p-羟基-l邓，20p-齐墩果垸-12-烯酸酯(以下简称化合物F)，结构式如下所示2-(腺嘌呤-9-基)乙基3-((3基-2-0-卩-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-a-D-葡萄吡喃糖苷醛酸)-18p，20P-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物G)，结构式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>2-(腺嘌呤-9-基)丙基3-(p基-2-0-P-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-a-D-葡萄吡喃糖苷醛酸)-18卩，20卩-齐墩果烷-12-烯酸酯(以下简称化合物H)，结构式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>上述化合物的结构中含有多个手性碳，手性碳上的基团可以为a或(3构型，所以可以有多种立体异构体，尤其是其18位的a-H可以变为p-H，如式(II)所示，其中X、Y、R1、R2、R3、R4、R5、W的含义同上所述。O本发明化合物可以通过下列工艺制备，但不仅限于下列工艺于干燥反应瓶中，加入乙腈、结构式(III)所示化合物或其异构体(其中X、R1、R2、R3、R4、RS的含义同上所述)，然后加入二甲氨基吡啶(DMAP)，搅拌溶解后，加入二环己基碳二亚胺(DCC),升温搅拌，然后缓慢加入结构式(IV)所示化合物(其中Y、W的含义同上所述)，滴加完毕续搅拌反应，过滤除掉生成的二环己基脲，回收溶剂，剩余物加入适量冰水后用乙酸乙酯提取，有机层干燥，回收溶剂，无水乙醇重结晶，得本发明化合物或其异构体。O本发明进一步要求保护上述化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预防病毒性感染的药物中的应用。本发明化合物或其立体异构体具有显著的抗病毒活性。药理实验表明，本发明化合物对鸭DHBV病毒具有显著抑制作用，并且停药后无明显的反跳现象；小鼠给药本发明化合物后5%血清在MT-4细胞内培养对HIV-1IIIBP24抗原有显著抑制作用。实验结果表<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>明，本发明化合物对HBV和HIV均有显著抑制作用，具有显著的抗病毒活性。本发明进一步要求保护上述化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预防肝脏疾病的药物中的应用。本发明化合物或其立体异构体具有显著的保肝活性。药理实验表明，本发明化合物可以显著降低四氯化碳致急性肝损伤后小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平，并减轻肝组织损伤，对CCU中毒小鼠肝损伤具有显著保护作用；本发明化合物可以显著降低四氯化碳致慢性肝损伤大鼠血清中的ALT、AST和透明质酸(HA)的水平，显著降低肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量，降低肝脏病变程度，可显著改善肝功能，减轻肝纤维化。实验结果表明，本发明化合物对急性和慢性肝损伤有显著保护作用。本发明还进一步要求保护包括上述化合物或其立体异构体作为必需的活性成分与药学上可接受的载体的药物组合物，为临床上或药学上可接受的任一剂型；可以肠胃外、口服、经皮给药等方式施用于需要这种治疗的患者，优选为口服制剂或注射剂。上述药物组合物中含有生理有效量的本发明的任化合物或其立体异构体(以本发明化合物或其立体异构体计)2mg2g，例如可以是2mg、5mg、6mg、7.5mg、10mg、12mg、13mg、15mg、20mg、23mg、25mg、28mg、30mg、35mg、37mg、40mg、45mg、47mg、50mg、55mg、57mg、60mg、70mg、80mg、85mg、90mg、95mg、騰mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、l卯mg、0.2g、0.235g、0.25g、0.3g、0.33g、0.35g、0.4g、0.45g、0.47g、0.5g、0.52g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、lg、2g等。用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有lml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、lOOml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，可选用水性溶剂或非水性溶剂。最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9%氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。用于口服时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂，可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括干混悬剂或浓混悬液。糖桨剂系指含有药物的浓蔗糖水溶液。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二垸基硫酸钠、微粉硅胶等。本发明化合物或其立体异构体与现有技术相比，具有以下优点(1)首次提供了具有显著抗病毒等活性的新化合物，尤其是2-(腺嘌呤-9-基)乙基3p-羟基-ll-氧代-l邓，20p-齐墩果烷-12-烯酸酯、2-(腺嘌呤-9-基)丙基邓-羟基-ll-氧代-18p，20p-齐墩果烷-12-烯酸酯、2-(腺嘌呤-9-基)乙基3p-羟基-18卩,20p-齐墩果垸-12-烯酸酯、2-(腺嘌呤-9-基)丙基3p-羟基-l眼20P-齐墩果烷-12-烯酸酯，丰富了临床用药品种。(2)药理实验表明，本发明化合物对鸭DHBV病毒具有显著抑制作用，且停药后无明显的反跳现象，小鼠给药本发明化合物后5%血清在MT-4细胞内培养对HIV-1IIIBP24抗原有显著抑制作用，有显著的抗病毒作用。(3)药理实验表明，本发明化合物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤和大鼠慢性肝损伤均有显著保护作用，有显著抗急性和慢性肝损伤的作用。(4)本发明化合物具有显著的抗HBV和HIV活性，并且具有显著的保肝活性，具有很好的临床应用价值。以下通过实验例来进一步阐述本发明化合物的有益效果。本发明化合物具有下列有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。以下实验例中用化合物A代替2-(腺嘌呤-9-基)乙基3P-羟基-ll-氧代-l邓，20P-齐墩果烷-12-烯酸酯，化合物B代替2-(腺嘌呤-9-基)丙基邓-羟基-ll-氧代-18p,20(3-齐墩果烷-12-烯酸酯，化合物E代替2-(腺嘌呤-9-基)乙基3卩-羟基-18卩，20P-齐墩果烷-12-烯酸酯，化合物F代替2-(腺嘌呤-9-基)丙基3(3-羟基-l眼20p-齐墩果垸-12-烯酸酯。实验例1本发明化合物抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用受试动物1日龄北京鸭，雌雄兼用。供试品生理盐水市购；化合物A胶囊13mg;化合物B胶囊13mg;化合物E胶囊13mg;化合物F胶囊13mg。给药剂量见表l,模型组给予氯化钠注射液。实验方法1日龄北京鸭腹腔注射DHBV-DNA阳性病毒血清，每只0.1ml，接种1周后，分别颈外静脉抽血，经斑点杂交检测筛选出感染阳性鸭，饲养至2周龄作为实验动物。将感染成功的阳性鸭50只，随机分为5组，每组10只，分别为模型组和各给药组。感染后第13天开始，模型组每日灌胃给予生理盐水20ml/kg，各给药组按表1所示剂量用生理盐水稀释至所需浓度灌胃给药20ml/kg，每日l次，连续10天，停药观察3天。分别于给药前、给药5天、给药IO天、停药3天颈外静脉抽血，分离血清于-20'C保存待检。采用斑点杂交法测定血清DHBV-DNA的变化，斑点值为volume(volume=intensityxmm2)。实验结果见表l。模型组给予生理盐水后鸭血清DHBV-DNA滴度无明显降低，化合物A、化合物B、化合物E、化合物F各给药组给药5天、10天鸭血清DHBVE)NA滴度均极显著降低(pO.Ol)，停药3天后各组DHBV-DNA水平无明显升高。表l给药本发明化合物前后鸭血清DHBV-DNA水平的比较(又士S，n=10)组别给药剂量给药前DHBV-DNA(volume)给药5天给药10天停药3天模型组20ml/kg321.2±68.7332.9±78.2354.7±82.5376.3±60.5化合物A组20mg/kg332.4±82.5261.6士76.4**234.2±62.3**257.4土59.8"化合物B组20mg/kg334.8±72.2275.2±68.3**247.6±70.2**272.7±62.3**化合物E组20mg/kg322.3±77.6250.4±78.3**223.2±64.7**246.5±62.7**化合物F组20mg/kg317.3±69.3266.5±69.6**243.7±65.1**267.3±63.5**与给药前相比较:**p<0.01。用DHBV感染鸭作为乙型肝炎动物模型来研究人类乙型肝炎发病机理、病毒复制过程及筛选有效的治疗药物，已为国内外学者所公认。13日龄雏鸭感染DHBV可维持长期病毒血症而无明显的自然转阴现象，我们应用1日龄雏鸭经腹腔感染DHBV的方法来建立鸭乙型肝炎动物模型进行本发明化合物抗乙肝病毒疗效的研究。实验结果表明，本发明化合物对鸭DHBV病毒具有显著抑制作用，并且停药后无明显的反跳现象，表明本发明化合物对病毒性肝炎有显著疗效。实验例2本发明化合物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用受试动物健康小鼠，60只，体重2025g，雌雄兼用，随机分为6组，每组10只。供试品氯化钠注射液250ml:2.25g,山东长富洁晶药业有限公司；化合物A注射液5ml:110mg;化合物B注射液5ml:110mg;化合物E注射液5ml:110mg;化合物F注射液5ml:110mg。给药剂量见表2，正常对照组及模型组给予氯化钠注射液。实验方法小鼠按体重随机分为正常对照组、模型组和各给药组，每组10只。正常对照组和模型组腹腔注射氯化钠注射液20ml/kg，各给药组按表2所示剂量用氯化钠注射液稀释至所需浓度腹腔注射给药20ml/kg，每日1次，连续7天。最后一次给药2h后，正常对照组腹腔注射橄榄油10ml/kg，其余各组均腹腔注射0.1%四氯化碳(CCU)橄榄油溶液10ml/kg。20h后断头处死动物，取血清，测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。断头取血后，肝组织作常规病理组织学检査。实验结果见表2。与正常对照组相比较，模型组小鼠血清ALT和AST水平急剧升高(pO.Ol)，病理组织学检査发现肝组织明显受损，并出现坏死，说明造模成功。与模型组相比较，化合物A、化合物B、化合物E、化合物F各给药组小鼠血清ALT和AST水平均极显著降低(pO.Ol)，且肝组织损伤显著减轻。表2本发明化合物对CCl4肝损伤小鼠血清ALT和AST水平的影响(5i土S，n=10)组别给药剂量ALT(U/L)AST(U/L)正常对照组20ml/kg156.43±14.21147.2±13.4模型组20ml/kg482.5±68.6##345.3±60.5##化合物A组16mg/kg242.6±31.4**201.4土20.6**化合物B组16mg/kg253.7±30.6**213.8±21.5**化合物E组16mg/kg243.8±32.5**202.3±21.7**化合物F组_16mg/kg_252.4土27.6**_211.7士19.6"与正常对照组相比较##p<0.01;与模型组相比较**p<0.01。结论四氯化碳进入机体后主要在肝微粒体中发生脂质过氧化反应，引起肝细胞膜结构和功能的损害，使细胞内ALT、AST溢出，导致血中ALT、AST活性升高。肝损害区域越大，ALT、AST活性越高。研究结果表明，本发明化合物可显著降低小鼠血清中的ALT和AST水平，减轻肝组织损伤，对CCU中毒小鼠肝损伤有显著保护作用，有显著抗急性肝损伤作用。实验例3本发明化合物对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的作用受试动物健康大鼠，60只，体重200220g，雌雄兼用，随机分为6组，每组10只。供试品生理盐水市购；化合物A胶囊110mg;化合物B胶囊110mg;化合物E胶囊110mg;化合物F胶囊110mg。给药剂量见表3,正常对照组及模型组给予生理盐水。实验方法大鼠按体重随机分为正常对照组、模型组和各给药组，每组10只。除正常对照组外，所有动物腹部皮下注射25。/。CCl4橄榄油液2ml/kg，正常对照组注射等量橄榄油，每周2次，连续13周。各组于给CCU第5周起给药，正常对照组和模型组灌胃组予生理盐水20ml/kg，各给药组按表3所示剂量用生理盐水稀释至所需浓度灌胃给药20ml/kg，每天1次，连续至第13周。末次给药24h后，处死动物，取血分离血清测定血清ALT、AST、透明质酸(hyaluronicacid，HA)含量，分离肝左叶组织测定羟脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)含量及病理切片观察。实验结果(1)对血清ALT和AST水平的影响结果见表3。与正常对照组相比较，模型组大鼠血清转氨酶水平均极显著升高(p<0.01)，ALT水平约为正常对照组的60倍，AST水平约为正常对照组的29倍。与模型组相比较，化合物A、化合物B、化合物E、化合物F各给药组大鼠血清中ALT和AST水平均极显著降低(p<0.01)。(2)对血清HA和肝组织Hyp含量的影响结果见表3。与正常对照组相比较，模型组大鼠血清HA含量极显著升高(pO.Ol);Hyp含量极显著增加(p<0.01)，约为正常对照组的6倍。与模型组相比较，化合物A、化合物B、化合物E、化合物F各给药组大鼠血清中HA含量均显著降低(p<0.05);Hyp含量均极显著降低(p<0.01)，约为正常对照组的22.5倍。表3本发明化合物对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响(又士S，n-lO)组别给药剂量ALT(U/L)AST(U/L)HA(ng/L)Hyp(mmol/kg)正常对照组20ml/kg83±17.2285.7±38.7643.5±74.32.1±0.9模型组20ml/kg4975±1762##8348±2152##1458±121##11.9±2.3##化合物A组11mg/kg2543±1128**4256±1762**1128±132*5.2±1.7**化合物B组11mg/kg2568±1221**4304±1543**1234±145*5.7±1.5**化合物E组11mg/kg2546±1205**4265±1587**1144±139*5.1±2.1**化合物F组11mg/kg2554±1163**4311±1720**1223±127*5.8士2.2**与正常对照组相比较><0.01;与模型组相比较*p<0.01，**p<0.01。(3)对肝组织病理变化的影响正常对照组大鼠肝组织结构完整清晰，肝小叶规则，肝细胞形态排列正常，在中央经脉周围放射状分布。模型组大鼠肝小叶内桥型坏死范围广并累及多个小叶呈多小叶坏死，纤维分隔形成伴小叶结构紊乱，形成早期肝硬化或肝硬化，多数大鼠出现严重皮脂囊肿。化合物A、化合物B、化合物E、化合物F各给药组大鼠肝小叶内肝细胞变性、出现坏死，少数伴有桥型坏死，部分大鼠肝组织汇管区周围轻度碎屑坏死，小叶内肝细胞变性，点、灶状坏死，可见嗜酸小体，汇管区周围纤维化，纤维分隔形成，但小叶结构保留，部分大鼠肝组织为分隔伴小叶结构紊乱，而无肝硬化，未见皮脂囊肿。结论本实验以CCU引起慢性肝损伤，模型组大鼠肝组织呈早期肝硬化或肝硬化，多数大鼠形成严重的皮脂囊肿。而本发明化合物治疗组大鼠无一例出现皮脂囊肿，提示本发明化合物具有很强抗脂肪变性、防止肝细胞坏死的作用。实验表明，本发明化合物可使肝组织损伤显著减轻，生化学上则反映为ALT、AST活力降低，Hyp含量降低。HA是反映肝细胞功能及肝纤维化进程的实用指标，其升高幅度与肝纤维化改变成正相关。模型组大鼠血清HA含量显著升高，而本发明化合物均能抑制血清HA的升高，表明本发明化合物具有改善肝功能，减轻肝纤维化的作用。综上所述，本发明化合物具有显著的抗肝纤维化作用，对慢性肝损伤具有显著治疗作用。实验例4本发明化合物抗HIV的活性供试品生理盐水市购；化合物A胶囊150mg;化合物B胶囊150mg;化合物E胶囊150mg;化合物F胶囊150mg。实验方法小鼠按体重随机分为各给药组，每组15只。给药前禁食禁水14小时，化合物A、B、E、F按300mg/kg用生理盐水稀释至所需浓度灌胃给药20ml/kg。给药后分别于不同时间摘眼球取血(每一时间取血5只)，分离血清，4'C保存，灭活处理后在细胞内培养测定其抑制HIV-1活性。96孔细胞培养板内同时加入含5%小鼠血清的细胞培养液、2乂105细胞/ml的MT细胞及100TCIDso的HIV-1IIIB病毒液，每种浓度重复2孑L;同时设病毒对照孔和空白对照孔。置37'C、5%(:02和饱和湿度培养箱内培养，每天观察细胞病变。培养4天(96小时)后吸细胞培养上清液，细胞用MTT染色；上清液经适当释后，按HIV-1P24抗原剂试剂盒提供的操作步骤测定HIV-1P24抗原，给药物组与阴性对照组比较，计算含药血清对HIV-1P24抗原的抑制率(抑制率％=(阴性对照组OD-给药物组OD)/(阴性对照组OD-空白对照组OD)X100。/0)。实验结果在MT-4细胞培养96小时内，各组给药小鼠血清(终浓度为5%)未见致细胞病毒变。灌胃给药后，小鼠血清在MT-4细胞内培养抑制HIV-1IIIB的作用见表4。小鼠给药化合物A、B、E或F后，5。/。血清在MT-4细胞内培养对HIV-1IIIBP24抗原具有显著的抑制作用，给药后45min时抑制率接近90%，80min时为75%左右，240min时高于50%。表4小鼠给药后5%血清在MT-4细胞内培养对HIV-1IIIBP24抗原的抑制率药物5%含药血清在MT-4细胞内培养对HIV-1IIIBP24抗原的抑制率(％)45min80min240min化合物A87.7±11.674.9±10.253.5±8.7化合物B89.4±10.575.7±9.955.4±9.2化合物E88.2±12.775.2±12.254.2±9.5化合物F89.7±10.976.1±11.655.3±10.2结论体内抗mv-i作用研究结果表明，灌胃给药后，5%小鼠血清对人传代丁淋巴细胞MT-4细胞无毒性作用；给药后4小时内5%小鼠血清在MT-4细胞内培养对H:V-1具有明显地抑制作用，且持续时间较长。表明，本发明化合物具有显著的抗HIV的活性，且对人体的毒性较小。具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。以下实施例中用化合物A代替2-(腺嘌呤-9-萄乙基3p-羟基-ll-氧代-l眼20p-齐墩果烷-12-烯酸酯，化合物B代替2-(腺嘌呤-9-基)丙基3P-羟基-ll-氧代-l邓，2邻-齐墩果烷-12-烯酸酯，化合物E代替2-(腺嘌呤-9-基)乙基3p-羟基-18卩，20p-齐墩果垸-12-烯酸酯，化合物F代替2-(腺嘌呤-9-基)丙基邓-羟基-l邓，20P-齐墩果垸-12-烯酸酯。实施例12-(腺嘌吟-9-基、乙基38-羟基-ll-氧代-18B,20B-齐墩果烷-12-烯酸酯的制备步骤l:将13.5g(lOOmmol)腺嘌呤投入反应瓶中，然后加入100ml95。/。乙醇和8g氢氧化钠，搅拌溶解，缓慢滴加20g(160mmol)2-溴乙醇，室温搅拌反应10h，减压回收溶剂，剩余物以90ml氯仿甲醇(1:2)加热溶解，过滤除掉不溶物，活性碳脱色，滤液再加入90ml氯仿，冷冻析晶，得9-(l-羟基乙基-2-基)腺嘌呤15.3g，收率85.3%。步骤2:于干燥反应瓶中，加入100ml乙腈、9.4g(20mmo1)3(3-羟基-11-氧代-1眼20卩-齐墩果烷-12-烯酸，然后加入10ml二甲氨基吡啶(DMAP)，搅拌溶解后，加入10g二环己基碳二亚胺(DCC)，升温至4(TC,搅拌10min，然后缓慢加入9-(l-羟基乙基-2-基)腺嘌呤4.5g(25mmo1)，滴加完毕续搅拌反应20h，过滤除掉生成的二环己基脲，回收溶剂，剩余物加入适量冰水后用乙酸乙酯50mlX3提取，有机层干燥，回收溶剂，无水乙醇重结晶，得2-(腺嘌呤-9-基)乙基3P-羟基-ll-氧代-l眼20p-齐墩果烷-12-烯酸酯5.7g，收率45.1%。元素分析(C"H53N504):C:70.06%,H:8.62%,N:11.01%(理论:C:70.33%，H:8.45%，N:11.08%)。实施例22-f腺嘌吟-9-基俩基3B-羟基-ll-氧代-18B,20B-齐墩果烷-12-烯酸酯的制备步骤l:将13.5g(lOOmmol)腺嘌呤投入反应瓶中，然后加入100ml95y。乙醇和8g氢氧化钠，搅拌溶解。缓慢滴加22g(160mmol)2-溴丙醇，升温至35'C搅拌反应15h，减压回收溶剂，剩余物以90ml氯仿甲醇(l:2)加热溶解，过滤除掉不溶物，活性碳脱色，滤液再加入100ml氯仿，冷冻析晶，得9-(l-羟基丙基-2-基)腺嘌呤14.9g，收率77.2%。步骤2:参照实施例l中步骤l，将9-(l-羟基乙基-2-基)腺嘌呤替换为9-(l-羟基丙基-2-基)腺嘌呤，得2-(腺嘌呤-9-基)丙基3卩-羟基-ll-氧代-18卩，20卩-齐墩果烷-12-烯酸酯6.1g，收率47.3%。元素分析(C38H55N504):C:70.57%，H:8.69%,N:10.76%(理论C:70.66%,H:8.58%，N:10.84%)。实施例32-偏嘌呤-9-基、乙基3B-羟基-18B,20B-齐墩果烷-12-烯酸酯的制备步骤l:参照实施例l中步骤l。步骤2:参照实施例1中步骤2，将3(3-羟基-11-氧代-180,20(3-齐墩果垸-12-烯酸替换为3&羟基-18p,20(3-齐墩果烷-12-烯酸，得2-(腺嘌呤-9-基)乙基3(3-羟基-18p,20p-齐墩果烷-12-烯酸酯5.4g，收率43.2%。元素分析(C37H55N503):C:70.06%，H:8.62%，N:11.01%(理论C:71.92%，H:8.97%，N:11.33%)。实施例42-f腺嘌吟-9-基俩基3B-羟基-18B,20B-齐墩果烷-12-烯酸酯的制备步骤l:参照实施例2中步骤1。步骤2:参照实施例1中步骤2，将9-(l-羟基乙基-2-基)腺嘌呤替换为9-(l-羟基丙基-2-基)腺嘌呤，将3「羟基-11-氧代-1邓，203-齐墩果烷-12-烯酸替换为3^羟基-18|3,20^齐墩果烷-12-烯酸，得2-(腺嘌呤-9-基)丙基3(3-羟基-18(3，20p-齐墩果垸-12-烯酸酯5.6g，收率48.1%。元素分析(C38H"N503)C:72.15%，H:9.12%，N:11.05%(理论:C:72.23%,H:9.09%，N:11.08%)。实施例5本发明化合物片的制备1、处方处方h化合物A、B、E或F6g微晶纤维素50g预胶化淀粉100g10%PVPK30乙醇液适量硬脂酸镁3g共制备画0片化合物A、B、E或F13g微晶纤维素50g预胶化淀粉100g10%PVPK30乙醇液适量硬脂酸镁3g共制备譲片化合物A、B、E或F150g微晶纤维素80g预胶化淀粉150g10%PVPK30乙醇液适量硬脂酸镁3g共制备画片222、制备工艺-原料和辅料分别粉碎过80目筛备用；制粒溶液制备取PVPK30加浓度为3095%药用乙醇制成510%的溶液；取原料和辅料混匀，加入制粒溶液适量制软材，20目制粒，507(TC干燥后，18目整粒，加入硬脂酸镁混匀；测定颗粒含量，压片，随机检测片重；成品全检，包装入库。实施例6本发明化合物胶囊的制备<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>2、制备工艺原料和辅料分别粉碎过80目筛备用；制粒溶液制备取PVPK30加浓度为3095%药用乙醇制成510%的溶液；取原料和辅料混匀，加入制粒溶液适量制软材，20目制粒，507CTC干燥后，18目整粒，加入硬脂酸镁混匀；测定颗粒含量，胶囊填充，随机检测装量；成品全检，包装入库。实施例7本发明化合物颗粒的制备1、处方处方1:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>处方2:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>处方3:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>处方4:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>2、具体步骤将原料和辅料粉碎过100目筛，备用；按照处方量称取原料和辅料，将原料与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2。/。HPMC50。/。乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，过20目筛制粒，6(TC烘干，过18目筛整粒；取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量，分装；成品全检，包装入库。实施例8本发明化合物水针的制备1、处方-处方l:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>处方2:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>化合物A、B、E或F聚山梨酯80注射用水110g50g5000ml共制备1000支处方4化合物A、B、E或F聚山梨酯80注射用水300g100g10000ml共制备1000支2、制备工艺将生产用安瓿配液用容器具、仪器设备等进行清理、除菌、除热原；按处方称取原料和辅料，取聚山梨酯80加配液量80%的注射用水，搅拌溶解；加入配液量0.05%的针用活性炭，搅拌15min，过滤，脱炭，向溶液中加入原料，搅拌溶解，测定并调节溶液的pH值，补加注射用水至全量，定容；药液经过0.22nm的微孔滤膜精滤，检査澄明度，半成品检验；将药液装于安瓿中，10(TC流通蒸汽灭菌30min，检漏，灯检；成品全检，包装入库。权利要求1、如下式所示的化合物或其立体异构体id="icf0001"file="A2006100706090002C1.gif"wi="95"he="65"top="36"left="56"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，X为id="icf0002"file="A2006100706090002C2.gif"wi="99"he="16"top="115"left="36"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基嘌呤-9-基或其1-去氮杂、3-去氮杂或8-氮杂类似物，或者为胞嘧啶-1-基、尿嘧啶-1-基、胸腺嘧啶-1-基或其3-去氮杂类似物；R1为H、F、Cl、Br或I；R2为H，或者1～3分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基、鼠李糖基、核糖基、脱氧核糖基、乳糖基、半乳糖基、半乳糖醛酸基、麦芽糖基、甘露糖基、木糖基；R3、R4、R5各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的C1-6的直链或支链的烷基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、乙烯基、1-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；其中，所述的取代基选自羟基，氨基，硝基，卤素，C1-6的直链或支链的烷基或烯基，C6-10的芳基，C1-4直链或支链的烷基酰氨基，C1-4直链或支链的烷氧基羰基；R6取代或未被取代的C1-6的直链或支链的烷基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、乙烯基、1-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；其中，所述的取代基选自羟基，氨基，硝基，卤素，C1-4的直链或支链的烷基或烯基。2、烯基、l-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；其中，所述的取代基选自羟基，氨基，硝基，卤素，CM的直链或支链的烷基或烯基。2、如权利要求1所述的化合物或其立体异构体，其中，<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage3</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、2,6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基嘌呤-9-基、胞嘧啶-l-基、尿嘧啶-l-基或胸腺嘧啶-l-基；R1为H、F、Cl或Br;W为H，或者13分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基、鼠李糖基；R3、R4、RS各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的CM的直链或支链的烷基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、乙烯基、1-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基；W为取代或未被取代的Cw的直链或支链的烷基或烯基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、l-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、异丁烯基。3、如权利要求2所述的化合物或其立体异构体，其中，<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage3</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基、胞嘧啶-l-基、尿嘧啶-l-基或胸腺嘧啶-l-基；W为H、F或C1;W为H，或者13分子葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、阿拉伯吡喃糖基、阿拉伯呋喃糖基;R3、R4、RS各自为独立的羟基，或者取代或未被取代的d.3的直链或支链的垸基、烯基或烷羟基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、乙烯基、l-丙稀基、2-丙稀基、异丙稀基、羟甲基、羟乙基、羟丙基；RS为取代或未被取代的Cw的直链或支链的烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基。4、如权利要求3所述的化合物或其立体异构体，其中，<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage4</formula>Y为鸟嘌呤-9-基、腺嘌呤-9-基或胞嘧啶-1-基；R'为H、F或C1;W为H，-P-D-葡萄糖基、-a-D-葡萄糖基或-P-D-葡萄糖酸酸基-a-D-葡萄糖醛酸基；RS为甲基或羟甲基；W为甲基或羟甲基；RS为甲基、羟基或羟甲基；W为甲基、乙基、丙基或异丙基。5、如权利要求4所述的化合物或其立体异构体，其中，<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage4</formula>Y为鸟嘌呤-9-基；R1为H;R2为H或-(3-D-葡萄糖醛酸基-a-D-葡萄糖醛酸基；113为甲基；W为甲基；W为甲基；W为乙基或异丙基。6、如权利要求15所述的任一化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预病毒性感染的药物中的应用。7、如权利要求15所述的任一化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预防肝脏疾病的药物中的应用。8、如权利要求15所述的任一化合物或其立体异构体作为必需的活性成分与药学上可接受的载体的药物组合物。9、如权利要求8所述的药物组合物为口服制剂或注射剂。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，涉及具有抗病毒等活性的新化合物或其立体异构体，这些化合物或其立体异构体的制备方法，含有这些化合物或其立体异构体作为必需的活性成分的药物组合物，以及这些化合物或其立体异构体在制备治疗和/或预防病毒性感染和肝脏疾病的药物中的应用。本发明的化合物或其立体异构体具有显著的抗病毒作用，尤其是乙型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒，同时具有显著的抗急性和慢性肝损伤的活性。文档编号C07J63/00GK101190936SQ200610070609公开日2008年6月4日申请日期2006年12月1日优先权日2006年12月1日发明者黄振华申请人:黄振华