协同治疗癌症的方法和组合物的利记博彩app

专利名称：协同治疗癌症的方法和组合物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及癌症治疗方法，具体地说，本发明涉及两种或多种具有抗增殖细胞毒性活性和抗增殖细胞抑制活性的抗癌剂的协同应用。
背景技术：
多年以来，系统给予后经血液循环系统传递至全身的抗肿瘤剂的化疗连同并且常常协同外科手术和/或放疗治疗一起，已经广泛用于治疗各种各样的癌症。遗憾的是，可应用的化疗药物经常对患者无效，因为它们杀死很多健康细胞并因此带来严重的副作用，这些副作用限制了医师可以给予的剂量。
癌性肿瘤特别难以治疗，因为它们既包含有增殖性癌细胞，又包含有非增殖性癌细胞。随着癌性肿瘤的生长，血管生成经常不能与恶性细胞群的快速增殖同步。因此，实体癌性肿瘤块通常呈现出异常的血管网络，这些血管网络与正常组织中的血管不同，它们不能为癌性肿瘤细胞最优生长提供足够的营养。就大多数癌性实体瘤而言，非增殖性肿瘤细胞占总肿瘤细胞群的大部分。而且，随着肿瘤尺寸的增大，非增殖性肿瘤细胞的比例也按比例增加。因为现有的大多数抗癌剂针对增殖细胞，所以对于单独或一起应用的放疗或化疗不能治愈肿瘤性疾病，非增殖性肿瘤细胞群已经被视为主要影响因素。
如上所述，随着肿瘤尺寸的增大，对大多数化疗来说，肿瘤通常变得更难以治愈。因此，许多肿瘤根除方法包括在给予抗肿瘤剂之前缩小肿瘤块的减少肿瘤步骤。然而，减少肿瘤步骤不是总能根除肿瘤，甚至在与有效化疗药物联合应用时也是如此。因此，本领域需要既针对增殖性癌细胞又针对非增殖性癌细胞的新型治疗来治疗恶性肿瘤。
WO 98/54966公开了使用抗肿瘤剂或放疗连同可用于治疗癌症的异戊烯蛋白转移酶抑制剂的组合疗法。但是，WO 98/54966没有公开本发明式I化合物的应用。
美国专利第6,011,029号公开了本发明式I化合物，并提供其用作抗癌剂的方法。另外，该专利从一般意义上公开了所述式I化合物可与其它癌症疗法组合使用。然而，美国专利第6,011,029号没有公开任何具体的组合治疗，也没有公开或提示起协同抗癌治疗作用的组合治疗。
因此，本发明的一个目的是提供一种治疗癌症的协同方法。
本发明的另一个目的是提供一种用于协同治疗癌症的药用组合物。
下文提供的本发明描述将使本发明的这些目的和其它目的变得更加清晰。
发明概述本发明提供一种治疗癌症的协同方法，包括给予哺乳动物协同治疗有效量的以下物质(1)至少一种选自抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂的药物，和(2)式I的化合物或其药学上可接受的盐 其中R1是Cl、Br、CN、任选取代的苯基或任选取代的2-、3-或4-吡啶基；R2是任选取代的低级烷基或任选取代的芳烷基；R3和R5每个独自为任选取代的低级烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；R4为氢或低级烷基；Z1为CO、SO2、CO2或SO2N(R5)-；而n为1或2；前提是所述细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与式I化合物同时给予或在式I化合物之前给予。
本发明进一步提供一种用于协同治疗癌症的药用组合物，其包括至少一种选自抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂的药物和式I化合物以及一种药学上可接受的载体。
在本发明的一个优选实施方案中，所述细胞毒性剂或细胞抑制剂在式I化合物给予之前给予。在本发明的另一个实施方案中，所述细胞毒性剂或细胞抑制剂与式I化合物同时给予。
附图简述

图1图示说明在裸鼠中生长的HCT116人结肠直肠实体癌模型中，绝大部分肿瘤细胞处于非增殖(G0)生长期。通过持续输注延长BrdUrd标记(24小时)鉴定皮下生长的HCT-116人结肠癌实体瘤中存在的非增殖细胞。从所述实体瘤分散获得的整个肿瘤细胞中仅有20％为BrdUrd染色阳性，BrdUrd选择性标记增殖细胞。
图2图示说明化合物2体外选择性针对非增殖HCT-116肿瘤细胞。指数生长的肿瘤细胞(第2天非汇合的高度增殖细胞)对化合物2的敏感性(IC90＝0.3μM)比稳定生长期的肿瘤细胞(第8天高度汇合的非增殖细胞)低44倍以上。
图3图示说明化合物6体外选择性针对非增殖HCT-116肿瘤细胞。指数生长的肿瘤细胞(第2天非汇合的高度增殖细胞)对化合物6的敏感性(IC90＝1.04μM)比稳定生长期的肿瘤细胞(第8天高度汇合的非增殖细胞)低约67倍。
图4图示说明化合物4体外选择性针对非增殖HCT-116肿瘤细胞。指数生长的肿瘤细胞(第2天非汇合的高度增殖细胞)对化合物4的敏感性(IC90＝1.05μM)比稳定生长期的肿瘤细胞(第8天高度汇合的非增殖细胞)低约91.2倍。
图5图示说明抗增殖剂如紫杉醇与化合物2及其同类物不同，其体外选择性针对增殖HCT-116肿瘤细胞。指数生长的癌细胞(第2天非汇合的高度增殖细胞)对紫杉醇的敏感性(IC90＝17.8nM)比稳定生长期的肿瘤细胞(第8天高度汇合的非增殖细胞)高出远超过10倍。
图6图示说明另一种类型的抗肿瘤抗增殖剂epothilone选择性针对增殖细胞。在该实施例中，指数生长的HCT116癌细胞(第2天非汇合的高度增殖细胞)对epothilone B的敏感性(IC90＝1.3nM)比稳定生长期的HCT116细胞(第8天高度汇合的非增殖细胞)高出远超过83倍。
图7显示了化合物2和紫杉醇组合化疗人结肠癌细胞系HCT116的结果。这些数据证实，使用化合物2和紫杉醇的组合疗法体外治疗HCT116癌细胞产生明显协同抗癌活性。已经表明，所述两种药物的给予顺序在决定是否获得协同作用方面很重要。首先给予紫杉醇20小时，然后在第二个20小时给予化合物2(0.33μM)，明显起协同作用，用指示浓度的所述两种药物同时治疗20小时也是如此。相反，发现化合物2(0.3μM)后接紫杉醇的组合是拮抗性的。
图8显示化合物2和化合物1组合化疗人结肠癌细胞系HCT116。这些数据证实，使用化合物2和化合物1的组合疗法体外治疗HCT116癌细胞产生明显协同抗癌活性。首先给予化合物120小时，然后在第二个20小时治疗周期给予化合物2(1μM)。
图9和10进一步图示说明使用化合物2和化合物1组合化疗的协同作用。协同作用在一定范围的化合物1和化合物2浓度获得，似乎与组合使用的每种药物的具体浓度无关。对于化合物2，1μM(图8)、0.33μM(图9)和0.11μM(图10)的浓度都与各种浓度的化合物1产生协同作用。在这些实验中，首先给予化合物120小时，然后在第二个20小时治疗周期给予化合物2。
图11显示，对于裸鼠中生长的人肿瘤异种移植物(HCT116人结肠癌)，使用化合物2和紫杉醇组合化疗获得体内协同作用。在该实验中，通过长时间静脉输注(24小时)给予125mg/kg剂量的化合物2。在化合物2输注结束时，以24mg/kg剂量腹膜内给予紫杉醇(可认为是同时给予)。
图12显示了使用化合物2和紫杉醇组合化疗对裸鼠中生长的紫杉醇抗性人肿瘤异种移植物(Pat-7人卵巢癌)的体内协同作用。同时给予紫杉醇和化合物2；紫杉醇通过静脉内途径给予，而化合物2通过腹膜内途径给予。显示的数据是最大耐受方案紫杉醇(36mg/kg，静脉内，q3dx3)；化合物2(350mg/kg，腹膜内，q3dx3)。
图13显示了使用化合物2和化合物1的组合化疗对裸鼠中生长的多药物抗性人肿瘤异种移植物(HCTVM46人结肠癌)的体内治疗协同作用。在腹膜内给予化合物2之前24小时静脉内给予化合物1。显示的数据是最大耐受方案单独的化合物1(15mg/kg，q4dx3)；单独的化合物2(400mg/kg，q4dx3)；两种药物联合应用(6mg/kg的化合物1，接着是400mg/kg的化合物2)。
图14显示了组合化合物1和化合物2体内抗裸鼠中生长的多药物抗性人肿瘤异种移植物(HCTVM46人结肠癌)的时序相关性。与上述的其它报道的时序相反，在给予化合物1前1天给予化合物2没有产生治疗协同作用。显示的数据是最大耐受方案单独的化合物1(10mg/kg，静脉内，q4dx3)；单独的化合物2(400mg/kg，腹膜内，q4dx3)；两种药物联合应用(300mg/kg的化合物2，接着是10mg/kg的化合物1)。
图15显示了化合物2和CPT-11组合化疗对裸鼠中生长的晚期(300-500mg)人结肠癌HCT116产生协同抗肿瘤活性。在给予化合物2之前1小时给予CPT-11。以最小中毒剂量(MTD)30mg/kg/inj或接近该剂量静脉内给予CPT-11。化合物2以两种不同剂量水平静脉内给予60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
图16(A)显示了吉西他滨(Gem)和化合物2组合化疗增强了对人结肠癌HT-29肿瘤生长的抑制。图16(B)显示在肿瘤消退作为肿瘤反应终点时，吉西他滨和化合物2组合治疗获得的协同抗肿瘤活性也适用。在给予化合物2之前1小时给予Gem。Gem以两种剂量水平静脉内给予24和36mg/kg/inj，Q2D×4(MTD＝36mg/kg/inj)。化合物2以两种不同剂量水平静脉内给予60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
图17(A)证实紫杉醇(Ptx1)和化合物2组合化疗就肿瘤生长来说产生了抗人结肠癌HCT116的协同抗肿瘤活性。图17(B)证实在肿瘤消退和治愈率用作肿瘤反应终点时，紫杉醇和化合物2组合治疗获得的协同抗肿瘤活性也适用。在给予化合物2之前3小时给予紫杉醇。紫杉醇以20mg/kg/inj、Q7D×4静脉内给予。化合物2以两种不同剂量水平静脉内给予40mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
图18A-18G显示了单独使用或组合使用的各种肿瘤药物的抗癌作用。结果显示化合物2和Her-1抑制剂(化合物8)在组合使用时具有体外抗Her-1激活的SAL-2癌细胞系的协同细胞毒性作用(对比图18B与图18D)。图18A在接触指示浓度的紫杉醇20小时后SAL-2细胞系的形成克隆性细胞存活率。图18B在接触指示浓度的化合物2达20小时后SAL-2细胞系的形成克隆性细胞存活率。图18C紫杉醇和Her-1抑制剂化合物8之间的拮抗作用。SAL-2细胞首先接触化合物8达20小时，然后再接触紫杉醇20小时。图18D化合物2和Her-1抑制剂化合物8之间的协同作用。SAL-2细胞首先接触化合物8达20小时，然后再接触化合物220小时。对于裸鼠中的Her-1过表达的A431人鳞状细胞癌异种移植物模型，化合物2增强Her-1(EGFR)抑制剂Iressa的抗肿瘤活性。图18EIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和化合物2(60mg/kg/inj，静脉，Q2D×5)的组合作用。在开始用化合物2治疗前3天开始Iressa治疗。图18FIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和化合物2(80mg/kg/inj，静脉，Q2D×5)的组合作用。图18GIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和紫杉醇(24mg/kg/inj，静脉，Q2D×5)的组合作用。
图19证实化合物2与Herceptin组合治疗产生抗BT474人乳腺癌细胞系的协同抗增殖活性。如图所示，在开始化合物2治疗之前2天开始Herceptin治疗。
图20图示化合物2增强他莫昔芬对裸鼠中的MCF-7雌激素依赖性人乳腺癌异种移植物模型的抗肿瘤活性。他莫昔芬以Q2D×14口服给予。如图所示，化合物2以2个疗程、Q1D×10口服给予。
图21图示化合物2增强手术阉割对裸鼠中的雄激素依赖性人前列腺癌异种移植物模型MDA-PCa-2b的抗肿瘤活性。在肿瘤移植后21天进行手术阉割。在手术阉割后3天开始化合物2和紫杉醇治疗。化合物2以Q1D×10口服给予。紫杉醇以Q2D×5静脉给予。
图22图示化合物2增强雄激素受体抑制剂Casodex对裸鼠中的雄激素非依赖性、Casodex反应型人前列腺癌异种移植物模型MDA-PCa-2b-AI的抗肿瘤活性。Casodex以Q1D×10口服给予。在Casodex治疗开始后3天开始化合物2治疗。化合物2以Q1D×10口服给予。
图23显示CDK抑制剂(CDKI)化合物9和化合物2组合产生对A2780人卵巢癌细胞的顺序依赖性体外协同细胞毒性作用。将1.5μM化合物9(无效剂量)治疗4小时与浓度逐渐增加的化合物2治疗20小时组合。在第10天记录集落形成。A图化合物2治疗前为CDKI治疗。图BCDKI治疗前为化合物2治疗。
发明详述本发明有利地提供一种协同治疗癌症的方法，包括给予其需要哺乳动物(优选为人)协同治疗有效量的以下物质(1)至少一种选自抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂的药物，和(2)式I化合物。
令人惊奇的是，发现(1)至少一种抗增殖细胞毒性剂和/或抗增殖细胞抑制剂和(2)式I化合物在组合使用时提供协同的癌症治疗方法。本文使用的术语“协同”是指用本发明方法和组合物达到的作用大于以下方法和组合物产生的作用总和即包含单独的所述细胞毒性剂或细胞抑制剂以及本发明式I化合物，其量为用于本发明所述方法和组合物的量。有利的是，所述活性成分之间的这种协同作用使得可以使用较小剂量的一种或两种活性成分、可以使用较低剂量的抗肿瘤剂或放疗、以相同的剂量提供较大的功效和/或防止或延迟形成多药物抗性。
超越以前公开方法的其它优势包括本发明的式I化合物和至少一种选自细胞抑制剂和细胞毒性剂的药物组合根据要治疗的癌细胞的性质而可以各自有所变化。还可以预期，所述组合物的治疗效果在所述细胞毒性剂或细胞抑制剂以及式I化合物的量小于它们单独给予时需要的量时就可以达到。该方法避免任何可能由于给予其量单独给予时足以达到相同的治疗效果的抗肿瘤剂或式I化合物或放疗引起的非机理型毒副作用。所述组合物达到协同治疗效果，并显现出超过任何组成化合物或方法在单独给予时的作用的意外治疗优势。
构成本发明方法的两种或多种抗癌药物的选择性程度提供的治疗优势超过先前公开的使用单一抗肿瘤剂治疗癌症的方法。特别是，使用两种或多种具有互补性的基本不重叠活性的独立药用活性组分使人们可以使用本发明治疗方法独立精确地改变组合活性，而不必合成具有特定药用活性谱的一种药物。另外，这种组合应当同时有效针对增殖细胞和非增殖细胞。
包括放疗在内的抗增殖细胞毒性剂可以与式I化合物同时给予或在式I化合物之前给予。在本发明的一个优选实施方案中，抗增殖细胞毒性剂和/或放疗在式I化合物之前给予。本文使用的术语“同时”是指抗增殖细胞毒性剂或放疗和式I化合物互相之间在24小时之内给予，优选12小时，更优选6小时，最优选3小时或更短。
除了上述抗增殖细胞毒性剂和放疗之外，还可以将使细胞变成“非增殖”或“休眠”细胞的药物(本文称为“抗增殖细胞抑制剂”或“休眠剂”)选择性地给予有需要的患者。抗增殖细胞抑制剂可与式I化合物或放疗或细胞毒性剂同时给予或序贯给予。
本发明提供协同治疗各种癌症的方法，所述癌症包括但不限于癌症，包括膀胱癌(包括快速转移性膀胱癌)、乳腺癌、结肠癌(包括结肠直肠癌)、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞和非小细胞肺癌以及肺腺癌)、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系统癌、直肠癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食道癌、胃癌、胆囊癌、子宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、Hodgkin淋巴瘤、非Hodgkin淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、组织细胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；骨髓系造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓发育异常综合征、骨髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质源肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其它肿瘤，包括黑素瘤、xenoderma pigmentosum、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎癌。
本发明最优选用于治疗快速转移性膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌和乳腺癌。
在本发明的一个优选实施方案中，提供一种协同治疗癌性肿瘤的方法。本发明的协同方法有利地减慢了哺乳动物宿主的肿瘤发展、降低其肿瘤负荷或导致其肿瘤消退。
本文使用的短语“放疗”包括但不限于由外部施用的放疗源(如光束)或植入的小放疗源传递的X射线或γ射线。也可以认为放疗是一种抗增殖细胞毒性剂。
本文使用的短语“抗肿瘤剂”与“化疗剂”同义，是指防止癌细胞增殖的化合物(即抗增殖剂)。一般而言，本发明所述抗肿瘤剂分为两类抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂。细胞毒性剂通过以下途径防止癌细胞增殖(1)干扰细胞复制DNA的能力和(2)诱导细胞死亡和/或癌细胞凋亡。抗增殖细胞抑制剂或休眠剂通过调节、干扰或抑制调节细胞增殖的细胞信号转导过程而起作用。大部分化疗剂是细胞毒性剂，针对增殖细胞。
可用作抗增殖细胞毒性剂的化合物类型包括烷化剂(包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)尿嘧啶氮芥、氮芥、环磷酰胺(Cytoxan)、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、双溴丙基哌嗪、曲他胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、亚硝脲氮芥、环己亚硝脲、链脲霉素、氮烯唑胺和Temozolomide。
抗代谢剂(包括但不限于叶酸拮抗物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、5-氟脱氧尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、戊制菌素和吉西他滨。
天然产物及其衍生物(例如长春花属生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)长春花碱、长春花新碱、长春碱酰胺、博来霉素、更生霉素、道诺红菌素、阿霉素、表柔比星、伊达比星、Ara-C、紫杉醇(紫杉醇可以商品名Taxol购买)、光辉霉素、去氧助间型霉素、丝裂霉素C、L-天冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-α)、依托泊苷和替尼泊苷。
其它的抗增殖细胞毒性剂为navelbene、CPT-11、anastrazole、letrazole、capecitabine、reloxafine、环磷酰胺、异环磷酰胺和droloxafine。
微管作用剂干扰细胞有丝分裂，其抗增殖细胞毒性活性在本领域众所周知。可用于本发明的微管作用剂包括但不限于异秋水仙碱(NSC 406042)、Halichondrin B(NSC 609395)、秋水仙素(NSC 757)、秋水仙素衍生物(例如NSC 33410)、dolastatin 10(NSC 376128)、美坦素(NSC 153858)、根胆酸(NSC 332598)、紫杉醇(Taxol，NSC125973)、Taxol衍生物(例如衍生物(例如NSC 608832))、硫代秋水仙素(NSC 361792)、三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)、硫酸长春碱(NSC49842)、硫酸长春新碱(NSC 67574)、天然和合成epothilone(包括但不限于epothilone A、epothilone B和discodermolide(参见Service，(1996)Science，2742009)、雌二醇氮芥、诺考达唑、MAP4等。所述药物的实例还描述于科技和专利文献，参见例如Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055 3064；Panda (1997)Proc.Natl.Acad.Sci USA 9410560-10564；Muhiradt(1997)Cancer Res.573344-3346；Nicolaou (1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem 27129807-29812。
本文使用的术语“紫杉醇”是指可以商品名Taxol(NSC编号125973)购买的药物。Taxol通过增强微管蛋白聚合为稳定微管束，稳定微管束不能重形成正确有丝分裂结构，而抑制真核细胞复制。在众多可用的化疗药物中，紫杉醇由于其在抗药物难治性肿瘤(包括卵巢肿瘤和乳腺肿瘤)的临床实验中的功效而引起注意(Hawkins(1992)Oncology，617-23，Horwitz(1992)Trends Pharmacol.Sci.13134-146，Rowinsky(1990)J.Natl.Canc.Inst.821247-1259)。
特别优选的抗增殖细胞毒性剂是具有紫杉醇样活性的化合物。这些化合物包括但不限于紫杉醇和紫杉醇衍生物(紫杉醇类化合物)或类似物。紫杉醇及其衍生物可由商业渠道购买。另外，制备紫杉醇以及紫杉醇类似物和衍生物的方法是本领域技术人员众所周知的(参见例如美国专利第5,569,729、5,565,478、5,530,020、5,527924、5,508,447、5,489,589、5,488,116、5,484,809、5,478,854、5,478,736、5,475,120、5,468,769、5,461,169、5,440,057、5,422,364、5,411,984、5,405,972和5,296,506号)。
因此，适用于本发明方法和组合物的抗增殖细胞毒性剂包括但不限于微管稳定剂和微管破坏剂，所述微管稳定剂如紫杉醇(也称为Taxol)、docetaxel(也称为Taxotere)、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇(公开于美国专利5,646,176号)、4-脱乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇(公开于2000年2月3日提交的USSN 60/179,965和本文的实施例17)、C-4甲基碳酸酯紫杉醇(公开于WO 94/14787)、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothilone D、脱氧epothiloneA、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7-11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(公开于WO99/02514)、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4-17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(公开于2000年2月17日提交的USSN 09/506,481和本文的实施例7和8)以及它们的衍生物。
其它合适的细胞毒性剂诸如表鬼臼毒素、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、丙卡巴肼、米托蒽醌、铂配位复合物如顺铂和卡铂、生物反应改进剂、生长抑制剂、抗激素治疗剂、甲酰四氢叶酸、替加氟和造血生长因子。
其它抗增殖细胞毒性剂包括苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜树碱、托泊替堪、比卡鲁胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚衍生物、干扰素和白介素。特别优选的抗增殖细胞毒性剂类型为EGFR抑制剂、Her-2抑制剂、CDK抑制剂和Herceptin(trastuzumab)。一些特别优选的抗增殖细胞抑制剂为紫杉醇、顺铂、卡铂、epothilone、吉西他滨、CPT-11、5-氟尿嘧啶、替加氟、甲酰四氢叶酸和EGFR抑制剂如Iressa(ZD 1839，4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉和OSI-774(4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)。
在本发明的一个实施方案中，在用本发明治疗前或治疗过程中通过用细胞抑制剂治疗，可使增殖癌细胞变成非增殖性细胞。本文使用的“细胞抑制剂”与“休眠剂”同义，是指任何减慢细胞分化和肿瘤生长速率的手段，使得所述细胞变成非增殖细胞或使得所述细胞的特性近似于非增殖细胞的特性。本发明的典型抗增殖细胞抑制剂或“休眠剂”包括但不限于激素和类固醇(包括合成类似物)17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、强的松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲基强的松龙、甲基睾丸素、强的松龙、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林。
其它适于用作细胞抑制剂的为抗生血管药物，如基质金属蛋白酶抑制剂和其它VEGF抑制剂如抗VEGF抗体，还包括小分子如ZD6474和SU6668。还可以使用Genetech的抗Her-2抗体。一种合适的EGFR抑制剂是EKB-569(一种不可逆性抑制剂)。还包括EGFR免疫特异性的Imclone抗体C225和src抑制剂。
其它适于用作抗增殖细胞抑制剂的是Casodex(比卡鲁胺，AstraZeneca)，Casodex使雄激素依赖性癌症非增殖化。细胞抑制剂的另一个实例为抗雌激素药他莫昔芬，该药物抑制雌激素依赖性乳腺癌增殖或生长。细胞增殖信号转导抑制剂为细胞抑制剂。实例为表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、Src激酶抑制剂和PDGF抑制剂。
上述细胞抑制剂还包含抗生血管药物和抗血管形成药物，它们通过中断流向实体瘤的血液剥夺其营养，使癌细胞休眠。还可以使用也使雄激素依赖性癌症非增殖化的阉割。利用非手术手段中断血流的饥饿疗法是细胞抑制剂的另一个实例。一类特别优选的抗血管形成细胞抑制剂为combretastatin。其它典型的细胞抑制剂包括MET激酶抑制剂、MAP激酶抑制剂、非受体和受体酪氨酸激酶抑制剂、整联蛋白信号转导抑制剂和胰岛素样生长因子受体抑制剂。
在本发明的优选实施方案中，所述方法需要组合给予两种或多种抗肿瘤剂。例如，本文提供的数据显示，通过在用式I化合物治疗人前列腺癌MDA-Pca-2b异种移植物之前手术阉割宿主动物，可以使人前列腺癌MDA-Pca-2b异种移植物休眠。
安全有效地给予大多数所述化疗剂的方法是本领域技术人员已知的。另外，在权威著作中也描述了其给予方法。例如，在“Physicians′Desk Reference”(PDR)，1996版(Medical Economics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)中描述了许多化疗剂的给予，所述文献公开内容通过引用结合到本文中。
优选的式I化合物为这样的化合物，其中R1为Br或CN；
R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z1为CO、SO2或SO2N(R5)-；R5为任选取代的低级烷基或任选取代的苯基；而n为1。
用于本发明方法和组合物的更优选的式I化合物为这样的化合物，其中R1为CN；R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z为CO或SO2；而n为1。
用于本发明的最优选的式I化合物为这样的化合物，其中R1为CN；R2为苄基；R3为正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4为氢；Z为SO2；而n为1。
特别用于本发明方法和组合物的式I化合物包括以下物质及其药学上可接受的盐(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(丁磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(3-甲氧基丙磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂。
特别优选(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈的甲磺酸盐用于本发明方法和组合物。
在本发明的一个优选实施方案中，抗增殖细胞毒性基选自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脱乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothiloneA、epothilone B、epothilone C、epothilone D、脱氧epothilone A、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮和[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方案中，所述细胞毒性剂为紫杉醇，而式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
在本发明的另一个优选实施方案中，所述细胞毒性剂为[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂二环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
用于本发明组合方法的特别优选的方法使用的细胞抑制剂选自Iressa、Herceptin、他莫昔芬和手术或化学阉割。
当描述本发明的化合物时，短语“低级烷基”或“低级烷基...”(作为另一基团的组成部分)是指1-6个碳原子、优选1-4个碳原子的未取代烷基。
术语“芳烷基”是指直接结合低级烷基的芳基。优选的芳烷基为苄基。
术语“芳基”是指单环或双环芳香烃基团，在环部分具有6-12个碳原子。本文典型芳基为苯基、萘基和联苯基。
术语“杂环基”是指完全饱和或不饱和的芳香环或非芳香环基团，为4-7元单环、7-11元双环或10-15元三环系统，在至少一个含碳原子的环上具有至少一个杂原子。含有杂原子的杂环基团的每个环可以具有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中氮和硫杂原子还可任选被氧化，氮杂原子还可以任选被季铵化。所述杂环基团可连接在任何杂原子或碳原子上。
典型的单环杂环基团包括吡咯烷基、吡咯基、吲哚基、吡唑基、oxetanyl、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧氮杂基、氮杂基、4-哌啶酮基、吡啶基、N-氧代-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢硫代吡喃基、四氢吡喃基、吗啉基、噻吗啉基、噻吗啉基亚砜、四氢硫代吡喃基砜、噻吗啉基砜、1，3-二氧戊环、四氢-1，1-二氧代噻吩基、二噁烷基、异噻唑烷基、thietanyl、硫杂丙环基、三嗪基、三唑基等。
典型的双环杂环基团包括苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、喹啉基-N-氧化物、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、肉啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃吡啶基(如呋喃[2，3-c]吡啶基、呋喃[3，1-b]吡啶基、呋喃[2，3-b]吡啶基)、二氢异吲唑基、二氢喹唑啉基(如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并二嗪基、苯并呋咱基、苯并硫代吡喃基、苯并三唑基、苯并吡唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并硫代吡喃基、二氢苯并硫代吡喃基砜、二氢苯并吡喃基、二氢吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢吲哚基、1，5-二氮杂萘基、2，3-二氮杂萘基、胡椒基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、喹唑啉基、四氢喹啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并吡啶基、噻吩并噻吩基等。
当提到一个基团为任选取代时，其可以被1-5个取代基取代，优选1-3个取代基取代，取代基例如F、Cl、Br、I、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、低级烷氧基、环烷氧基、杂环氧基、氧代、低级烷酰基、芳氧基、低级烷酰基氧基、氨基、低级烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、环烷基氨基、杂环氨基、双取代的胺(其中两个氨基取代基独立地选自低级烷基、芳基或芳烷基)、低级烷酰基氨基、芳酰基氨基、芳烷酰基氨基、取代的低级烷酰基氨基、取代的芳基氨基、取代的芳烷酰基氨基、硫羟基、低级烷硫基、芳硫基、芳烷硫基、环烷硫基、杂环硫基、低级烷硫羰基、芳硫羰基、芳烷硫羰基、低级烷磺酰基、芳磺酰基、芳烷磺酰基、氨磺酰基(例如SO2NH2)、取代的氨磺酰基、硝基、氰基、羧基、氨基甲酰基(例如CONH2)、取代的氨基甲酰基(例如CONH-低级烷基、CONH-芳基、CONH-芳烷基或在氮原子上存在两个独立选自低级烷基、芳基或芳烷基的取代基的氨基甲酰基)、低级烷氧羰基、芳基、取代的芳基、胍基和杂环基(例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等)。以上提及的取代基进一步被取代时，其取代基可以为F、Cl、Br、I、任选取代的低级烷基、羟基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的芳基或任选取代的芳烷基。
设想了本发明式I化合物的所有立体异构体或者为混合物形式，或者为纯或基本纯形式。式I化合物的定义包含所有可能的立体异构体及其混合物。式I化合物的定义非常特别地包括具有特定活性的外消旋形式和分离的旋光异构体。
可利用美国专利6,011,029描述的方法制备式I化合物。本文涉及的所有中请和专利都通过引用结合到本文中。
式I化合物以各种药学上可接受的盐形式使用。术语“药学上可接受的盐”是指对药化工作者来说显而易见的盐形式，即基本上无毒并提供需要的药代动力学特性、可口性、吸收性、分布性、代谢和排泄的盐形式。其它在性质上更实用的因素在选择时也很重要，如原材料的成本、结晶的容易程度、收率、稳定性、获得的原料药的吸湿性和流动性。药用组合物可方便地由活性成分或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体制备。
适用于本发明方法和组合物的式I化合物、细胞毒性剂和细胞抑制剂的药学上可接受的盐包括但不限于与各种有机酸或无机酸形成的盐，所述酸例如盐酸、羟甲基磺酸、氢溴酸、甲磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、苯磺酸、甲苯磺酸、氨基磺酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、扑酸、磺胺酸、2-乙酸基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸，包括各种其它药学上可接受的盐，例如硝酸盐、磷酸盐、硼酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐等。设想将阳离子如季铵离子作为药学上可接受的阴离子部分的阳离子。
式I化合物的优选盐包括盐酸盐、甲磺酸盐和三氟乙酸盐，更优选甲磺酸盐。另外，可以用碱金属如钠、钾和锂；碱土金属如钙和镁；有机碱如二环己胺、三丁胺和吡啶以及氨基酸如精氨酸、赖氨酸等，制备式I化合物的药学上可接受的盐。
可用常规方法合成本发明的药学上可接受的盐。一般来说，通过将游离碱或酸与化学计量或过量的形成需要盐的无机或有机酸或碱在合适溶剂或溶剂组合中反应，制备所述盐。
本发明还包括一种用于治疗癌症的药用组合物，包括给予治疗有效量的本发明组合物，具有或没有药学上可接受的载体或稀释剂。本发明的协同作用药用组合物包含任选的抗增殖细胞毒性剂、任选的休眠剂、式I化合物和药学上可接受的载体。所述方法必须组合使用细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与式I化合物。本发明的组合物还可含有一种或多种药学上可接受的添加成分，如明矾、稳定剂、抗微生物剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、佐剂等。本发明的抗肿瘤剂、任选的细胞抑制剂(如果为化学物质的话)、式I化合物和组合物可口服或胃肠外给药，包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠和局部途径给药。
口服使用的本发明的抗肿瘤剂、细胞抑制剂、式I化合物和组合物可以例如片剂或胶囊剂、粉剂、可分散颗粒剂或扁囊剂或以水溶液或悬浮液形式给药。在口服使用片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖、玉米淀粉、碳酸镁、滑石粉和糖，通常加入润滑剂如硬脂酸镁。当以胶囊剂形式口服给药时，使用的载体包括乳糖、玉米淀粉、碳酸镁、滑石粉和糖。当使用水性悬浮液口服给药时，通常加入乳化剂和/或悬浮剂。另外，可将甜味剂和/或调味剂加入到口服组合物中。对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内使用，通常使用所述活性成分的无菌溶液，溶液的pH应当适当调节并缓冲。对于静脉内使用，应当控制溶质的总浓度，以便使制备物等渗。在本发明的一个优选实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐用硫丁醚-7-β-环糊精或2-羟丙基-β-环糊精配制，静脉内给药。
为制备按照本发明的栓剂，首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可油的混合物融化，通过例如搅拌将活性成分均一地分配在蜡中。然后将熔融的均一混合物倾倒入适宜大小的模子中，让其冷却，并由此固化。
液体制剂包括溶液剂、悬浮液剂和乳浊液剂。这种制剂的实例为胃肠外注射的水溶液剂或水/丙二醇溶液剂。液体制剂还可以包括鼻内给药的溶液剂。
适于吸入的气溶胶制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，它们可与药学上可接受的载体(如惰性压缩气体)混合。
还包括在使用前马上转变为口服或胃肠外给药的液体制剂的固体制剂。这样的液体形式包括溶液、悬浮液和乳浊液。
本文描述的式I化合物以及细胞毒性剂和细胞抑制剂还可以经皮传递。经皮组合物可采用乳膏、洗剂、气溶胶和/或乳剂的形式，并可以包含在基质或储库型的经皮贴片中，这在本领域是常规性的。
本发明的组合应用还可以结合其它广为人知的疗法，选择这些疗法是因为其对要治疗的病症特别有用。
如果以固定剂量配制，则本发明组合的组合物的活性成分在以下描述的剂量范围内使用。或者，所述细胞毒性剂、细胞抑制剂和式I化合物可分别以下文描述的剂量范围给药。在本发明的一个优选实施方案中，在以下文描述的剂量范围给予式I化合物之前，以下文描述的剂量范围给予所述抗肿瘤剂。
表I列出了用于本发明方法的优选化疗组合和典型剂量。当出现“式I化合物”时，设想本文提供的式I化合物的任何变化形式都可用于化疗组合。最好使用化合物2。
化疗组合 剂量mg/m2(每剂)式I化合物 2.5-750mg/m2+顺铂 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+卡铂 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+放疗 200-8000cGy式I化合物 2.5-750mg/m2+CPT-115-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇40-250mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇40-250mg/m2+卡铂 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+5FU 5-5000mg/m2任选+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+Epothilone1-500mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2
+吉西他滨 100-3000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2任选+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+吉西他滨 100-3000mg/m2+顺铂 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+顺铂 5-150mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+顺铂 5-150mg/m2+5FU 5-5000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+奥沙利铂 5-200mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+5FU 5-5000mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2任选+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2
+5FU 5-5000mg/m2+放疗 200-8000cGy式I化合物 2.5-750mg/m2+放疗 200-8000cGy+5FU 5-5000mg/m2+顺铂 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+奥沙利铂 5-200mg/m2+5FU 5-5000mg/m2任选+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2+5FU 5-5000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2任选+甲酰四氢叶酸 5-1000mg/m2在上表I中，“5FU”表示5-氟尿嘧啶，“甲酰四氢叶酸”可以使用甲酰四氢叶酸钙，“UFT”是1∶4摩尔比的替加氟∶尿嘧啶，而“Epothilone”最好为WO 99/02514或WO 00/50423中描述的化合物，这两个专利都通过引用整体结合到本文中。
尽管表I提供了本发明式I化合物和某些抗肿瘤药物的典型剂量范围，但在配制本发明的药用组合物时，临床医师可根据治疗患者病情的许可使用优选的剂量。例如，化合物2(一种式I化合物)优选可以约25-500mg/m2的剂量范围每三周给药一次，只要需要进行治疗。顺铂的优选剂量为约75-120mg/m2，每三周给予一次。卡铂的优选剂量在约200-600mg/m2的范围内，或AUC约0.5-8mg/ml×分钟；最优选为AUC约4-6mg/ml×分钟。当所用的方法使用放疗时，优选的剂量范围为约200-6000cGY。CPT-11的优选剂量为约100-125mg/m2，每周一次。紫杉醇的优选剂量约130-225mg/m2，每21天给药一次。吉西他滨的优选剂量在约80-1500mg/m2的范围内，每周一次。UFT在与甲酰四氢叶酸组合给予时，其优选使用范围为约每天300-400mg/m2。甲酰四氢叶酸的优选剂量为约10-600mg/m2，每周给药一次。
实际使用的剂量可根据患者的需要以及治疗病症的严重程度而有所改变。确定特定情况下的正确剂量属于本领域的技术范畴。一般来说，以小于所述化合物的最优剂量的剂量开始治疗。此后，小量增加剂量，直至达到在所述情况下的最佳效果。为方便起见，在需要治疗的天数内，可将总日剂量分开并按份给药。还可以使用间歇疗法(例如三周中的一周或四周中的三周治疗)。
某些癌症可用式I化合物和多种抗癌剂有效治疗。这样的三种药物或四种药物的组合可提供更大的功效。当使用这样的三药或四药组合时，可以使用以上列出的剂量。因此，在以上表I中的其它组合可包括组合“化合物2”与(1)米托蒽醌+强的松；(2)阿霉素+紫杉烷(taxane)；或(3)herceptin+紫杉烷。在以上的任何组合中，5-FU都可用UFT替换。
当使用本发明的方法或组合物时，还可根据需要给予其它在临床环境下用于调节肿瘤生长或转移的药物，如止吐药。
还可以进行使用本发明组合化疗方法的临床研究。所述研究特别优选给予约3小时的Taxol(135mg/m2)输注，然后以三周的间隔给予约1小时的化合物2(50mg/m2)输注。在另一个方案中，输注Taxol(80mg/m2)约1小时，然后输注化合物2(80mg/m2)。该方案需要每周给予一次。另一个方案需要给予三种药物的组合，包括约3小时的Taxol(135mg/m2)输注，然后为约20分钟的卡铂输注(AUC＝6)，以此方式每三周给予一次Taxol和卡铂。在此方案中，化合物2以80mg/m2每周输注给患者约1小时。
本发明包括一种协同治疗癌症的方法，其中细胞毒性剂和/或细胞抑制剂和式I化合物同时或序贯给予。因此，尽管包含抗肿瘤剂和式I化合物的药用制剂对一个特定治疗可有利地给予所述组合，但先给予细胞毒性剂或细胞抑制剂可能在其它治疗中具有优势。还应当理解的是，本发明的抗肿瘤剂和式I化合物的组合可与其它治疗癌症(优选癌性肿瘤)的方法(包括但不限于放疗和手术)联合使用。进一步应当理解的是，细胞抑制剂，如果有的话，可与任何或所有其它协同疗法先后或同时给予。
本发明的组合还可以与其它众所周知的治疗剂同时给予，选择这些治疗剂是因为其对要治疗的病症特别有用。当多组合配方不合适时，作为替代，本发明的组合可以与已知的药学上可接受的药物先后使用。
可按照本领域众所周知的治疗方案给予化疗剂和/或放疗。对本领域技术人员显而易见的是，化疗剂和/或放疗的给予可根据治疗的疾病和所述化疗剂和/或放疗对该疾病的已知作用而有所变化。此外，按照熟练临床医师的知识，治疗方案(例如剂量和给药时间)可根据观察到的所给予治疗剂(即抗肿瘤剂或放疗)对患者的作用以及观察到的疾病对所给予治疗剂的反应而改变。
在本发明方法中，式I化合物与细胞毒性剂和/或放疗和/或细胞抑制剂同时或先后给予。因此，化疗剂和式I化合物或者放疗与式I化合物同时给予或基本同时给予并不是必须的。同时给予或基本同时给予的优势完全在熟练临床医师的掌握之中。
此外，一般而言，式I化合物、任选细胞抑制剂和任选细胞毒性剂不是必须以同一药用组合物给予，而且因为不同的物理和化学性质，可能必须通过不同的途径给予。例如，尽管化疗剂可静脉内给药，但式I化合物可口服给药，以产生和保持其良好的血液浓度水平。在有可能以同一药用组合物给药时，对给药方式和给药合理性的确定完全在熟练临床医师的知识范围内。可按照本领域建立的已知方法进行初始给药，然后熟练临床医师可根据观察到的效果修改剂量、给药方式和给药时间。
式I化合物和细胞毒性剂和/或放疗和/或细胞抑制剂的具体选择取决于主治医师的诊断及其对患者病情和合适治疗方案的判断。根据增殖性疾病的性质、患者的病情以及实际选择的与式I化合物联合给予(即在单一治疗方案中)的化疗剂和/或细胞抑制剂和/或放疗，式I化合物和/或细胞毒性剂和/或细胞抑制剂和/或放疗可同时(例如同时、基本同时或属于同一治疗方案)或先后给予。
如果式I化合物和细胞毒性剂和/或放疗和/或细胞抑制剂不同时或基本同时给予，那么式I化合物和化疗剂和/或细胞抑制剂和/或放疗的初始给予顺序可以改变。因此，例如，可首先给予式I化合物，接着给予细胞毒性剂和/或放疗；或者，可首先给予细胞毒性剂和/或放疗，接着给予式I化合物。这种交替给予在单一治疗方案中可以重复。在评价了要治疗的疾病和患者的状况之后，对给予顺序、治疗方案中每种治疗剂的重复给予次数的确定，完全在熟练医师的知识范围内。例如，开始可给予细胞抑制剂和/或放疗，特别是在使用细胞毒性剂时。然后给予式I化合物以及任选接着给予细胞抑制剂继续治疗，直至完成治疗方案。
因此，根据经验和知识，执业医师可根据各个患者的需要，随着治疗的进行修改每个方案的治疗组分(治疗剂，即式I化合物、细胞抑制剂、细胞毒性剂或放疗)的给予。
主治医师在判断以给予的剂量治疗是否有效时，将考虑患者的一般健康状态以及更明确的体征，例如疾病相关症状的减轻、肿瘤生长的抑制、肿瘤的实际收缩或转移抑制。肿瘤大小可通过标准方法如放疗性检查(例如CAT或MRI扫描)检测，连续检测可用于判断肿瘤生长是否已经减速甚至逆转。疾病相关症状(如疼痛)的减轻和整体状况的改善也可用于帮助判断治疗的有效性。
为了有助于进一步理解本发明，提供以下的实施例，这主要是为了阐释本发明更具体的细节。不应当认为本发明的范围限于所述实施例，而是应当包含权利要求定义的完整主题。实验方案化合物以下命名的化合物用于鉴定全部实施例中的测试化合物化合物1[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮化合物2(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈，盐酸盐化合物3(R)-4-(丁磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂，盐酸盐化合物4(R)-4-(3-甲氧基丙磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂，盐酸盐化合物5(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂，盐酸盐化合物6(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂，盐酸盐化合物7(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂，盐酸盐化合物84-(3-溴苯氨基)-6，7-二(甲氧基)喹唑啉化合物9N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺药物给予为将化合物1(一种epothilone)给予啮齿动物，使用两种不同的赋形剂(1)乙醇/水(1∶9，v/v)和(2)Cremophor/乙醇/水(1∶1∶8，v/v)。首先将化合物1溶解在乙醇或Cremophor/乙醇(50∶50)混合物中。在给药之前1小时之内最终稀释至需要的剂量浓度。对于胃肠外给药(IV)，用水进行稀释，使得定量溶液中含有上述的特定赋形剂组合物。对于口服给药(PO)，用0.25M磷酸钠缓冲液(pH＝8.0)以30/70(v/v)比率进行稀释。将紫杉醇溶解在乙醇和Cremophor的50/50混合物中，并储存于4℃；在给药之前用0.9％NaCl稀释，获得紫杉醇的最终稀释液。所有注射化合物的体积都是0.01ml/g小鼠和0.005ml/g大鼠。集落形成性细胞的集落-形成测定通过集落形成测定评价化合物体外杀死形成集落肿瘤细胞(能够无限分裂形成集落的细胞)的能力。在接触药物16小时结束时，通过将细胞于37℃接触0.05％胰蛋白酶5分钟，解离单层细胞培养物。将细胞重悬浮在完全培养基(含10％FBS)中，用Coulter Channelyzer计数，稀释，并以每个稀释度5个复孔平板接种到塑料有盖组织培养板中。在湿润气氛下于37℃温育所述细胞10天。用结晶紫对细胞集落染色，记录每个集落多于50个细胞的集落。测定杀死90％的形成集落的HCT-116人结肠癌细胞需要的浓度(即IC90)。异步生长肿瘤的BrdUrd标记将BrdUrd溶解在无菌磷酸缓冲盐水(PBS)溶液pH7.4中，并以100mpk的剂量经尾静脉长时间输注(24小时)给小鼠。在输注过程结束时处死带肿瘤小鼠，并割除肿瘤进行BrdUrd/DNA分析。肿瘤细胞分散和细胞染色割除肿瘤并用剪刀切碎，使用含0.025％胶原酶(Sigma ChemicalCo.，St Louis，MO)、0.05％链霉蛋白酶(Calbiochem，LaJolla，CA)和0.04％Dnase(Sigma)的酶混合物于37℃离解1小时。去除碎片后，将细胞悬浮液通过70μm的尼龙筛，用PBS清洗细胞、计数并重悬浮在75％甲醇中。将固定的细胞保持在4℃冷冻，直至分析。
在测定当天，用PBS将固定在75％甲醇中的细胞清洗1次，重悬浮在胃蛋白酶的2N HCl溶液(0.2mg/ml)中，并于37℃温育20分钟。然后用含0.5％胎牛血清(FBS)和0.5％Tween 80的1ml PBS清洗细胞2次。在两次清洗之后，将细胞重悬浮在含2％FBS的1ml PBS中，并于室温温育20分钟。然后将细胞旋转下来，并将沉淀重悬浮在100μl抗-BrdUrd-FITC(10μg/ml)(Boehringer Mannheim)中。在45分钟温育之后，用含0.5％FBS和0.5％Tween 80的1ml PBS清洗细胞。将清洗的细胞重悬浮在1ml RNase(1mg/ml)中，并于室温温育30分钟。最后，以10μg/ml的浓度加入碘化丙啶(Sigma)的PBS溶液。体内抗肿瘤测试用Balb/c nu/nu裸鼠保持人肿瘤异种移植物。使用由供体小鼠获得的肿瘤碎片作为皮下移植物在合适的小鼠品系中繁殖肿瘤。
在实验开始时，将需要检测有意义反应的需要数目的小鼠(6-10)集中在一起，并用13-标准规格的套针皮下给予每只小鼠一块肿瘤碎片移植物(约50mg)。为治疗早期肿瘤，再次将小鼠集中在一起，然后分配到各个治疗组和对照组。为治疗患晚期癌症的小鼠，让肿瘤生长至预先确定的尺寸框(将范围外的肿瘤排除在外)，并将动物均匀地分配到各个治疗组和对照组。每个动物的治疗都是基于各自的体重。每天检查受治疗动物的治疗相关毒性/死亡率。在开始治疗之前对每组动物称重(Wt1)，然后在最后治疗剂量之后再称重(Wt2)。体重差(Wt2-Wt1)提供了治疗相关毒性的检测结果。
每周通过用测径器检测肿瘤两次来测定肿瘤反应，直至肿瘤达到预先确定的“目标”大小0.5或1.0g。由下式估算肿瘤重量(mg)肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2以仅仅低于出现过度毒性(即超过1个死亡)的剂量水平确定最大耐受剂量(MTD)。MTD常常等于最佳剂量(OD)。活性以OD表示。在其肿瘤达到目标大小之前死亡的受治疗小鼠被认为是死于药物毒性。所患肿瘤小于目标大小的对照小鼠没有死亡。有1个以上由药物毒性引起的死亡的治疗组被认为是获得过度毒性治疗，其数据未包括在对化合物抗肿瘤效果的评价当中。
肿瘤反应终点以肿瘤生长迟缓(T-C值)表示，T-C值的定义是治疗达到预先确定的目标大小的肿瘤(T)需要的时间(天数)相比于对照组所需时间(C)的差值。
为估算杀死的肿瘤细胞，首先用下式计算肿瘤体积倍增时间(TVDT)TVDT＝对照肿瘤达到目标大小的平均时间(天数)-对照肿瘤达到目标大小一半的平均时间(天数)以及，Log杀死的细胞(LCK)＝T-C÷(3.32×TVDT)研究中止时(天数＞肿瘤移植后75天)不存在可检测的肿瘤时将肿瘤定义为“治愈”；研究中止和药物治疗结束之间的间隔总是超过任何特定肿瘤类型的体积倍增时间的10倍。
所有治疗组和对照组通常都由8只小鼠组成。使用Gehan的广义Wilcoxon检验对反应数据进行统计学分析。
实施例1同时包含增殖性细胞群和非增殖性细胞群的肿瘤随着肿瘤生长，血管生长经常不能与恶性细胞群的快速增殖同步。因此，实体肿瘤块通常呈现出异常的血管网络，这些血管网络与正常组织中的血管不同，它们不能为肿瘤细胞最优生长提供足够的营养。因此，实体瘤既包含增殖性肿瘤细胞，也包含非增殖性肿瘤细胞。对于大多数实体瘤而言，非增殖性肿瘤细胞占总肿瘤细胞群的大部分。现有的抗癌剂针对增殖细胞的生化过程。这些抗癌剂对非增殖性肿瘤细胞群和/或稳定细胞仅具有最小作用。因此，放疗或化疗治愈肿瘤疾病失败的主要影响因素是这些化合物不能针对休眠肿瘤细胞群。使用长时间(24小时)输注BrdUrd方案对HCT116人结肠癌异种移植物进行评价，结果是体内各种肿瘤的增殖性细胞部分仅占总细胞群的一小部分。对于200-300mg的HCT-116肿瘤来说，细胞群仅有约20％包含增殖性细胞，而剩余的80％包含非增殖性细胞(图1)。还检查了许多其他肿瘤，在每种情况下非增殖细胞都占肿瘤中存在细胞的大部分(表2)。
表2
通过控制培养基的生长条件可以在体外细胞培养时重现实体瘤的营养限制性微环境。因此，通过去除营养供应(培养第8天)可以将肿瘤细胞诱导入非增殖状态或休眠期(稳定期，约90％非增殖细胞)，而在最佳营养条件下(培养第3天)，实际上所有的肿瘤细胞都以指数增殖(对数期，约90％增殖细胞)。
实施例2本发明组合物选择性杀死非增殖肿瘤细胞通过集落形成测定评价化合物2体外杀死形成集落肿瘤细胞(能够无限分裂形成集落的细胞)的能力。在接触药物16小时结束时，通过将细胞于37℃接触0.05％胰蛋白酶5分钟，解离单层细胞培养物。将细胞重悬浮在完全培养基(含10％FBS)中，用Coulter Channelyzer计数，稀释，并以每个稀释度5个复份平板接种到塑料有盖组织培养板中。在湿润气氛下于37℃温育所述细胞10天。用结晶紫对细胞集落染色，记录每个集落多于50个细胞的集落。测定杀死90％的形成集落的HCT-116人结肠癌细胞需要的浓度(即IC90)。
与增殖性(Log)细胞相比，化合物2和类似物选择性杀死非增殖性(稳定)HCT-116人结肠癌细胞(图2-4和表3)。增殖和非增殖群之间敏感性的差异程度(倍数)在2.7-181的范围内。
表3
大多数抗癌药物的作用是影响DNA合成或其功能，并因此针对增殖细胞而保持休眠细胞完整，除非休眠细胞在接触药物后马上分裂。因此，抗癌药物的效力经常受限于这部分难以控制的肿瘤细胞。例如，与化合物2正相反，通常使用的抗癌药物如紫杉醇、epothiloneB和5-氟尿嘧啶优选对增殖肿瘤细胞具有细胞毒性，而对非增殖细胞基本无效(图5和6以及表4)。
表4
实施例3抗增殖剂与本发明化合物组合起体外协同杀死肿瘤细胞的作用如上所述，机理研究强有力地提示，化合物2对非增殖肿瘤细胞具有选择性细胞毒性。这种独一无二的特性获得了与现有的主要针对增殖肿瘤细胞的抗肿瘤药物进行协同组合治疗的前景。例如，紫杉醇对对数期HCT-116细胞具有高度的体外细胞毒性，获得的IC90值为17.8nM(图5)。然而，对非增殖稳定细胞群，在高至162nM的浓度完全无毒(图5)。用epothilone B(图6)观察到相似的显著差异，对增殖细胞和非增殖细胞的IC90分别为1.3nM和＞108nM(表3)。紫杉醇和化合物2组合获得体外协同细胞毒性，使得所述组合产生的细胞杀伤力高于累加的细胞杀伤力(图7)。而且发现为了观察到这种协同组合，两种药物应当按照特定的顺序给予。当用两种药物同时治疗细胞或紫杉醇先于化合物2治疗细胞时观察到协同作用。当化合物2先于紫杉醇24小时给予时，观察到拮抗作用。化合物2和化合物1组合观察到相似的协同作用和时序相关性(图8-10)。
实施例4抗增殖剂与本发明化合物组合对人肿瘤异种移植物起协同杀死肿瘤细胞的作用使用sc HCT-116肿瘤模型进行输注化合物2+快速静脉浓注紫杉醇的组合疗法(图11)。尽管各个药物单独给予无效(化合物2和紫杉醇分别为0.4和0.6LCK)，但所述组合(化合物2，125mpk 24小时静脉输注+紫杉醇，24mg/kg静脉给予)产生1.8LCK的协同效果。
通过快速浓注给药的化合物2和紫杉醇的组合化疗还显示了对Pat-7人卵巢癌细胞的协同作用，Pat-7人卵巢癌细胞得自出现TAXOL抗性的癌症患者。对该抗性肿瘤模型，分别以最大耐受剂量给予紫杉醇和化合物2作为单一药物治疗，获得的肿瘤反应小于1对数杀死细胞(LCK)。然而，以最大耐受剂量组合的化合物2和紫杉醇产生治疗协同作用和1.7LCK的显著抗肿瘤活性(图12)。对HCT116人结肠癌异种移植物也观察到协同抗肿瘤活性(图13)。在人类患者观察到产生相似的全身接触的剂量水平(20-80μM小时)的化合物2显示与紫杉醇的抗肿瘤作用协同作用。
化合物1和化合物2组合对多药物抗性人结肠癌异种移植物HCT/VM46也清楚了显示了体内治疗协同作用。化合物1和化合物2作为单一药物治疗对此模型的抗肿瘤活性都不大(图13)。两种药物产生的肿瘤反应超过1LCK(分别为1.6和1.1LCK)，但不能诱导肿瘤痊愈。然而，当所述两种药物组合给药时(给予化合物124小时以后给予化合物2)，观察到抗肿瘤活性急剧升高。值得注意的是，7只小鼠中的3只观察到肿瘤生长延迟有非常显著的增加(3.7LCK)，包括增强治疗效果(图13)。
证实了所述组合的时序相关性。当化合物2治疗在化合物1之前24小时给予时，未观察到治疗协同作用(图14)，实施的该组合仅与单独给予化合物1一样。
实施例5本发明化合物增强拓扑异构酶I抑制剂CPT-11对人实体癌的体内抗肿瘤活性CPT-11是一种抗增殖细胞毒性抗癌药物，它与通过诱导可逆性单链断裂而解除DNA扭应变的拓扑异构酶I特异性相互作用。CPT-11的细胞毒性缘自DNA合成过程中复制酶和三元复合物(由拓扑异构酶I-DNA和CPT-11或其活性代谢物SN-38形成)相互作用时产生的双链DNA损伤。因此，CPT-11选择性针对进行有效DNA合成的增殖细胞。我们在本实施例中已经证实，组合(使用化合物2前1小时使用CPT-11)治疗携带晚期(300-500mg)HCT116人结肠癌异种移植物的小鼠产生协同抗肿瘤活性，该活性远超过单独给予每种药物时获得的活性(图15A和15B)。在此研究中，CPT-11以MTD 30mg/kg/inj或接近该MTD静脉内给药。化合物2以两种不同剂量水平静脉内给药60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。选择所述剂量的化合物2，是因为它们产生的药物接触接近临床能实现的接触。如图15A和15B所示，在与CPT-11组合时，化合物2的两种剂量水平产生的抗肿瘤活性都显著高于每种药物单独给予时获得的抗肿瘤活性。而且，所述组合产生的部分或全部肿瘤消退率显著高于单独的单一药物。表5 化合物2和CPT-11组合化疗对晚期HCT116人结肠癌的抗肿瘤活性
1药物治疗方案为IV、Q2D×5。CPT-22在化合物2之前1小时给予。2在治疗开始时肿瘤在300-500(中值约200mg)的范围内。3LCK＝杀死细胞的对数4PR＝部分反应，肿瘤尺寸减小50％或更多。5CR＝完全反应，定义为通过治疗根除了所有容易检测的肿瘤。当肿瘤小于35mg时定义为不可检测。完全反应与治愈的不同之处在于可能存在显微镜可见的或潜在肿瘤，这些肿瘤可导致随后肿瘤发展。
实施例6本发明化合物增强吉西他滨(GEMZAR)对人实体瘤的体内抗肿瘤活性吉西他滨是一种具有细胞分裂时相特异性的抗代谢型抗增殖细胞毒性化疗剂。该药物主要杀死进行DNA合成(S-期)的细胞，还将细胞进程阻断在G1/S期交界处。因此，吉西他滨对活跃分裂或增殖的细胞具有选择性毒性。我们已经证明，吉西他滨和化合物2组合(在给予化合物2之前1小时给予吉西他滨)对裸鼠晚期HT-29人结肠癌异种移植物产生增强的抗肿瘤活性(图16A和16B)。值得注意的是，不仅在生长延迟方面观察到增强的抗肿瘤活性，更重要的是，增强抗肿瘤活性还导致反应率(肿瘤消退)显著提高。因此，尽管单一药物化合物2产生12.5％PR，单一药物吉西他滨在24和6mg/kg/inj剂量分别产生0和25％的反应率，但化合物2和吉西他滨的组合在所有受治疗小鼠中产生100％PR(图16B)。
实施例7紫杉醇与本发明化合物组合起协同杀死人结肠癌异种移植物的作用紫杉醇杀死进入细胞分裂周期的有丝分裂期的肿瘤细胞。因此，紫杉醇对增殖细胞具有选择性毒性(图5)。我们证实，化合物2和紫杉醇组合对裸鼠人结肠癌模型HCT116产生协同抗肿瘤活性。图17A和17B显示，静脉给予紫杉醇后(20mpk，每周4次)3小时静脉给予40或80mpk的化合物2，相对于单独的任一种药物的抗肿瘤作用显著增强；治疗的获益程度明显超出如果两种药物仅仅发挥出累加的抗肿瘤活性所获得的结果。这种协同作用不仅可见于肿瘤生长延迟，而且可见于临床上更相关的肿瘤反应检测指标，即部分和完全肿瘤消退(或反应，分别为PR和CR)和肿瘤治愈。这在表6和图17C中说明。表6 化合物2与紫杉醇组合化疗对晚期HCT116人结肠癌的抗肿瘤活性
1药物治疗方案为IV、Q7D×4。紫杉醇在化合物2之前3小时给予。2治疗开始时肿瘤在130-300(中值约200mg)的范围内。3LCK＝杀死细胞的对数4PR＝部分反应，肿瘤尺寸减小50％或更多。5CR＝完全反应，定义为通过治疗根除所有容易检测的肿瘤。当肿瘤小于35mg时定义为不可检测。完全反应与治愈的不同之处在于可能存在显微镜可见的或潜在肿瘤，这些肿瘤可导致随后的肿瘤发展。6治愈-根据尸体解剖确定在肿瘤移植后第77天没有证据显示有存活的肿瘤。
实施例8Her-1抑制剂(化合物8)与本发明化合物组合起体外杀死SAL-2癌细胞和体内杀死A431鳞状细胞癌的协同作用表皮生长因子(EGF或Her-1)受体涉及许多人上皮和鳞状细胞癌。EGF与其肿瘤细胞受体结合导致蛋白酪氨酸激酶活性活化和酪氨酸自体磷酸化。这些事件又导致激活一连串的涉及癌细胞促有丝分裂(增殖)信号转导的生化反应。已经证明，抑制敏感细胞EGF受体结合导致抑制细胞增殖、细胞周期停滞和凋亡。因此，EGF或Her-1抑制剂选择性针对增殖细胞，并通过干扰促有丝分裂信号转导使癌细胞非增殖化。已知本发明化合物针对非增殖细胞的选择性，我们提出了一个构思我们可以利用Her-1抑制剂的这种特别的作用模式，通过使癌细胞转变为非增殖态，使它们对本发明的化合物2和类似化合物的促凋亡活性“敏化”。这个假说在体外和体内实验条件下都被证实是正确的。对于体外，为了评价Her-1抑制剂和化合物2组合的治疗功效，使用组成型过表达活化形式的Her-1受体的SAL-2肿瘤细胞进行实验。为此使用Her-1抑制剂化合物8。作为参比，紫杉醇用作仅针对增殖细胞的药物实例，并按照我们的假说在本实验条件下不能有效作用，即依序进行药物接触Her-1抑制剂首先诱导细胞停滞，接着用化合物2或紫杉醇。数据揭示，当化合物2和紫杉醇每种都作为单一药物给予时，指数生长的SAL2癌细胞对化合物2和紫杉醇具有相对抗性，如图18A-18G所示。正如我们的假说所预测，Her-1抑制剂′832后接紫杉醇的时序组合是拮抗性的(图18C)。相反，Her-1抑制剂(化合物8)后接化合物2的时序组合是协同性的(图18D)。
为证实Her-1抑制剂和本发明化合物组合的体内作用，我们使用Her-1抑制剂Iressa组合化合物2对抗已知过表达Her-1受体的人鳞状细胞癌A431。如图18E和F所示，两个单独剂量水平的化合物2当与Iressa组合使用时，相比于单独给予每种药物产生增强的抗肿瘤活性。应当注意的是，Iressa以日治疗方案Q1D×11给药，在化合物2治疗开始前3天开始Iressa治疗。以Q2D×5的程序给予化合物2。重要之处在于，使用紫杉醇的该时序药物治疗方案(即先用Iressa)效果很差(图18G)。Iressa和紫杉醇组合产生的抗肿瘤作用不比单独使用任一种单个药物获得的抗肿瘤作用好。
实施例9化合物2和Her-2直接抗体Herceptin组合对Her-2过表达人乳腺癌细胞的生长产生协同抑制作用HER-2(或c-erbB2)原癌基因编码一种185kDa的跨膜受体蛋白，该蛋白在结构上与表皮生长因子受体或Her-1相关。在25％-30％的原发性乳腺癌中可观察到HER2蛋白过表达。Herceptin是一种选择性结合Her-2蛋白胞外结构域的重组DNA衍生的人源化单克隆抗体。已经表明，Herceptm在体外测定和动物中都抑制过表达Her-2的人肿瘤细胞增殖。因此，按照本发明提出的构思，Herceptm是这样一类药物的实例其作用是使癌细胞非增殖化，从而使肿瘤细胞对选择性针对非增殖细胞的本发明化合物的抗癌作用敏化。因此，在本实施例中，在用化合物2治疗前预处理过表达Her-2的人乳腺癌细胞系BT-474两天，对癌细胞生长产生协同抗增殖作用(图19)。
实施例10他莫昔芬与本发明化合物组合对雌激素依赖性人乳腺癌异种移植物起协同杀死癌细胞的作用大多数人乳腺癌的生长和肿瘤发育需要雌激素(雌激素依赖型)。已经表明，用抗雌激素(如他莫昔芬)治疗雌激素依赖性乳腺癌在体外和体内都抑制肿瘤细胞增殖。为了评价本发明的组合抗癌药物对人乳腺癌模型MCF-7异种移植物的功效，在裸鼠中培育该模型，并如本文所述治疗。使用化合物2和他莫昔芬组合化疗产生增强的抗肿瘤活性。实际上，在8只为MCF-7人乳腺癌异种移植物模型的小鼠中观察到3只小鼠肿瘤症状缓解。图20显示，化合物2作为单一药物给予对肿瘤生长仅产生非常一般的作用。单独的他莫昔芬对该模型明显更有效，大约和切除卵巢(estradial pellet removal)等效，但尽管如此，在用他莫昔芬治疗或切除卵巢之后，所有的肿瘤都再生长，没有观察到治愈的情况。相反，40mpk他莫昔芬与化合物2(口服、100mpk、qdx10，两个疗程)组合，除了上述的治愈情况以外，还导致平均肿瘤重量急剧下降。
实施例11雄激素去除疗法(手术或化学方法)通过诱导肿瘤细胞非增殖态(休眠)增强了雄激素依赖性人前列腺癌对化合物2的敏感性如前所述，可在各种生物条件下使细胞非增殖化或“休眠”。一种治疗人前列腺癌的常规方案是化学阉割。尽管本发明不依靠任何特定的理论或机制，但认为对于雄激素依赖性前列腺癌，去除激素通过去除对肿瘤增殖很关键的生长刺激而起促休眠药物的作用。因此，以人前列腺癌异种移植物模型评价本发明抗癌药物的功效。
对雄激素依赖性sc MDA-Pca-2b人前列腺癌异种移植物模型，用单独的化合物2(400mpk、口服、q1d×10)治疗对肿瘤生长具有一般作用，如图21所示。去除雄激素疗法(手术阉割)也降低肿瘤生长速率，但不引起消退。如数据所揭示(图21)，阉割后3天给予化合物2导致肿瘤迅速消退。
另一个使雄激素依赖性前列腺癌细胞非增殖化的方法是使用化学抗雄激素药物，例如Casodex。实际上，现在已经知道，某些前列腺癌甚至在其雄激素非依赖性越来越增加以后仍保持对Casodex治疗的敏感性，反之亦然。猜测这种现象是由于雄激素受体特异性突变所致，这种突变区别性影响雄激素和抗雄激素受体结合。为测试Casodex和化合物2组合的抗肿瘤功效，我们使用Casodex反应型但雄激素非依赖性人前列腺癌模型Pca-2b-AI。如图22所示，对于这种肿瘤模型，Casodex和化合物2组合的作用显著好于单独使用任一种药物的作用，这两种药物都以其最大耐受剂量和方案给予(分别为化合物2为600mpk、口服、q1d×10；Casodex为150mpk、口服、q1d×4)。因此，根据定义，Casodex和化合物2组合产生的协同抗肿瘤活性超过单独给予的每一种药物。
实施例12化合物2组合cdk抑制剂(化合物9)以严格时序相关方式产生协同杀死细胞的作用(图23)哺乳动物细胞的有丝分裂需要丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族(称作依赖细胞周期蛋白的激酶(CDK))的协同活性。已经表明，CDK(具体地说是CDK2)抑制剂抑制细胞增殖，并将细胞停滞在细胞周期的G1/S交界处。为测定CDK抑制剂(CDKI)和本发明化合物组合化疗的作用，进行了一个研究用1.5μM选择性CDK2抑制剂处理指数增殖的A2780人卵巢癌细胞4小时的时间。化合物9(无效剂量)与逐渐增加浓度的化合物2的20小时治疗组合。使用两种治疗次序(1)化合物9治疗4小时，接着化合物2治疗20小时；或(2)化合物2治疗20小时，接着化合物9治疗4小时。如图23所示，当首先给予CDKI时，观察到协同杀死细胞，而首先给予化合物2时没观察到作用。这支持所述假说通过首先给予CDKI使细胞非增殖化，这又使细胞对化合物2的细胞毒性作用敏感。
实施例13Epothilone B转变为Epothilone F (i)将1.98g(3.90mmol)Epothilone B置于氩气下，并溶解在60ml无水CH2Cl2中。向该溶液中加入0.720g mCPBA(4.17mmol、1.07当量)。让该混合物于25℃搅拌5.5小时。用60ml NaHCO3猝灭反应混合物，并用3×75ml CHCl3提取。依次用100ml水、70ml 5％Na2SO3(水溶液)和70ml盐水清洗有机相。有机相然后经Na2SO4干燥。用硅胶对粗反应产物进行层析，用2％MeOH的CHCl3溶液洗脱，获得0.976g N-氧化物(48％)，为白色松软固体。
(ii)在氩气下向可再密封的管中加入0.976g溶解在35ml无水CH2Cl2、2，6-二甲基吡啶(1.73ml、14.88mmol、8当量)和(CF3CO)2O(1.84ml、13.02mmol、7当量)中的N-氧化物(1.86mmol)。密封该管并于70℃加热25分钟。让混合物冷却，在氩气流下去除溶剂，接着真空浓缩成几毫升的暗黄色溶液。用25ml MeOH稀释反应物，并加入2.9ml 28％的NH4OH(水溶液)。混合物于45℃加热20分钟，然后冷却至室温。将粗产物于旋转蒸发器上浓缩，并使用硅胶层析，用4％MeOH的CHCl3溶液洗脱，获得0.815g Epothilone F(84％)。
实施例14制备[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(叠氮甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮 于0℃、氩气下向搅拌的以上实施例13的Epothilone F(957mg，1.83mmol)的20.0ml四氢呋喃溶液中加入0.47ml二苯基磷酰叠氮化物(604mg，2.19mmol，1.2当量)。搅拌混合物约3分钟。然后加入1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.27ml，278mg，1.83mmol，1当量)，于0℃搅拌混合物。2小时后，将混合物温至25℃，搅拌20小时。用150ml乙酸乙酯稀释反应混合物，用50ml H2O清洗。用35ml乙酸乙酯提取水层。合并的有机层经Na2SO4干燥，并真空浓缩。使用硅胶对粗产物层析，用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得913mg(91％)的21-叠氮基-epothilone B，为清澈无色油状物。MS(ESI+)549.3(M+H)+；1H-NMR(300 MHz，CDCl3)；δ＝6.59(bs，17-H)，7.04(s，19-H)，4.63(s，21-H2)；HRMS(DCI)；C27H40N4O6S[M+]计算值549.2747，实测值549.2768。
实施例15制备[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮在H2气氛下将18.0mg的Lindler催化剂悬浮在500μl乙醇中并饱和。然后，加入溶解在乙醇-甲醇混合物中的15.9mg(29.0μmol)以上实施例14的21-叠氮基-epothilone B。于室温搅拌30分钟后，经硅藻土过滤悬浮液，用乙酸乙酯清洗。去除有机相中的溶剂，并经高真空干燥。通过PSC(溶剂CH2Cl2/甲醇90∶10)纯化粗产物，由此获得12.3mg(81％)的21-氨基-epothilone B和1mg(6％)的离析物。
1H-NMR(300 MHz，CDCl3)；δ＝6.58(bs，17-H)，7.05(s，19-H)，4.15(s，21-H2)；HRMS(DCI)；C27H42N2O6S[M+H+]计算值522.2764，实测值522.2772。
实施例16制备[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(替代方法) 在氩气下向搅拌的21-叠氮基-epothilone B(实施例14)(1.070g，1.950mmol)的30.0ml四氢呋喃溶液中加入0.22ml三甲基磷化氢(0.163g，2.145mmol，1.1当量)。然后加入H2O(5.5ml)，让混合物于25℃搅拌。3小时后，叠氮化物完全耗尽，加入3ml 28％的NH4OH水溶液，以将磷酰亚胺完全转变为磷酰胺。于25℃搅拌1小时后，真空下去除溶剂。使用硅胶对粗产物进行层析，用1％Et3N、2.5％MeOH的CHCl3溶液洗脱，获得924mg(91％)的21-氨基-epothiloneB，为白色固体。MS(ESI+)523.3(M+H)+。
实施例17制备(+)-顺-4-叔丁基-1-叔丁氧羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-氮杂环丁烷基-2-酮 于室温向对甲氧基苯胺(18.4g，0.150mol)和无水Na2SO4(150g)的无水CH2Cl2(250ml)溶液中加入三甲基乙醛(20.3ml，1.25当量)。2小时后，对其过滤，并用另外的无水CH2Cl2清洗固体。去除滤过液中的溶剂，将结晶的残余物溶解在无水CH2Cl2(750ml)中，并置于氮气氛下。加入三乙胺(48.0ml，2.3当量)，将反应混合物冷却至-78℃。滴加苄氧基乙酰氯(27.2ml，1.15当量)，然后让反应物温至室温。24小时后，用0.5M HCl(2次)、饱和NaHCO3水溶液、盐水清洗并干燥(Na2SO4)。去除溶剂，残余物在硅胶柱上层析(洗脱梯度为含0-20％EtOAc的20％CH2Cl2的己烷溶液)，获得为结晶固体的(±)-顺-4-叔丁基-3-苄氧基-1-对甲氧基苄基-氮杂环丁烷酮(46.9g，92％)1H-NMR(CDCl3)；δ1.09(s，9H)，3.81(s，3H)，4.15(d，1H，J＝5.5Hz)，4.77(d，1H，J＝11.9Hz)，4.81(d，1H，J＝5.5Hz)，5.03(d，1H，J＝11.9Hz)，6.87-7.43(m，9 Hz)；LRMS(ESI)340([M+H]+)。在冰浴中于1小时之内将硝酸高铈铵(60.4g，3.6当量)的900ml水溶液加入到充分搅拌的氮杂环丁烷酮(10.38g，30.6mmol)的乙腈(600ml)溶液中。然后用EtOAc提取反应物(两次)，用饱和NaHCO3水溶液(两次)、20％NaHSO3水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水清洗合并的有机提取物。干燥(Na2SO4)后去除溶剂，残余物在硅胶柱上层析(洗脱梯度为含10-40％EtOAc的己烷)，获得5.64g较纯的(±)-顺-3-苄氧基-4-叔丁基-氮杂环丁烷-2-酮1H-NMR(CDCl3)；δ1.04(s，9H)，3.51(d，1H，J＝5.2Hz)，4.71(m，2H)，4.96(d，1H，J＝11.9Hz)，6.10(brs，1H)，7.35(m，5H)。将该物质(5.54g，23.8mmol)和2.5g 10％披钯碳的无水EtOH(100ml)悬浮液氢化(34psiH2，Parr仪器)23小时。加入另外2g钯催化剂，在50psi H2下再继续氢化17小时。过滤去除催化剂，去除滤过液中的溶剂，获得粗品(±)-顺-3-羟基-4-(叔丁基)-氮杂环丁烷-2-酮1H-NMR(CDCl3+1滴D2O)δ1.05(s，9H)，3.48(d，1H，J＝5.0Hz)，4.98(d，1H，J＝5.0Hz)。将该物质溶解在无水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入咪唑(3.24g，2当量)和三乙基甲硅烷基氯(4.0ml，1当量)。10分钟后，反应物分配在水与EtOAc和己烷(1∶1)的混合物之间。用水(两次)、盐水清洗有机相，然后干燥(Na2SO4)。去除溶剂，残余物在硅胶柱上层析(洗脱梯度为20-25％EtOAc的己烷溶液)，获得(±)-顺-4-叔丁基-3-三乙基甲硅烷氧基-氮杂环丁烷-2-酮(3.86g)1H-NMR(CDCl3)δ0.70(m，6H)，0.98(m，18H)，3.39(d，1H，J＝5.0Hz)，4.88(dd，1H，J＝2.1，5.0Hz)，6.08(brs，1H)。于室温下搅拌此氮杂环丁烷酮(2.04g，7.92mmol)、二异丙基乙胺(1.66ml，1.2当量)、二-叔丁基碳酸氢酯(1.90g，1.1当量)和对二甲基氨基吡啶(194mg，0.2当量)的无水CH2Cl2(24ml)溶液3小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，用盐水清洗并干燥(Na2SO4)。去除溶剂，然后用硅胶柱层析(洗脱梯度为0-20％EtOAc的己烷溶液)，获得2.71g(96％)油状物标题化合物1H-NMR(CDCl3)δ0.70(m，6H)，1.00(m，9H)，1.09(s，9H)，1.53(s，9H)，3.90(d，1H，J＝6.5Hz)，4.93(d，1H，J＝6.5Hz)。
实施例18制备浆果赤霉素衍生物A 于室温向10-脱乙酰基浆果赤霉素(47.4g，87mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(500ml)溶液中加入咪唑(47g，691mmol)。搅拌溶液10-15分钟，直至观察到溶液澄清。向反应混合物中滴加二异丙基二氯硅烷(58ml，322mmol)。于室温搅拌反应混合物16小时。向溶液中加入额外量的二异丙基二氯硅烷(6ml)，搅拌反应混合物60分钟。此时HPLC显示反应完成。向混合物中加入甲醇(36ml)，搅拌溶液60分钟。终止反应，用叔丁基甲基酮(TMBE)(500ml)和水(200ml)的混合物终止并稀释反应物。分离各层，有机相用盐水(250ml)清洗、干燥(Na2SO4)并蒸发，获得为白色无定形化合物的三甲硅烷化浆果赤霉素衍生物A(91g，＞100％得率)，其不需要进一步纯化即用于下一步。
LRMS(ESI)M+C50H84O13Si3计算值977；实测值977实施例19制备浆果赤霉素衍生物B 于0℃向浆果赤霉素衍生物A(90g，92mmol)的DMF(500ml)溶液中加入咪唑(22g，320mmol)。于0℃滴加二甲基氯硅烷(35ml，320mmol)。此时观察到化合物沉淀。于0℃搅拌反应混合物(淤浆)0.5小时。过滤固体，用冷DMF(3×150ml)清洗。空气干燥后，在TBME(700ml)中重溶解固体，用水(3×200ml)、盐水(250ml)清洗溶液并干燥(Na2SO4)。通过短硅垫过滤溶液。真空去除溶剂，获得B，收率77％(70g)。
LRMS(ESI)M+C50H90O13Si4计算值1035；实测值1035
实施例20制备浆果赤霉素衍生物C 于-34℃、10分钟之内，向搅拌的B(66.3g，64mmol)的甲苯(680ml)溶液中滴加入Red-Al(50ml，160mmol，65％(重量)双(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠的甲苯溶液)。将反应混合物温至-25℃并搅拌1.5小时。向反应混合物中滴加入甲醇(62ml)，保持内部温度在-20℃至-25℃之间。用TBME(500ml)稀释溶液，接着加入1N NaOH溶液(60ml)和盐水(60ml)。搅拌溶液30分钟。向混合物中加入硅藻土(12g)，搅拌10分钟，通过硅藻土垫过滤。分离各层。用水、盐水清洗有机层，干燥(Na2SO4)。接着，让溶液通过短硅垫，然后去除溶剂。获得为白色固体的化合物，收率97％(62g)。
LRMS(ESI)M+C50H88O12Si4计算值993；实测值993实施例21制备浆果赤霉素衍生物D 在氩气氛下，于-60℃向浆果赤霉素衍生物C(62g，62mmol)的无水四氢呋喃(THF)(600ml)溶液中滴加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(125ml，125mmol，1M的THF溶液)。搅拌溶液15分钟，接着加入氯甲酸甲酯(9ml，116mmol)；溶液内部温度保持在-60℃。将反应物缓慢温至0℃，搅拌混合物3小时。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(300ml)。用TBME(100ml)提取反应混合物。用饱和氯化铵溶液(200ml)、水(200ml)、盐水(200ml)清洗有机层，干燥(Na2SO4)并蒸发，获得为油状物的D(67g，得率＞100％)。粗产物不需要进一步纯化即用于下一步。
LRMS(ESI)M+C52H90O14Si4计算值1051；实测值1051。
实施例22制备浆果赤霉素衍生物E 于室温向浆果赤霉素衍生物D(62g，59mmol)的无水THF(260ml)溶液中加入三乙胺-氢氟酸复合物(56ml，344mmol)。搅拌反应物3小时。用乙酸乙酯(350ml)稀释反应混合物，用水(200ml)、盐水(200ml)清洗，干燥(Na2SO4)并蒸发，获得E(43g，粗品得率＞100％)。使粗品化合物在热乙酸乙酯(350ml)和己烷(50ml)混合物中重新成浆(resluring)，获得纯E，收率90％。
LRMS(ESI)M+C29H36O11计算值560；实测值560
实施例23制备浆果赤霉素衍生物F 于-65℃、氩气下，向搅拌的浆果赤霉素衍生物E(32g，57mmol)和咪唑(11.7g，172mmol)的DMF(220ml)溶液中加入二异丙基二氯硅烷(26.8ml)。将反应混合物的温度保持在-60℃，搅拌混合物2小时。反应结束(HPLC)后，加入咪唑的甲醇溶液(11.7g咪唑溶解在35ml甲醇中)，于0℃搅拌溶液30分钟。用TBME(500ml)提取混合物。用水(4×150ml)清洗有机相，干燥(Na2SO4)并蒸发，获得粗品F(45g)。将粗品再溶解在乙腈(150ml)中，用己烷(3×100ml)清洗溶液。去除乙腈后获得为白色固体的纯F(34g，收率84％)。
LRMS(ESI)M+C36H52O12Si计算值704；实测值704实施例24制备4-脱乙酰基-7-[双异丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-甲氧羰基-浆果赤霉素 于-43℃向浆果赤霉素衍生物F(33.2g，47mmol)的DMF(200ml)溶液中加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(61.2ml，61.2mmol，1M的THF溶液)。搅拌反应混合物15分钟，接着加入乙酸酐(5.8ml，63mmol)。于-40℃搅拌反应混合物30分钟。加入乙酸(3.6ml)并去除冷却浴。用TBME(300ml)提取反应混合物。分离有机层，用水(3×150ml)、盐水(150ml)清洗，干燥(Na2SO4)并蒸发，获得粗产物。通过由THF庚烷(1∶6)的混合物结晶，对该化合物进行纯化。投料40g获得21g结晶标题产物(60％收率)。
LRMS(ESI)M+C38H54O13Si计算值746；实测值746实施例25制备3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇 在N2下将(±)-顺-4-叔丁基-1-(叔丁氧羰基)-3-三乙基甲硅烷氧基-氮杂环丁烷-2-酮(2.71g，5当量)和4-脱乙酰基-7-[双异丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-甲氧羰基-浆果赤霉素(1.13g，1.52mmol)的无水THF(100ml)溶液冷却至-50℃，加入双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂的溶液(1.97ml，1.3当量，1.0M的THF溶液)。5分钟后，将溶液转移至浴器，保持在-35℃至-30℃20小时，然后保持于-25℃24小时。然后用饱和NH4Cl水溶液猝灭反应，用EtOAc和己烷(1∶1)的混合物提取。用盐水清洗有机提取物并干燥(Na2SO4)。去除溶剂，残余物层析(在6mm硅胶板上径向层析；洗脱梯度为5-20％EtOAc的己烷溶液)，获得1.55g 3’-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-7-[双异丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-2′-三乙基甲硅烷氧基紫杉醇，为2′，3′-非对映体的混合物。将该混合物溶解在无水THF(60ml)中，加入三乙胺三氢氟酸盐(0.92ml，4当量)。于室温22小时后，用饱和NaHCO3水溶液中和反应混合物，然后用EtOAc提取。用盐水清洗有机提取物，干燥(Na2SO4)，去除溶剂。残余物层析(径向层析；2mm硅胶板；洗脱梯度为10-50％EtOAc的己烷溶液)，获得(按洗脱顺序)；210mg(18％)的2′S，3′R-3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇{1HNMR(CDCl3)δ1.04(s，9H)，1.13(s，3H)，1.20(s，3H)，1.37(s，9H)，1.65(s，1H)，1.66(s，3H)，1.84-1.93(m，2H)，2.17(s，3H)，2.25(s，3H)，2.55(m，3H)，3.00(d，1H，J＝6.5Hz)，3.74(d，1H，J＝10.8Hz)，3.79(d，1H，J＝6.9Hz)，3.92(s，3H)，4.16(d，1H，J＝8.5Hz)，4.33(d，1H，J＝8.5Hz)，4.42(m，1H)，4.54(d，1H，J＝6.5Hz)，4.87(d，1H，J＝10.6Hz)，5.01(d，1H，J＝7.7Hz)，5.68(d，1H，J＝7.0Hz)，5.76(m，1H)，6.32(s，1H)，7.44-8.05(m，5H)；LRMS(ESI)846[(M+H)+]}和668mg(56％)的标题化合物{1HNMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.14(s，3H)，1.24(s，3H)，1.33(s，9H)，1.66(s，4H)，2.23(s，3H)，2.38-2.59(m，4H)，3.11(d，1H，J＝5.8Hz)，3.77(d，1H，J＝11.1Hz)，3.82(d，1H，J＝7.0Hz)，3.96(s，3H)，4.20(d，1H，J＝8.6Hz)，4.33(d，1H，J＝8.6Hz)，4.39(m，1H)，4.53(d，1H，J＝5.4Hz)，4.88(d，1H，J＝10.6Hz)，4.98(d，1H，J＝7.9Hz)，5.69(d，1H，J＝7.1Hz)，6.03(m，1H)，6.28(s，1H)，7.40-8.11(m，5H)；LRMS(ESI)846[(M+H)+]}。
本发明不限于以上具体描述的实施方案，而是可以在不背离所附权利要求书范围的情况下对本发明进行变更和修改。
权利要求
1.一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要哺乳动物协同治疗有效量的以下物质(1)至少一种选自抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂的药物，以及(2)下式I化合物或其药学上可接受的盐 其中R1是Cl、Br、CN、任选取代的苯基或任选取代的2-、3-或4-吡啶基；R2是任选取代的低级烷基或任选取代的芳烷基；R3和R5各自独立为任选取代的低级烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；R4为氢或低级烷基；Z1为CO、SO2、CO2或SO2N(R5)-；而n为1或2；前提是所述细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与所述式I化合物同时给予或在式I化合物之前给予。
2.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂在所述式I化合物之前给予。
3.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂包括放疗。
4.按照权利要求1的方法，其中所述细胞抑制剂在所述式I化合物之前给予。
5.按照权利要求1的方法，该方法用于协同治疗癌性实体瘤。
6.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂选自微管稳定剂、微管破坏剂、烷化剂、抗代谢剂、表鬼臼毒素、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、丙卡巴肼、米托蒽醌和铂配位复合物。
7.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂选自蒽环药物、长春花药物、丝裂霉素、博来霉素、细胞毒性核苷、紫杉烷、epothilone、discodermolide、蝶啶药物、diynene、芳香酶抑制剂和鬼臼毒素。
8.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂选自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脱乙酰基-4-碳酸二甲酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothiloneB、epothilone C、epothilone D、脱氧epothilone A、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1 S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、阿霉素、洋红霉素、道诺红菌素、氨蝶呤、氨甲蝶呤、甲蝶呤、二氯-氨甲蝶呤、丝裂霉素C、紫菜霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、吉西他滨、阿糖胞苷、鬼臼毒素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、苯丙氨酸氮芥、长春花碱、长春新碱、异长春碱、长春地辛、环氧长春碱、雌二醇氮芥、顺铂、卡铂、环磷酰胺、博来霉素、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜树碱、CPT-11、托泊替堪、ara-C、比卡鲁胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚、干扰素和白介素。
9.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂选自紫杉烷和epothilone。
10.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂选自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脱乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothiloneB、epothilone C、epothilone D、脱氧epothilone A、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮。
11.按照权利要求1的方法，其中R1为Br或CN；R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z1为CO、SO2或SO2N(R5)-；R5为任选取代的低级烷基或任选取代的苯基；而n为1。
12.按照权利要求1的方法，其中R1为CN；R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z为CO或SO2；而n为1。
13.按照权利要求1的方法，其中R1为CN；R2为苄基；R3为正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4为氢；Z为SO2；而n为1。
14.按照权利要求1的方法，其中所述式I化合物选自以下物质及其药学上可接受的盐(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(丁磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(3-甲氧基丙磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂。
15.按照权利要求14的方法，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、甲磺酸盐和三氟乙酸盐。
16.按照权利要求10的方法，其中所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
17.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂为紫杉醇，而所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
18.按照权利要求1的方法，其中所述细胞毒性剂为[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
19.按照权利要求1的方法，其中所述哺乳动物为人。
20.按照权利要求1的方法，其中所述细胞抑制剂选自手术阉割、化学阉割、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉、激素、类固醇、类固醇合成类似物、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、强的松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲基强的松龙、甲基睾丸素、强的松龙、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林、抗血管生成剂、基质金属蛋白酶抑制剂、VEGF抑制剂、ZD6474、SU6668、抗Her-2抗体、EGFR抑制剂、EKB-569、Imclone抗体C225、src抑制剂、比卡鲁胺、表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、PDGF抑制剂、combretastatm、MET激酶抑制剂、MAP激酶抑制剂、非受体和受体酪氨酸激酶抑制剂、整联蛋白信号转导抑制剂和胰岛素样生长因子受体抑制剂。
21.按照权利要求1的方法，其中所述细胞抑制剂选自比卡鲁胺、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉、Her-1抑制剂和trastuzumab。
22.一种用于协同治疗癌症的药用组合物，其包括细胞抑制剂和细胞毒性剂中的一种或两种，并且还包括权利要求1所述的式I化合物以及药学上可接受的载体。
23.按照权利要求22的组合物，它用于协同治疗癌性实体瘤。
24.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂选自微管稳定剂、微管破坏剂、烷化剂、抗代谢剂、表鬼臼毒素、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、丙卡巴肼、米托蒽醌和铂配位复合物。
25.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂选自蒽环药物、长春花药物、丝裂霉素、博来霉素、细胞毒性核苷、紫杉烷、epothilone、discodermolide、蝶啶药物、diynene、芳香酶抑制剂和鬼臼毒素。
26.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂选自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基紫杉醇、4-脱乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothiloneD、脱氧epothilone A、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、阿霉素、洋红霉素、道诺红菌素、氨蝶呤、氨甲蝶呤、甲蝶呤、二氯-氨甲蝶呤、丝裂霉素C、紫菜霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、吉西他滨、阿糖胞苷、鬼臼毒素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、苯丙氨酸氮芥、长春花碱、长春新碱、异长春碱、长春地辛、环氧长春碱、雌二醇氮芥、顺铂、卡铂、环磷酰胺、博来霉素、异环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜树碱、CPT-11、托泊替堪、ara-C、比卡鲁胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚、干扰素和白介素。
27.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种选自紫杉烷和epothilone的细胞毒性剂。
28.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂选自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基紫杉醇、4-脱乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3′-脱苯基-3′-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothiloneD、脱氧epothilone A、脱氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮和[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮。
29.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞抑制剂选自手术阉割、化学阉割、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)、激素、类固醇、类固醇合成类似物、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、强的松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲基强的松龙、甲基睾丸素、强的松龙、去炎松、氯烯雌醚、羟孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林、抗血管生成剂、基质金属蛋白酶抑制剂、VEGF抑制剂、ZD6474、SU6668、抗Her-2抗体、EGFR抑制剂、EKB-569、Imclone抗体C225、src抑制剂、比卡鲁胺、表皮生长因子抑制剂、Her-2抑制剂、MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3抑制剂、PDGF抑制剂、combretastatin、MET激酶抑制剂、MAP激酶抑制剂、非受体和受体酪氨酸激酶抑制剂、整联蛋白信号转导抑制剂和胰岛素样生长因子受体抑制剂。
30.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞抑制剂选自比卡鲁胺、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉、Her-1抑制剂和trastuzumab。
31.按照权利要求22的组合物，其中R1为Br或CN；R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z1为CO、SO2或SO2N(R5)-；R5为任选取代的低级烷基或任选取代的苯基；而n为1。
32.按照权利要求22的组合物，其中R1为CN；R2为任选取代的苄基；R3为任选取代的低级烷基、任选取代的苯基、任选取代的2-噻吩基或任选取代的1-哌啶基；R4为氢或甲基；Z为CO或SO2；而n为1。
33.按照权利要求22的组合物，其中R1为CN；R2为苄基；R3为正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4为氢；Z为SO2；而n为1。
34.按照权利要求22的组合物，其中所述式I化合物选自以下物质及其药学上可接受的盐(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(丁磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂；(R)-4-(3-甲氧基丙磺酰基)-7-氰基-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮杂。
35.按照权利要求34的组合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、甲磺酸盐和三氟乙酸盐。
36.按照权利要求34的组合物，其中所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
37.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂为紫杉醇，而所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
38.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂为[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而所述式I化合物为(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
39.按照权利要求1的方法，其中所述癌症为前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、转移性膀胱癌、结肠直肠癌或胰腺癌。
40.按照权利要求22的组合物，其中所述细胞毒性剂是一种或多种细胞毒性剂，所述细胞毒性剂选自紫杉醇、顺铂、卡铂、吉西他滨、CPT-11、甲酰四氢叶酸、替加氟、尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉和4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉。
41.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为紫杉醇，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
42.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
43.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为CPT-11，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
44.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为吉西他滨或其药学上可接受的盐，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
45.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞抑制剂为4-(3-溴苯基氨基)-6，7-二(甲氧基)喹唑啉，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
46.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞抑制剂为trastuzumab，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
47.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞抑制剂为4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
48.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞抑制剂为他莫昔芬，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
49.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞抑制剂为阉割，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
50.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺或其药学上可接受的盐，其在给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐之前给予。
51.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为紫杉醇，其以约135mg/m2输注给药约3小时，其后以约50mg/m2输注给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐约1小时，紫杉醇和(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐都根据需要间隔约3周给药。
52.按照权利要求1的方法，其中所述至少一种细胞毒性剂为紫杉醇，其以约80mg/m2输注给药约1小时，其后以约80mg/m2输注给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐约1小时，紫杉醇和(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐都根据需要间隔约1周给药。
53.按照权利要求1的方法，其中给予两种细胞毒性剂，所述细胞毒性剂为紫杉醇，其以约135mg/m2输注约3小时，其后以大约等于6的AUC输注卡铂约20分钟，紫杉醇和卡铂间隔约3周给药，所述方法还包括以约80mg/m2、约每周一次给予(R)-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂-7-腈或其药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明提供一种治疗癌症的协同方法，包括给予哺乳动物协同治疗有效量的以下物质(1)至少一种选自细胞毒性剂和细胞抑制剂的药物，和(2)下式式(I)化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供一种协同治疗癌症的药用组合物，其包括至少一种选自抗增殖细胞毒性剂和抗增殖细胞抑制剂的药物、式(I)化合物以及药学上可接受的载体。
文档编号C07D409/12GK1419452SQ01807162
公开日2003年5月21日 申请日期2001年3月22日 优先权日2000年3月27日
发明者F·Y·李 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司