专利名称：肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计的靶点的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及治疗和消除肿瘤耐药性的领域，更具体地，本发明涉及一种新的肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计和筛选的靶点的应用，该基因已知为神经丝蛋白-H基因(NF-H基因)。本发明还设计所述基因在临床诊断肿瘤耐药性中的应用。
为了克服肿瘤多药耐药，提高化疗疗效，国内外许多研究者通过在体外用药物诱导耐药细胞株和建立耐药表型动物模型，发现了多种耐药机制(1)膜糖蛋白外排泵作用引起的细胞内药物浓度的下降，包括mdr1基因编码的P-糖蛋白Pgp，多药耐药相关蛋白MRP，P110核孔蛋白LRP，乳腺癌耐药相关蛋白BCRP(杨纯正等，《药物化学进展》，2001年9月，化学工业出版社，北京，彭司勋主编pp181-206)；(2)酶系统的作用，包括拓扑异构酶IIα表达下降，药物代谢酶系统P-450、GST、SOD表达增高，另外还有DNA损伤修复酶、二氢叶酸还原酶、Abl酪氨酸激酶、DNA聚合酶以及O6-烷基鸟苷DNA烷基转移酶的改变等(Wessel I，et al.Cancer Res，1997；574451-4454)；(3)激素受体量和亲和力的改变(Radinsky R.Cancer Metastasis Rev.1995；14(4)323-338)；(4)凋亡机制的修饰(Hickman JA.Eur J Cancer 1996，32A921-926)。在上述这些机制中唯一能够得到临床证实的只有P-糖蛋白，并且针对这一机制，国内外已发现了多种逆转剂，经体外实验证明具有逆转肿瘤细胞多药耐药的活性，所述逆转剂例如维拉帕米、环孢菌素A、三氟拉嗪、奎尼丁、他莫西芬、奎宁等。但除维拉帕米、环孢菌素A对多发性骨髓瘤以及少数白血病患者有一定的疗效外，其他药物的疗效令人失望。临床实验还发现，这些逆转剂对实体瘤的效果甚微，并且还会带来严重的毒副作用。因此，选择特有的靶点设计合成直接作用于耐药肿瘤的新药将对癌症的治疗非常有益，也就是靶向治疗。2001年，美国FDA批准Gleevec可用于临床治疗慢性粒细胞白血病，这就使肿瘤的靶向治疗和靶向药物的研究取得了划时代的进展。Gleevec，又称STI571或CGP57148B，是由人工合成的一种酪氨酸激酶抑制剂，特异地竞争性结合Abl激酶的ATP结合位点，用于慢性粒细胞性白血病的治疗。本发明人正是基于这一肿瘤靶向治疗思路，进行了深入研究而筛选到一种新的肿瘤耐药标志物基因，从而为抗肿瘤耐药新药的设计提供了新的靶点，以这一基因为靶点，在基因水平设计新的化学实体，能避免病人服用低效、无效甚至有毒副作用的药物，提高治疗疗效。
图2示出PHII-7对耐药细胞中高表达的5个基因的抑制作用。
本发明的肿瘤耐药基因是在本发明人试图发现参与上述K562/A02细胞的耐药机制的相关基因，了解多药耐药可能的新的分子机制的工作中发现并分离的。为此目的，本发明人选用含有1,176个基因的cDNA微阵列(Clontech，USA)对K562/A02和K562细胞mRNA的表达进行了对照分析，发现有12个基因的表达水平在二者之间的差别达两倍以上，其中7个基因在K562中表达高，5个基因在K562/A02中表达高。在耐药细胞中表达高的基因似乎对耐药机制的形成更有意义。为了避免cDNA微阵列产生假阳性，本发明人选择在耐药细胞中高表达的5个基因进行Northern印迹或RT-PCR验证，结果基本与cDNA微阵列的实验相符。在这5个基因中有一最令人感兴趣的基因，其在K562细胞中基本无表达，而在K562/A02细胞中有较高表达，这一点已由RT-PCR证实。对此基因的测序表明，其是一种已知的称为神经丝蛋白-H的基因(NF-H基因)，其序列如SEQ ID NO1所示。现有技术中已知NF-H基因编码200kDa的神经丝蛋白-H，NF-H与其它2种蛋白NF-L和NF-M一起组成神经丝，神经丝对于神经元的抗张强度、分子和细胞器在轴突内的转运起着重要作用。但是现有技术中没有任何NF-H参与肿瘤耐药的任何提示，是本发明人首次发现NF-H基因还是一种肿瘤耐药标志物基因。
本发明的NF-H基因可作为抗耐药肿瘤药物作用的靶点，进行抗肿瘤药物的设计和抗耐药肿瘤治疗。如下述实施例所详细描述的，本发明人采用本发明人已获专利的一种具有较高抗肿瘤活性和较低毒性的药物PH II-7(专利号ZL 94 1 07957.0)证实本发明的NF-H基因是其作用靶点之一。本领域技术人员应理解的是PH II-7仅是举例示出本发明的NF-H基因可以作为抗耐药肿瘤药物作用的靶点，应用本发明的NF-H基因设为靶点，可以在基因水平设计新的化学实体，能避免病人服用低效、无效甚至有毒副作用的药物，提高治疗疗效。
以下将以实施例具体描述本发明。实施例1耐药基因NF-H的分离A.细胞培养取K562细胞(购自上海细胞库)和本发明人获得的MDR细胞株K562/A02(Yabg CZ et al.Acta Pharmacologica Sinica，1995；16(4)333-337)于补加10％胎牛血清(医科院血研所)、10mM Hepes和1％谷氨酰胺的RPMI1640培养液(Gibco BRL)中，37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中分别培养维持。K562/A02细胞在培养过程中加阿霉素1μg/ml，以维持耐药性，使用前3天撤药。
B.cDNA探针的制备取上述A步骤培养至对数生长期的细胞K562、K562/A02各4×107，用PBS洗两遍，按TRIzol总RNA提取试剂盒(Gibco BRL)说明提取总RNA，再按照Atlas cDNA表达微阵列用户手册进行操作(PT3140-1)，制备cDNA探针。简要地说，将所提取的两种细胞的总RNA经DNase I处理以除去DNA污染。取4μg总RNA与1μl 10×CDS随机引物混合液混匀，再以去离子水将体积补至3μl，70℃放置2分钟，然后50℃ 2分钟，加入反应体系中。反应体系包括5×反应缓冲液2μl，10×dNTP混合物1μl，[α-22P]dATP(比放射活性1.17×1014Bq/mmol)3.5μl，100mM DTT 0.5μl，M-MLV逆转录酶(Gibco.，UAS，50U/μl)1μl。小心混匀，50℃放置25分钟后加入1×μl10终止液(0.1MEDTA pH8.0；1mg/ml肝糖元)。由此，制备出两种细胞K562、K562/A02的标记的cDNA探针。用CHROMA SPIN-200 DEPC-H2O柱(Clontech，USA)纯化所述探针。
C.cDNA探针与Atlas cDNA微阵列杂交Atlas cDNA表达微阵列是Clontech公司产品，本例中选用的是有1,176cDNAs的Human 1.2II(cat.#7852-1)。用去离子水湿润cDNA微阵列杂交膜，置于杂交瓶中，并向其中加入10ml预热至68℃的ExpressHyb杂交液(Clontech，USA，内含100μg/ml热变性的鲑鱼精DNA)，预杂交30分钟，并不断震荡。另取200μl上述步骤B制备的cDNA探针，加入22×μl10变性液(1M NaOH，10mM EDTA)，孵育20分钟，再加入5μl(1mg/ml)COt-1 DNA(所述微阵列试剂盒中所包括的一种试剂)，和225μl2×中和液(1M NaH2PO4pH7.0)，孵育10分钟。除去微阵列杂交瓶中的预杂交液，向其中加入如上所述制备的cDNA探针和5ml含有100μg/ml鲑鱼精DNA的已预热至68℃的ExpressHyb杂交液，震荡过夜。倒去杂交液，用已预热至68℃的洗脱液I(2×SSC，1％SDS)震荡洗脱30分钟，并重复3次，再用200ml已预热至68℃的洗脱液II(0.1×SSC，0.5％SDS)震荡洗脱30分钟，整个操作过程中温度一直维持在68℃。-70℃放射自显影。之后用用Clontech公司Atlas VisionTM3.0软件分析自显影图象。
D.RT-PCR验证NF-H在K562/A02细胞中的表达取适量RNA，在M-MLV的作用下37℃水浴1h逆转成cDNA，再按文献(Davidorf MS，et al.Histochem Cell Biol，1999，111173-187)所述进行PCR扩增，产物在2％的琼脂糖凝胶上进行电泳，紫外下观察并照相。结果通过如上所述方法比较K562、K562/A02细胞的mRNA，发现有7个基因在多药耐药(MDR)细胞株K562/A02中被下调，5个被上调，如表1所示。表1 K562和K562/A02细胞之间基因表达的差异基因 蛋白质/基因强度 差异2代码1K562 K562/A02A08k CCAAT/增强子结合蛋白γ(CEBPG) 43 14-3.07B07f 断裂点簇集区蛋白(BCR) 5 31+6.20C04m EG-高尔基体中间区室53-kDa蛋白(ERGIC-53)4 22+5.50C131 Apo载脂蛋白E前体(APOE) 59 4 -14.75D02b 类固醇5-α还原酶1(SRD5A1) 33 13-2.54D02h 二氢二醇脱氢酶+十氯酮还原酶32 10-3.2D07e 60S核糖体蛋白L22(RPL22)14970-2.13F01c Ras GTPase-激活样蛋白(IQGAP1) 11 35+3.18F03h Sorcin 22-kDa蛋白(SRI)；CP-22 18 107 +5.94F06k 凝血酶原蛋白 16419-8.36F08c 脂蛋白相关凝集抑制剂 28354-5.24F11j 神经丝三联体H蛋白 0 22+∞(200kD神经丝蛋白)(NF-H)注1微阵列中的代码。
2差异是K562/A02与K562细胞中基因表达的强度比“+”是指在K562/A02中基因的上调“-”是指在K562/A02中基因的下调由上表可以看出，NF-H基因在耐药细胞中强表达，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。用其作为耐药标志物基因的候选者进行进一步测试。经RT-PCR验证，NF-H基因在在耐药细胞中的表达，结果与cDNA微阵列的结果相符，即NF-H在耐药细胞中有较高表达，而在敏感细胞中几乎无表达(
图1)。另外，经过1μg/ml的PH II-7处理K562/A02细胞24h之后上述在耐药细胞中高表达的5个基因(BCR、ERGIC-53、IQGAPl、Sorcin和NF-H)均受到不同程度的抑制，接近K562细胞中的表达水平(图2)。PH II-7是本发明人筛选得到的一种抗肿瘤药(专利号ZL 94 1 07957.0)，其不仅可抑制多种人敏感肿瘤的生长，且对于阿霉素无效的耐药肿瘤，PH II-7也具有同样的抑制作用。实施例2免疫细胞化学检测NF-H蛋白在不同肿瘤细胞中的表达使K562/A02、K562(购自上海细胞库)、实体瘤细胞系MCF-7/ADR(北京肿瘤医院刘叙仪教授惠赠)、实体瘤细胞系MCF-7细胞(购自上海细胞库)分别自然贴附于玻片上，4％多聚甲醛固定后，3％H2O2室温孵育30分钟以阻断内源性过氧化物酶活性；10％羊血清室温封闭30分钟；加N-F200抗体(1∶100，得自Sigma，是否是NF-H蛋白的抗体)37℃孵育1小时45分钟；加生物素标记的IgG抗体(北京中山生物技术公司)，37℃ 30分钟；再加HRP标记的链霉卵白素(北京中山生物技术公司)37℃ 30分钟；最后加AEC染液(武汉博士德生物公司)显色，苏木素复染，显微镜下观察。
检测结果如下表2所示。表2 NF-H的表达
如上表所示，发现NF-H在4种肿瘤细胞中均有表达，但在耐药细胞株K562/A02和MCF-7/ADR中的表达明显高于敏感细胞K562和MCF-7；另外，NF-H在血液细胞肿瘤和实体瘤中表达的相似性说明NF-H作为耐药肿瘤标志物具有通用性。实施例3免疫组织化学检测NF-H在模型裸鼠中的表达模型建立使用Balb/c nu/nu裸鼠(购于中国医学科学院肿瘤研究所动物中心)，雌性，4-6周。取1×107K562、K562/A02细胞分别接种于同一只裸鼠的左、右前肢根部背侧皮下，一周后开始治疗。分为4组，每组6只，这四组分别为阳性对照组阿霉素(ADR)4mg/kg Q3d×4，PH II-750mg/kg Q2-3d×5(即每2-3天治疗一次，共5次)，PH II-725mg/kg Q2-3d×5，和溶剂(蓖麻油∶无水乙醇∶吐温80＝49∶49∶2)对照组。治疗时按0.2ml/10g腹腔给药。实验结束后，切取裸鼠移植肿瘤组织，10％中性福尔马林固定24小时，常规石蜡包埋，切片。石蜡切片脱蜡、梯度乙醇至水，然后按照常规免疫细胞化学的操作(细胞培养，1999年2月世界图书出版公司西安司徒镇强等主编pp198-204，)进行，最后用新鲜配制的DAB染液显色，苏木素复染，脱水、透明、封片，镜下观察。
通过比较各组的治疗效果，发现50mg/kg PH II-7对多药耐药细胞K562/A02移植瘤显示出较好的治疗效果(P＝0.033)，而阿霉素的治疗效果不明显(P＝0.057)。对于敏感肿瘤细胞K562移植瘤，阿霉素具有较好的治疗作用，P＝0.020，50mg/kg PH II-7仍有明显的治疗作用，P＝0.039。这就支持了PH II-7抗耐药肿瘤的特点。接下来取肿瘤组织进行免疫组化染色，观察PH II-7对NF-H的作用。结果发现与体外结果相似，耐药肿瘤组织中有较高的NF-H表达，而在敏感肿瘤组织中的表达较低，并且这种高表达的NF-H经抗耐药肿瘤药物PH II-750mg/kg治疗后，明显受到抑制(表3)。
表3免疫组化法检测K562/A02、K562移植瘤的表达
*P值是与K562/A02移植瘤组比较而得。实施例4应用NF-H基因为靶点筛选抗肿瘤药物1.针对NF-H基因的序列用软件Prime6.3设计逆转肿瘤耐药的反义核酸药物2.以NF-H蛋白为靶点进行高通量药物2.1初始DOCK筛选从细胞中提取或经大肠杆菌表达NF-H蛋白，并纯化分离，然后进行晶体培养，X晶体衍射得到NF-H蛋白得3D结构，或进行同源模建得到复合物晶体结构，去掉所有的水分子作为DOCK计算的初始结构。利用SYBYL给蛋白加氢和电荷，使用DMS程序利用一个半径1.4的探针计算受体的溶剂可接触表面，用SPHGEN程序填充不同大小的刚性小球的方法来描述在受体结合腔穴结构互补的立体特征，使用GRID程序计算靶点结合位点的打分网格。在分子对接过程中，配体分子将被划分成为由可旋转单键连接的不同分子片段，通常具有5个或更多的重原子(如芳香环)的刚性片段被选作锚点，然后将所选择的分子锚点片段与填充到受体结合腔穴的小球进行匹配，从而将此片段分别定位到受体结合位点的200个不同的方位，并且进行基于打分网格的优化来选择锚点片段在每种定位方式下最佳的空间位置；然后根据锚点片段依次连接其余的分子碎片，在每次连接新的一层分子片段时，通过单键旋转来搜寻新分子片段与受体局部结合位点的最佳结合位置；通过这种基于分子锚点片段逐步添加剩余的分子片段的方式对于处理配体分子的柔性问题非常有效，而且同样配体分子可设置多种不同的锚点片段来进一步增加配体最佳结合位置的搜寻。最后对配体分子各种不同的定位方式进行打分，选择与受体最佳的结合方式。在初始DOCK筛选中选择得分靠前的20000个化合物进行下一轮的操作。2.2二次筛选为了提高打分函数式的精度和速度，通过联合使用多种打分方法对配体结合状态进行评估，这样可能增加数据库搜寻的命中率。利用DOCK程序将上面选出的20000个化合物进行更加充分的构象搜寻和能量优化筛选，对其得到的配体最佳的结合构型同时采用其它的多种具有代表性的打分函数式(如GOLD，PMF，FLEX)重新打分，那么活性化合物可认为是不同方法评估的结合情况均较好的分子。真正与受体结合较好的配体通常均会被不同评分方式选择出来。在二级筛选中选择得分靠前的1000个化合物。2.3结构多样性分析和最终的化合物选择利用结构多样性分析可增加选择到新型结构活性化合物的可能性。将上步中筛选到的1000个化合物利用聚类分析的方法分到结构不同的组中。应用CHEMFINDER4.0计算出Tanimoto相似指数来进行这种结构差异性分组。通过比较包括化学连接性(如原子种类，键的种类，环结构等)在内的不同结构的化学指纹之间的相似性，用Tanimoto系数来定量地表征分子之间的相似性程度。计算所有1000个化合物中每个分子与所有其它分子的Tanimoto系数，如果超过或等于事先设定的相似性指数(例如70％)的分子可认为相似，按照化合物具有的相似性分子的数目大小将所有分子排列，有最多相似性分子的化合物将排在第一位；然后，从上一步得到分子的排列中的第一位开始，将此化合物和与其Tanimoto系数超过或等于分组指数的化合物分到一组。然后将此组化台物分子从库中排除，对剩下的分子重复先前的步骤直到将库中所有的分子都分到代表不同结构特征的化合物组中。进行生物实验的化合物要选自不同的化合物组并其物化性质具有药物类似性，如0＝＜logP值＜＝5，200＝＜分子量＜＝500，氢键供体数目＜＝5和受体数目＜＝10，分子中可旋转单键的数目＜＝15，无潜在的毒性集团和较好化学稳定性等。从每个组中挑选1-5个化合物，共大约100个化合物进行生物学测试。得到潜在的抗肿瘤药物。
序列表<110>中国医学科学院血液学研究所<120>肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计的靶点的用途<130>I2002995CB<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>3774<212>DNA<213>Homo sapiens<400>1atgatgagct tcggcggcgc ggacgcgctg ctgggcgccc cgttcgcgcc gctgcatggc60ggcggcagcc tccactacgc gctagcccga aagggtggcg caggcgggac gcgctccgcc120gctggctcct ccagcggctt ccactcgtgg acacggacgt ccgtgagctc cgtgtccgcc180tcgcccagcc gcttccgtgg cgcaggcgcc gcctcaagca ccgactcgct ggacacgctg240agcaacgggc cggagggctg catggtggcg gtggccacct cacgcagtga gaaggagcag300ctgcaggcgc tgaacgaccg cttcgccggg tacatcgaca aggtgcggca gctggaggcg360cacaaccgca gcctggaggg cgaggctgcg gcgctgcggc agcagcaggc gggccgctcc420gctatgggcg agctgtacga gcgcgaggtc cgcgagatgc gcggcgcggt gctgcgcctg480ggcgcggcgc gcggtcagct acgcctggag caggagcacc tgctcgagga catcgcgcac540gtgcgccagc gcctagacga cgaggcccgg cagcgagagg aggccgaggc ggcggcccgc600gcgctggcgc gcttcgcgca ggaggccgag gcggcgcgcg tggacctgca gaagaaggcg660caggcgctgc aggaggagtg cggctacctg cggcgccacc accaggaaga ggtgggcgag720ctgctcggcc agatccaggg ctccggcgcc gcgcaggcgc agatgcaggc cgagacgcgc780gacgccctga agtgcgacgt gacgtcggcg ctgcgcgaga ttcgcgcgca gcttgaaggc840cacgcggtgc agagcacgct gcagtccgag gagtggttcc gagtgaggct ggaccgactg900tcggaggcag ccaaggtgaa cacagacgct atgcgctcag cgcaggagga gataactgag960taccggcgtc agctgcaggc caggaccaca gagctggagg cactgaaaag caccaaggac1020tcactggaga ggcagcgctc tgagctggag gaccgtcatc aggccgacat tgcctcctac1080caggaagcca ttcagcagct ggacgctgag ctgaggaaca ccaagtggga gatggccgcc1140cagctgcgag aataccagga cctgctcaat gtcaagatgg ctctggatat agagatagcc1200gcttacagaa aactcctgga aggtgaagag tgtcggattg gctttggccc aattcctttc1260tcgcttccag aaggactccc caaaattccc tctgtgtcca ctcacataaa ggtgaaaagc1320gaagagaaga tcaaagtggt ggagaagtct gagaaagaaa ctgtgattgt ggaggaacag1380acagaggaga cccaagtgac tgaagaagtg actgaagaag aggagaaaga ggccaaagag1440gaggagggca aggaggaaga agggggtgaa gaagaggagg cagaaggggg agaagaagaa1500acaaagtctc ccccagcaga agaggctgca tccccagaga aggaagccaa gtcaccagta1560aaggaagagg caaagtcacc ggctgaggcc aagtccccag agaaggagga agcaaaatcc1620ccagccgaag tcaagtcccc tgagaaggcc aagtctccag caaaggaaga ggcaaagtca1680ccgcctgagg ccaagtcccc agagaaggag gaagcaaaat ctccagctga ggtcaagtcc1740cccgagaagg ccaagtcccc agcaaaggaa gaggcaaagt caccggctga ggccaagtct1800ccagagaagg ccaagtcccc agtgaaggaa gaagcaaagt caccggctga ggccaagtcc1860ccagtgaagg aagaagcaaa atctccagct gaggtcaagt ccccggaaaa ggccaagtct1920ccaacgaagg aggaagcaaa gtcccctgag aaggccaagt cccctgagaa ggccaagtcc1980ccagagaagg aagaggccaa gtcccctgag aaggccaagt ccccagtgaa ggcagaagca2040aagtcccctg agaaggccaa gtccccagtg aaggcagaag caaagtcccc tgagaaggcc2100aagtccccag tgaaggaaga agcaaagtcc cctgagaagg ccaagtcccc agtgaaggaa2160gaagcaaagt cccctgagaa ggccaagtcc ccagtgaagg aagaagcaaa gacccccgag2220aaggccaagt ccccagtgaa ggaagaagcc aagtccccag agaaggccaa gtccccagag2280aaggccaaga ctcttgatgt gaagtctcca gaagccaaga ctccagcgaa ggaggaagca2340aggtcccctg cagacaaatt ccctgaaaag gccaaaagcc ctgtcaagga ggaggtcaag2400tccccagaga aggcgaaatc tcccctgaag gaggatgcca aggcccctga gaaggagatc2460ccaaaaaagg aagaggtgaa gtccccagtg aaggaggagg agaagcccca ggaggtgaaa2520gtcaaagagc ccccaaagaa ggcagaggaa gagaaagccc ctgccacacc aaaaacagag2580gagaagaagg acagcaagaa agaggaggca cccaagaagg aggctccaaa gcccaaggtg2640gaggagaaga aggaacctgc tgtcgaaaag cccaaagaat ccaaagttga agccaagaag2700gaagaggctg aagataagaa aaaagtcccc accccagaga aggaggctcc tgccaaggtg2760gaggtgaagg aagacgctaa acccaaagaa aagacagagg tggccaagaa ggaaccagat2820gatgccaagg ccaaggaacc cagcaaacca gcagagaaga aggaggcagc accggagaaa2880aaagacacca aggaggagaa ggccaagaag cctgaggaga aacccaagac agaggccaaa2940gccaaggaag atgacaagac cctctcaaaa gagcctagca agcctaaggc agaaaaggct3000gaaaaatcct ccagcacaga ccaaaaagac agcaagcctc cagagaaggc cacagaagac3060aaggccgcca aggggaagta aggcagggag aaaggaacat ccggaacagc caaagaaact3120cagaagagtc ccggagctca aggatcagag taacacaatt ttcacttttt ctgtctttat3180gtaagaagaa actgcttaga tgacggggcc tccttcttca aacaggaatt tctgttagca3240atatgttagc aagagagggc actcccaggc ccctgccccc atgccctccc caggcgatgg3300acaattatga tagcttatgt agctgaatgt gatacatgcc gaatgccaca cgtaaacact3360tgactataaa aactgccccc ctcctttcca aataagtgca tttattgcct ctatgtgcaa3420ctgacagatg accgcaataa tgaatgagca gttagaaata cattatgctt gagatgtctt3480aacctattcc caaatgcctt ctgttttcca aaggagtggt caagcccttg cccagagctc3540tctattctgg aagagcggtc caggtggggc cgggcactgg ccactgaatt atgccagggc3600gcactttcca ctggagttca ctttcaattg cttctgtgca ataaaaccaa gtgcttataa3660aatgaaaaaa aaaaaaaaaa tgctgttatt ctctttccct gggaaggctg ggggcagggc3720aggggaggtc tggatgtgac accccagact gcatgggact gagcaagcat cagt 377权利要求
1.肿瘤耐药标志物基因，其具有SEQ ID NO1所示的序列或其互补序列或简并序列。
2.一种用于设计抗耐药肿瘤药物的靶点，其为具有SEQ ID NO1的序列的基因。
3.权利要求1的肿瘤耐药标志物基因作为抗耐药肿瘤药物设计的靶点的用途。
4.权利要求1的肿瘤耐药标志物基因在制备用于临床诊断肿瘤耐药性的诊断剂中的应用。
5.针对权利要求2的靶点设计出的药物。
全文摘要
本发明涉及一种新的肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计和筛选的靶点的应用，该基因已知为神经丝蛋白－H基因(NF－H基因)。本发明还设计所述基因在临床诊断肿瘤耐药性中的应用。
文档编号C07H21/00GK1453364SQ02118320
公开日2003年11月5日 申请日期2002年4月24日 优先权日2002年4月24日
发明者杨纯正, 赵春华, 谭耀红, 彭晖, 齐静, 王金宏, 邵晓枫, 范冬梅 申请人:中国医学科学院血液学研究所