新型清除蛋白受体的利记博彩app

专利名称：新型清除蛋白受体的利记博彩app
技术领域：
本发明是关于分离的人及小鼠的新型清除蛋白(scavenger)受体(在本说明书中分别称为hSRCL-P1和mSRCL-P1，对两者不加区别的情况下只称SRCL-P1)的基因及蛋白质，它们的相同体，变异体，修饰体及多型性变种(这些总称为衍生物)，它们的片段(以下全称为SRCL-P1s)以及它们的检出方法。再有，关于含有SRCL-P1s的医药用、诊断用、研究用的组合物，它们的制造方法及应用。还有关于SRCL-P1s蛋白质的激活剂和拮抗剂，用SRCL-P1s的药物的筛选方法。更进一步关于构建含SRCL-P1s基因的载体，用该构建的载体转化的转化细胞和关于针对SRCL-P1蛋白质的抗体及产生该抗体的细胞。
背景技术：
作为动脉粥样硬化症的初期病变的病理学特征是泡沫细胞出现在动脉壁上增多的现象。存在于巨噬细胞的细胞膜上的清除蛋白受体(以下简称SR)(Krieger，M.等人；Annu.Rev.Biochem.，63，601-637，1994)与LDL受体不同，缺乏胆固醇的负反馈调节，变性的LDL(胆固醇与脂蛋白质的复合体是低密度脂白质)因为被积极地摄入细胞内，细胞自身变成泡沫细胞而积累在血管内皮细胞下面。所以，巨噬细胞及其SR被认为在形成动脉粥样硬化时起主要的作用。(Brown M，S.等人；Nature，343，508-509，1990，Kurihara，Y.A.等人；Current Opinion Lipidology，2，295-300，1991，Krieger，M.；TIBS，17，141-146，1992，Krieger，M.等人；J.Biol.Chem.，268(7)，4569-4572，1993)。
因糖尿病产生的体内持续的高血糖，引起各种蛋白质的非酶促糖化。席夫碱·阿吗多瑞(アマドリ)化合物经糖化过程产生最终产物美拉德反应后期产物(AGEadvanced glycation end products)。具有细胞障碍作用的AGE通过AGE受体结合于巨噬细胞、血管内皮细胞、肝细胞、肾小球系膜细胞等，对机体施加恶劣的影响。例如AGE与巨噬细胞结合，促进TNF(Tumor Necrosis Factor肿瘤坏死因子)、IL-1(Interleukin-1白细胞介素)及来自血小板的增殖因子(PDGF)等的细胞素的分泌，引起以糖尿病性合并症为特征的细胞障碍，这一点已为人们所知。因为SR是与AGE的摄取分解有关的受体之一(Araki，N.，等人；Eur.J.Biochem.，230，408-415，1995，Susuki，H.等人；Circulation，92，1-428，1995)，在SR双缺损小鼠中AGE的分解活性降低三分之一，所以人们认为SR与糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜症、糖尿病性神经障碍等糖尿病性合并症也有很深的关系。其次，在大鼠体内，因为饲喂过量的AGE白蛋白，和肾中AGE的沉积，引起小球体硬化症(Vlassara，H.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91，11704-11708，1994)，所以推想，识别AGE的SR与小球体硬化症有深深的关联。
再者，人们认为SR与早老性痴呆病也有关系。早老性痴呆病的病理学特征是β淀粉样蛋白沉积的老人斑。有人报道，β淀粉样蛋白通过在小胶细胞上发现的SR产生激活小胶细胞的活性氧而表达神经毒性(Nature，382，716-719，1996)。
作为SR的配体，因SR分子种类不同，而存在特异性上的差异，具有负电荷的配体有，例如乙酰化LDL(AcLDL)氧化LDL(OxLDL)等的变性LDL、顺丁烯二酰化的BSA等的变性蛋白质、多聚肌苷酸等的四螺旋核酸、葡聚糖硫酸和多聚岩藻糖等多糖类，磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇等酸性磷脂类，内毒素(LPS)、AGE、老化细胞及凋亡细胞等。此外人们认为，SR还具有清除生物体内的各种变性物、病毒等异物和陈旧废物的重要作用(Hamptom，R.Y.等人；Nature，352，342-344，1991、Tokuda，H.等人；Biochem.Biophys.Res.Commun.，196(1)，8-24，1993、Pearson，A.M.等人；J.Biol.Chem.，268，3546-3554，1993、Dunne，D.W.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91，1863-1867，1994、Freeman，M.W.；Current Opinion in Lipidology，5，143-148，1994)。
在除巨噬细胞以外的肝类洞内皮细胞(Eskild，W.等人；Elsevier Biomedical N.Y.，255-262，1982)、血管内皮细胞(Baker，D.P.等人；Arteriosclerosis，4，248-255，1984、Bickel，P.E.等人；J.Clin.Invest.，90，1450-1457，1992)、血管平滑肌细胞(Pitas，R.E.等人；J.Biol.Chem.，265，12722-12727，1990、Bickel，P.E.等人；J.Clin.Invest.，90，1450-1457，1992)、纤维芽细胞(Pitas，R.E.等人；J.Biol.Chem.，265，12722-12727，1990)上都发现了SR。其次，SR可分类成SRA、SRB、SRC(Peason，A.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，4056-4060，1995)、FcγRIIB2(Stanton，L.W.等人；J.Biol.Chem.，270，22446-22451，1992)以及macrosialin(CD68)(Ramprasad，M.P.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，9580-9584，1995)、人血管内皮OxLDL受体(LOX-1类似植物凝集素的氧化的LDL受体)(Sawamura，T.等人；Nature，386，73，1997)，SRA可进一步分类成SR-AI和SR-AII(Kodama，T.等人；Nature，343，531-535，1990)及MARCO(一种新的巨噬细胞受体，具有胶原结构)(Elomaa，O.等人；Cell，80，603-609，1995)，SRB可进一步分类成CD36(Endemann，G.等人；J.Biol.Chem.，268，11811-11816，1993)和SR-B1(Acton，S.L.等人；J.Biol.Chem.，269，21003-21009，1994)。
SR-AI及SR-AII是均聚三体，是N末端在细胞内的内-外(inside-out)型贯穿膜的蛋白质。该蛋白质在细胞外部分可分辨出类似胶原蛋白的区段、α-螺旋区段和富含半胱氨酸区段等构造上的数个区段(Rohrer，L.等人；Nature，343，570，1990、Matsumoto，A.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，9133，1990)。类似胶原蛋白区段具有胶原蛋白特有的(Gly-Xaa-Yaa)n构造(Xaa和Yaa可以是任何一种氨基酸残基)，这一区段有配体结合部位的功能。α-螺旋区段则是每7个氨基酸向右旋转两圈的7肽重复序列，即α-螺旋构造，每7个氨基酸有三条多肽，亮氨酸和异亮氨酸等疏水性氨基酸朝内侧，极性氨基酸和糖链结合部位朝外侧(亮氨酸拉链)形成均聚三体。该区段的作用是维持均聚三体的构造，并且，与变形LDL等配体结合并进入细胞内。由于核内体中的pH低，使受体的三次构造改变，从而具有使配体解离的作用。
该蛋白质的细胞质内区段具有和LDL受体和胰岛素受体中的NRXY顺序和铁传递蛋白受体中的YXRF顺序相同的内吞作用信号特有的急转向(タイトタ一ン)构造，如果使这些顺序缺损，则内吞作用受到抑制。
SR-AI和SR-AII是通过编码富含半胱氨酸的mRNA的两者择一地剪接产生的，SR-AI该区由110个氨基酸组成，SR-AII由17个氨基酸组成。已经发现至少在来自末梢单球的巨噬细胞、肺胞巨噬细胞及肝Kupffer细胞上有SR-AI和SR-AII，并且与生体防御、动脉硬化、钙离子非依赖性的细胞接着等有关。(Krieger，M.等人；Annu.Rev.Biochem.，63，601-637，1994、Wada，Y.等人；Ann.N.Y.Acad.Sci.，748，226-239，1995、Fraser，I.P.等人；Nature，364，343，1993)。其次，OxLDL存在于动脉硬化巢的巨噬细胞内，在这种巨噬细胞的细胞膜上更多地发现SR-AI和SR-AII，SR-AI在转基因小鼠中能抑制脂质负荷而引起的血中脂蛋白上升的现象，SR-AI和SR-AII对OxLDL的摄取起重要的作用。
另一方面，分类上属于SRA的MACRO和SR-AI有类似的构造，不存在α-螺旋区段，其特征是具有长的胶原蛋白样的区段。发现于脾脏巨噬细胞和淋巴节巨噬细胞等处的MACRO，由于其配体的特异性，被认为是作为针对细菌感染的生物体防御机构发挥机能。
铃木等人制作成功了SRA缺损的小鼠，他们用卡那霉素耐性基因置换了SR-AI和SRA-II的共同部分的第四外显子(Suzuki，H.等人；Nature，386，292-296，1997)。SRA缺损的小鼠和野生型比较表现出了免疫障碍，它们对李斯特菌和单纯疱疹病毒的感染率高。其次发生凋亡的T细胞的贪食现象与SRA有关系，SRA缺损的小鼠与野生型比较，表现出贪食能力降低(Platt，N.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93，12456，1996)。还有，SRA缺损小鼠与动脉硬化的动物模型的apoE缺损小鼠(Plump，A.S.等人；Cell，71，343，1992、Zhag，S.H.等人；J.Clin.Invest.，94，937，1994)交配，得到了双重缺损小鼠，有意思的是，它们的动脉硬化灶的面积也比apoE缺损小鼠的小(Suzuki，H.等人；Nature，386，292-296，1997)。
照这样，巨噬细胞机能的解明、动脉硬化、糖尿病性合并症以及AD、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三脂血症、低α脂蛋白血症、移植、动脉粥样硬化斑切除和血管形成后再狭窄等各种疾患的发病机制的解明，然后其诊断、预防以及治疗方法、还有为此可以开发利用的试药及医药，SR以及所有属于这一族的新型种类分子的发现，使上述课题有了解决手段。
另一方面，对生物体防御起着重要作用的补体系统，作为识别免疫球蛋白的分子，已知有补体第一成分Cl活化的经典途径及细菌等异物为补体第三成分C3的直接结合的第二途径。近年来加入到这些补体活化途径之中的已知有是血清凝集素的甘露糖结合蛋白质(以下称MBP)，通过直接识别结合在异物表面的糖链而活化补体系统的凝集素途径(Sato，T.等人；Int.Immunol.，6，665-669，1994)。
MBP是在Ca离子存在下与甘露糖以及N-乙酰葡萄糖胺等特异结合的C型(外源)凝集素，其构造至少含有由(Gly-Xaa-Yaa)n组成的类似胶原蛋白的区域、糖链识别区域(CRD)。与MBP相同，具有类似胶原蛋白区域和CRD的血清凝集素总称为共同凝集素(コレクチン)(Malhotora，R.等人；Eur.J.Immunol.，22，1437-1445，1992)，除MBP以外还可以举出共同凝集素-43(CL-43)、表面活性蛋白A(SP-A)、表面活性蛋白D(SP-D)以及牛粘合素(BKg)等。共同凝集素具有调理素活性，所以被认为与以细菌、病毒为首的各种微生物的基础免疫有关系(Kawasaki，N.等人；J.Biochem.，106，483-489，1989、Ikeda，K.等人；J.Biol.Chem.262，7451-7454，1987、Ohta，M.等人；J.Biol.Chem.，265，1980-1984，1990、Summerfield，J.A.等人；Lancet，345，886，1995)。
这类共同凝集素，如

图1(a)所示，已知由含有(1)CRD和(2)类似胶原蛋白区域等特征的基本构造构成(Malhotora，等人；Eur.J.Immunol.，22，1437-1445，1992)，这一基本构造在类似胶原蛋白区域，由三螺旋形成的亚基，然后这种亚基形成3体、4体、6体等寡聚体构造。
最近有资料暗示共同凝集素与非特异免疫应答有关，例如有人报告，对于婴儿来说，来自母亲的移行抗体和特有的防御系统不十分发达，在中和和排除各种微生物上起重要作用(Super等人；Lancet，2，1236-1239，1989)。其次，关于这些共同凝集素在宿主的生体防御上的作用，例如由于MBP基因中的变异引起血中MBP浓度下降，宿主变得易受感染，这样的研究结果已有人报告(Sumiya，等人；Lancet，337，1569-1570，1991)。再有，有报告说，调理素作用不全的血清中MBP含量低(Madsen，H.O.等人；Immunogenetics，40，37-44，1994)，易发生细菌感染，(Garred，P.等人；Lancet，346，941-943，1995)，可以认为MBP对免疫机构有重要作用。
本发明者曾发现，BKg和MBP能阻碍H1和H3型的流感病毒A型感染和红血球的凝集活性(Wakamiya等人；Glycoconjugate；J.，8，235，1991、Wakamiya等人；Biochem.Biophys.Res.Comm.，187，1270-1278，1992)。其次，在这之后获得了编码BKg的cDNA克隆，也发现了BKg和SP-D等的关连性(Suzuki等人；Biochem.Biophys.Res.Comm.，191，335-342，1993)。
共同凝集素可能是对阐明生物体防御机制有用的和作为生理活性物质有用的物质，这一族新型分子种的发现，除对传染病的治疗外，对各种医疗领域乃至生物学领域，人们也寄予很大的期望。
发明的内容本发明的目的是提供新型的清除蛋白受体，有可能用于阐明巨噬细胞和基础免疫的机能、阐明动脉硬化、糖尿病性综合症、早老性痴呆病、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、低α脂蛋白血症、移植、动脉粥样硬化斑切除后和血管形成后再狭窄、以及细菌感染症等各种疾病的发病机制，然后用于诊断、预防和治疗方法以及用于为此开发的试药和医药。
因此，本发明提供了(1)一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示的742个氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ IDNO2所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO2氨基酸序列1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质；(2)一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO1碱基号74-2299所示的碱基序列、编码SEQ ID NO2中氨基酸号1-742所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列；(3)一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示的氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ ID NO24所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO24氨基酸序列1-618所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质；
(4)一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO23碱基号74-1933所示的碱基序列、编码SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列；(5)一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO4氨基酸号1-742所示的742个氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ IDNO2所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO2氨基酸序列1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质；(6)一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO3碱基号74-2299所示的碱基序列、编码SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列；(7)含有(2)、(4)或(6)所述的多核苷酸为特征的载体；(8)保持(2)、(4)或(6)所述的多核苷酸的表达可能的转化细胞；(9)培养用(2)或(4)所述的多核苷酸转化的细胞，收获产生的hSRCL-P1蛋白质为特征的蛋白质制造方法；(10)培养用(6)中所述的碱基序列遗传转化的细胞，收获产生的mSRCL-P1蛋白质为特征的蛋白质制造方法；(11)(9)或(10)所述的制备方法，其中细胞是大肠菌、动物细胞或昆虫细胞；(12)SRCL-P1基因的表达水平被改变了的转基因非人动物；(13)(12)所述的转基因非人动物，其特征为SRCL-P1基因是编码SRCL-P1的cDNA，基因组DNA或合成的DNA；(14)(13)所述的转基因非人动物，其特征为通过在基因表达调节部位引起变异来改变表达水平；(15)一种剔除小鼠，它的mSRCL-P1基因机能缺损；(16)针对(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质或其片段的抗体；(17)(16)所述的抗体，其特征为多克隆抗体、单克隆抗体或肽抗体；(18)针对(1)、(3)或(5)中所记的蛋白质或其片段的单克隆抗体利记博彩app，其特征为将(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质或其片段注入人以外的温血动物，选择抗体效价被确认的该动物，取出脾脏或淋巴节，将它们含有的产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合、制作出能产生单克隆抗体的杂交瘤；(19)根据(16)或(17)中所述的抗体与SRCL-P1蛋白质或其片段的免疫结合而来的该蛋白质或其片段的定量方法；(20)根据(16)或(17)中所述的抗体与SRCL-P1蛋白质或其片段的免疫结合而来的该蛋白质或其片段的检出方法；(21)刺激(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质活性的激活剂；(22)阻碍(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质活性或活性化的拮抗剂；(23)应用(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质为特征的药物筛选方法；(24)用(23)中所述的筛选方法获得的药物；(25)以治疗与氧化LDL累积有关的病态为目的药物筛选方法，通过比较在候选药物有或无的条件下(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质与氧化LDL的结合量可以做出评价，当候选药物对该蛋白质与氧化LDL的结合有阻碍能力，则可鉴定出与氧化LDL累积有关的病态的药物，以含有这样的工程为特征的药物筛选方法；(26)通过(25)所述的筛选方法得到的药物；(27)与氧化LDL累积有关的病态的治疗方法，应用(26)中所述的药物，具有以阻碍SRCL-P1蛋白质或其片段与氧化LDL结合为特征的工程的方法；(28)为治疗与氧化LDL累积有关的病态的医药组合物，含有(26)中所述的药物；(29)和细胞上结合AGE有关的病态的治疗药物的筛选，通过比较(1)、(3)或(5)中所述的蛋白质在有或无候选药物的情况下与AGE的结合量，做出评价，根据候选药物阻碍该蛋白质与AGE结合的能力，鉴定可用于治疗与细胞上结合AGE有关的病态的药物的工程为特征的药物筛选方法；(30)用(29)中所述的筛选方法得到的药物；(31)与AGE结合于细胞有关的病态的治疗方法，应用(30)中所述的药物，以阻碍SRCL-P1蛋白质或其片段与AGE结合的工程为特征的方法；(32)含有(30)中所述的药物的医药组合物，其特征为与AGE结合细胞有关的病态治疗用的医药组合物。
附图简单说明图1表示以前报告的主要的共同凝集素的基本构造和蛋白质的概况。
图2以前报告的3种共同凝集素的氨基酸序列的直线排列的前半部分。
图3表示和图2相同的直线排列的后半部分。
图4(b)为测定本发明新型的清除蛋白受体的碱基序列所使用的各引物的名称，表示顺序仪读出的碱基序列，图4(a)表示所得到的新型共同凝集素的ORF。
图5 A酵母，B革兰氏阴性细菌(大肠杆菌，Escherichia coli)或C革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌，Staphylococcus aureus)与表达hSRCL-P1的细胞特异结合的情形。
图6 A氧化LDL，B甘露糖和CAGE与表达hSRCL-P1的细胞特异结合的情形。
图7酵母在表达hSRCL-P1的细胞内被摄取的情形。
图8 A健康人和B小鼠的心脏血管内皮细胞中hSRCL-P1被表达的情形。
实施发明的最佳形态本发明人成功地克隆到了人和小鼠的新型SR。在新型SR(SRCL-P1)的C末端存在着含有被认为与基础免疫有关的CRD的共同凝集素区段，其次，这种全部构造类似SRA，特别是SR-A1。具体地说，靠N末端一侧至少含有亮氨酸重复4次的亮氨酸拉链构造贯穿膜区段、α-螺旋区段、类似胶原蛋白区段、颈区段、CRD区段。3个具有上述特征的分子，由螺旋区形成o-螺旋、在类似胶原蛋白区段形成三螺旋，构成均聚三体。其次，类似胶原蛋白区段在生理pH条件下，推测带有正电荷。还有，SRCL-P1蛋白质具有多个糖链结合部位。
使用本说明书时，所谓的hSRCL-P1基因和mSRCL-P1基因，除特别指出外，均指含有SEQ ID NO1或3所示的核酸顺序的多核苷酸，它们的衍生物(相同体、变异体、修饰体和多态变体)，以及它们的片段。其次，使用本说明书时，所谓的hSRCL-P1蛋白质和mSRCL-P1蛋白质，除特别指出外，均指含有SEQ ID NO2或4所示的氨基酸序列(多肽)，它们的衍生物、它们的片段。无论是天然的或是人工制作的，均包含在本发明前面的记载中。
可以举出hSRCL-P1作为例子，它具有SEQ ID NO24所示的氨基酸的蛋白质(至于SEQ ID NO1所示的蛋白质，是胶原蛋白区段的一部分和颈区段，即第483～606号氨基酸残基缺失的变异体)，SEQ ID NO1所示的多核苷酸变异体的例子，可以举出编码SEQ ID NO24的蛋白质的SEQ ID NO23所示的多核苷酸。
再有，本发明中也含有实际上与SEQ ID NO2或4所示的氨基酸序列类似的氨基酸序列及编码实际上与SEQ ID NO2或4所示的氨基酸序列类似的氨基酸序列的碱基序列。并且也含有具有这些氨基酸序列的蛋白质。与SEQ ID NO2或4所示的氨基酸序列实际上相似的氨基酸序列，和含SEQ ID NO2或4所示的氨基酸序列的蛋白质具有同样的性质，即是说，因为含有SR所特有的亮氨酸拉链构造的贯穿膜区段、α-螺旋区段、类似胶原蛋白区段，在具有活性、机能和三次构造的范围内，带有一个或数个氨基酸置换、缺失、添加和/或插入等的改变的氨基酸序列。无论它们是天然的或是人工制作的。
其次，本发明也包含SEQ ID NO1或3之一的核酸顺序或其片段的核酸顺序、或与它们互补的核酸顺序(以下称为特定顺序)、也包含严谨条件下能够杂交的核酸顺序。在本发明中，所谓严谨条件是指，例如在含有5xSSC、5％Denhard′s溶液(0.1％BSA、0.1％Ficoll400、0.1％PVP)、0.5％SDS和20μg/ml变性鲑精子DNA的溶液中，37℃保温一夜，随后，在室温下用含0.1％SDS的2xSSC洗净。使用适当的SSPE代替SSC也很好。这样得到的核酸顺序，至少是特定的顺序，被认为具有50％的同源性。特定顺序和严谨条件下可以杂交的核酸顺序所编码的蛋白质，推测多具有和SRCL-P1蛋白质相同的性质，并且，只要具有和SRCL-P1蛋白质相同性质，本发明也包括这样的蛋白质。
特别是SEQ ID NO2所示hSRCL-P1(氨基酸号1～742)的氨基酸序列是由742个氨基酸组成的蛋白质，编码此蛋白质的碱基序列由2226个碱基组成。该顺序中存在有亮氨酸拉链区段、α-螺旋区段、类似胶原蛋白区段、颈区段、CRD区段等特有的氨基酸序列，即是说，存在有氨基酸号36～57所示的亮氨酸拉链区段、氨基酸号72～426(Coils Program)或81～431(Multicoil Program)所示的α-螺旋区段、氨基酸编号443-589所示的类似胶原蛋白区段、氨基酸号590-606所示的颈部区段、氨基酸号607～742所示的CRD区段等。还可举出其它区段如氨基酸号63～742(TMHMM1.0program)或者58～742(TMpred program)所示的细胞外区段、氨基酸号1～39(TMHMM1.0 program)或1～37(TMpred program)所示的细胞内区段、氨基酸号40～62(TMHMM1.0 program)或38～57(TMpred program)所示的贯穿膜区段、氨基酸号443～743的外源凝集素区段(结构域)等，还有，含有氨基酸号708～730所示的C型凝集素基序。编码此蛋白质的碱基序列示于SEQ ID NO1。
其次，SEQ ID NO4所示的mSRCL-P1(氨基酸号1～742)的氨基酸序列是由742个氨基酸组成的蛋白质。编码此蛋白质的碱基序列由2226个碱基组成。该序列和序列2所示的hSRCL-P1相同，存在有亮氨酸拉链区段、a-螺旋区段、类似胶原蛋白区段、颈区段、CRD区段、C型凝集素基序等特征性的氨基酸序列。编码此蛋白质的碱基序列示于SEQ ID NO3中。
本说明书使用的所谓相同体是指同源性高的核酸顺序或氨基酸序列，至少在50％以上，较好为70％以上，更好在90％以上。顺序中存在缺失和插入时，最好能进行帽子(キヤツプ)结合的同源性检查。例如，可以用多重直线排列(商品名SODHO，富士通)的方法进行检查。其次，同源性检查的推导法可以用最严密的Smith-Waterman推导法。此外，可通过互联网利用FASTA和BLAST等。
本说明书中使用的所谓变异体，可以举出，例如等位基因(allele)单核苷酸多型性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)等。其次，在本发明的核酸顺序中也含有密码子缩小范围内起变化的核酸顺序的变异。可以按照通常的方法利用合成的寡核苷酸构成的引物，编码所希望的改变，使核酸顺序的密码子的一部分改变的，位置特异的变异导入法等(Mark，D.F.等人；Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，81，5662，1984)进行，本发明的核酸顺序中也包括所得到的人工基因变异体。其次，也有超出密码子缩小范围的场合，由变异的密码子翻译出变异的氨基酸，最好具有与正常氨基酸类似的性质。例如脂肪族氨基酸的丙氨酸、颉氨酸、亮氨酸、以及异亮氨酸之间的变异，中性氨基酸有甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、颉氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、色氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺之间的变异，酸性氨基酸有天冬氨酸和谷氨酸之间的变异，碱性氨基酸有精氨酸、赖氨酸以及组氨酸之间的变异，有羟基的丝氨酸和苏氨酸之间的变异，有芳香环的苯丙氨酸和酪氨酸之间的变异等，最好氨基酸的性质、功能和特性等都类似。本发明也包含这些人工的和天然的变异的蛋白质。可以用PCR法引起特异位置上的变异，也可以使用人们熟知的其它方法，引起任意位置上的变异。
本说明书中使用的修饰体，例如乙酰基化、酰基化、ADP-核糖基化、酰胺化、肉豆蔻酰基化、葡萄糖基化、羟化、磷酸化、硫酸化、甲酰基化、甲基化、聚乙二醇化、脂质结合、核苷酸结合、金属结合(钙附加体等)、与多种蛋白质(白蛋白等)的融合体、二聚体等的改变，都可用通常的方法进行。例如，因为大肠菌不能引起宿主的葡萄糖基化，所以在打算葡萄糖基化时最好用真核细胞进行。可以利用昆虫细胞，也可以利用哺乳动物细胞进行翻译后的葡萄糖基化。
本说明书中使用的多型性变种是指例如染色体DNA的构造以及形态上的差异产生的多型性，由于某种基因的等位基因变化产生的多型性等。一般真核生物的基因多显示多型现象，由于这一现象，一个或多个氨基酸也被置换，其次，这种场合下蛋白质的活性仍保持着。因此，编码SEQ ID NO2或4任意一个显示的氨基酸序列的基因被人工改变，所得的编码蛋白质的基因，只要该蛋白质具有本发明的基因的特有的功能，本发明都包括在内。其次，SEQ ID NO2或4任意一个所显示的氨基酸顺序被人工改变后得到的蛋白质，只要具有本发明的蛋白质的特征，都包括在本发明内。所谓改变可理解为含有置换、缺失、添加和/或插入。
本说明书中使用的所谓片段是指例如上述SRCL-P1具有的氨基酸序列中的任意片段，可以举出细胞外片段和细胞内片段、贯通膜区段、亮氨酸拉链区段、a-螺旋区段、类似胶原蛋白区段、颈部区段、CRD区段、类似共同凝集素区段、疏水性区段(颈部区段、贯穿膜区段等)、亲水性区段(疏水性区段以外)等。再有可以举出这些片段被融合的片段。例如可举出SEQ ID NO2所示的hSRCL-P1的氨基酸序列缺失了贯穿膜区段形成可溶性受体的由58乃至63号到742号的氨基酸片段、缺失CRD区段形成贯通膜型清除蛋白受体的具有约1-606号氨基酸的片段、由亮氨酸拉链区段和α-螺旋区段构成的可溶性清除蛋白受体的约36号到426号乃至431号的氨基酸片段，还有，除去CRD区段和颈部区段的第1-589号氨基酸的片段等。
获得SRCL-P1基因的方法可以用任何方法获得本发明的SRCL-P1基因。例如，可以从表达该蛋白质的细胞制取mRNA，再用常规方法转换成双链DNA，获得编码SRCL-P1的碱基序列。可用异硫氰酸胍-氯化钙等方法抽提mRNA(Chirwin，等人；Biochemistry，18，5294，1979)。应用结合了寡聚(dT)的载体，例如聚蔗糖或胶乳粒，进行亲和层析等从总RNA提取多聚(A)RNA。用所得的RNA做模板，用3′末端上有多聚(A)链的互补的寡聚(dT)或λ噬菌体引物，或者与SRCL-P1的氨基酸序列的一部分相对应的合成寡核苷酸作为引物，进行逆转录酶反应(Mol.Cell Biol.，2，161，1982、Mol.Cell Biol.，3，280，1983、Gene，25，263，1983)，这样得到的cDNA链，再用大肠杆菌RnaseH、大肠菌DNA聚合酶I、大肠菌连接酶处理，通过变换成DNA，可得到双链的cDNA。可以将此cDNA重组进质粒载体、噬菌体载体、粘粒载体，转化进大肠菌，或体外包装之后转染进大肠菌，建成cDNA文库。
可以在这里使用的质粒载体只要能在宿主内复制，没有特别的限制。噬菌体载体，只要能在宿主内增殖，也没有特别的限制。克隆用的载体，可以举出的有，pBR322、pUC19、λgt10、λgt11等。其次，在提供免疫学筛选时最好有能够表达宿主内SRCL-P1基因的启动子的载体。
将cDNA重组进质粒的方法可参考Maniatis等人的方法(《分子克隆实验指南》Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第二版)。其次，将cDNA重组入噬菌体载体的方法可参考Hyunh等人的方法(DNA Clonging，a practical approach，1，49，1985)。
前述将表达载体导入宿主细胞的方法，例如有脂聚胺、DEAE-葡聚糖、hanahan(ハナハン)法、脂转染法、磷酸钙法由来的转染法、微注射法和电穿孔等方法(《分子克隆实验指南》Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第二版)。体外包装可用市售的试剂盒(Stratagene公司制、Amersham公司制)，简便易行。
由上述制得的cDNA文库分离编码SRCL-P1蛋白质的cDNA的方法，可用一般的cDNA筛选方法组合进行。例如，制作32P标记的探针，采用菌落杂交法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，72，3961，1975)、噬斑杂交法(《分子克隆实验指南》MolecularCloning，A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory，2，108，1989)可以筛选出含有目的cDNA的克隆。其次，也可以用PCR法选择克隆。再者，在使用表达cDNA的载体制作cDNA文库时可通过利用识别SRCL-P1的抗体来筛选目的克隆。
其次，用能表达SRCL-P1基因的细胞分离SRCL-P1基因的时候，例如，采用SDS或蛋白酶K溶解该表达细胞，用酚处理，用核糖核酸酶消化没有用的RNA。用限制酶消化得到的DNA，将所得的DNA片段用噬菌体或粘粒扩增制成文库。然后选择目的克隆，就可以获得SRCL-P1基因。
可以应用马克萨姆-吉尔伯特法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，74，560，1977)或桑格尔法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，74，5463，1977)测定这样得到的DNA的碱基序列。可以用限制酶等从上述得到的克隆中切出SRCL-P1基因。
使用根据SRCL-P1碱基序列合成的引物，应用以SRCL-P1表达细胞的多聚(A)+RNA为模板的RT-PCR法进行筛选，也是可以的。其次，不用PCR，根据SRCL-P1碱基序列制作合成探针，直接筛选cDNA文库，也可以得到目的cDNA。用这些方法得到的基因中，可以通过测定基因碱基序列选择出本发明的基因。也可以用例如磷亚胺酸酯法(Mattencci M.D.等人，J.Am.Chem.Soc.，130，3185，1981)等核酸化学合成的通常方法制作本发明的基因。
表达载体的利记博彩app本发明还涉及以含有SRCL-P1s核酸顺序为特征的载体。对于载体没有特别的限制，只要能表达SRCL-P1s蛋白质的即可，质粒载体、RNA载体、DNA载体、病毒载体、噬菌体载体等都可以使用。具体地，可以举出Invitrogen公司生产的pBAD/His、pRSETA、pcDNA2.1、pTrcHis2A、pYES2、pBlueBac4.5、pcDNA3.1、pSecTag2、Novagen公司生产的pET、pBAC、Promega公司生产的pGEM、Stratagene公司生产的pBluescriptII、pBS、Phagescript、pSG、pSV2CAT或者Pharmacia公司生产的pGEX、pUC18/19、pBPV、pSVK3、pSVL等。
表达载体上连接的SRCL-P1s cDNA顺序和启动子有功能地连接着。关于启动子，可以举出噬菌体的λPL启动子、大肠菌的lac、trp、tac启动子、SV40早期和晚期启动子、T7和T3启动子、逆转录病毒的LTR启动子。特别是，可以使用的真核细胞启动子，有CMV启动子、HSV启动子、SV40早期和晚期启动子、逆转录病毒的LTR启动子、RSV启动子、金属硫蛋白启动子。再有，表达载体也可以含有能选择转化的宿主的特殊记号和增强子。记号有二氢叶酸还原酶基因、卡那霉素耐性基因、氨苄青霉素耐性基因等。增强子有SV40增强子、巨细胞病毒的早期增强子-启动子、腺病毒增强子等。
转化细胞的利记博彩app本发明提供上述载体中保存的本发明的这些碱基序列，并保持可能表达它们的转化细胞。虽然本说明书所指的作为转化细胞用的宿主细胞最好是动物细胞和昆虫细胞，但是可以举出能够表达本发明的表达载体中的SRCL-P1s蛋白质的所有细胞(包括微生物)。
本说明书中的动物细胞或昆虫细胞，可以举出分别来自人的细胞、来自果蝇或蚕的细胞。例如CHO细胞、COS细胞、BHK细胞、Vero细胞、骨髓瘤细胞、HEK293细胞、HeLa细胞、Jurkat细胞、小鼠L细胞、小鼠C127细胞、小鼠FM3A细胞、小鼠纤维芽细胞、骨芽细胞、软骨细胞、S2、Sf9、Sf21、High FiveTM(注册商标)细胞等。本说明书所指的微生物包括大肠菌或酵母等。可以用上面所述的方法导入这些宿主。
本发明的SR表达细胞，可以用来分析有关动脉硬化发病的SR路径、通过此路径被摄入细胞的被修饰的LDL的特异性。其次，可以用作分析以受体为媒介的物质摄入细胞的模型。其次，本发明的细胞可以用于动脉硬化症治疗药物的开发，例如，LDL变性的抑制剂、酰基辅酶A、胆固醇酰基转移酶(ACAT)活性抑制剂等的开发过程中，用于药物的筛选。还有可以应用于有糖链的人SR蛋白质的制造。此外，可以用于以SR为媒介的异物或变性物的处理过程的实验系统，或者作为引起伴随变性白蛋白的感染的B型病毒等的感染实验系统。
获得蛋白质的方法本发明也涉及培养上述用本发明的碱基序列转化的细胞，提取产生的SRCL-P1，制造SRCL-P1的方法。可以用本领域的人熟知的方法进行细胞培养，蛋白质分离还有精制。
本发明的蛋白质，其本身可以作为，容易分离、精制、识别的重组融合蛋白质被表达。所谓重组融合蛋白质编码目的蛋白质的核酸顺序紧连在可能表达的蛋白质的N末端或/和C末端的一侧并添加了适当的肽链的可被表达的蛋白质。为了使表达的蛋白质的精制变容易，最好作为具有细胞分泌信号的融合蛋白质被表达。其次，从各种原料精制蛋白质，例如从培养细胞、培养组织、转化细胞等产生蛋白质的原料，可以采用历来公认的方法，如硫酸铵沉淀法等盐析、用交联葡聚糖等的凝胶过滤法、离子交换层析法、疏水性层析法、色素凝胶层析法、电泳法、透析、限制过滤法、亲和层析和高速液相层析法。
基因利用方法为了检出SRCL-P1基因，可以根据SEQ ID NO1或3任意一个所记载的碱基序列设计探针。或者，可以设计为了扩增含有这些碱基序列的DNA和RNA用的引物。利用给定的顺序设计探针和引物是本领域的从业人员日常进行的工作。可以通过化学合成得到具有设定的碱基序列的寡核苷酸，然后在此寡核苷酸上添加适当的标记，则可利用各种各样的杂交检测法。或者可以采用PCR那样的核酸合成反应。作引物用的寡核苷酸至少有10个碱基，较好15-50个碱基的长度是理想的，用作探针的寡核苷酸，全长达100个碱基较为理想。其次，因为也可以应用于编码SRCL-P1蛋白质的基因变异的检出和SNP的检出等，可用来诊断SRCL-P1基因变异而产生的疾病。例如，推想可以利用来诊断动脉硬化、糖尿病性合并症以及早老性痴呆病、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、低α-脂蛋白血症、移植、动脉切除及血管形成后再狭窄、以及细菌感染等各种疾病。再有，因为SRCL-P1基因可被导入并表达，对于基因治疗也是有用的。
再有，根据本发明提供的SRCL-P1的cDNA碱基序列，也有可能取得基因组中存在的SRCL-P1基因的启动子区、增强子区。具体地说，用日本专利公开公报平6-181767、(J.Immunol.，155，2477，1995、Proc.Natl.Acad.Sci，USA.，92，3561，1995)等同样的方法得到这些控制区是可能的。本说明书中所述的启动子区是指存在于转录开始部位，调控基因表达的DNA区，所谓增强子区是指存在于内含子、5′不翻译区或3′不翻译区的增强基因的表达的DNA区。
蛋白质利用方法本发明的SRCL-P1s蛋白质有可能被利用来阐明巨噬细胞和基础免疫的机能，阐明动脉硬化、糖尿病性合并症和早老性痴呆病、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、低α-脂蛋白血症、移植、动脉切除及血管形成后再狭窄、以及细菌感染等各种疾病的发病机制。另外，有可能用于这些疾病的诊断、预防以及治疗方法，和为了医治这些疾病而开发利用试药和医药都成为可能。其次，可以用作抗原，制作针对SRCL-P1s的抗体。而且也可用于激活剂和拮抗剂的筛选。
激活剂和拮抗剂本发明也涉及刺激本发明的SRCL-P1的活性或活性化的激活剂。还涉及阻碍本发明的SRCL-P1的活性或活性化的拮抗剂。拮抗剂的筛选可以使用作用于例如表达SRCL-P1蛋白质的细胞的候补抑制剂和OxLDL或抗体的竞争实验系统，根据OxLDL的结合比例筛选候补抑制剂是可能的。此外，可以使用本领域公认的方法。其次，抑制剂也包含能阻碍SRCL-P1基因的表达的反义核酸。其它筛选方法有测定因受体的活化发生的细胞外pH变化的方法(Science，246，181-296，1989)。
利用筛选的拮抗剂可以作为药物对与氧化LDL的积累以及细胞与AGE结合有关的疾病进行治疗、预防等处理。这种筛选方法是将本发明的SRCL-P1与氧化LDL或与AGE的结合量，在有候补药物存在下和不存在下做比较，根据这种候补药物阻碍两者结合的能力可以鉴定用于处理目的疾病的药物，这种筛选方法包括有鉴定药物工程为特征。
转基因非人动物本发明涉及SRCL-P1基因的表达水平有变化的转基因非人动物。这里所谓的SRCL-P1基因包括编码hSRCL-P14或SRCL-P1的cDNA、基因组DNA或是合成DNA。其次，基因的表达既包括转录也包括翻译各步骤。本发明的转基因非人动物，对于SRCL-P1的功能或表达调节的研究对推想与SRCL-P1有关的疾病的机理的阐明，医药品的筛选，安全性试验用的疾病模型动物的开发是有用的。
在本发明中，正常情况下，调节基因表达的几个重要部位(增强子、启动子、内含子等)的一部分由于发生缺失、置换、添加和/或插入等的变异，和原来的基因表达水平比较上升或下降，这样的人工修饰是可能的。这种变异的导入可以用众所周知的方法进行，可以获得转基因动物。
所谓转基因动物，狭义上讲，是通过基因重组，外来基因被人为地导入生殖细胞的动物，广义上讲，是使用反义RNA抑制了特定的基因的功能的反义转基因动物和用胚性干细胞(ES细胞)使特定的基因被缺损的动物，包含被导入了点突变的DNA的动物，在个体发生的初期，外来基因被导入安定的染色体，作为遗传物质传递给子孙的动物。
本说明书中所谓转基因动物应广义地理解为人以外的所有脊椎动物。本发明中的转基因动物对于SRCL-P1的功能或表达调节的研究，对人体内表达的细胞有关的疾病的机理的阐明，医药品的筛选，安全性试验用的疾病模型动物的开发是有用的。
转基因动物的利记博彩app是在相差显微镜下用微型吸管将基因直接导入前核期卵子的核的方法(微注射法，美国专利4873191)、使用胚性干细胞(ES细胞)的方法等。此外正在开发将基因插入反转录病毒载体或腺病毒载体，感染卵子的方法、其次，精子介导的将基因导入卵子的精子载体法等。
所谓精子载体法，是使外来基因附着在精子上或者用电穿孔等方法导入精子之后，再使卵子受精，将外来基因导入的基因重组法(M.Lavitranoet等，Cell，57，717，1989)。或者可以用噬菌体P1的cre/lox P重组酶系统和啤酒酵母的FLP重组酶系统等，在体内进行部位特异的基因重组，其次，也有人报告使用反转录病毒将目的蛋白质的转基因导入非人动物。
使用微注射法制作转基因动物的方法是按照下面介绍的方法进行的。
首先，由与表达调控有关的启动子、编码特定蛋白质的基因、和多聚A信号构成的转基因是必要的。由启动子的活性左右着特定分子的表达样式和表达量。其次，由于导入的转基因的拷贝数和在染色体上的导入部位，制作的转基因动物在系统间的不同，要确认在各系统间的表达样式和表达量。为了判明非翻译区和因为剪接而发生的表达量的变化，最好预先在多聚A信号之前导入剪接内含子顺序。导入受精卵的基因，尽可能使用纯度高的，这一点是重要的。作为使用的动物，采取受精卵用的小鼠(5-6周龄)、交配用的雄小鼠、假妊娠的雌小鼠、结扎了输精管的雄小鼠等都可以用。
为了高效率地得到受精卵，最好也使用促性腺激素诱发排卵。回收受精卵，用微注射法将微注吸管中的基因注入卵子的雄性前核。将注射过的卵子移入准备好的动物(假妊娠的小鼠等)的输卵管，一只动物约移植10～15个卵子。之后，为了确认诞生的小鼠是否有导入的转基因，从尾部前端抽出基因组DNA，用分子杂交法或PCR法检出转基因，或者用阳性筛选法，即只有在发生了同源重组时，插入的记号被激活，才可能应用这一方法。再有，为了确认转基因的表达，可使用RNA-DNA杂交法或RT-PCR法检出来自转基因的转录产物。或者利用针对蛋白质或其片段的特异抗体进行Western印迹。
缺损小鼠本发明的缺损(敲除，knock out)小鼠是指SRCL-P1基因的功能经处理而丧失的小鼠。所谓缺损小鼠是通过同源重组技术，使任意的基因破坏，其功能缺损的转基因小鼠。利用ES细胞进行同源重组，选择一方等位基因改变了的、破坏了的胚性干细胞，可以制作缺损小鼠。例如，在受精卵的胚盘胞及桑椹期，注入基因，经过操作的胚性干细胞，得到了来自胚性干细胞的细胞和来自胚的细胞混合的嵌合体小鼠。这种嵌合体小鼠(所谓嵌合体是指基于两个以上的受精卵的体细胞形成的单一个体)和正常小鼠交配，可以制成一方的等位基因完全改变、破坏的杂合结合体小鼠。此外杂合接合体小鼠相互交配，可制得同型接合体小鼠。
所谓同源交换，是指碱基序列相同或非常类似的两个基因之间，通过基因交换机制发生交换。选择发生了同源交换的细胞可以使用PCR。使用插入基因的一部和期待插入的区域的一部作为引物进行PCR，能产生扩增产物的细胞就可以判明发生了同源交换。其次，在胚干细胞中表达基因重组的场合，导入的基因上结合了卡那霉素耐性基因，导入后可通过卡那霉素耐性选择细胞，使用公认的方法及改进的方法可以容易地进行选择。
抗体利记博彩app本发明还提供识别SRCL-P1或其片段的抗体。本发明的抗体包括针对，例如具有SEQ ID NO2或4任意一个记载的氨基酸序列的蛋白质或其片段的抗体。制作SRCL-P1或其片段的抗体(例如多克隆抗体、单克隆抗体、肽抗体)或抗血清，可以使用本发明的SRCL-P1或其片段等作为抗原，按照本领域的人们公认的抗血清制作技术操作。特别是，能够调控SRCL-P1功能的抗体(例如能识别CRD、类似胶原蛋白区段和α-螺旋区段等的抗体)作为含有抗体的医药品是有用的。
将本发明的SRCL-P1或其片段本身、或者和稀释剂、载体一道注射到温血动物的可能因注射而产生抗体的部位。为了注射时产生的抗体高，也可以注射完全的弗氏佐剂和不完全的弗氏佐剂。通常每1～6周注射一次，共注射2～10次。可以使用的温血动物有，例如猴子、兔、狗、豚鼠、小鼠、大鼠、绵羊、山羊、鸡等。小鼠和大鼠就很好用。大鼠以Wistar和SD系的为好，小鼠以BALB/c、C57BL/6和ICR系的为好。
制作产生单克隆抗体的细胞时，从抗原免疫后的温血动物(例如小鼠)选择抗体效价已测定的个体，在最后一次免疫后的2～5天采取脾或淋巴节作为抗原，将它们所含的产生抗体细胞和骨髓瘤细胞融合，用这种方法可以制作产生单克隆抗体的杂交瘤。可以用下述的方法测定抗血清的抗体效价，即用标记的SRCL-P1与抗血清反应，然后测定与抗体结合了的标记剂活性。可以按照人们熟知的方法进行融合操作，例如Keller和Milstein法(Nature，256，495，1975)及其改进方法(J.Immunol.Method，39，285，1980、Eur.J.Biochem.，118，437，1981 Nature，285，446，1980)。聚乙二醇(PEG)和仙台病毒等可以用作融合促进剂，PEG就很好。再有，为了提高融合效率可以适当地添加植物凝集素、多聚-L-赖氨酸、或者DMSO。
骨髓瘤细胞有X-63Ag8、NS-1、P3U1、SP2/O、AP-1等，最好用SP2/O。使用的产生抗体细胞(脾脏细胞)数与骨髓瘤细胞数的最佳比例为1∶20～20∶1，添加PEG(PEG1000～PEG6000最好)的浓度为10～80％，20～40℃，最好30～37℃培养1～10分钟，可进行高效率的细胞融合。可以使用各种方法筛选产生抗SRCL-P1抗体的杂交瘤，例如，将SRCL-P1抗原直接或者与载体共同吸附在固相上(如微型平皿)添加杂交瘤培养上清，然后加上被放射性物质和酶等标记了的抗免疫球蛋白的抗体(细胞融合使用的细胞是小鼠细胞时，使用抗小鼠免疫球蛋白抗体)或者加蛋白A接合在固相上抗SRCL-P1抗体的检出方法，可以举出在吸附了抗免疫球蛋白的抗体或蛋白A的固相上添加杂交瘤培养上清，加入用放射性物质或酶等标记的SRCL-P1等，检出结合在固相上的抗SCRL-P1的单克隆抗体。
选择和克隆抗SRCL-P1单克隆抗体可按照本领域人们熟知的或者按照下述方法进行。利用添加了通常的HAT(次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺苷)的动物细胞用的培养基进行。挑选、克隆及育种用的培养基可利用能使杂交瘤生长发育的那种培养基，例如含1～20％，最好是10～20％牛胎儿血清的RPM1培养基、含1～10％的牛胎儿血清的GIT培养基、或培养杂交瘤用的无血清培养基等。培养温度最好在37℃左右。培养时间通常为5天～3周，最好1～2周。通常在5％二氧化碳气体下进行培养。杂交瘤培养上清的抗体效价，可以用上述测定抗血清中的抗SRCL-P1抗体效价的同样方法测定。这就是说，可利用放射免疫检测(RIA)法、酶免疫测定法(ELISA)、荧光免疫检测法(FIA)、噬斑测定法、凝集反应法等，下面介绍的ELISA方法很好。
可以按照以下方法进行ELISA法筛选。将像处理免疫抗原同样的方法处理过的蛋白质固定在ELISA平板的各个孔的表面。然后为防止非特异吸附，将BSA、MSA、OVA、KLH、明胶、或脱脂乳等在各孔中固化。在这些孔中添加杂交瘤培养上清液，放置一定时间进行免疫反应。用PBS等作为洗涤液洗净各孔。在洗涤液中最好添加表面活性剂。添加酶标二次抗体并放置一定时间。标记酶可用β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、过氧化物酶等。用相同的洗涤液将各孔洗净后添加标记酶的底物溶液，进行酶反应。添加的杂交瘤培养上清液中存在目的抗体时，就会发生酶反应，并且底物溶液的颜色起变化。
可用通常的半固体琼脂法和极限稀释法等本领域公认的方法进行克隆，具体地说，在确认了上述方法产生了目的抗体的孔之后，进行克隆操作，获得单个克隆。最好使用极限稀释法作为克隆方法，即稀释杂交瘤时，预期平均每个培养平板的一个孔形成一个群落。在用极限稀释法克隆时，为了提高群落形成能力，可利用支持细胞，也可以添加白细胞介素6等细胞增殖因子。此外，还可利用FACS和单细胞操作法。克隆化的杂交瘤最好培养在无血清培养基中。并在此上清液中加入适量的抗体。这样获得的单一的杂交瘤，用摇瓶和细胞培养装置进行大量培养、在动物的腹腔内培养(J.Immunl.Meth.，53，313，1982)等方法都可得到单克隆抗体。在摇瓶培养时，可用含O～20％的FCS的细胞培养用的培养基(IMDM、DMEM、RPMI 1640及MEM等)。在动物腹腔内培养时，最好使用细胞融合时使用的骨髓瘤细胞由来的动物及同一种动物、同系统动物或缺损胸腺的裸小鼠。预先给予姥鲛烷等矿物油然后移植杂交瘤。1～2周后腹腔内骨髓瘤细胞增殖，可以得到含单克隆抗体的腹水。
用本发明的单克隆抗体，因为能选择地识别SRCL-P1上的特异表位，可以不和其它蛋白质发生交叉反应。一般在构成这种蛋白质的氨基酸序列中，至少5个以上连续的氨基酸，最合意地是7～10个氨基酸顺序才呈现出表位，这样就可以说是此蛋白质显示了固有的表位。所以由SEQ ID NO2和4任意一个记载的氨基酸进行选择，并且至少连续5个氨基酸残基构成的氨基酸序列的肽组成的表位，能被单克隆抗体认识，对本发明来说，就称为hSRCL-P1和mSRCL-P1特异的单克隆抗体。如果从SEQ ID NO2和4记载的氨基酸序列之间找出保守的氨基酸序列，则可以选择出SRCL-P1共同的表位。或者如果是含对各顺序特异的氨基酸序列领域，则可能选择出能识别各种蛋白质的可能的单克隆抗体。
抗SRCL-P1单克隆抗体的分离和精制，可以采用和多克隆抗体的分离精制同样的免疫球蛋白的分离精制法。人们熟知的精制法，如盐析法、酒精沉淀法、等电点沉淀法、电泳法、硫铵沉淀法、用离子交换剂(如DEAE)的吸附洗脱法、超离心法、凝胶过滤法、将抗原结合在固相上或用蛋白A或蛋白G等活性吸附剂仅仅提取抗体，获得结合并解离的抗体的特异精制法，这样的方法都可以应用。为了防止精制过程中形成凝集物以及抗体效价降低，可以添加如人血清白蛋白，浓度在0.05～2％。此外也可以添加甘氨酸、α-丙氨酸、等氨基酸类，特别是赖氨酸、精氨酸和组氨酸等碱性氨基酸、葡萄糖和甘露醇等糖类或氯化钠等盐类。在有IgM抗体的场合，因为知道特别容易凝集，也可以用β-丙氨酸内酯和无水醋酸处理。
本发明的多克隆抗体可以按照本领域人们熟知的，根据这些方法衍生出来的方法制作。例如用免疫抗原(蛋白质抗原)本身，或它们与载体蛋白质的复合体，和制作上述单克隆抗体的方法相同，对温血动物免疫，由该免疫动物可以提取针对本发明的蛋白质或其片段的抗体的血清，通过分离精制，可以制作出抗体。关于免疫温血动物使用的抗原和载体-蛋白质复合体。载体蛋白质的种类和载体-半抗原的混合比，在载体上偶联的免疫半抗原，对于抗体的效率若是好的话，什么样的物质以什么样的比例偶联都可以，例如牛血清白蛋白和牛血清球蛋白、血蓝蛋白等，对半抗原1的重量比，采用约0.1～20，最佳约1～5的比例，进行偶联。其次，半抗原和载体偶联时，可以应用各种缩合剂，可使用戊二醛、碳化二亚胺、马来酰亚胺活性酯、含有巯基、二硫代吡啶基的活性酯试药等。将缩合产物本身或与载体、稀释剂一道注入温血动物的可能产生抗体的部位。为了提高注射产生抗体的能力，最好还注入完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。通常每2～6周注射一次，共注射3～10次。从上述方法免疫的温血动物的血液、腹水等，最好从血液，提取多克隆抗体。测定抗血清中多克隆抗体的效价，可以用和上述测定血清中抗体效价样同的方法。多克隆抗体的分离精制可以按照与分离精制上述单克隆抗体所用相同的免疫球蛋白分离精制法进行。
利用抗体的方法可以利用针对SRCL-P1或其片段的单克隆抗体以及多克隆抗体，诊断与治疗和表达SRCL-P1的细胞有关联的疾病。因为这些抗体与本发明的SRCL-P1或其片段能免疫结合，所以可利用这些抗体测定SRCL-P1或其片段。具体地说，用这些抗体测定SRCL-P1或其片段的方法，可以举出例如，三明治法，其特点是检出不溶性载体上结合的抗体与标记的抗体和SRCL-P1或其片段反应生成的三明治错体，和竞争法，其特点是标记的SRCL-P1与受检材料中的SRCL-P1或其片段与抗体发生竞争性反应，从抗体与反应的标记抗体量测定受检材料中的SRCL-P1或其片段。
利用三明治法测定SRCL-P1或其片段可用二步法或一步法，二步法是首先在固定化抗体与SRCL-P1或其片段反应之后，洗涤以完全除去未反应物，添加标记的抗体，使形成固定化抗体-SRCL-P1标记抗体，一步法是将固定化抗体、标记抗体及SRCL-P1或其片段同时混合。
测定中使用的不溶性载体有聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚酯、聚丙烯酸酯、尼龙、聚缩醛、氟树脂等合成树脂、纤维素、琼脂糖等多糖类、玻璃、金属等。不溶性载体的形状可以采用浅盘状、球状、纤维状、棒状、盘状、容器状、蜂窝状、管状等各种形状。吸附了抗体的载体，在适宜的叠氮化钠等防腐剂的存在下，保存于冷处。
关于抗体的固层化可以使用人们熟知的化学结合法或物理吸附法。化学结合法，可以举出例如戊二醛法、N-琥珀酰-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-缩酸酯以及N-琥珀酰甲基-2-马来酰亚胺乙酰酯等的马来酰亚胺法、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸等碳化二亚胺法、此外，也可以用马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯法、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸法、双重氮化联苯胺法、二棕榈基赖氨酸法等。或者先使被检出物质与表位不同的第二抗体反应，形成复合体，将针对此抗体的第三抗体用上述方法固层化也可能捕捉到被检物质。
使用酶、荧光物质、发光物质、放射性物质、以及金属螯合剂等作标记物质都很好。酶，可以举出，例如过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶、苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、d-5-固醇异构酶、α-甘油磷酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、西洋山嵛菜过氧化物酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、核糖核酸酶、尿素酶、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖淀粉酶、乙酰胆碱酯酶等。荧光物质，可以举出，例如荧光素异硫氰酸酯、藻胆色素蛋白、碱性蕊香红、藻红蛋白、藻青蛋白、别藻青蛋白、邻酞醛等。发光物质，可以举出，例如异鲁米诺尔、光泽精、鲁米诺尔、芳香族丙烯鎓酯、咪唑啉、丙烯二鎓盐及其修饰酯、萤光素、萤光素酶、水母发光蛋白等、放射性物质可列举有125I、127I、131I、14C、3H、32P、35S等。不止这些，凡免疫测定上可以使用的方法都没有特别的限制。其次，抗体上结合了生物素、二硝基酚、吡哆醛或荧光胺那样的低分子半抗原也很好。使用西洋山嵛菜过氧化物酶作为标记酶更好。这个酶能和多个底物反应，用过碘酸法容易将它结合在抗体上。
标记物是酶时，为了测定其活性，根据需要用显色剂作底物。用过氧化物酶时，用H2O2作底物，显色剂可用2，2′-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑磺酸)铵盐(ABTS)、5-氨基水杨酸、邻苯二胺、4-氨基安替比林、3，3′，5，5′-四甲基联苯胺等。用碱性磷酸酶时，底物可用邻硝基磷酸苯酯、对硝基磷酸苯酯，用β-D-半乳糖苷酶时，底物用荧光素-二-(β-D-半乳糖吡喃苷)、4-甲基伞形酸苯基-β-D-半乳糖吡喃苷等。本发明还包括前述的单克隆抗体、多克隆抗体以及试剂盒化的试药类。
偶联剂可用N，N′-邻苯二马来酰亚胺、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷酸-N-琥珀酰亚胺酯、6-马来酰亚胺己酸-N-琥珀酰亚胺酯、4，4′-二硫代吡啶以及人们熟知的其它偶联剂。这些偶联剂与酶及抗体反应，可根据各偶联剂的性质进行。其次，根据情况可用抗体的片段作为抗体，例如Fab′、Fab、F(ab′)2。其次，不论多克隆抗体还是单克隆抗体都可经同样的处理获得酶标抗体。用上述偶联剂得到的酶标抗体，若用亲和层析等公认的方法精制，可成为灵敏度很高的免疫测定系统。精制的酶标抗体、加上硫柳汞或甘油等作稳定剂，或冷冻干燥后保存于暗处。
测定对象没有限制，只要是含有SRCL-P1的试料即可，如血浆、血清、血液、尿、组织液、脑脊髓液等体液。各种细胞、组织等。
人用抗体的利记博彩app在人体内制作对任意抗原免疫的抗体，理论上是不可能的。其次，将小鼠单克隆抗体注入人体，因为对人是异种蛋白，有发生各种副作用的危险。因此，把抗体应用于人时，最好用对人抗原性低的抗体。
人的单克隆抗体的利记博彩app，除了细胞融合法以外，还有用Epstein-Bar病毒(EBV)遗传转化的方法，还有把这种转化的细胞与亲细胞融合的方法，利用基因工程的嵌合抗体，制作人用的抗体等。所谓嵌合抗体是指将不同种动物的免疫蛋白基因片段连接制成的抗体。所谓人用抗体是指将小鼠等对人是异种的抗体，加以改变，把H链和L链的互补性决定部(CDR)以外的一次构造，用人抗体的对应部分的一次构造置换了的抗体。
嵌合抗体的利记博彩app如下，首先将小鼠免疫，由此小鼠单克隆抗体的基因切出与抗原结合的抗体可变部(V区)，使与来自人骨髓瘤的抗体恒定部(C区)基因结合，制作成嵌合基因。这种嵌合基因如果在宿主细胞中表达，就可产生人-小鼠-单克隆抗体。由于嵌合抗体对人抗原性小，可用做注入人体的治疗性和摄像诊断用的单克隆抗体。与抗体有关的公认的技术见于特开平05-304989号、特开平04-330295号、WO9106649、特开昭63-036786号、特公平06-98021号等。
其次，最近开发出了比嵌合抗体更有用的是人用抗体。人用抗体是指仅将抗体分子的抗原结合部位(CDRComplementary determining reagion，互补决定区)的基因顺序移到了人的抗体基因上(CDR嫁接)，除了抗体分子的CDR外，整个分子都是人抗体。由于本抗体比人-小鼠嵌合抗体，小鼠抗体部分少，抗原性小，因而安全性高。制作人单克隆抗体用的亲细胞是人/小鼠杂合骨髓瘤SHM-D 33株(ATCC CRL 1668)或者RF-S1株可获得与小鼠亲细胞同样高的融合效率。用这些亲细胞得到的杂交瘤，无饲喂细胞也可以克隆，IgG型抗体比较稳定，而且可以大量生产。亲细胞的培养用添加了15％FCS的ERDF培养基，其它操作与小鼠的情况是相同的。其次，制作IgG型的人单克隆抗体时最好采用末梢血液的被抗原充分感应了的人淋巴球。如果难以取得被抗原充分感应了的淋巴球，也可在体外进行抗原的感应。在日本，现在正在进行针对成年人T细胞白血病的人用抗体的临床试验。关于人用抗体的制造方法及其有关的技术可以利用例如美国Genentech公司(WO9222653、WO9845332、WO94O4679、WO9837200、WO9404679)和英国Celltech公司(WO9429451、WO9429351、WO9413805、WO9306231、WO9201059、WO9116927、WO9116928、WO9109967、WO8901974、WO8901783)等公开的技术。
采用上述的方法可以有效地将本发明的抗体人化，在给予人的场合非常有用。
组合物SRCL-P1多核苷酸、或蛋白质以及抗体物质、而且SRCL-P1的拮抗物等，与氧化LDL(变性LDL)累积有关的病态，例如从动脉粥样硬化症等的动脉硬化开始、与AGE结合到细胞上有关的小球体硬化症等的障碍、糖尿病性合并症、以及AD、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三脂血症、低α脂蛋白血症、移植、动脉切除以及血管形成后再狭窄、以及细菌感染症等各种疾病的诊断、预防和治疗方法，以及可应用的试药和医药的开发。其次，也可以和公认的医药合用或配合应用。例如动脉粥样硬化症的治疗药、可以和ACAT抑制剂、HMG-CoA还原酶阻碍剂、脂质调节剂、胆汁酸调节剂合用或配合应用。
本发明的医药组合物可含有SRCL-P1多核苷酸和蛋白质、刺激SRCL-P1活性或活化的物质或阻碍物质，针对SRCL-P1蛋白质的抗体等物质(以下称SRCL-P1关连物质)。SRCL-P1关连物质可以直接或用水稀释后使用，可以配合各种药品、非医药品使用。这种场合中该物质的配合量，要根据制品作适当的选择，通常全身给药时，可以用人体重量的0.001～50％、最好是重量的0.01～10％，少于0.001％就不认为可能满足促进泪液分泌作用，其次，超过50％时制品本身的稳定性以及香味等特性可能受到损害。
除前述的口服和静脉内给药以外还可以选择经粘膜、皮肤、肌肉内、皮下、直肠内、眼局部等给药途径。
本发明的SRCL-P1关连物质可以盐的形式含在制剂中。药剂学容许的盐，可以举出，例如无机碱、有机碱等碱的盐、无机酸、有机酸、碱性或酸性氨基酸等的酸附加盐等。无机碱可以举出，例如钠、钾等碱金属、钙、镁等碱土金属、铝、铵等、有机碱可以举出，例如乙醇胺等一级胺、二乙基胺、二乙醇胺、二环己基胺、N，N′-二苄基乙二胺等二级胺、三甲胺、三乙胺、吡啶、皮考啉、三乙醇胺等三级胺。无机酸可以举出，例如盐酸、溴氢酸、硝酸、硫酸、磷酸等。有机酸可以举出，例如蚁酸、醋酸、乳酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、安息香酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。碱性氨基酸例如可列举精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等。酸性氨基酸可列举天冬氨酸、谷氨酸等。
口服时的剂型有散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、锭剂、酏剂、悬浮剂、乳剂和糖浆剂等，可以适当选择。另外，在这些制剂中可施加缓释、稳定、易崩解、难崩解、肠溶化、易吸收等修饰。另外，口腔内局部给予时的剂型有咀嚼剂、舌下剂、颊剂、锭剂、软膏剂、贴布剂、液剂等，可按需选择。并且，这些制剂可施加缓释、稳定、易崩解、难崩解、肠溶化、易吸收等修饰。
关于上述剂型，可以采用人们熟知的给药系统(DDS)技术。本说明书所述的DDS制剂是指处方化制剂，局部适用制剂(糖锭、圆片形锭、舌下锭等)，控制药物释放制剂、肠溶制剂和胃溶性制剂等，给药途径，生物药效率，副作用等都加以考虑的是指最适宜的制剂形态的制剂。
DDS的基本构成要素有药物、药物释放的模数、数量和治疗方案构成，至于各构成要素，特别是停止释放时能使血中浓度迅速下降的半减期短的药物最好，给药部位的生体组织不反应的量最好，再有，设定期间中维持最佳的药物浓度的治疗方案最好。药物释放的模数基本上有药物储藏库、释放控制部、能源及放出孔或释放表面。这些基本构成要素不必完全齐备，可以适当增加或减少，可以选择最佳的情况。
DDS中可以使用的材料有高分子材料、环化糊精诱导体、卵磷脂等。高分子材料有不溶性高分子材料(聚硅酮、乙烯-醋酸乙烯酯的共聚物、乙烯-乙烯醇的共聚物、乙基纤维素、醋酸纤维素等)，水溶性高分子材料和羟基凝胶形成的高分子(聚丙烯酰胺、聚羟基甲基丙烯酸乙酯交联体、聚丙烯交联体、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、水溶性纤维素衍生物、交联泊洛沙姆、甲壳质、壳聚糖等)、缓溶性高分子(乙基纤维素、甲基乙烯基醚-无水马来酸共聚体的部分酯等)、胃溶性聚合物(羟基丙基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、焦糖钠、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯甲基丙烯酸甲酯共聚物等)、肠溶性聚合物(羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素、丙烯酸类聚合物等)、生物分解性聚合物(热凝固或交联的白蛋白、交联的明胶、胶原、纤维蛋白、聚丙烯酸氰酯、聚乙二醇、聚乳酸、聚-β-羟乙酸、聚己内酯等)，可根据剂型适当选择。
特别是，聚硅酮、乙烯-醋酸乙烯酯共聚合体、乙烯-乙烯基乙醇的共聚合体、甲基乙烯基醚-无水马来酸共聚合体的部分酯可以用于药物释放的控制，醋酸纤维素可以用作浸透压泵的材料，乙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、甲基纤维素可以用作缓释剂的膜材料，聚丙烯基交连体可以用作口腔粘膜或眼粘膜附着剂使用。
其次，根据剂型(口服剂、注射剂、座剂、等人们熟知的剂型)，在制剂中可以加入溶剂、赋形剂、包衣剂、基剂、结合剂、润滑剂、分散剂、助溶剂、悬浊化剂、粘稠剂、乳化剂、稳定剂、缓冲剂、等渗剂、无痛化剂、保存剂、矫味剂、芳香剂、着色剂等。
本发明举出各种具体例子加以说明，但是对这些并没有特别的限制。
精制水、注射用水、生理盐水、花生油、酒精、甘油，[赋形剂]淀粉类、乳糖、葡萄糖、白糖、结晶纤维素、硫酸钙、碳酸钙、滑石、二氧化钛、岩藻糖、木糖醇、[包衣剂]白糖、明胶、醋酸、邻苯二酸、纤维素以及上述高分子，〔基剂〕凡士林、植物油、聚乙二醇、水包油乳剂性基剂、油包水乳剂性基剂，〔结合剂〕淀粉及其衍生物，纤维素及其衍生物、明胶、精氨酸钠、角豆树胶、阿拉伯树胶等天然高分子化合物、聚乙酰吡咯烷酮等的合成高分子化合物、糊精、羟基丙基淀粉，〔润滑剂〕硬脂酸及其盐类、滑石、蜡类、小麦淀粉、聚乙二醇、加氢植物油、蔗糖脂肪酸酯、聚乙烯二醇，〔分散剂〕淀粉及其衍生物、琼脂、明胶粉、碳酸氢钠、纤维素及其衍生物、焦糖钙、羟基丙基淀粉、羧甲基纤维素及其盐类、以及其偶联体、低置换型羟基丙基纤维素，〔助溶剂〕环化糊精、乙醇、丙烯二醇、聚乙烯二醇，〔悬浊化剂〕阿拉伯树胶、角豆树胶、精氨酸钠、单硬脂酸铝、柠檬酸、各种表面活性剂，〔粘稠剂〕焦糖钠、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、角豆树胶、阿拉伯树胶、精氨酸钠，〔乳化剂〕阿拉伯树胶、胆固醇、角豆树胶、甲基纤维素、各种表面活性剂、卵磷脂，〔稳定剂〕亚硫酸氢钠、抗坏血酸、生育酚、螯合剂、惰性气体、还原性物质，〔缓冲剂〕磷酸氢钠、醋酸钠、硼酸，〔等渗化剂〕氯化钠、葡萄糖，〔治痛剂〕盐酸普鲁卡因、利多卡因、苄基醇，〔保存剂〕苯甲酸及其盐类、对氧苯甲酸酯类、氯代丁醇、逆性石碱、苄基醇、酚、thyromesale、〔调味剂〕白糖、糖精、甘草精、山梨醇、木糖醇、甘油、〔芳香剂〕橙皮酊、玫瑰油、〔着色剂〕水溶性食用色素、色淀染料。
实施例以下是关于本发明的新型清除蛋白受体用实施例依次作详细的说明，但是当然不可以用这些实施例的揭示内容对本发明做出限定的解释。
就是，EST数据库的检索(实施例1)，筛选用探针的制作(实施例2)，来自人胎盘的cDNA文库的筛选(实施例3)，新型人清除蛋白受体的碱基序列的确定(实施例4)，和新型小鼠清除蛋白受体的cDNA的获得(实施例5)，其次，瞬间表达新型人清除蛋白受体的转染体的利记博彩app(实施例6和7)，稳定表达新型人清除蛋白受体转染体的利记博彩app(实施例8和9)，新型人清除蛋白受体的结合特异性的验证(实施例10)，贪食能力的证明(实施例11)，然后，血管内皮细胞中表达的证明(实施例12)，因为对以上这些结果都做了举例证明，以下加以说明。
实施例1EST数据库的检索通过比较已知的共同凝集素，即人MBP，人SP-A和人SP-D的氨基酸序列(参看图2和3，图中，确认相同的氨基酸残基部分已用方框圈起)对分子间保守性高的区域进行检索。结果表明人MBP的氨基酸序列中从第220号到第246号的27个氨基酸(图3，白框圈出部分，SEQ ID NO5)的保守性高，做成几个相当于这一区域的相似顺序，并进行EST(Expressed Sequence Tags)数据库检索。使用的EST数据库是1996年10月11日的，含676750条顺序。
结果得到了数个含有和上述27氨基酸的序列同源性高的氨基酸序列。对所得数据的氨基酸序列进行GenBank/EST数据库检索，以判定各是已知或未知的物质，相似顺序为Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Met-Tyr-Thr-Asp-Gly-Lys-Trp-Asn-Asp-Arg-Asn-Cys-Leu-Gln-Ser-Arg-Leu-Ala-Ile-Cys-Glu-Phe(SEQ ID NO6)，用此氨基酸序列检索时得到的顺序中，得到了两个数据，它们含有同源性高的未知氨基酸序列(登录号W72977和R74387)。它们分别来自胎盘和胎儿心脏，它们是显示新型共同凝集素的碱基序列的一部分的克隆。
所以，这中间，购自ATCC(American Type Culture Collection)的来自胎儿心脏的克隆(I.M.A.G.E.Consortium Clone ID 34472)，被用来制作为筛选以下新型清除蛋白受体所用的探针。
实施例2筛选用探针的制作用引物(Parmacia公司制M13 Universal Primer(SEQ ID NO7，5′-荧光素-cgacgttgtaaaacgacggccagt-3′)和M13反向引物(SEQ ID NO8，5′-荧光素-caggaaacagctatgac-3′))测定了上述克隆的插入DNA碱基序列。
将这一碱基序列的读码框和共同凝集素的氨基酸序列作比较，由此得出可以读取的相当于氨基酸序列的碱基序列，使用Applied Biosystems公司制造的392A DNA/RNA合成仪制作了相当于这一部分的地高辛(DIG)标记的cDNA探针用的引物(反向引物，caatctgatgagaaggtgatg(SEQ ID NO9)和正向引物，acgaggggctggatgggacat(SEQ ID NO10)。用PCR DIG探针合成试剂盒(Bohringer-Manheim公司制)进行了DIG标记。反应组成如下，质粒DNA(克隆W72977，50ng/ul)2μl(100ng)，10x缓冲液5μl，25mM MgCl25μl，dNTP(PCR标记混合物)5μl，20mM反向引物2.5μl，20mM正向引物5μl，H2O28μl，Taq聚合酶0.5μl)。用阿透公司生产的PCR仪进行PCR反应，92℃ 1分钟，55℃ 1分钟，72℃ 2分钟，循环35次。
实施例3人胎盘cDNA文库的筛选首先，用以下方式进行了人胎盘的噬菌体cDNA文库的效价测定.用mLB培养基(含10mM MgSO4和0.2％麦芽糖的LB培养基(1g胰酶水解胨，0.5g酵母提取物，0.5g NaCl/100ml)在37℃培养了16小时的大肠杆菌(Escherichia coli)Y1090r-0.2ml用SM缓冲液(5.8g NaCl、2g MgSO4.7H2O、2M Tris-HCl(pH 7.5)25ml、5ml 2％明胶/L)阶段稀释了的cDNA文库0.1ml 37℃培养15分钟，然后加入2.5ml LB-上层琼脂糖(0.75％琼脂糖/LB培养基)并混合均匀，倒在90mm直径的LB培养基平板(岩城硝子公司制)(1.5％琼脂/LB培养基)。室温下15分钟令其固化，42℃保温5小时，将各平板的噬斑计数后，通过计算求出噬菌体的数据。结果数据是2.1×1010pfu/ml。就这样测定了效价的cDNA文库，利用实施例2制作的探针按以下过程进行了筛选。
用mLB培养基37℃培养了16小时的大肠杆菌(Escherichia coli)Y1090r-0.6ml和用SM缓冲液稀释的cDNA文库1×105pfu 37℃保温15分钟，然后加入7.5ml LB上层琼脂糖(0.75％琼脂糖)并混合均匀。将它铺在140mm2LB培养基方形平板(日水制药社制)上，制作10个平皿，室温15分钟使之固化，42℃培养5小时。确认噬斑形成后，再复印至尼龙膜上。用Nytran 13N(Schleicher and Schuell Co.)进行复印。将12.5cm×9.0cm滤膜在蒸馏水中浸10分钟润湿，然后在Whatman 3MM纸上除去多余水分，将滤膜放在形成了噬斑的平板上。放置2分钟后，剥下滤膜，风干10分钟。用0.2MNaOH/1.5M NaCl将噬菌体DNA变性2分钟，用0.4M Tris-HCl(pH7.6)/2xSSC中和2分钟，用2xSSC洗净2分钟。然后用GS GENE LINKER(Bio-Rad制)进行紫外线照射，将噬菌体DNA固定在滤膜上。杂交和信号的检出按以下方法进行。用2xSSC将滤膜浸湿，用Whatman 3MM纸除去多余水分，移入杂交袋和杂交溶液(5xSSC，1％封闭剂，0.1％N-月桂酰肌氨酸，0.02％SDS)68℃预杂交1小时。接下来除去袋中的杂交溶液，袋中加入含DIG标记的cDNA探针10ng/ml的杂交溶液，55℃杂交16小时。杂交终了后，将滤膜用2xSSC/0.1％SDS溶液室温洗涤5分钟，洗2次，55℃下，用0.5xSSC/0.1％SDS溶液洗15分钟，洗2次。然后用DIG缓冲液I(100mMTris-HCl，150mM NaCl(pH7.5))处理1分钟，除去SDS，用DIG缓冲液II(1％封闭剂，DIG缓冲液I)处理30分钟将滤膜封闭。用DIG缓冲液I洗1分钟，然后加入用DIG缓冲液II稀释5000倍的碱性磷酸酶标记抗体(Bohringer-Manheim公司制)溶液，室温进行30分钟抗体反应之后，用DIG缓冲液I室温下洗15分钟，洗2次。用DIG缓冲液III(100mM Tris-HCl，100mM NaCl(pH 9.5)，50mM MgCl2)处理3分钟提高Mg2+的浓度，当加入NBT/BCIP(和光纯药社制)的DIG缓冲液III显色时，得到了10个阳性克隆。从平板上把相当于这些克隆的噬斑切下来加到装了1mlSM缓冲液的试管中，搅拌10分钟后用SM缓冲液作阶段稀释，将此稀释液0.1ml和用mLB培养基37℃培养了16小时的大肠杆菌(Escherichia coli)Y1090r-0.2ml混合，37℃培养15分钟。然后将混合液加到2.5ml LB-上层琼脂糖中并混合均匀，铺在90mm直径的LB培养基平板上面，制作10个平板，室温15分钟令固化，42℃培养5小时，得到了几个噬斑，与第一次筛选一样地进行了第二次筛选。
实施例4新型人清除蛋白受体碱基序列的测定从平板上切出第二次筛选得到的阳性克隆中被认为是合适的克隆的噬斑，加到装入了200μl蒸馏水的试管中，室温搅拌30分钟之后，15000rpm离心分离5分钟得到上清。以得到的上清作模板，用TaKaRa LA PCR Kit Ver.2(保酒造社制)，通过PCR扩增插入的DNA。PCR反应的组成如下(上清27μl，10x LA PCR缓冲液II(不含Mg2+)5μl，25mM MgCl25μl，dNTP混合物8μl，20uM lgtII反向引物(SEQ ID NO11，5′-ttgacaccagaccaactggtaatg-3′)2.5μl，20uM λgt11正向引物(SEQ ID NO12，5′-ggtggcgacgactcctggagcccg-3′)2.5μl，LA Taq聚合酶0.5μl，H2O添加至总体积50μl)。使用Applied Biosystem公司制的Gene Amp PCR系统9600进行PCR反应，98℃20秒，68℃5分钟为一循环，进行30循环。PCR产物经1％琼脂糖电泳确认后，从凝胶切出精制。精制时使用了Pharmacia公司生产的Sephaglas Band Prep Kit试剂盒。
切出的DNA片段被重组进了Invitrogen公司生产的TA克隆试剂盒的pCR2.1载体。重组的载体被转化进了Invitrogen公司生产的TA克隆试剂盒含有的TOP10F′细胞。用LB培养基(100μg/ml氨苄青霉素)培养转化体，用碱SDS法抽出了各克隆含有的3种质粒DNA。
用限制酶切断被认为合适的所得的DNA，将各DNA片段重组进了pUC18载体，转化进了XL1-Blue细胞。用LB培养基(100μg/ml氨苄青霉素)培养转化体，用碱SDS法抽出质粒。由CL-P1-2-1得到了含EcoR I-Hind III片段、HindIII-EcoR I片段的质粒，由CL-P1-3-4得到了含EcoR I-BamH I片段、BamH I-Sma I片段、Sma I-Hind III片段、Kpn I-Sau3A I片段、Sau3A I-EcoR I片段、EcoR I-Kpn I片段、EcoR I-Sma I片段的质粒，由CL-P1-3-7得到了含EcoR I-BamH I片段、BamHI-Sma I片段、Sma I-Hind III片段、Kpn I-Sau3A I片段、Sau3AI-EcoR I片段、EcoR I-Kpn I片段、Kpn I-EcoR I片段的质粒。使用AutoReadSequening Kit(Pharmacia公司生产)带有的M13 Universal Primer(SEQ ID NO7)、M13Reverse Primer(SEQ ID NO8)和用DNA/RNA合成仪作成的FITC(Pharmacia公司生产FluorePrime)标记的以下引物，用Pharmacia公司生产的AutoRead SequencingKit和A.L.F.自动合成仪测定了全部的碱基序列。
HPP 15′-荧光素-cgtgaaaatgaatggaagtgg-3′(SEQ ID NO13)、HPP 25′-荧光素-ttttatccattgctgttcctc-3′(SEQ ID NO14)、HPP 35′-荧光素-ctggcagtccccgaggtccag-3′(SEQ ID NO15)、HPP 55′-荧光素-gctggtccccccggagagcgt-3′(SEQ ID NO16)。
以上实施的顺序测定的概略示于图4。图4(a)表示获得的清除蛋白受体的共同凝集素构造部分的ORF，其中的G-X-Y(G表示甘氨酸，X和Y可以是任何一种氨基酸残基)表示类似胶原蛋白区。然后，图4(b)表示上述各引物的名称，用顺序仪读取的碱基序列(用箭形符号表示)以及M13 Universal primer(用U表示)和M13 Reverseprimer(用R表示)。
其次，用Cap Site cDNA，决定了含有此顺序的转录开始点的5′末端区的碱基序列。
根据Cap Site cDNA人肝(NIPPON GENE公司生产)使用添上的IRC2 Primer(5′-caaggtacgccacagcgtatg-3′(SEQ ID NO17)和用Applied Biosystems公司生产的392ADNA/RNA合成仪合成的TGP1 Primer(5′-tcttcagtttccctaatccc-3′(SEQ ID NO18))进行第一次PCR。反应混合物总液量50μl，含有LA PCR BufferII(不含Mg2+)、2.5mMMgCl2、各200μM的dATP、dCTP、dGTP和dTTP(以上保酒造社制)1μlCap SitecDNA Human Liver，0.5μM IRC2 Primer(以上NIPPON GENE公司生产)以及0.5μMTG P1 Primer。PCR的条件为，热变性95℃20秒，60℃退火20秒，伸长反应72℃20秒，进行35个循环，再，包括重复反应前95℃热变性5分钟，最后72℃伸长反应10分钟。第一次PCR终了后，进行嵌套PCR。取第一次PCR产物1μl做模板，引物用添上的2RC2引物(5′-gtacgccacagcgtatgatgc-3′(SEQ ID NO19))及合成的TGP2引物(5′-cattcttgacaaacttcatag-3′(SEQ ID NO20))(用和合成TGP1 Primer同样的方法合成)，用和第一次PCR相同的反应组成、条件(但是循环次数为25次)进行。以上的PCR反应用保酒造社生产的TaKaRa PCR Thermal Cycler 480进行。得到的PCR产物经琼脂糖电泳确认后，从凝胶中切出条带，-80℃冻结10分钟，15000rpm离心分离10分钟后，取上清用酒精沉淀精制。
将精制的DNA片段重组进了Novagen公司生产的pT7Blue Vector，将此载体转化进了感受态细胞XL1-Blue。用LB培养基(100μg/ml氨苄青霉素)培养转化体，用碱SDS法抽出质粒，用Pharmacia公司生产的AutoRead Sequencing Kit和A.L.F.DNA Sequencer测定了碱基序列。引物用AutoRead Sequencing Kit附带的M13Universal Primer(SEQ ID NO7)和M13 Reverse Primer(SEQ ID NO8)。
然后，为了确认N末端，合成了得到的cDNA克隆N末端部分的顺序上游方向的引物5′-atcttgctgcagattcgtgac-3′(SEQ ID NO21)，对胎盘来的cDNA文库(Clontec公司生产)进行了筛选。筛选用合成的上游方向的引物5′-atcttgctgcagattcgtgac-3′(SEQID NO21)和载体上含有的一部分引物λgt11 5′测序引物5′-gactcctggagcccg-3′(SEQ IDNO22)进行PCR。配制的反应液含2.5mM MgCl2、1xLA PCR Buffer II(不含Mg2+)、2U TaKaRa LA Taq、2种引物5′-atcttgctgcagattcgtgac-3′(SEQ ID NO21)、λgt11 5′测序引物5′-gactcctggagcccg-3′(SEQ ID NO22)各0.2μM、胎盘来的cDNA文库1μl、加水至总量50μl、94℃2分钟进行一个循环、94℃30秒、60℃30秒、72℃1分30秒进行50个循环。
将得到的cDNA用琼脂糖凝胶电泳分离，用溴化乙锭溶液(0.1μg/ml)染色、用紫外线灯确认电泳图形，发现相当于约600bp的插入顺序被扩增了出来。因此将此扩增的部分从琼脂糖凝胶切出、-80℃冻结10分钟、15000rpm离心分离10分钟后，取上清，用酒精沉淀精制。将精制的DNA片段重组进Novagen公司生产的pT7BlueVector，将此载体转化进了大肠菌XL1-Blue的感受态细胞。用LB培养基(50μg/ml氨苄青霉素)培养转化体，用碱SDS法抽出质粒，用PE Applied Biosystems公司生产的DNA Sequencing Kit和序列分析仪ABI PRISM 377测定了碱基序列。引物用Pharmacia公司生产的AutoRead Sequencing Kit附带的M13 Universal Primer(SEQID NO7)和M13 Reverse Primer(SEQ ID NO8)。
已弄清楚，得到的碱基序列是比N末端一侧的604碱基更长的顺序。由以上结果确认，这里得到的hSRCL-P1的cDNA含有2628碱基，具有2226碱基的ORF(翻译解读框)(SEQ ID NO1)，SEQ ID NO2所示的742个氨基酸是编码的氨基酸。
接下来，用GenBank数据库进行DNA和氨基酸相同性的检索，得到的氨基酸序列，和以前发现的共同凝集素/清除蛋白受体终归有所不同，发现是新型的蛋白质顺序。
其次，得到了SEQ ID NO2所示的氨基酸序列的第483～606号氨基酸缺失，由SEQ ID NO23所示的碱基序列的第74～1933号得到编码的突变体(SEQ ID NO24)。
实施例5新型小鼠清除蛋白受体的cDNA的获得使用和hSRCL-P1同样的方法，进行了小鼠肝脏cDNA文库的筛选，得到了mSRCL-P1基因。所得mSRCL-P1的cDNA克隆含有2637碱基，具有2226碱基的ORF(翻译解读框)(SEQ ID NO3)，SEQ ID NO4表示的742氨基酸，可以确认是编码的氨基酸。
实施例6hSRCL-P1的瞬间表达载体pEGFP-N1-hSRC-P1的构建首先，SEQ ID NO1所示的hSRCL-P1的开始密码到终止密码，使用ccgctcgagcggtcaccatgaaagacgact碱基序列(SEQ ID NO25)做成的引物和tccccgcggtaatgcagatgacagtactgt碱基序列(SEQ ID NO26)做成的引物、以人胎盘由来的cDNA文库做模板，通过PCR(TaqKaRa公司生产TaKaRa Thermal Cycler MP)进行了扩增。将得到的hSRCL-P1 cDNA和pT7Blue T-Vector(Novagen公司生产)连接，并转化进了大肠菌XL1-Blue。由得到的克隆精制了含hSCRL-P1 cDNA的质粒。用序列分析仪确认了所得质粒的碱基序列之后，用限制酶Xho 1和Sac II消化正确无误的质粒，用同样的酶消化精制的pEGFP-N1 载体(Clontech公司生产)，进行了连接。连接的质粒被转化进大肠菌XL1-Blue之后，培养得到的克隆，精制质粒，被认为是瞬间表达载体pEGFP-N1-hSRCL-P1。
实施例7用瞬间表达系统表达hSRCL-P1用实施例6中得到的表达载体pEGFP-N1-hSRCL-P1和LIPOFECTAMINE2000(LF2000)Reagent(GIBCOBRL公司生产)，试验了在CHO细胞中瞬间表达。首先，准备了LF2000 Reagent溶液(LF2000 Reagent 12μl、Nutrient Mixture F-12 Ham(Ham′sF-12培养基(Sigma公司生产)))0.2ml，室温培养5分钟之后，和载体溶液0.2ml(pEGFP-N1-hSRCL-P1载体4μg、Ham′s F-12培养基)混合，培养20分钟。然后添加在35mm培养皿中用2ml Ham′s F-12培养基(含5％FCS)培养至高密度的CHO细胞。37℃、5％CO2下培养4小时之后，换上新培养基，再继续37℃5％CO2下培养20小时。用Olympus公司生产的倒立型系统显微镜IX70的荧光观察系统，进行GFP的荧光像的观察，以确认有无表达。这样得到的细胞被认为是瞬间表达hSRCL-P1的细胞。
实施例8制作hSRCL-P1的稳定表达细胞株用的载体pcDNA3.1/Myc-His A-hSRCL-P1的构建首先，SEQ ID NO1所示的hSRCL-P1的开始密码到终止密码中取aatgcggccgcaccatgaaagacgacttcgcagag碱基序列(SEQ ID NO27)用作引物，和取gctctagaccgcggtaatgcagatgacagtac碱基序列(SEQ ID NO28)用作引物，以来自人胎盘的cDNA文库作模板，进行了PCR(TaKaRa公司生产Takara Thermal Cycler MP)扩增。将得到的hSRCL-P1 cDNA和pT7Blue T-Vector(Novagen公司生产)连接，并转化进了大肠菌XL1-Blue。由得到的克隆精制了含hSCRL-P1 cDNA的质粒。用序列分析仪确认了所得质粒的碱基序列之后，用限制酶Not 1和Sac II消化正确无误的质粒，用同样的酶消化精制的pcDNA3.1/Myc-His A载体(Invitrogen公司生产)，进行了连接。连接的质粒被转化进大肠菌XL1-Blue之后，培养得到的克隆，精制质粒，被认为是稳定表达载体pcDNA3.1/Myc-His A-hSRCL-P1。
实施例9hSRCL-P1的稳定表达细胞株的制成用实施例8中得到的表达载体pcDNA3.1/Myc-His A-hSRCL-P1和LIPOFECTAMINE 2000(LF2000)Reagent(GIBCOBRL公司生产)，试验了hSRCL-P1的稳定表达。首先，准备了LF2000 Reagent溶液0.5ml(LF2000 Reagent 30μl、Ham′sF12培养基)，室温培养5分钟之后，和载体溶液0.5ml(载体10μg、Nutrient MixtureF-12 Ham(Ham′s F-12培养基)(Sigma公司生产))混合，培养20分钟。然后添加在25cm3摇瓶中用5ml Ham′s F-12培养基(含5％FCS)培养至高密度的CHO细胞。37℃、5％CO2下培养4小时之后，换上新培养基，再继续37℃5％CO2下培养20小时。然后将培养基换用Ham′s F-12培养基(含5％FCS、0.4mg/ml Geneticin(GIBCOBRL公司生产))，接着培养10天。中间更换一次培养基。
通过此10天的药物选择，只有转化的细胞生存并增殖，而非转化细胞死亡了。为了从得到的转化细胞中获得高表达的细胞，使用细胞分选仪(Becton Dikinson公司生产)进行分选。首先将细胞表面表达了hSRCL-P1的细胞进行染色。用5ml PBS(-)洗转化的25cm3摇瓶的细胞两次之后，用EDTA solution 0.02％(Nakalitesk公司生产)0.3ml将细胞剥下，悬浮在10ml PBS(-)中，4℃下、200xg离心7分钟，除去上清。添加用2％FCS/PBS(-)稀释10倍的抗myc抗体(Invitrogen公司生产)50μl到剩下的细胞，将细胞好好地悬浮之后，4℃下培养20分钟。然后，添加2％FCS/PBS(-)10ml并悬浮之后，4℃下、200xg离心7分钟，除去上清，洗净细胞。在剩下的细胞中添加用2％FCS/PBS(-)稀释10倍的第二抗体Alexa488标记抗小鼠IgG(H+L)溶液50μl，将细胞好好地悬浮之后，4℃下培养20分钟。然后，添加2％FCS/PBS(-)10ml并悬浮之后，4℃下、200xg离心7分钟，除去上清，洗净细胞。剩下的细胞悬浮在2％FCS/PBS(-)0.5ml中，作为分选的样本。将样本通过细胞分选仪附带的5ml试管(Becton Dickson公司生产)然后加到细胞分选仪上。同样方法处理没有转化的CHO细胞作为对照样本，选出比对照样本荧光强度高10倍的细胞。取96孔细胞培养平板，每孔放入100μl Ham′s F-12培养基(含5％FCS、0.4mg/ml Geneticin)和平均放入一个细胞。37℃、5％CO2下进行培养，培养一周后，再每孔加100μl培养液，继续培养一周。由于用Geneticin的药物选择作用，将增殖起来的克隆分成两份，在12孔和24孔细胞培养用平板中继代培养。这时，除了一个孔中由二个以上细胞增殖的克隆以外，以9∶1的细胞比播种于12孔和24孔细胞培养用平板。37℃、5％CO2下进行培养，当12孔平板的细胞达到高密度时，再将每个克隆与分选时同样的方法染色后送入FACSCalibur(Becton Dickinson公司生严)，测定表达量。确认了表达量高的克隆之后，取分别对应的24孔平板的细胞作为稳定表达细胞株(CHO/hSRCL-P1)。
实施例10hSRCL-P1的结合特异性用实施例9得到的稳定表达细胞株(CHO/hSRCL-P1)试验了hSRCL-P1对(1)酵母(Zymosan A Bioparticles、Molecular Probes公司生产)、革兰氏阴性细菌(Escherichiacoli Bioparticles、Molecular Probes公司生产)或革兰氏阳性细菌(Staphylococcus aureusBioparticles、Molecular Probes公司生产)、(2)氧化LDL(2.0mg/ml LDL添加50μMCuSO4反应24小时，再对PBS(-)透析过)、(3)AGE-HAS(AGE-人血清白蛋白、按照Ikeda，K.等人.，Biochemistry 35(24)，8075-8083(1996)的方法处理)、或者(4)甘露糖(α-D-甘露糖BP-探针，生化工业社生产)或岩藻糖(α-L-岩藻糖BP探针、生化工业社生产)的结合特异性。
首先，1×105CHO/hSRCL-P1细胞播种于35mm平皿(松浪玻璃公司生产)中，37℃、5％CO2下培养3天。培养在2ml Ham′s F-12培养基(含5％FCS、0.4mg/mlGeneticin)中进行。3日后用含2％ FCS的Minimum Essential Medium AlphaMedium(αMEM/2％FCS)1ml洗两次，然后添加含有25μg/ml酵母、25μg/ml革兰氏阴性细菌、25μg/ml革兰氏阳性细菌、5μg/ml氧化LDL、10μg/ml AGE、或10μg/ml甘露糖或10μg/ml岩藻糖的αMEM/2％FCS各1ml，4℃下反应3小时，然后用1ml αMEM/2％FCS洗5次。
用以下方法确认结合。首先，关于(2)、(3)和(4)，分别添加抗氧化磷酸乙酰胆碱抗体(2)，抗HSA抗体(BIOSYS公司生产)(3)，streptavidin，Alexa594 conjugate(molecularProbes公司生产)(4)各用αMEM/2％FCS稀释100倍的溶液1ml，然后4℃培养30分钟，之后，用1ml αMEM/2％FCS洗3次。其次，从(1)到(4)全部都添加4％多聚甲醛/PBS(-)溶液0.2ml，室温培养20分钟进行固定，用1ml TBSC(宝酒造社制TBS(Tris-Buffered Saline)其中添加了粉末状CaCl2并用灭菌蒸馏水调整最终浓度为5mM)洗3次。然后，关于(2)和(3)，与第二抗体进行反应。这就是说分别添加用25％BlockAce(大日本制药社制)/TBS稀释200倍的若丹明标记抗小鼠IgM Muchain(Chemicon International公司生产)(2)和Alexa 594抗山羊IgG(H+L)(MolecularProbe公司生产)(3)溶液1ml，接着室温培养30分钟，然后用1ml TBSC洗3次。然后用SlowFade Light Antifade Kit(Molecular Probe公司生产)将(1)到(4)装片，在荧光显微镜下观察样本。使用Olympus公司生产的倒立型系统显微镜IX70的荧光观察系统进行荧光像的观察。分别地将(1)的结果表示于图5(A酵母、B革兰氏阴性细菌(Escherichia coli)、和C革兰氏阳性细菌(Staphylococcus aureus))(2)到(4)的结果表示于图6(A氧化LDL、B甘露糖、和CAGE)。这些图清楚地表明，所有(1)到(4)，在稳定表达hSRCL-P1的CHO细胞上，都能观察到特异的结合像，使用微生物的图5 A到C中显示的结果，hSRCL-P1的染色的地方(各左图，绿色染色)和各种微生物存在的地方(各中央图，红色染色)是重叠的(Overlap，各右图)，表明了各种微生物对hSRCL-P1的特异结合。
还有，在瞬间表达hSRCL-P1的细胞上(参见实施例7)，也同样得到显示特异结合的结果。
实施例11借助于hSRCL-P1的吞噬作用结合物被摄入细胞内用实施例7和9得到的hSRCL-P1的瞬间表达细胞和稳定表达细胞株，观察了实施例10中所用的各种结合物的细胞内摄取。改良了实施例10中记载的方法，与结合物反应温度用37℃，确认了结合物的摄入。染色后，用Olympus公司生产的共焦点激光显微镜，通过三维图像处理，观察了向细胞内摄取的状态。用瞬间表达细胞对酵母得到的结果，表示于图7，证明了酵母(红色染色)被摄取进表达hSRCL-P1(绿色染色)的细胞内。并且，用稳定表达细胞株也得到了同样的结果。
实施例12用血管内皮细胞证明SRCL-P1的表达为了确认hSRCL-P1的组织内表达的部位，使用来自健康人和小鼠心脏的石腊包埋切片(Novagen公司生产)，按照以下的操作，做了荧光免疫染色。
在石腊包埋切片载片的染色瓶中，在二甲苯中室温下浸泡10分钟，浸3次，进行脱石腊处理。然后在室温下在100％-90％-80％-70％酒精中顺次各浸10分钟，在PBS(-)溶液中浸10分钟，进行水合作用。
其次，为了抑制组织切片中内因性过氧化物酶活性，将切片在含有3％过氧化氢的PBS(-)溶液中室温下浸泡10分钟，然后室温下浸泡在封闭剂(大日本制药社制)中1小时，进行封闭处理。
接下来在保湿箱中，将抗hSRCL-P1家兔多克隆抗体(IgG部分、100μg/ml)100μl作为第一抗体，涂布在组织切片上，室温下反应30分钟。在染色瓶中将第一抗体浸在洗净液(Tris-HClpH7.5，0.15M NaCl，0.05％Tween20)中，室温下缓慢振荡10分钟，洗3次，然后与作为第二抗体的POD(过氧化物酶)标记抗家兔IgG羊抗体(Boehringer Mannheim公司生产)以5U/ml浓度，和第一抗体时同样地反应，并洗净。然后将Biotinyl Tyramide Amplification Reagent(NEN(商标名)、Life Science Products公司生产)涂布在切片上，室温反应10分钟，和第一抗体时同样地洗净。Avidin AlexaFluor(商标名)488 conjugate(Molecular Products公司生产)1mg/ml，用PBS(-)溶液稀释100倍，取此溶液100μl，在保湿箱中涂布在载玻片上的组织切片上，室温下反应30分钟，和第一抗体时同样地洗净后，用Slowfade Light Antifade Kit(Molecular Products公司生产)装片，用荧光显微镜(Nikon公司生产)观察样本。另外用正常兔血清代替第一抗体进行反应，进行了同样处理的载玻片作为阴性对照。
这一结果，正如图8所示，A健康常人和B小鼠的，心脏血管内皮细胞染色像观察(各左图)，阴性对照的这样的染色像(各右图)则完全看不到。因此证明了SRCL-P1在心脏中在血管内皮细胞中表达，在这里表明了有关氧化LDL和AGE等与血管壁结合的可能性。
发明的效果本发明的SRCL-P1蛋白质，因为具有SR构造和共同凝集素构造，所以被认为是显示这些特有的效果的物质，有可能利用来阐明巨噬细胞和基础免疫的机能、阐明动脉硬化、糖尿病性合并症和早老性痴呆病、高β脂蛋白血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、低α脂蛋白血症、移植、动脉硬化手术和血管形成后再狭窄、阐明细菌感染症等各种疾病的发病机制，然后用于诊断、预防和治疗方法以及用于为此开发的试药和医药。
序 列 表<110>扶桑药品工业株式会社<120>新型清除蛋白受体<130>01P211WO<160>28<210>1<211>2628<212>DNA<213>智人(Homo Sapiens)<220>
<221>CDS<222>(74)..(2299)<400>1ggggggacga cttcctcggc tgcgcggcgc tcgcgcggag ctccccggcc ggcggtgcgt 60ccccacggtc acc atg aaa gac gac ttc gca gag gag gag gag gtg caa 109Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln1 5 10tcc ttc ggt tac aag cgg ttt ggt att cag gaa gga aca caa tgt acc157Ser Phe Gly Tyr Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu Gly Thr Gln Cys Thr15 20 25aaa tgt aaa aat aac tgg gca ctg aag ttt tct atc ata tta tta tac205Lys Cys Lys Asn Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser Ile Ile Leu Leu Tyr30 35 40att ttg tgt gcc ttg cta aca atc aca gta gcc att ttg gga tat aaa253Ile Leu Cys Ala Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala Ile Leu Gly Tyr Lys45 50 55 60gtt gta gag aaa atg gac aat gtc aca ggt ggc atg gaa aca tct cgc301Val Val Glu Lys Met Asp Asn Val Thr Gly Gly Met Glu Thr Ser Arg65 70 75caa acc tat gat gac aag ctc aca gca gtg gaa agt gac ctg aaa aaa349Gln Thr Tyr Asp Asp Lys Leu Thr Ala Val Glu Ser Asp Leu Lys Lys80 85 90tta ggt gac caa act ggg aag aaa gct atc agc acc aac tca gaa ctc397Leu Gly Asp Gln Thr Gly Lys Lys Ala Ile Ser Thr Asn Ser Glu Leu95 100 105tcc acc ttc aga tca gac att cta gat ctc cgt cag caa ctt cgt gag445Ser Thr Phe Arg Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg Gln Gln Leu Arg Glu110 115 120att aca gaa aaa acc agc aag aac aag gat acg ctg gag aag tta cag493Ile Thr Glu Lys Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr Leu Glu Lys Leu Gln125 130 135 140gcg agc ggg gat gct ctg gtg gac agg cag agt caa ttg aaa gaa act541Ala Ser Gly Asp Ala Leu Val Asp Arg Gln Ser Gln Leu Lys Glu Thr145 150 155ttg gag aat aac tct ttc ctc atc acc act gta aac aaa acc ctc cag589
Leu Glu Asn Asn Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val Asn Lys Thr Leu Gln160 165 170gcg tat aat ggc tat gtc acg aat ctg cag caa gat acc agc gtg ctc 637Ala Tyr Asn Gly Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln Asp Thr Ser Val Leu175 180 185cag ggc aat ctg cag aac caa atg tat tct cat aat gtg gtc atc atg 685Gln Gly Asn Leu Gln Asn Gln Met Tyr Ser His Asn Val Val Ile Met190 195 200aac ctc aac aac ctg aac ctg acc cag gtg cag cag agg aac ctc atc 733Asn Leu Asn Asn Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln Gln Arg Asn Leu Ile205 210 215 220acg aat ctg cag cgg tct gtg gat gac aca agc cag gct atc cag cga 781Thr Asn Leu Gln Arg Ser Val Asp Asp Thr Ser Gln Ala Ile Gln Arg225 230235atc aag aac gac ttt caa aat ctg cag cag gtt ttt ctt caa gcc aag 829Ile Lys Asn Asp Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val Phe Leu Gln Ala Lys240 245 250aag gac acg gat tgg ctg aag gag aaa gtg cag agc ttg cag acg ctg 877Lys Asp Thr Asp Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln Ser Leu Gln Thr Leu255 260 265gct gcc aac aac tct gcg ttg gcc aaa gcc aac aac gac acc ctg gag 925Ala Ala Asn Asn Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn Asn Asp Thr Leu Glu270 275 280gat atg aac agc cag ctc aac tca ttc aca ggt cag atg gag aac atc 973Asp Met Asn Ser Gln Leu Asn Ser Phe Thr Gly Gln Met Glu Asn Ile285 290 295 300acc act atc tct caa gcc aac gag cag aac ctg aaa gac ctg cag gac1021Thr Thr Ile Ser Gln Ala Asn Glu Gln Asn Leu Lys Asp Leu Gln Asp305 310 315tta cac aaa gat gca gag aat aga aca gcc atc aag ttc aac caa ctg1069Leu His Lys Asp Ala Glu Asn Arg Thr Ala Ile Lys Phe Asn Gln Leu320 325 330gag gaa cgc ttc cag ctc ttt gag acg gat att gtg aac atc att agc1117Glu Glu Arg Phe Gln Leu Phe Glu Thr Asp Ile Val Asn Ile Ile Ser335 340 345aat atc agt tac aca gcc cac cac ctg cgg acg ctg acc agc aat cta1165Asn Ile Ser Tyr Thr Ala His His Leu Arg Thr Leu Thr Ser Asn Leu350 355 360aat gaa gtc agg acc act tgc aca gat acc ctt acc aaa cac aca gat1213Asn Glu Val Arg Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu Thr Lys His Thr Asp365 370 375 380gat ctg acc tcc ttg aat aat acc ctg gcc aac atc cgt ttg gat tct1261Asp Leu Thr Ser Leu Asn Asn Thr Leu Ala Asn Ile Arg Leu Asp Ser385 390 395gtt tct ctc agg atg caa caa gat ttg atg agg tcg agg tta gac act1309Val Ser Leu Arg Met Gln Gln Asp Leu Met Arg Ser Arg Leu Asp Thr400 405 410gaa gta gcc aac tta tca gtg att atg gaa gaa atg aag cta gta gac1357Glu Val Ala Asn Leu Ser Val Ile Met Glu Glu Met Lys Leu Val Asp415 420 425tcc aag cat ggt cag ctc atc aag aat ttt aca ata cta caa ggt cca1405Ser Lys His Gly Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr Ile Leu Gln Gly Pro
430 435 440ccg ggc ccc agg ggt cca aga ggt gac aga gga tcc cag gga ccc cct1453Pro Gly Pro Arg Gly Pro Arg Gly Asp Arg Gly Ser Gln Gly Pro Pro445 450 455 460ggc cca act ggc aac aag gga cag aaa gga gag aag ggg gag cct gga1501Gly Pro Thr Gly Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly465 470 475cca cct ggc cct gcg ggt gag aga ggc cca att gga cca gct ggt ccc1549Pro Pro Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Pro Ile Gly Pro Ala Gly Pro480 485 490ccc gga gag cgt ggc ggc aaa gga tct aaa ggc tcc cag ggc ccc aaa1597Pro Gly Glu Arg Gly Gly Lys Gly Ser Lys Gly Ser Gln Gly Pro Lys495 500 505ggc tcc cgt ggt tcc cct ggg aag ccc ggc cct cag ggc ccc agt ggg1645Gly Ser Arg Gly Ser Pro Gly Lys Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly510 515 520gac cca ggc ccc ccg ggc cca cca ggc aaa gag gga ctc ccc ggc cct1693Asp Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Lys Glu Gly Leu Pro Gly Pro525 530 535 540cag ggc cct cct ggc ttc cag gga ctt cag ggc acc gtt ggg gag cct1741Gln Gly Pro Pro Gly Phe Gln Gly Leu Gln Gly Thr Val Gly Glu Pro545 550 555ggg gtg cct gga cct cgg gga ctg cca ggc ttg cct ggg gta cca ggc1789Gly Val Pro Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Val Pro Gly560 565 570atg cca ggc ccc aag ggc ccc ccc ggc cct cct ggc cca tca gga gcg1837Met Pro Gly Pro Lys Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Ala575 580 585gtg gtg ccc ctg gcc ctg cag aat gag cca acc ccg gca ccg gag gac1885Val Val Pro Leu Ala Leu Gln Asn Glu Pro Thr Pro Ala Pro Glu Asp590 595 600aat ggc tgc ccg cct cac tgg aag aac ttc aca gac aaa tgc tac tat1933Asn Gly Cys Pro Pro His Trp Lys Asn Phe Thr Asp Lys Cys Tyr Tyr605 610 615 620ttt tca gtt gag aaa gaa att ttt gag gat gca aag ctt ttc tgt gaa1981Phe Ser Val Glu Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala Lys Leu Phe Cys Glu625 630 635gac aag tct tca cat ctt gtt ttc ata aac act aga gag gaa cag caa2029Asp Lys Ser Ser His Leu Val Phe Ile Asn Thr Arg Glu Glu Gln Gln640 645 650tgg ata aaa aaa cag atg gta ggg aga gag agc cac tgg atc ggc ctc2077Trp Ile Lys Lys Gln Met Val Gly Arg Glu Ser His Trp Ile Gly Leu655 660 665aca gac tca gag cgt gaa aat gaa tgg aag tgg ctg gat ggg aca tct2125Thr Asp Ser Glu Arg Glu Asn Glu Trp Lys Trp Leu Asp Gly Thr Ser670 675 680cca gac tac aaa aat tgg aaa gct gga cag ccg gat aac tgg ggt cat2173Pro Asp Tyr Lys Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro Asp Asn Trp Gly His685 690 695 700ggc cat ggg cca gga gaa gac tgt gct ggg ttg att tat gct ggg cag2221Gly His Gly Pro Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu Ile Tyr Ala Gly Gln705 710 715
tgg aac gat ttc caa tgt gaa gac gtc aat aac ttc att tgc gaa aaa2269Trp Asn Asp Phe Gln Cys Glu Asp Val Asn Asn Phe Ile Cys Glu Lys720 725 730gac agg gag aca gta ctg tca tct gca tta taacggactg tgatgggatc 2319Asp Arg Glu Thr Val Leu Ser Ser Ala Leu735 740acatgagcaa attttcagct ctcaaaggca aaggacactc ctttctaatt gcatcacctt 2379ctcatcagat tgaaaaaaaa aaaagcactg aaaaccaatt actgaaaaaa aattgacagc 2439tagtgttttt taccatccgt cattacccaa agacttggga actaaaatgt tccccagggt 2499gatatgctga ttttcattgt gcacatggac tgaatcacat agattctcct ccgtcagtaa 2559ccgtgcgatt atacaaatta tgtcttccaa agtatggaac actccaatca gaaaaaggtt 2619atcatcccg 2628<210>2<211>742<212>PRT<213>智人(Homo Sapiens)<220>
<223>从核苷酸序列推导出的新型人清除蛋白受体的氨基酸序列.
<400>2Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln Ser Phe Gly Tyr1 5 10 15Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu Gly Thr Gln Cys Thr Lys Cys Lys Asn20 25 30Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser Ile Ile Leu Leu Tyr Ile Leu Cys Ala35 40 45Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala Ile Leu Gly Tyr Lys Val Val Glu Lys50 55 60Met Asp Asn Val Thr Gly Gly Met Glu Thr Ser Arg Gln Thr Tyr Asp65 70 75 80Asp Lys Leu Thr Ala Val Glu Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Asp Gln85 90 95Thr Gly Lys Lys Ala Ile Ser Thr Asn Ser Glu Leu Ser Thr Phe Arg100 105 110Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg Gln Gln Leu Arg Glu Ile Thr Glu Lys115 120 125Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr Leu Glu Lys Leu Gln Ala Ser Gly Asp130 135 140Ala Leu Val Asp Arg Gln Ser Gln Leu Lys Glu Thr Leu Glu Asn Asn145 150 155 160Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val Asn Lys Thr Leu Gln Ala Tyr Asn Gly165 170 175Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln Asp Thr Ser Val Leu Gln Gly Asn Leu180 185 190Gln Asn Gln Met Tyr Ser His Asn Val Val Ile Met Asn Leu Asn Asn195 200 205Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln Gln Arg Asn Leu Ile Thr Asn Leu Gln210 215 220Arg Ser Val Asp Asp Thr Ser Gln Ala Ile Gln Arg Ile Lys Asn Asp225 230 235 240
Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val Phe Leu Gln Ala Lys Lys Asp Thr Asp245 250 255Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln Ser Leu Gln Thr Leu Ala Ala Asn Asn260 265 270Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn Asn Asp Thr Leu Glu Asp Met Asn Ser275 280 285Gln Leu Asn Ser Phe Thr Gly Gln Met Glu Asn Ile Thr Thr Ile Ser290 295 300Gln Ala Asn Glu Gln Asn Leu Lys Asp Leu Gln Asp Leu His Lys Asp305 310 315 320Ala Glu Asn Arg Thr Ala Ile Lys Phe Asn Gln Leu Glu Glu Arg Phe325 330 335Gln Leu Phe Glu Thr Asp Ile Val Asn Ile Ile Ser Asn Ile Ser Tyr340 345 350Thr Ala His His Leu Arg Thr Leu Thr Ser Asn Leu Asn Glu Val Arg355 360 365Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu Thr Lys His Thr Asp Asp Leu Thr Ser370 375 380Leu Asn Asn Thr Leu Ala Asn Ile Arg Leu Asp Ser Val Ser Leu Arg385 390 395 400Met Gln Gln Asp Leu Met Arg Ser Arg Leu Asp Thr Glu Val Ala Asn405 410 415Leu Ser Val Ile Met Glu Glu Met Lys Leu Val Asp Ser Lys His Gly420 425 430Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr Ile Leu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Arg435 440 445Gly Pro Arg Gly Asp Arg Gly Ser Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly450 455 460Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro465 470 475 480Ala Gly Glu Arg Gly Pro Ile Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Glu Arg485 490 495Gly Gly Lys Gly Ser Lys Gly Ser Gln Gly Pro Lys Gly Ser Arg Gly500 505 510Ser Pro Gly Lys Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Asp Pro Gly Pro515 520 525Pro Gly Pro Pro Gly Lys Glu Gly Le L Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro530 535 540Gly Phe Gln Gly Leu Gln Gly Thr Val Gly Glu Pro Gly Val Pro Gly545 550 555 560Pro Arg Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Val Pro Gly Met Pro Gly Pro565 570 575Lys Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Ala Val Val Pro Leu580 585 590Ala Leu Gln Asn Glu Pro Thr Pro Ala Pro Glu Asp Asn Gly Cys Pro595 600 605Pro His Trp Lys Asn Phe Thr Asp Lys Cys Tyr Tyr Phe Ser Val Glu610 615 620Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala Lys Leu Phe Cys Glu Asp Lys Ser Ser625 630 635 640His Leu Val Phe Ile Asn Thr Arg Glu Glu Gln Gln Trp Ile Lys Lys645 650 655
Gln Met Val Gly Arg Glu Ser His Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Glu660 665 670Arg Glu Asn Glu Trp Lys Trp Leu Asp Gly Thr Ser Pro Asp Tyr Lys675 680 685Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro Asp Asn Trp Gly His Gly His Gly Pro690 695 700Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu Ile Tyr Ala Gly Gln Trp Asn Asp Phe705 710 715 720Gln Cys Glu Asp Val Asn Asn Phe Ile Cys Glu Lys Asp Arg Glu Thr725 730 735Val Leu Ser Ser Ala Leu740<210>3<211>2637<212>DNA<213>小鼠(Mus musculus)<220>
<221>CDS<222>(92)..(2317)<400>3gacgctagga ctggaacgct gaaggctgcc atgggcgtgc agtgagagac actggtacga 60cttctccggg cggagcgtgt cctcagtcac c atg aaa gac gac ttt gca gag 112Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu1 5gaa gag gag gtg cag tcc ttc ggt tac aag agg ttt ggt att cag gag160Glu Glu Glu Val Gln Ser Phe Gly Tyr Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu10 15 20ggg aca cag tgt acc aaa tgt aaa aat aac tgg gca ctg aag ttt tcg208Gly Thr Gln Cys Thr Lys Cys Lys Asn Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser25 30 35att gta tta tta tac att ctg tgt gcc tta ctg acc atc aca gta gcc256Ile Val Leu Leu Tyr Ile Leu Cys Ala Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala40 45 50 55att ttg gga tat aaa gtt gta gag aaa atg gac aat gtc aca gat ggc304Ile Leu Gly Tyr Lys Val Val Glu Lys Met Asp Asn Val Thr Asp Gly60 65 70atg gag aca tct cac cag act tat gac aac aaa ctc act gct gtg gaa352Met Glu Thr Ser His Gln Thr Tyr Asp Asn Lys Leu Thr Ala Val Glu75 80 85agt gac ctg aag aaa tta ggg gat caa gct ggg aag aaa gct cta agt400Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Asp Gln Ala Gly Lys Lys Ala Leu Ser90 95 100acc aac tct gag ctt tct acc ttc aga tca gat att ctg gat ctc cgt448Thr Asn Ser Glu Leu Ser Thr Phe Arg Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg105 110 115caa caa ctt cag gag atc aca gaa aaa acc agc aag aac aaa gat acg496Gln Gln Leu Gln Glu Ile Thr Glu Lys Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr120 125 130 135ctg gag aag ttg caa gca aat ggg gac tca ttg gtt gat agg cag agt544
Leu Glu Lys Leu Gln Ala Asn Gly Asp Ser Leu Val Asp Arg Gln Ser140 145 150cag ctg aag gaa act ctg cag aat aat tct ttc ctc att acc acc gtc 592Gln Leu Lys Glu Thr Leu Gln Asn Asn Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val155 160 165aac aaa aca ctc cag gca tat aat ggc tat gtc aca aat ctg caa caa 640Asn Lys Thr Leu Gln Ala Tyr Asn Gly Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln170 175 180gat act agt gtg ctc cag ggc aat ctg cag agc caa atg tat tct cag 688Asp Thr Ser Val Leu Gln Gly Asn Leu Gln Ser Gln Met Tyr Ser Gln185 190 195agc gtg gtt atc atg aac ctc aac aac ctg aac cta acc cag gtt cag 736Ser Val Val Ile Met Asn Leu Asn Asn Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln200 205 210 215cag agg aac ctt atc tca aat ctg cag cag tct gtg gat gac aca agc 784Gln Arg Asn Leu Ile Ser Asn Leu Gln Gln Ser Val Asp Asp Thr Ser220 225 230ctg gcc atc cag cga att aag aat gat ttc caa aat ctg cag cag gtt 832Leu Ala Ile Gln Arg Ile Lys Asn Asp Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val235 240 245ttc ctt caa gcc aag aag gac acc gat tgg cta aag gaa aaa gta cag 880Phe Leu Gln Ala Lys Lys Asp Thr Asp Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln250 255 260agc ttg cag aca ttg gct gcc aac aac tct gcc ctg gcc aaa gcc aac 928Ser Leu Gln Thr Leu Ala Ala Asn Asn Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn265 270 275aat gac acc cta gag gat atg aat agc cag ctc agc tca ttc aca ggt 976Asn Asp Thr Leu Glu Asp Met Asn Ser Gln Leu Ser Ser Phe Thr Gly280 285 290 295cag atg gac aac att acc act atc tca cag gcc aac gag cag agc ctg1024Gln Met Asp Asn Ile Thr Thr Ile Ser Gln Ala Asn Glu Gln Ser Leu300 305 310aaa gac ctt cag gac tta cac aag gat aca gaa aat aga aca gct gtc1072Lys Asp Leu Gln Asp Leu His Lys Asp Thr Glu Asn Arg Thr Ala Val315 320 325aag ttc agc caa ctt gag gaa cgc ttc cag gtc ttt gag aca gat att1120Lys Phe Ser Gln Leu Glu Glu Arg Phe Gln Val Phe Glu Thr Asp Ile330 335 340gtg aac atc att agc aac atc agc tac aca gcc cat cac ctg agg aca1168Val Asn Ile Ile Ser Asn Ile Ser Tyr Thr Ala His His Leu Arg Thr345 350 355ctg acc agc aat ctg aat gat gtt agg acc aca tgc aca gac acc ttg1216Leu Thr Ser Asn Leu Asn Asp Val Arg Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu360 365 370 375acc aga cac acg gat gac ctg acc tcc ttg aat aac aca cta gtc aac1264Thr Arg His Thr Asp Asp Leu Thr Ser Leu Asn Asn Thr Leu Val Asn380 385 390atc cgc ttg gat tct att tct ctc agg atg cag caa gac atg atg agg1312Ile Arg Leu Asp Ser Ile Ser Leu Arg Met Gln Gln Asp Met Met Arg395 400 405tca aag tta gac act gaa gtg gcc aac tta tca gtg gtt atg gaa gag1360Ser Lys Leu Asp Thr Glu Val Ala Asn Leu Ser Val Val Met Glu Glu
410 415 420atg aaa ctg gtt gac tcc aag cac ggt cag ctc atc aag aac ttt acc1408Met Lys Leu Val Asp Ser Lys His Gly Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr425 430 435att cta caa ggt cct cct ggc ccc aga ggt cca aaa ggt gac aga gga1456Ile Leu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Arg Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly440 445 450 455tct cag gga cca cct ggt cca act ggc aac aag gga cag aaa gga gag1504Ser Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu460 465 470aag gga gag cct ggt cca cct ggc cct gcg ggt gag agg ggc aca att1552Lys Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Thr Ile475 480 485gga cca gtc ggc cct cct gga gag cgt ggc agc aaa gga tcc aaa ggc1600Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Ser Lys Gly Ser Lys Gly490 495 500tca cag ggt ccc aaa gga tct cgt ggg tcc cca ggg aag cct ggc cct1648Ser Gln Gly Pro Lys Gly Ser Arg Gly Ser Pro Gly Lys Pro Gly Pro505 510 515caa gga cct agt ggg gac cca gga cca cca ggt cca cca ggc aag gat1696Gln Gly Pro Ser Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Lys Asp520 525 530 535gga ctc cct ggc cct cag ggc cct cct ggc ttc cag gga cta cag ggc1744Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Phe Gln Gly Leu Gln Gly540 545 550act gtg ggt gag cct gga gta cct gga cct cgg ggg ttg cca ggc ttg1792Thr Val Gly Glu Pro Gly Val Pro Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Leu555560 565cca ggg gtg cca ggc atg cct ggg cct aag gga cca cct ggc cct cca1840Pro Gly Val Pro Gly Met Pro Gly Pro Lys Gly Pro Pro Gly Pro Pro570 575 580ggc ccc tca gga gca atg gag cca ttg gct ctg cag aat gaa cca acc1888Gly Pro Ser Gly Ala Met Glu Pro Leu Ala Leu Gln Asn Glu Pro Thr585 590 595cca gca tca gag gtc aac gga tgt ccg cct cac tgg aag aac ttc aca1936Pro Ala Ser Glu Val Asn Gly Cys Pro Pro His Trp Lys Asn Phe Thr600 605 610 615gat aaa tgc tac tat ttt tca ttg gaa aaa gaa att ttt gaa gat gct1984Asp Lys Cys Tyr Tyr Phe Ser Leu Glu Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala620 625 630aag ctt ttc tgt gaa gac aaa tct tcc cat ctc gtt ttc ata aac tca2032Lys Leu Phe Cys Glu Asp Lys Ser Ser His Leu Val Phe Ile Asn Ser635 640 645aga gaa gaa cag caa tgg ata aaa aag cat acc gtg ggg aga gaa agc2080Arg Glu Glu Gln Gln Trp Ile Lys Lys His Thr Val Gly Arg Glu Ser650 655 660cat tgg atc ggc ctc aca gac tca gaa cag gaa agc gaa tgg aag tgg2128His Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Glu Gln Glu Ser Glu Trp Lys Trp665 670 675cta gac ggg tca cct gtt gat tac aaa aac tgg aaa gct gga caa cca2176Leu Asp Gly Ser Pro Val Asp Tyr Lys Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro680 685 690 695
gat aac tgg ggc agt ggc cat ggg cca gga gaa gac tgt gct ggc ttg2224Asp Asn Trp Gly Ser Gly His Gly Pro Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu700 705 710att tac gca gga cag tgg aat gac ttc cag tgt gat gaa atc aat aac2272Ile Tyr Ala Gly Gln Trp Asn Asp Phe Gln Cys Asp Glu Ile Asn Asn715 720 725ttc att tgt gag aag gaa agg gag gca gta cca tca tcc ata tta2317Phe Ile Cys Glu Lys Glu Arg Glu Ala Val Pro Ser Ser Ile Leu730 735 740taacagcatg atataatagc agaaacatat tttctgatgc ctctgaaagc cgaagaatgc 2377tcgtttttga ttccatcact tctcaccaga ttgaatggaa aaagctctga aaagtagtta 2437ttcaaaataa atggacacct actgcacaat aacccaagga ctagggggct aaaatgctcc 2497cccaagttga tatattgatt tccagtgtac aaatggactg aatcgcatag attttctcag 2557ccattaacca tagaatttat gcaaagtata tctttccaaa tatggaatgc tccaatcaga 2617aaaagccaaa aaaaaaaaaa 2637<210>4<211>742<212>PRT<213>小鼠(Mus musculus)<220>
<223>从核苷酸序列推导出的新型人清除蛋白受体的氨基酸序列.
<400>4Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln Ser Phe Gly Tyr1 5 10 15Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu Gly Thr Gln Cys Thr Lys Cys Lys Asn20 25 30Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser Ile Val Leu Leu Tyr Ile Leu Cys Ala35 40 45Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala Ile Leu Gly Tyr Lys Val Val Glu Lys50 55 60Met Asp Asn Val Thr Asp Gly Met Glu Thr Ser His Gln Thr Tyr Asp65 70 75 80Asn Lys Leu Thr Ala Val Glu Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Asp Gln85 90 95Ala Gly Lys Lys Ala Leu Ser Thr Asn Ser Glu Leu Ser Thr Phe Arg100 105 110Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg Gln Gln Leu Gln Glu Ile Thr Glu Lys115 120 125Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr Leu Glu Lys Leu Gln Ala Asn Gly Asp130 135 140Ser Leu Val Asp Arg Gln Ser Gln Leu Lys Glu Thr Leu Gln Ash Asn145 150 155 160Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val Asn Lys Thr Leu Gln Ala Tyr Asn Gly165 170 175Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln Asp Thr Ser Val Leu Gln Gly Asn Leu180 185 190Gln Ser Gln Met Tyr Ser Gln Ser Val Val Ile Met Asn Leu Asn Asn195 200 205Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln Gln Arg Asn Leu Ile Ser Asn Leu Gln
210 215 220Gln Ser Val Asp Asp Thr Ser Leu Ala Ile Gln Arg Ile Lys Asn Asp225 230 235 240Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val Phe Leu Gln Ala Lys Lys Asp Thr Asp245 250 255Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln Ser Leu Gln Thr Leu Ala Ala Asn Asn260 265 270Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn Asn Asp Thr Leu Glu Asp Met Asn Ser275 280 285Gln Leu Ser Ser Phe Thr Gly Gln Met Asp Asn Ile Thr Thr Ile Ser290 295 300Gln Ala Asn Glu Gln Ser Leu Lys Asp Leu Gln Asp Leu His Lys Asp305 310 315 320Thr Glu Asn Arg Thr Ala Val Lys Phe Ser Gln Leu Glu Glu Arg Phe325 330 335Gln Val Phe Glu Thr Asp Ile Val Asn Ile Ile Ser Asn Ile Ser Tyr340 345 350Thr Ala His His Leu Arg Thr Leu Thr Ser Asn Leu Asn Asp Val Arg355 360 365Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu Thr Arg His Thr Asp Asp Leu Thr Ser370 375 380Leu Asn Asn Thr Leu Val Asn Ile Arg Leu Asp Ser Ile Ser Leu Arg385 390 395 400Met Gln Gln Asp Met Met Arg Ser Lys Leu Asp Thr Glu Val Ala Asn405 410 415Leu Ser Val Val Met Glu Glu Met Lys Leu Val Asp Ser Lys His Gly420 425 430Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr Ile Leu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Arg435 440 445Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly Ser Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly450 455 460Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro465 470 475 480Ala Gly Glu Arg Gly Thr Ile Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Glu Arg485 490 495Gly Ser Lys Gly Ser Lys Gly Ser Gln Gly Pro Lys Gly Ser Arg Gly500 505 510Ser Pro Gly Lys Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Asp Pro Gly Pro515 520 525Pro Gly Pro Pro Gly Lys Asp Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro530 535 540Gly Phe Gln Gly Leu Gln Gly Thr Val Gly Glu Pro Gly Val Pro Gly545 550 555 560Pro Arg Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Val Pro Gly Met Pro Gly Pro565 570 575Lys Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Ala Met Glu Pro Leu580 585 590Ala Leu Gln Asn Glu Pro Thr Pro Ala Ser Glu Val Asn Gly Cys Pro595 600 605Pro His Trp Lys Asn Phe Thr Asp Lys Cys Tyr Tyr Phe Ser Leu Glu610 615 620Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala Lys Leu Phe Cys Glu Asp Lys Ser Ser
625 630 635 640His Leu Val Phe Ile Asn Ser Arg Glu Glu Gln Gln Trp Ile Lys Lys645 650 655His Thr Val Gly Ara Glu Ser His Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Glu660 665 670Gln Glu Ser Glu Trp Lys Trp Leu Asp Gly Ser Pro Val Asp Tyr Lys675 680 685Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro Asp Asn Trp Gly Ser Gly His Gly Pro690 695 700Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu Ile Tyr Ala Gly Gln Trp Asn Asp Phe705 710 715 720Gln Cys Asp Glu Ile Asn Asn Phe Ile Cys Glu Lys Glu Arg Glu Ala725 730 735Val Pro Ser Ser Ile Leu740<210>5<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>迄今报道的三个共同凝集素的共有序列.
<400>5Glu Asp Cys Val Leu Leu Leu Lys Asn Gly Gln Trp Asn Asp Val Pro1 5 10 15Cys Ser Thr Ser His Leu Ala Val Cys Glu Phe20 25<210>6<211>27<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>可与新的共同凝集素杂交的修饰的共同凝集素的共有序列.
<400>6Glu Lys Cys Val Glu Met Tyr Thr Asp Gly Lys Trp Asn Asp Arg Asn1 5 10 15Cys Leu Gln Ser Arg Leu Ala Ile Cys Glu Phe20 25<210>7<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于测序的M13通用引物序列.
<400>7
cgacgttgta aaacgacggc cagt 24<210>8<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于测序的M13反向引物序列.
<400>8caggaaaca gctatgac 17<210>9<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的反向引物的序列.
<400>9caatctgatg agaaggtgat g 21<210>10<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的正向引物的序列.
<400>10acgaggggct ggatgggaca t 21<210>11<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于测序的λgt11反向引物的序列.
<400>11ttgacaccag accaac tggt aatg 24<210>12<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于测序的λgt11正向引物的序列.
<400>12ggtggcgacg actcctggag cccg 24<210>13<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的引物的序列.
<400>13cgtgaaaatg aatggaagtg g 21<210>14<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的引物的序列.
<400>14ttttatccat tgctgttcct c 21<210>15<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的引物的序列.
<400>15ctggcagtcc ccgaggtcca g 21<210>16<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于筛选新的共同凝集素的引物的序列.
<400>16gctggtcccc ccggagagcg t 21<210>17<211>21<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>用于Cap位点测序的1RC2引物的序列.
<400>17caaggtacgc cacagcgtat g 21<210>18<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于Cap位点测序的合成的TGP1引物的序列.
<400>18tcttcagttt ccctaatccc 20<210>19<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于Cap位点测序的2RC2引物的序列.
<400>19gtacgccaca gcgtatgatg c 21<210>20<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于Cap位点测序的合成的TGP2引物的序列.
<400>20cattcttgac aaacttcata g 21<210>21<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物序列.
<400>21atcttgctgc agattcgtga c 21
<210>22<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>λgt11 5’测序引物的序列.
<400>22gactcctgga gcccg15<210>23<211>2262<212>DNA<213>智人(Homo Sapiens)<220>
<221>CDS<222>(74)..(1933)<400>23ggggggacga cttcctcggc tgcgcggcgc tcgcgcggag ctccccggcc ggcggtgcgt 60ccccacggtc acc atg aaa gac gac ttc gca gag gag gag gag gtg caa 109Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln1 5 10tcc ttc ggt tac aag cgg ttt ggt att cag gaa gga aca caa tgt acc157Ser Phe Gly Tyr Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu Gly Thr Gln Cys Thr15 20 25aaa tgt aaa aat aac tgg gca ctg aag ttt tct atc ata tta tta tac205Lys Cys Lys Asn Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser Ile Ile Leu Leu Tyr30 35 40att ttg tgt gcc ttg cta aca atc aca gta gcc att ttg gga tat aaa253Ile Leu Cys Ala Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala Ile Leu Gly Tyr Lys45 50 55 60gtt gta gag aaa atg gac aat gtc aca ggt ggc atg gaa aca tct cgc301Val Val Glu Lys Met Asp Asn Val Thr Gly Gly Met Glu Thr Ser Arg65 70 75caa acc tat gat gac aag ctc aca gca gtg gaa agt gac ctg aaa aaa349Gln Thr Tyr Asp Asp Lys Leu Thr Ala Val Glu Ser Asp Leu Lys Lys80 85 90tta ggt gac caa act ggg aag aaa gct atc agc acc aac tca gaa ctc397Leu Gly Asp Gln Thr Gly Lys Lys Ala Ile Ser Thr Asn Ser Glu Leu95 100 105tcc acc ttc aga tca gac att cta gat ctc cgt cag caa ctt cgt gag445Ser Thr Phe Arg Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg Gln Gln Leu Arg Glu110 115 120att aca gaa aaa acc agc aag aac aag gat acg ctg gag aag tta cag493Ile Thr Glu Lys Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr Leu Glu Lys Leu Gln125 130 135 140gcg agc ggg gat gct ctg gtg gac agg cag agt caa ttg aaa gaa act541Ala Ser Gly Asp Ala Leu Val Asp Arg Gln Ser Gln Leu Lys Glu Thr
145 150 155ttg gag aat aac tct ttc ctc atc acc act gta aac aaa acc ctc cag 589Leu Glu Asn Asn Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val Asn Lys Thr Leu Gln160 165 170gcg tat aat ggc tat gtc acg aat ctg cag caa gat acc agc gtg ctc 637Ala Tyr Asn Gly Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln Asp Thr Ser Val Leu175 180 185cag ggc aat ctg cag aac caa atg tat tct cat aat gtg gtc atc atg 685Gln Gly Asn Leu Gln Asn Gln Met Tyr Ser His Asn Val Val Ile Met190 195 200aac ctc aac aac ctg aac ctg acc cag gtg cag cag agg aac ctc atc 733Asn Leu Asn Asn Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln Gln Arg Asn Leu Ile205 210 215 220acg aat ctg cag cgg tct gtg gat gac aca agc cag gct atc cag cga 78lThr Asn Leu Gln Arg Ser Val Asp Asp Thr Ser Gln Ala Ile Gln Arg225 230 235atc aag aac gac ttt caa aat ctg cag cag gtt ttt ctt caa gcc aag 829Ile Lys Asn Asp Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val Phe Leu Gln Ala Lys240 245 250aag gac acg gat tgg ctg aag gag aaa gtg cag agc ttg cag acg ctg 877Lys Asp Thr Asp Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln Ser Leu Gln Thr Leu255 260 265gct gcc aac aac tct gcg ttg gcc aaa gcc aac aac gac acc ctg gag 925Ala Ala Asn Asn Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn Asn Asp Thr Leu Glu270 275 280gat atg aac agc cag ctc aac tca ttc aca ggt cag atg gag aac atc 973Asp Met Asn Ser Gln Leu Asn Ser Phe Thr Gly Gln Met Glu Asn Ile285 290 295 300acc act atc tct caa gcc aac gag cag aac ctg aaa gac ctg cag gac1021Thr Thr Ile Ser Gln Ala Asn Glu Gln Asn Leu Lys Asp Leu Gln Asp305 310 315tta cac aaa gat gca gag aat aga aca gcc atc aag ttc aac caa ctg1069Leu His Lys Asp Ala Glu Asn Arg Thr Ala Ile Lys Phe Asn Gln Leu320 325 330gag gaa cgc ttc cag ctc ttt gag acg gat att gtg aac atc att agc1117Glu Glu Arg Phe Gln Leu Phe Glu Thr Asp Ile Val Asn Ile Ile Ser335 340 345aat atc agt tac aca gcc cac cac ctg cgg acg ctg acc agc aat cta1165Asn Ile Ser Tyr Thr Ala His His Leu Arg Thr Leu Thr Ser Asn Leu350 355 360aat gaa gtc agg acc act tgc aca gat acc ctt acc aaa cac aca gat1213Asn Glu Val Arg Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu Thr Lys His Thr Asp365 370 375 380gat ctg acc tcc ttg aat aat acc ctg gcc aac atc cgt ttg gat tct1261Asp Leu Thr Ser Leu Asn Asn Thr Leu Ala Asn Ile Arg Leu Asp Ser385 390 395gtt tct ctc agg atg caa caa gat ttg atg agg tcg agg tta gac act1309Val Ser Leu Arg Met Gln Gln Asp Leu Met Arg Ser Arg Leu Asp Thr400 405 410gaa gta gcc aac tta tca gtg att atg gaa gaa atg aag cta gta gac1357Glu Val Ala Asn Leu Ser Val Ile Met Glu Glu Met Lys Leu Val Asp415 420 425
tcc aag cat ggt cag ctc atc aag aat ttt aca ata cta caa ggt cca1405Ser Lys His Gly Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr Ile Leu Gln Gly Pro430 435 440ccg ggc ccc agg ggt cca aga ggt gac aga gga tcc cag gga ccc cct1453Pro Gly Pro Arg Gly Pro Arg Gly Asp Arg Gly Ser Gln Gly Pro Pro445 450 455 460ggc cca act ggc aac aag gga cag aaa gga gag aag ggg gag cct gga1501Gly Pro Thr Gly Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly465 470 475cca cct ggc cct gcg ggc tgc ccg cct cac tgg aag aac ttc aca gac1549Pro Pro Gly Pro Ala Gly Cys Pro Pro His Trp Lys Asn Phe Thr Asp480 485 490aaa tgc tac tat ttt tca gtt gag aaa gaa att ttt gag gat gca aag1597Lys Cys Tyr Tyr Phe Ser Val Glu Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala Lys495 500 505ctt ttc tgt gaa gac aag tct tca cat ctt gtt ttc ata aac act aga1645Leu Phe Cys Glu Asp Lys Ser Ser His Leu Val Phe Ile Asn Thr Arg510 515 520gag gaa cag caa tgg ata aaa aaa cag atg gta ggg aga gag agc cac1693Glu Glu Gln Gln Trp Ile Lys Lys Gln Met Val Gly Arg Glu Ser His525 530 535 540tgg atc ggc ctc aca gac tca gag cgt gaa aat gaa tgg aag tgg ctg1741Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Glu Arg Glu Asn Glu Trp Lys Trp Leu545 550 555gat ggg aca tct cca gac tac aaa aat tgg aaa gct gga cag ccg gat1789Asp Gly Thr Ser Pro Asp Tyr Lys Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro Asp560 565 570aac tgg ggt cat ggc cat ggg cca gga gaa gac tgt gct ggg ttg att1837Asn Trp Gly His Gly His Gly Pro Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu Ile575 580 585tat gct ggg cag tgg aac gat ttc caa tgt gaa gac gtc aat aac ttc1885Tyr Ala Gly Gln Trp Asn Asp Phe Gln Cys Glu Asp Val Asn Asn Phe590 595 600att tgc gaa aaa gac agg gag aca gta ctg tca tct gca tta1933Ile Cys Glu Lys Asp Arg Glu Thr Val Leu Ser Ser Ala Leu605 610 615taacggactg tgatgggatc acatgagcaa attttcagct ctcaaaggca aaggacactc 1993ctttctaatt gcatcacctt ctcatcagat tgaaaaaaaa aaaagcactg aaaaccaatt 2053actgaaaaaa aattgacagc tagtgttttt taccatccgt cattacccaa agacttggga 2113actaaaatgt tccccagggt gatatgctga ttttcattgt gcacatggac tgaatcacat 2173agattctcct ccgtcagtaa ccgtgcgatt atacaaatta tgtcttccaa agtatggaac 2233actccaatca gaaaaaggtt atcatcccg2262<210>24<211>618<212>PRT<213>智人(Homo Sapiens)<220>
<223>从核苷酸序列推导出的新的突变的人清除蛋白受体的氨基酸序列.
<400>24
Met Lys Asp Asp Phe Ala Glu Glu Glu Glu Val Gln Ser Phe Gly Tyr1 5 10 15Lys Arg Phe Gly Ile Gln Glu Gly Thr Gln Cys Thr Lys Cys Lys Asn20 25 30Asn Trp Ala Leu Lys Phe Ser Ile Ile Leu Leu Tyr Ile Leu Cys Ala35 40 45Leu Leu Thr Ile Thr Val Ala Ile Leu Gly Tyr Lys Val Val Glu Lys50 55 60Met Asp Asn Val Thr Gly Gly Met Glu Thr Ser Arg Gln Thr Tyr Asp65 70 75 80Asp Lys Leu Thr Ala Val Glu Ser Asp Leu Lys Lys Leu Gly Asp Gln85 90 95Thr Gly Lys Lys Ala Ile Ser Thr Asn Ser Glu Leu Ser Thr Phe Arg100 105 110Ser Asp Ile Leu Asp Leu Arg Gln Gln Leu Arg Glu Ile Thr Glu Lys115 120 125Thr Ser Lys Asn Lys Asp Thr Leu Glu Lys Leu Gln Ala Ser Gly Asp130 135 140Ala Leu Val Asp Arg Gln Ser Gln Leu Lys Glu Thr Leu Glu Asn Asn145 150 155 160Ser Phe Leu Ile Thr Thr Val Asn Lys Thr Leu Gln Ala Tyr Asn Gly165 170 175Tyr Val Thr Asn Leu Gln Gln Asp Thr Ser Val Leu Gln Gly Asn Leu180 185 190Gln Asn Gln Met Tyr Ser His Asn Val Val Ile Met Asn Leu Asn Asn195 200 205Leu Asn Leu Thr Gln Val Gln Gln Arg Asn Leu Ile Thr Asn Leu Gln210 215 220Arg Ser Val Asp Asp Thr Ser Gln Ala Ile Gln Arg Ile Lys Asn Asp225 230 235 240Phe Gln Asn Leu Gln Gln Val Phe Leu Gln Ala Lys Lys Asp Thr Asp245 250 255Trp Leu Lys Glu Lys Val Gln Ser Leu Gln Thr Leu Ala Ala Asn Asn260 265 270Ser Ala Leu Ala Lys Ala Asn Asn Asp Thr Leu Glu Asp Met Asn Ser275 280 285Gln Leu Asn Ser Phe Thr Gly Gln Met Glu Asn Ile Thr Thr Ile Ser290 295 300Gln Ala Asn Glu Gln Asn Leu Lys Asp Leu Gln Asp Leu His Lys Asp305 310 315 320Ala Glu Asn Arg Thr Ala Ile Lys Phe Asn Gln Leu Glu Glu Arg Phe325 330 335Gln Leu Phe Glu Thr Asp Ile Val Asn Ile Ile Ser Asn Ile Ser Tyr340 345 350Thr Ala His His Leu Arg Thr Leu Thr Ser Asn Leu Asn Glu Val Arg355 360 365Thr Thr Cys Thr Asp Thr Leu Thr Lys His Thr Asp Asp Leu Thr Ser370 375 380Leu Asn Asn Thr Leu Ala Asn Ile Arg Leu Asp Ser Val Ser Leu Arg385 390 395 400Met Gln Gln Asp Leu Met Arg Ser Arg Leu Asp Thr Glu Val Ala Asn405 410 415
Leu Ser Val Ile Met Glu Glu Met Lys Leu Val Asp Ser Lys His Gly420 425 430Gln Leu Ile Lys Asn Phe Thr Ile Leu Gln Gly Pro Pro Gly Pro Arg435 440 445Gly Pro Arg Gly Asp Arg Gly Ser Gln Gly Pro Pro Gly Pro Thr Gly450 455 460Asn Lys Gly Gln Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro465 470 475 480Ala Gly Cys Pro Pro His Trp Lys Asn Phe Thr Asp Lys Cys Tyr Tyr485 490 495Phe Ser Val Glu Lys Glu Ile Phe Glu Asp Ala Lys Leu Phe Cys Glu500 505 510Asp Lys Ser Ser His Leu Val Phe Ile Asn Thr Arg Glu Glu Gln Gln515 520 525Trp Ile Lys Lys Gln Met Val Gly Arg Glu Ser His Trp Ile Gly Leu530 535 540Thr Asp Ser Glu Arg Glu Asn Glu Trp Lys Trp Leu Asp Gly Thr Ser545 550 555 560Pro Asp Tyr Lys Asn Trp Lys Ala Gly Gln Pro Asp Asn Trp Gly His565 570 575Gly His Gly Pro Gly Glu Asp Cys Ala Gly Leu Ile Tyr Ala Gly Gln580 585 590Trp Asn Asp Phe Gln Cys Glu Asp Val Asn Asn Phe Ile Cys Glu Lys595 600 605Asp Arg Glu Thr Val Leu Ser Ser Ala Leu610 615<210>25<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于PCR扩增hSRCL-P1的引物序列.
<400>25ccgctcgagc ggtcaccatg aaagacgact 30<210>26<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于PCR扩增hSRCL-P1的引物序列.
<400>26tccccgcggt aatgcagatg acagtac tgt 30<210>27<211>35<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>用于PCR扩增hSRCL-P1的引物序列.
<400>27aatgcggccg caccatgaaa gacgacttcg cagag 35<210>28<211>32<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于PCR扩增hSRCL-P1的引物序列.
<400>28gctctagacc gcggtaatgc agatgacagt ac 3权利要求
1.一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示的742个氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ ID NO2所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO2氨基酸序列1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质。
2.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO1碱基号74-2299所示的碱基序列、编码SEQ ID NO2中氨基酸号1-742所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列。
3.一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示的氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ ID NO24所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO24氨基酸序列1-618所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质。
4.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO23碱基号74-1933所示的碱基序列、编码SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO24氨基酸号1-618所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列。
5.一种蛋白质或其衍生物或片段，所述蛋白质具有SEQ ID NO4氨基酸号1-742所示的742个氨基酸组成的氨基酸序列，或者，该蛋白质的氨基酸序列由SEQ ID NO2所示氨基酸序列中有一个或数个氨基酸缺失、置换或添加的氨基酸序列构成，且该蛋白质和具有SEQ ID NO2氨基酸序列1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同的性质。
6.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有SEQ ID NO3碱基号74-2299所示的碱基序列、编码SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示的氨基酸序列或其片段的碱基序列、或在严谨条件下与这些碱基序列或这些碱基序列的互补碱基序列杂交且编码与具有SEQ ID NO2氨基酸号1-742所示氨基酸序列的蛋白质有相同性质的蛋白质的碱基序列。
7.一种载体，其特征在于，它含有权利要求2、4或6所述的多核苷酸。
8.一种转化细胞，其特征在于，它保持了表达权利要求2、4或6所述的多核苷酸的可能。
9.一种制备蛋白质的方法，其特征在于，该方法包括培养用权利要求2或4所述的多核苷酸转化的细胞，收获产生的hSRCL-P1蛋白质的步骤。
10.一种制备蛋白质的方法，其特征在于，该方法包括培养用权利要求6所述的碱基序列转化的细胞，收获产生的mSRCL-P1蛋白质的步骤。
11.根据权利要求9或10所述的制备方法，其中细胞是大肠杆菌、动物细胞或昆虫细胞。
12.一种转基因非人动物，它的SRCL-P1基因的表达水平被改变。
13.根据权利要求12所述的转基因非人动物，其特征在于，SRCL-P1基因是编码SRCL-P1的cDNA，基因组DNA或合成的DNA。
14.根据权利要求13所述的转基因非人动物，其特征在于，通过在基因表达调节部位引起变异来改变表达水平。
15.一种剔除小鼠，其特征在于，它的mSRCL-P1基因机能缺损。
16.一种抗体，其特征在于，它是针对权利要求1、3或5中所述的蛋白质或其片段的抗体。
17.根据权利要求16所述的抗体，其特征在于，它是多克隆抗体、单克隆抗体或肽抗体。
18.一种制备针对权利要求1、3或5中所述的蛋白质或其片段的单克隆抗体的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求1、3或5所述的蛋白质或其片段给予人以外的温血动物，选择抗体效价被确认的该动物，取出脾脏或淋巴节，将它们含有的产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合，制得能产生单克隆抗体的杂交瘤。
19.一种根据权利要求16或17所述的抗体与SRCL-P1蛋白质或其片段的免疫结合来对该蛋白质或其片段进行定量的方法。
20.一种根据权利要求16或17所述的抗体与SRCL-P1蛋白质或其片段的免疫结合来对检测该蛋白质或其片段的方法。
21.一种激活剂，其特征在于，它刺激权利要求1、3或5所述的蛋白质的活性。
22.一种拮抗剂，其特征在于，它阻碍权利要求1、3或5所述的蛋白质的活性或活性化。
23.一种药物筛选方法，其特征在于，该方法使用权利要求1、3或5所述的蛋白质。
24.一种用权利要求23所述的筛选方法获得的药物。
25.一种药物筛选方法，该方法是以治疗与氧化LDL累积有关的病态为目的药物的筛选方法，其特征在于，该方法包括，通过比较在候选药物有或无的条件下权利要求1、3或5所述的蛋白质与氧化LDL的结合量来做出评价，当候选药物对该蛋白质与氧化LDL的结合有阻碍能力，则鉴定出治疗与氧化LDL累积有关的病态的药物。
26.一种用权利要求25所述的筛选方法得到的药物。
27.一种治疗与氧化LDL累积有关的病态的方法，其特征在于，用权利要求26所述的药物阻碍SRCL-P1蛋白质或其片段与氧化LDL的结合。
28.一种治疗与氧化LDL累积有关的病态的医药组合物，其特征在于，它含有权利要求26所述的药物。
29.一种药物筛选方法，该方法是治疗和细胞上结合AGE有关的病态的药物的筛选方法，其特征在于，该方法包括，通过比较权利要求1、3或5所述的蛋白质在有或无候选药物的情况下与AGE的结合量，做出评价，根据候选药物阻碍该蛋白质与AGE结合的能力，鉴定出可用于治疗与细胞上结合AGE有关的病态的药物。
30.一种用权利要求29所述的筛选方法得到的药物。
31.一种治疗与AGE结合于细胞有关的病态的方法，其特征在于，该方法包括用权利要求30所述的药物来阻碍SRCL-P1蛋白质或其片段与AGE的结合。
32.一种含有权利要求30所述的药物的医药组合物，其特征在于，它是用来治疗与AGE结合于细胞有关的病态的医药组合物。
全文摘要
本发明提供可能利用来阐明巨噬细胞和基础免疫的机能、阐明动脉硬化、糖尿病性合并症、血管形成后再狭窄、细菌感染症等的各种疾患的发病机制、及其诊断、预防和治疗方法、以及为此开发试药和医药的，具有SR构造和共同凝激素构造的新型清除蛋白受体、具有顺序号2、4或24的氨基酸顺序的蛋白质或具有和它们相同性质的蛋白质，或者，它们的衍生物或片段和含有编码这些蛋白的碱基顺序的分离的多核苷酸、和抗体、拮抗体等的关连分子。还公开了使用它们的治疗方法。
文档编号C07K14/705GK1646689SQ0180813
公开日2005年7月27日 申请日期2001年2月8日 优先权日2000年2月14日
发明者若宫伸隆 申请人:扶桑药品工业株式会社