专利名称：从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法
技术领域：
本发明涉及一种从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案一种从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法，其特征在于它包括以下步骤三七生粉以甲醇浸提，得甲醇提取液和残渣，将甲醇提取液浓缩干燥，获得甲醇提取物，甲醇提取物加水，并以石油醚萃取，取水相，以正丁醇萃取，得正丁醇相，蒸干后，得三七皂甙粗提取物，该皂甙粗提取物分离得三七皂甙R1和人参皂甙Re；甲醇提取后三七生粉残渣以水提取，得到水提取物，水提取物以正丁醇萃取，将水层冷冻干燥得三七素粗提取物，三七素粗提取物进一步分离纯化得三七。
图3为发明中利用HSCCC第二步分离得到的两种皂甙的薄层色谱4A、图4B为第二步HSCCC分离得到的一种皂甙液相色谱图(203nm)(16管、15管)图5A、图5B为第二步HSCCC分离得到的另一种皂甙色谱图(203nm)(17管、18管)
二、利用高速逆流色谱(HSCCC)第一步分离得到三七皂甙R1、人参皂甙Re的混合物。
1、采用氯仿、甲醇、丙醇、水体系，其中氯仿∶甲醇∶丙醇∶水＝6∶6∶1∶4(体积比)取三七皂甙粗提物，其上样量200mg，柱体积200ml，主机转数800rpm，上相作固定相，下相作流动相，流动相流速2ml/min。
2、操作步骤按各溶剂体积比配制溶剂体系，在分液漏斗中静置分层，分出上下相，上相作固定相、下相作流动相，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进样。(该分离采用北京市新技术应用研究所研制的逆流色谱仪完成。)由于三七皂甙R1及人参皂甙Re没有紫外吸收，所以无法使用高速逆流色谱仪(HSCCC)所配的常规紫外检测器检测出峰及分离情况。因此，本实验中采用自动集分收集器，设定时间，分段收集高速逆流色谱仪上样后洗脱下的各级分。然后以薄层色谱检测分析各吸分管，采用与药典相同的展开条件，通过与药典中提供谱图比较。收集含有三七皂甙R1和人参皂甙Re的级分(25-38管)其薄层展开谱图如
图1所示。
通过以上分离，可得三七皂甙R1及人参皂甙Re混合物13mg。其高效液相色谱分析谱见图2所示。
三、用高速逆流色谱仪将上述分离得到的混合物进行进一步分离(第二步分离)1、采用乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3体积比，上样量为第一步多次分离所得产物共40mg，柱体积200ml，主机转数800rpm。上相作固定相，下相作流动相，流动相流速2ml/min。
2、操作步骤同上，以集分收集器收集，洗脱的各级分经薄层色谱检测分析并与药典中提供谱图比较，保留含有三七皂甙R1与人参皂甙Re的级分(15-18)管，其薄层展开图见图3所示。
3、经高效液相色谱检测分析第15至16管为一种皂甙(24mg)见图4A、图4B，第17-18管为另一皂甙(13mg)见图5A、图5B，且两者完全分离。
实施例2(本实施例系从三七生粉甲醇提取后的剩余残渣中提取三七素的提取步骤三七生粉经甲醇提取后的残渣，用水提取，所得水提取物，经正丁醇萃取，水相经冷冻干燥即可得三七素粗提物，100g三七生粉可得三七素粗提物约10g，经氨基酸分析其中主要含三七素和精氨酸等几种氨基酸成分。三七素粗提取物以Sephadex LH-20的凝胶色谱柱分离，以柱填料的1/10的比例上样，去离子水洗脱，用馏分收集器收集各级分，分别点样，用茚三酮显色法分析，将能与茚三酮反应，呈显紫红色的级分，再分别用纸色谱点样，茚三酮显色分析。合并含三七素的级分经冷冻干燥得中间产物。该产物经过CMSephadex C-25再次层析分离，采用同样的方法分析，收集目标级分，冷冻干燥。必要时，可进行重复的CM-Sephadex C25柱分离或重结晶，即可得到三七素纯品。
三七素的分析方法1、氨基酸分析仪自动分析法层析柱4.6×150mm阳离子交换树脂缓冲液流速0.425ml/min柱温50℃，进样量50μl，分析时间50min。
2、纸层析一茚三酮显色法支撑物层析滤纸展开剂正丁醇-乙酸-水-无水乙醇(4∶1∶2∶1)显色法喷雾1％茚三酮水溶液后，加热3分钟即显紫红色，此法为氨基酸的特征显色方法，三七素的位移值Rf＝0.1。
本发明优点本发明提供的方法中可分别得到纯化的产品，且方法简便，所得纯品经过认定可作为质量控制的标准品或参考物，很有实用价值。
权利要求
1.一种从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法，其特征在于它包括以下步骤三七生粉以甲醇浸提，得甲醇提取液和残渣，将甲醇提取液浓缩干燥，获得甲醇提取物，甲醇提取物加水，并以石油醚萃取，取水相，以正丁醇萃取，得正丁醇相，蒸干后，得三七皂甙粗提取物，该皂甙粗提取物分离得三七皂甙R1和人参皂甙Re；甲醇提取后三七生粉残渣以水提取，得到水提取物，水提取物以正丁醇萃取，将水层冷冻干燥得三七素粗提取物，三七素粗提取物进一步分离纯化得三七。
2.根据权利要求1所述的从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法，其特征在于所述的粗三七皂甙分离是采用高速逆流色谱方法，分别收集各分离级分，检测分析，得三七皂甙R1和人参皂甙Re的混合物，本分离溶剂体系为氯仿、甲醇、丙醇、水；应用高速逆流色谱进一步分离上述混合物、分别得到三七皂甙R1和人参皂甙Re，其所用溶剂体组成为乙酸乙酯、正丁醇、水。
3.根据权利要求2所述的从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法，其特征在于所述的氯仿、甲醇、丙醇、水体系中各体积比为6∶6∶1∶4，上相做固定相、下相做流动相；所述的进一步分离用的溶剂体系中体积比为乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3。
4.根据权利要求1所述的从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re三七素方法，其特征在于所述的三七素粗提物分离纯化方法为将三七素粗提物以凝胶色谱柱Sephadex Lh-20分离，用去离子水洗脱，收集能与茚三酮发生显色反应组分，分别点样，用纸层析-茚三酮显色法分析；合并含三七素组分，经冷冻干燥得中间产物，产物再次以CM SephadexC-25层析分离。
全文摘要
一种从三七生粉提取分离三七皂甙R
文档编号C07C235/80GK1414009SQ0113669
公开日2003年4月30日 申请日期2001年10月26日 优先权日2001年10月26日
发明者梁瑞安, 邝志威, 任贵兴, 魏英伟, 刘子芸, 杨成安, 田宇, 曹学丽, 张天佑, 贾立军 申请人:香港生物科技研究院